内容正文:
名师大讲堂·2013 高考总复习《生物》
土壤中分解尿素、纤维素的细菌的分离与计数
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分离微生物的原理
1.筛选分离菌株的原理
提供有利于目的菌株生长而抑制其它微生物生长的条件,这些条件可以是营养、温度,也可以是PH等。
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2.实例
(1)加入青霉素可以分离出混杂在细菌中的酵母菌和霉菌;
(2)加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌;
(3)培养基中缺乏氮源时,可以分离固氮微生物;
(4)培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物;
(5)培养基中的氮源只有尿素时,理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。
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实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应,用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与下图中的链霉素带接触),将平板置于37℃条件下恒温培养3天,结果如图所示。从实验结果分析以下叙述,不正确的是( )
A.链霉素能阻止结核菌的生长
B.链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效
C.链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效
D.链霉素可以用于治疗伤寒病人
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【解析】 该实验的目的是测定链霉素对3种细菌的作用效果,由于三种细菌的实验条件完全一致(如培养基、温度、划线时均与链霉素带直接接触等),但结果却有明显差异:结核菌数量最少,离链霉素带最远,说明作用效果最好,因此ABC正确;伤寒菌数量最多,在链霉素带附近也能生存,说明链霉素对伤寒菌基本没有效果,D是错误结论。
【答案】 D
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1.通过配置特殊的培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。下列哪项操作最终不能达到分离出相应微生物的目的( )
A.在无氮培养基上可从多种细菌中分离出圆褐固氮菌
B.在缺乏有机碳源的培养基上可以从多种细菌中分离得到硝化细菌
C.在培养基中加青霉素可以从混杂的真菌中分离到酵母菌
D.在培养基中加高浓度食盐可以分离得到金黄色葡萄球菌
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答案:C
解析:圆褐固氮菌可以利用空气中的N2,硝化细菌可以利用空气中的CO2通过化能合成作用合成含碳有机物,而青霉素能抑制原核生物合成肽聚糖,只能将酵母菌从原核生物中分离出来。
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土壤中分解尿素的细菌的分离实验
一、分离土壤中分解尿素的细菌实验
1.本实验的流程:土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物的培养→观察并记录结果→细菌计数
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2.课题延伸——菌种的进一步鉴定
(1)原因:由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以分解尿素的细菌的代谢产物为氮源的其它微生物。
(2)原理:CO(NH2)2+H2Oeq \o(――→,\s\up17(脲酶)) CO2+2NH3;由于NH3的产生,培养基碱性增强,pH升高,因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(3)方法:以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则pH升高,说明该种细菌能分解尿素。
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3.注意事项
(1)要设置重复实验。主要目的是排除实验中人为因素对实验结果的影响,增强实验结果说服力和准确性。统计某一稀释度下平板上的菌落数时,要至少涂布3个平板作重复组。
(2)要设置对照实验:主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。
①判断培养基是否有杂菌污染,需将未接种的相同培养基同条件下同时进行培养。
②判断该培养基是否具有筛选作用,需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种相同样品后同条件下同时培养。
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二、统计微生物数目的方法
1.显微镜直接计数法
(1)原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
(2)方法:用计数板计数。
(3)缺点:不能区分死菌与活菌。
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2.间接计数法(活菌计数法)
(1)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。
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(3)注意事项
①设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
②为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
③当菌落数目稳定时,才能进行计数,