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专题07 DNA和蛋白质技术
①DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低,蛋白质的溶解度最高,DNA形成沉淀析出。
②DNA不溶于95%酒精,某些蛋白质溶于酒精,将DNA与蛋白质进一步分离。
DNA溶解性
(一)DNA的提取
1.DNA的溶解性:DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中和酒精中的溶解度不同。
考点一、DNA的提取和鉴定
2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶水解蛋白质,对DNA没有影响。
②60~80°C的高温中,蛋白质变性后溶解度降低而产生沉淀,DNA在80°C以上才会变性。
③洗涤剂瓦解细胞膜(脂质),对DNA没有影响(在植物材料中提取DNA使用)。
DNA耐受性
DNA 蛋白质
蛋白酶 无影响
(酶的专一性) 水解
高 温 80℃以上变性
(DNA稳定性) 60~80℃变性
洗涤剂 无影响 瓦解细胞膜
洗涤剂瓦解细胞膜示意图
(二)、鉴定提取物——DNA的方法
①DNA遇二苯胺(沸水浴)呈蓝色
②甲基绿与DNA结合,呈绿色
怎样将DNA与细胞中其他生物大分子分离?
(怎样去除滤液中的杂质?)
方法 原理
方案一
方案二
方案三
通过控制NaCl溶液的浓度,去除杂质。
直接在滤液中加入嫩肉粉,反应10~15min,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
将滤液放在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15min,使蛋白质变性
DNA在0.14 mol/L的NaCl中溶解度最小,在高盐溶液中溶解度高,蛋白质则相反
蛋白酶分解蛋白质,不能分解DNA
DNA耐高温,蛋白质60~80℃会变性
考点二、实验方案
【实验步骤】
选择合适材料 破碎细胞,获取含DNA的滤液
去除滤液中的杂质 DNA的析出与鉴定
步骤 操作 原理 DNA 蛋白质
破碎细胞,释放和溶解DNA
去除杂质,将DNA与其他大分子分离
DNA的鉴定
案例一 花菜细胞中的DNA的提取与鉴定
滤液中
滤渣中
DNA析出
溶液中
DNA不溶于酒精,某些蛋白质杂质可溶
•洗涤剂可瓦解细胞膜,•DNA对洗涤剂有耐受性
•食盐可溶解DNA
花菜中加入洗涤剂和食盐,充分研磨
过滤
滤