专题5 血红蛋白的提取和分离（备课堂）-【上好课】2020-2021学年高二生物同步备课系列（人教版选修1）

血红蛋白的提取和分离 【学习目标】 1、掌握蛋白质分离的方法凝胶色谱法的原理、缓冲液的制备及作用和蛋白质纯度鉴定的方法电泳法的原理。 2、掌握蛋白质提取和分离的过程。 3、掌握蛋白质分离过程中需注意的问题。 血红蛋白的提取和分离 一、蛋白质分离技术 凝胶色谱法 电泳法 1、蛋白质特性的差异 (1)分子的形状和大小； (2)所带电荷的性质和多少； (3)溶解度； (4)吸附性质； (5)对其他分子的亲和力。 2、分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶：微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构成，内含许多贯穿通道,如葡聚糖或琼脂糖。 相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内部的通道，通过的路程较长，移动速度较慢，因此可将各种相对分子质量不同的蛋白质分离。 ③凝胶色谱法分离蛋白质的原理(如图A) ④分离蛋白质的过程(如图B) 蛋白质混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→先收集大分子→后收集小分子。 (2)电泳 ①概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 ②原理：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 在同一电场下，由于各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 ③电泳常用方法 a.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大小和形状的不同而不同，从而得以分离。 b.聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用：掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。（原理：SDS使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链，并与其结合形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质原有的电荷量。测定的结果只是单条肽链的分子量）