3.2.3 DNA片段的扩增及电泳鉴定 课件【新教材】 2020-2021学年人教版（2019）高二生物选择性必修三

2021 第2节 基因工程的基本操作程序 基因表达载体的组成 提问 二、DNA片段的扩增及电泳鉴定 1、DNA体外扩增的原理 PCR利用了DNA热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。 实验原理 PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。 探究-实践 2、DNA片段电泳鉴定的原理 DNA分子具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。 PCR 的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。 在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构像等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。 目的要求 1、了解PCR和电泳鉴定的基本原理 2、尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物 材料用具 PCR仪、微量离心管、微量移液器、一次性吸液枪头 电泳装置（包括电泳仪、电泳槽等） 4种脱氧核苷酸的等量混合液、2种引物 TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水、 电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、 琼脂糖和核酸染料等 琼脂糖凝胶电泳装置 PCR仪 回顾：PCR的条件 （1）DNA（目的基因）模板。 （2）分别与模板DNA相结合的两种引物。 （3）A、T、G、C四种脱氧核苷酸。 （4）耐高温的DNA聚合酶。 （5）稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）。 （6）能严格控制温度的温控设备。 耐高温的DNA聚合酶 引物 四种脱氧核苷酸 DNA模板 PCR反应体系的配方 10倍浓缩的扩增缓冲液 5ul 20mmol/l 的4种脱氧核苷酸的等量混合液 1ul 20umol/l 的引物I 2.5ul 20umol/l 的引物II 2.5ul H2O 28-33ul 1-5U/ul 的Taq DNA聚合酶 1-2U 模板DNA 5-10ul 总体积 50ul 注：模板DNA的用量为1pg-1ug 方法步骤： 用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的 说明书，在微量移液管中依次加入各组分。 2．待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子。