内容正文:
基因工程
基因工程简介
一、教材分析
基因工程的基本内容
在实践中的应用
基因工程
(一)基因操作的工具
(二)基因操作的基因步骤
基因的剪刀
基因的针线
基因的运输工具
提取目的基因
目的基因与运载体结合
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测与表达
基因工程与医药卫生
基因工程与农牧业、食品工业
基因工程与环境保护
基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。这种技术是在生物 体外,通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生出人类所需要的基因产物。(分子水平)
苏云金芽孢杆菌——抗虫基因——普通棉花细胞——含抗虫基因棉花——抗虫棉
提取
与运载体拼接并导入
(一)基因操作的工具
1.基因的剪刀──限制性内切酶(限制酶)
一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列(特异性),并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200(数量)多种。
如 大肠杆菌中的一种限制酶,识别GAATTC序列,并切割G-A序列
结果:产生黏性末端
2、基因的针线──DNA连接酶
连接酶的作用是:将互补配对的两个黏性末端连接起来,使之成为一个完整的DNA分子。
连接部位:磷酸二酯键
3、基因的运输工具——运载体
作用:将外源基因导入受体细胞
种类:质粒(最常用的运载体,是染色体外能够自我复制的很
小的环状DNA。)
噬菌体
动植物病毒
①能够在宿主细胞中复制并稳定的保存。
②具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接。
③具有标记基因便于筛选。
(二)基因工程的基本步骤
第一步:提取目的基因
1、直接分离法:鸟枪法(散弹射击法)
2、人工合成法
逆转录法:以信使RNA为模板,在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。
化学合成:根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序,再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。
用限制酶切断成许多片段
将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段,再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达,基因工程就算成功了。
优点:是操作简便,缺点:是带有很大的盲目性,工作量大,成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。
第二步:目的基因与运载体结合
用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口,将目的基因插入切口处,让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后,在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。
第三步:将目的基因导入受体细胞
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径,通过运载体把目的基因带入某生物体内,并使目的基因在受体细胞内能准确地转录和翻译。
导入
扩增(增殖)
为使重组的DNA分子更容易进入受体细胞,通常要用CaCl2对受体细菌进行处理,使受体细菌具有更大的通透性。
第四步:目的基因的检测与表达
大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少,必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落,检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落,保留有表达产物的进一步培养、研究。
无表达产物
无表达产物
有表达产物
无表达产物
1、检测;判断目的基因是否导入受体细胞
2、表达:有没有产生特定的性状
三、基因工程的成果和前景
1、基因工程与医药卫生
⑴ 基因工程药品的生产
许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限,其价格往往十分昂贵。;利用转基因技术得到产品。如:胰岛素,乙肝疫苗
⑵ 基因诊断与基因治疗
◆运用基因工程设计制造的“DNA探针”检测肝炎病毒等病毒感染及遗传缺陷,不但准确而且迅速。
◆通过基因工程给患有遗传病的人体内导入正常基因可“一次性”解除病人的疾苦。
2、基因工程与农牧业、食品工业
农业:获得高产稳产高品质的农作物、抗逆行新品种。
畜牧业:高产仔率,高产奶量的品种。如:超级小鼠
食品业:将鸡蛋白基因移入酵母菌来生产卵清蛋白
3、基因工程与环境保护
(1)环境监测:基因工程做成的DNA探针能够十分灵敏地检测环境中的病毒、细菌等污染。
1t水中只有10个病毒也能被DNA探针检测出来
利用基因工程培育的“指示生物”能十分灵敏地反映环境污染的情况,却不易因环境污染而大量死亡,甚至还可以吸收和转化污染物。
(2)环境污染治理:
假单孢杆菌能分解石油的成分,把分解三种烃类的基因转移到能分解另一种烃类的假单孢杆菌内,创造出同时能分解四种烃类的超级细菌。提高分解石油的效率。
拓展:原核细胞的基因结构
非编码区
非编码区
编码区
编码