内容正文:
能产生人胰岛素的大肠杆菌
思考:
怎样能够在大肠杆菌中生产人的胰岛素?
这依托于什么技术的发展?
第二节 基因工程原理及技术
问1:基因工程的基本原理是什么?
问2:为实现基因工程的目的,
经过几步操作程序?
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基因工程的基本操作程序
目的基因的获取
基因表达载体的构建
目的基因导入受体细胞
筛选目的基因
第一步
第二步
第三步
第四步
目的基因的表达
第五步
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问3:
人的胰岛素基因存在于人体的什么细胞中?
获得人胰岛素基因的方法有哪些?
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问4:如何进行化学合成?
问5:如何构建基因文库?
通过DNA合成仪用化学方法人工合成
蛋白质的氨基酸顺序
mRAN
核苷酸序列
基因(DNA)的核苷酸序列
目的
基因
推测
推测
合成
当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时,可采用此种方法。
DNA合成仪
DNA合成仪
利用PCR技术扩增目的基因
聚合酶链式反应,在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。
基因文库的构建模式图
通过对
受体菌
的培养而
储存基因
大肠杆菌质粒的分子结构示意图
构建重组DNA活动环节构建重组DNA活动环节
质粒
目的基因
限制酶
基因表达载体的构建
DNA连接酶
重组DNA
1.用一定的_________ 切割质粒,使其出现一个切
口,露出____________。
2.用_____________ 切断目的基因,使其产生_________________。
归纳构建过程:
3. ___________将切下的目的基因片段插入质粒的______处,形成了一个重组DNA分子(基因表达载体、重组质粒)
限制性核酸内切酶
粘性末端
同一种限制性核酸内切酶
相同的粘性末端
切口
DNA连接酶
基因工程的基本操作程序
基因文库
获取目的基因
基因组文库
cDNA文库
化学合成法
PCR扩增法
运载体(细菌质粒)
酶切、连接,构建
重组DNA(基因表达载体)
受体细胞
导入
筛选
动物受精卵
植物体细胞
细菌细胞
组织培养
发酵工程
胚胎移植
表达产物
转基因动物
转基因植物
目的基因的表达与鉴定
总结:
二.基因工程的原理
1.整体原理:
人工的基因重组
2.各步骤原理:
(1)基因能转移:
基因是独立的遗传单位
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