专题2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数-2020-2021学年高二生物同步课件讲解（人教版选修1 ）

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 研究思路 一、筛选菌株 （1）自然界中目的细菌的筛选 （2）实验室中目的细菌的筛选 依据： 实例： 根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 PCR技术用到的耐高温的TapDNA聚合酶，是从热泉中筛选出的Tap细菌中提取出来 原理： 方法： 实例： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（营养、温度、PH等）同时抑制或阻止其他微生物的生长。 利用选择培养基分离 选择分解尿素的细菌培养基，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 二.统计菌落数目 三.设置对照 稀释涂布平板法 显微镜技术法 设置对照组的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 例：排除培养基被杂菌污染的情况，需以培养未接种细菌的培养基作为空白对照。 实验设计 土壤中某样品细菌的分离与计数 1.土壤取样 2.样品的稀释 3.微生物的培养与观察 从肥沃、湿润的土壤中取样，绝大多数细菌分布在距地表约3-8cm的土壤层，因此，取样时应先铲去表层的土壤。 稀释原因： 稀释标准： 稀释倍数： 样品中的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目 选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得的菌落30-300之间，便于计数。 土壤中不同微生物的数量不同，需要采用不同的稀释度。 培养： 观察： 不同种类微生物，往往需要不同的培养温度和时间 每隔24h统计一次菌落数量，最后选取菌落数目稳定的记录作为结果 注意事项 （一）无菌操作 小铁铲、信封灭菌、称取、倒入锥形瓶中、稀释土壤在火焰附近操作 （二）做好标记 （三）制定计划 试管多，做好数字标记 制定计划，有条不紊 结果分析与评价 分解尿素的细菌的鉴定 鉴定原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，如果变为红色，初步鉴定该细菌能分解尿素 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3 脲酶 $$