专题2 课题1 微生物的实验室培养-2021-2022学年高中生物选修1【名师导航】同步Word教参(人教版)

课题1　微生物的实验室培养 学习目标：1.知道培养基的种类、营养要素及配制原则。(重点)　2.掌握消毒、灭菌的原理和方法。(重点)　3.学会配制培养基和纯化大肠杆菌的方法。(重、难点) 1．培养基 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)种类： 按物理性质分 (3)营养组成：各种培养基一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质(如维生素、氨基酸和碱基等)以及氧气的要求。 2．无菌技术 (1)无菌技术的目的是防止外来杂菌的入侵。主要内容包括： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 (2)消毒和灭菌： 消毒 灭菌 概念 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 适用对象 操作空间、操作者双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 3.大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ① ②培养基应采用高压蒸汽灭菌；倒平板时要待培养基冷却至50_℃左右时，在酒精灯火焰附近进行，等平板冷凝后将平板倒置。 (2)纯化大肠杆菌 ①纯化培养的原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。 ②纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 ⅰ平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 ⅱ稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 ③培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中，培养12 h和24 h后，分别记录观察。 ④菌种保存： 临时保藏法 甘油管藏法 适用对象 频繁使用的菌种 长期保存的菌种 培养基类型 固体斜面培养基 液体培养基 温度 4 ℃ －20 ℃ 方法 菌落长成后放入冰箱中保存，以后每3～6个月将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上 将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后放在冷冻箱内保存 缺点 菌种易被污染或产生变异 1．判断对错 (1)高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖。 (　　) (2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。 (　　) (3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。 (　　) 提示：(1)×　在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。 (2)×　倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。 (3)×　接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。 2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是(　　) A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 C　[制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，应先根据需要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。] 培养基及无菌技术 [合作交流] 1．虽然各种培养基的具体配方不同，但是一般都含有哪些成分？ 提示：虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子。另外，还必须满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 2．对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒方法分别是什么？ 提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。 3．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 提示：无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。 [归纳总结] 1．培养基的配制原则 (1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。 (3)pH要适宜：为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用磷酸氢二钾－磷酸二氢钾。 2．培养基的