1.2.2 微生物的选择培养和计数(第2课时)-【爱上生物课】2022-2023学年高二生物优质精讲课件（人教版2019选择性必修3）

第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数（第2课时） 1 1.间接计数法——稀释涂布平板法 （1）原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 三、微生物的数量测定 （2）计数原则 ① 一般选择菌落数为30～300的平板计数。 ② 在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 ③ 适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。 1.间接计数法——稀释涂布平板法 （3）结果分析 ①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少； ②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 三、微生物的数量测定 （4）计算公式 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；M代表稀释倍数。 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)； （5）使用范围 可以用来测定土壤、水、食品等样品中的细菌、酵母菌、芽孢和孢子等的数量，但不适于测定样品中的放线菌、丝状真菌等丝状体微生物的数量。 例1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( ) A.2.34×108 B.2.34×109 C.234 D.23.4 B 学以致用 某两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 请评价这两位同学的实验结果的有效性： 1.甲同学________________________________； 2.乙同学_____________________________________________； 实验操作不合理，未设置重复实验组 结果计算不合理，21与另外两组数值相差太大，应舍去 学以致用 2.直接计数法——显微镜直接计数 （1）原理 利用特定的__________或____________在______下观察、计数，然后再计算________的样品中微生物的数量； *血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等； 细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 （2）优点 ________ （3）缺点 ①统计结果一般是_________________，不能区分死菌与活菌。 ②个体小的细菌在显微镜下难以观察。 ③不适于对运动细菌的计数。 细菌计数板 血细胞计数板 显微镜 一定体积 快速、直观 活菌数和死菌数的总和 三、微生物的数量测定 计数区 放大后的计数室 (4)计数方法： 每毫升原液所含细菌数＝ 每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数 注意：统计结果一般是活菌数和死菌数的总和。（“染色排除法”） 三、微生物的数量测定 2.直接计数法——显微镜直接计数 内容 直接计数法 间接计数法 主要用具 计数依据 优点 缺点 计算公式 显微镜、细菌计数板 或血细胞计数板 涂布器 细菌个数 培养基上菌落数 计数方便、操作简单 计数的是活菌 不能区分死菌与活菌 操作较复杂且有一定误差 每毫升原液含菌株数＝400×1 0000×每小格平均菌株数×稀释倍数 每毫升原液含菌株数＝ 平均菌落数/所用涂布液体积×稀释倍数 三、微生物的数量测定 （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用 的_____培养基，可以从土壤中分离出 的细菌。 脲酶 以尿素作为唯一氮源 选择 分解尿素 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 1.实验目的 2.实验原理 常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 实验流程： 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察 菌