3.2基因工程的基本操作程序知识点-2020-2021学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

第2节　基因工程的基本操作程序 【知识回顾】 一、目的基因的筛选与获取(第一步) 1.目的基因:在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。 2.筛选合适目的基因的方法:从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。 3.利用PCR获取和扩增目的基因 (1)原理:DNA半保留复制。 (2)DNA复制所需的基本条件: 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 (体外用高温代替) 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸 (3)选一选:基于PCR过程的理解,下列说法正确的是:②⑤⑥。 ①Ⅰ过程需要加热到90 ℃以上,目的是使双链DNA变性,破坏磷酸二酯键。 ②Ⅱ过程需要调节温度到50 ℃左右,目的是复性,即引物与模板DNA结合。 ③PCR过程中引物是一小段DNA,至少要有2种。 ④Ⅲ过程需将温度调整到72 ℃左右,目的是使4种脱氧核苷酸加到引物的5'端。 ⑤Ⅱ和Ⅲ过程均遵循碱基互补配对原则。 ⑥由于整个PCR过程中需要不断调节温度,DNA聚合酶必须耐高温。 (4)仪器:PCR扩增仪 (5)鉴定方法:琼脂糖凝胶电泳 二、基因表达载体的构建(核心步骤) 1.构建的目的: (1)使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且遗传给下一代。 (2)使目的基因能够表达和发挥作用。 2.填一填:基于对基因表达载体成分(如图)和构建过程的理解,完成下列几个小题。 (1)A:启动子,是RNA聚合酶识别和结合的部位,可以驱动基因转录出mRNA。 (2)B:目的基因。 (3)C:终止子,转录停止的部位。 (4)D:复制原点、E:标记基因。 3.构建过程: (1)用适宜的限制酶切割载体。 (2)用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割目的基因。 (3)用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来。 三、将目的基因导入受体细胞 1.转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.填一填:基于受体细胞的不同,完成下列表格。 生物类型 导入方法 受体细胞 注意事项 植物 我国独创的——花粉管通道法;农杆菌转化法 受精卵或体细胞 农杆菌转化法适用于双子叶植物和裸子植物 动物 显微注射