专题5课题3 血红蛋白的提取和分离-2020-2021学年高二生物同步课件讲解（人教版选修1 ）

课题3 血红蛋白的提取和分离 凝胶色谱法 概念： 原理： 凝胶色谱法称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法 大多数凝胶是由多糖类化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过时，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，速度较快。因此得以分离。 凝胶色谱法 缓冲溶液 作用： 配制： 在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界的酸和碱对溶液PH的影响，维持PH基本不变，生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的PH下进行的，为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内过程，就必须保持体外溶液PH与体内一致。 缓冲溶液通常由1-2种缓冲剂溶于水配制而成的，调节缓冲剂的使用比例就可以制得不同PH使用的缓冲液。 电泳 概念： 原理： 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 许多重要的大分子如多肽、核酸等具有可解离的基团，在一定PH下，这些基团会带正电或负电。在电场作用下，这些带电分子会向着与其所带电极相反的电极移动。 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质差异以及本身分子大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现分离。 实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步: 样品处理-----------------粗分离---------纯化-----------纯度鉴定 血红蛋白：血红蛋白由四条肽链组成，包括两条ɑ-肽链和两条β-肽链，每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一份子氧或一份子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素呈红色。 （1）红细胞的洗涤（去除杂蛋白如血浆蛋白） （2）血红蛋白的释放 （使红细胞破裂，释放血红蛋白，以进行提取和分离） （3）分离血红蛋白溶液(经过离心使血红蛋白与其他杂质分离） （4）透析（除去样品中相对分子质量较小的杂质） （5）凝胶色谱柱的制作 （6）凝胶色谱柱的装填 （7）样品的加入和洗脱 （除去相对分子质量较大的杂质） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 目的分析： ①蒸馏水的作用是______________________________。 ②加入甲苯的作用是____________________________。 ③充分搅拌的目的是____________________________。 使红细胞大量吸