1.2.2 微生物的选择培养和计数（备课件）-【上好课】2021-2022学年高二生物同步备课系列（人教版2019选择性必修3）

第一章 发酵工程 第2.2节 微生物的选择培养和计数 学习目标 利用选择培养基分离细菌，运用相应技术解决生产生活中有关微生物的计数。（科学探究） 01 02 关注有害生物的控制、宣传健康的生活方式等。（社会责任） 新课讲授 1 一、选择培养基 实例 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 寻找耐高温的DNA聚合酶 筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 实验室中微生物筛选的原理 人为提供_________________的条件（包括_____、_____和_____等），同时___________________________。 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH 选择培养基的概念 在微生物学中，将允许 生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 特定种类的微生物 抑制 阻止 选择培养基的类型 类型 条件 分离得到的菌种 改变培养条件 添加某种化学物质 营养缺陷 70～80℃的高温 水生栖热菌 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌 高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 不加碳源 不加氮源 自养型微生物 固氮菌 举例 培养基中加氨苄青霉素 培养基应有菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 具有氨苄青霉素抗性的菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌 biàn 思考·讨论 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 尿素的分子模型 讨论： 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 培养基的配方中应含有微生物生长所需的营养要素：碳源、氮源、水、无机盐等。由于绝大多数微生物都能利用葡萄糖，分解尿素的细菌也能利用葡萄糖，可以用葡萄糖作为碳源。但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，在培养基中加入尿素提供氮源，使培养基具有了选择作用。该培养基以尿素作为唯一氮源，只允许能以尿素作为氮源的微生物生长。 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 该培养基与普通培养基相比较： 共同点：都是以有机碳（如葡萄糖）作为碳源，都有水和无机盐； 不同点：是该培养基以尿素作为唯一氮源，使只有能以尿素作为氮源的微生物生长。 新课讲授 2 二、微生物的选择培养 方法 对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。 操作步骤 ①铲取图样，将样品装入纸袋中 操作步骤 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，一次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 操作步骤 ③取0.1mL 菌液滴加到培养基表面。 1×107 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ④⑤步骤为涂布器灭菌 操作步骤 ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 培养与观察 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落（菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体）。 恒温培养箱 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 注意说明 （1）稀释操作时：每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1~2cm处。 （2）涂布平板时： ①涂布器浸在体积分数为70%的酒精中，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 ②不要将过热的涂布器放在盛放在酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。