内容正文:
第2节 动物细胞培养
一 动物细胞培养
从社会中来
在治疗大面积烧伤时,通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说,自体健康皮肤非常有限,使用他人皮肤來源又不足,而且会产生免疫排斥反应。那么,怎样才能获得大量的自体健康皮肤?能不能用自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤?
通过细胞培养构建的人造皮肤
一 动物细胞培养
一、动物细胞培养
1.动物细胞工程常用技术
动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等。
(1)常用技术:
(2)基础:
动物细胞培养。
2.动物细胞培养
(1)概念:
从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
(2)培养条件
①营养
属于合成培养基
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。
需加入天然成分:血清。
是液体培养基,即培养液
②无菌、无毒的环境
a.对培养液和所有培养用具进行灭菌处理。
b.在无菌环境下进行操作。
c.培养液需定期更换,以清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
a.成分:
糖类、氨基酸、无机盐、维生素等。
b.类型:
③温度、pH和渗透压
a.温度:
以36.5 ℃±0.5 ℃为宜。
b.pH:
以pH为7.2~7.4为宜。
c.适宜的渗透压:
④气体环境
O2作用:
细胞代谢所必需的。
CO2主要作用:
维持培养液的pH。
a.动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
b.在进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶, 并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。
培养皿
培养瓶
CO2培养箱
培养液的渗透压与细胞内液渗透压相等
(3)培养过程
①体外培养的动物细胞类型
悬浮在培养液中生长增殖的细胞
②过程
动物组织块
用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理
分散成单个细胞
问题
细胞分裂受阻
悬浮生长
贴壁生长
原因
原因
细胞密度过大、有害代谢物积累和营养物质缺乏等
接触抑制
解决
传代培养
制成细胞悬液
原代培养
分瓶
①原代培养:指动物组织经处理后的初次培养。
②细胞贴壁:悬液中分散的细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上。
③接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞停止分裂增殖的现象。
④传代培养:分瓶后的细胞培养。
单层贴壁的猪输卵管上皮细胞
贴附于某些基质表