内容正文:
第一章 基因工程
第一节:工具酶的发现和基因工程的诞生
什么是基因工程
神奇的荧光鱼
基因工程:又重组DNA技术,把一种生物的外源基因转入另一种生物体内,使其通过表达产生我们需要的基因产物,并让它获得新的遗传性状。
发荧光的水母
理论上的三大发现
肺炎双球菌转化实验:格里菲斯和艾弗里,发现了生物的遗传物质是DNA,而不是蛋白质。
1953年美国沃森和英国克里克:明确了DNA的双螺旋结构和半保留复制机理。
半保留复制
1963年尼伦伯格和马太
1963年尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的遗传密码,1966年霍拉纳用实验加以证明。
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破译了具有通用性的遗传密码
①手术刀:限制性核酸内切酶
②缝合针:DNA连接酶
③运载体:主要是质粒
技术上的三大工具
目的基因
质粒
重组质粒
受体细胞
大肠杆菌
1973年:基因工程诞生
1973年,美国斯坦福大学
体外重组DNA,并转化成功
1973年,加州大学旧金山分校的赫伯特·博耶 H.Boyer和斯坦福大学的斯坦利·科恩 S. Cohen将外源基因拼接在质粒中,在大肠杆菌中表达,揭开基因工程的序幕。
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基因的剪刀:限制性核酸内切酶,1970年科学家首次从细菌中分离得到。
用途:切割 DNA 分子
对外不对内
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思考1:如何将水母的荧光蛋白基因从水母的 DNA 中分离出来?限制性核酸内切酶:一类能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶(主要从细菌中分离)。
EcoRⅠ:识别GAATTC序列,并在G和A之间切割
结果:形成DNA片段,产生粘性末端
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绝大多数限制酶的识别序列由6 个碱基组成,也有4、5或8个。
限制酶:具有专一性,能够识别特定的核苷酸序列,并在特定的位点上切割双链DNA。
氢键自动断裂
限制酶:只切割磷酸二酯键
粘性末端2
粘性末端1
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特点:具有特异性,一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定位点上切割双链DNA分子。
粘性末端
粘性末端
EcoRI
EcoRI的作用过程
3’
5’
5’∙∙∙∙∙∙∙∙GAATTC ∙∙∙∙∙∙∙∙3’
3’∙∙∙∙∙∙∙∙CTTAAG ∙∙∙∙∙∙∙∙5’
5’∙∙∙∙∙∙∙∙GGATCC ∙∙∙∙∙∙∙∙3’
3’∙∙∙∙∙∙∙∙CCTAGG ∙∙∙∙∙∙∙∙5’
5’∙∙∙∙∙∙∙∙GACGTC ∙∙∙∙∙∙∙∙3’
3’∙∙∙∙∙∙∙∙CTG