第一部分 微生物的利用 课件 浙科版高中生物选修一

选修一 生物技术实践 第一部分 主讲人：XXX 目 录 第一部分： 微生物的利用 Part 01 实验一：大肠杆菌的培养和分离 大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌（原核生物） 基因工程技术常用的工具 实验一：大肠杆菌的培养和分离 实验内容： 将大肠杆菌扩大培养和划线分离，分离后，一个菌体便会形成一个菌落，单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一 本实验采用LB液体培养基（通常用的细菌培养基）扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体培养基上划线进行分离，随后形成一个个单独的菌落 LOVE (L) - 实验一：大肠杆菌的培养和分离 实验准备：灭菌操作 消毒 使用较为温和的物理方法，杀死物体表面或内部一部分微生物 如煮沸消毒法，巴氏消毒法，化学试剂消毒法 灭菌 使用强烈的理化因素，杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子） 如灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 常用的灭菌方法： 灭菌方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间 灼烧灭菌 接种环、接种针或其他金属用具 在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 直至烧红 干热灭菌 玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具 干热灭菌箱内160℃~170℃加热 1h~2h 高压蒸气灭菌 培养基等 100kPa，121℃ 15min-30min LOVE (L) - 实验一：大肠杆菌的培养和分离 细菌的分离方式： 划线分离法：将混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细菌，经培养后生长繁殖成单菌落。 优点：方法简单 涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释10-5-10-7倍。取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，将培养皿倒置，在37℃恒温中培养24~48h。 优点：单菌落更容易分开 LOVE (L) - 实验一：大肠杆菌的培养和分离 实验步骤： 培养基灭菌 ↓ 倒平板 ↓ 接种 ↓ 划线分离 ↓ 培养观察 50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌 将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面 在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h 用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划