3.3 核酸的性质与序列测定-【竞赛帮】全国高中生物竞赛之《生物化学简明教程》名师精讲课件

高中生物竞赛 《生物化学简明教程》 魏民、张丽萍、杨建雄 3/16，3.3核酸的性质与序列测定 3.3.1 核酸的水解 （1）酸水解 ①磷酸二酯键对酸不敏感，只有在强酸和高温条件下才会断裂 ②糖苷键对酸较敏感，但不同的糖苷键敏感性不同 嘌呤糖苷键>嘧啶糖苷键 （2）碱水解 磷酸二酯键对碱异常敏感 原因：C2′-OH对P原子的诱电子效应，使P原子带上微弱的正电荷，有利于碱(OH－)的亲核攻击，形成2′，3′-环状核苷酸，这个中间产物不稳定，得到2′或3′-核苷酸的混合物 （3）酶水解 ①按底物特异性 核酸酶：既能水解DNA，也能水解RNA DNA酶：只水解DNA RNA酶：只水解RNA ②按作用方式 外切核酸酶、内节核酸酶、限制性内切核酸酶 ③按磷酸二酯键的断裂方式 5′-核苷酸的水解酶 3′-核苷酸的水解酶 3.3 核酸的性质 3/16.核酸 （1）核酸的酸碱性质 是两性化合物，具有等电点，DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5 （2）黏性 ①DNA分子双螺旋结构的高轴比使其在水溶液中具有 高黏性，变性后的单链及RNA的水溶液黏性小很 ②DNA分子越大，黏性越大。如断裂成小片段，黏性就下降 （3）浮力密度 ①DNA分子在CsCl溶液中高速离心时，CsCl溶液形成一个密度梯度，DNA分子在CsCl溶液中移动停止位置处于的CsCl溶液密度即是DNA分子的浮力密度 ②浮力密度与G-C碱基对含量有关，G-C碱基对含量高，浮力密度大 ③浮力密度与DNA分子构象有关，与DNA分子大小无关 超螺旋结构>环状结构>线形结构； 单链结构>双螺旋结构； RNA分子的浮力密度比DNA分子大，变性后的DNA分子浮力密度比天然DNA分子大。 3.3.2 核酸的理化性质 3.3 核酸的性质 3/16.核酸 （4）核酸的溶解度 ①DNA和RNA都是极性化合物，天般都微溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿、三氯乙酸等有机溶剂 ②核酸、核苷酸、碱基在水中的溶解度：核酸>核苷酸>碱基 ③DNP和RNP的溶解度 DNP溶解度在低浓度盐溶液中随盐浓度的增加而增加，在2mol/L 的NaCl溶液中最高，在0.14mol/L的NaCl溶液中最低 RNP溶解度在0.14mol/L的NaCl溶液中较大，在2mol/L的NaCl中溶液中溶解度较小 利用浓度差分别得到DNP和RNP后，再用蛋白质