内容正文:
1、工具酶的名称和作用?
2、载体有哪些种类?
3、什么是质粒?
思考:
利用这些工具酶和载体,如何解决转基因的问题?
如:利用大肠杆菌生产人的胰岛素
如何具体实施操作呢
1 获得人的胰岛素基因
——目的基因的获取①
将目的基因转移入大肠杆菌
(1)能否将人的胰岛素基因进入到大肠杆菌中?
——形成重组DNA分子②
(2)怎样才能让大肠杆菌含有重组质粒?
——将重组DNA分子导入受体细胞③
(3)如何判定人的胰岛素基因导入是否成功了?
——筛选含有目的基因的受体细胞④
大肠杆菌能合成人的胰岛素
——目的基因的表达⑤
获得目的基因
形成重组DNA分子
将重组DNA分子导入受体细胞
筛选含有目的基因的受体细胞
目的基因的表达
基因工程基本操作步骤
第一章 基因工程
§1.2 基因工程的原理和技术
1、获取目的基因
基因工程的基本操作步骤
从基因文库中获取目的基因(限制酶切取)
目的基因序列未知
化学方法合成
目的基因
人工合成
聚合酶链式反应扩增(PCR)
目的基因
目的基因序列已知
利用DNA合成仪
反转录法
根据已知的氨基酸序列合成DNA
练习
许多DNA片段
重组DNA分子
限制酶 切割
用DNA 连接酶 将DNA 片段 与载体 连接
受体细胞
导 入
供体细胞中的DNA
通过对受体菌的培养而储存基因
增 殖
多个克隆
①基因组文库的构建
(1)基因文库的构建方法
mRNA
单链DNA
逆转录酶
DNA聚合酶
双链DNA(cDNA)
用DNA连接酶与载体连接
重组体
导入
受体细胞
筛选
含重组体的 受体细胞 (转基因细胞)
多个克隆
增殖
(1)基因文库的构建方法
②cDNA文库的构建方法
基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA导入到适当的宿主细胞中,通过细胞增殖构成各个DNA片段的克隆,这一组克隆