苏教版高中生物选修1-4.1.2 凝胶色谱法分离血红蛋白-学案（无答案）

凝胶色谱法分离血红蛋白 【学习目标】 1．尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2．了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 【学习重难点】 教学重点：凝胶色谱法的原理和方法 教学难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 【学习过程】 DNA的粗提取和鉴定 完成下列实验步骤： 一、凝胶色谱法 1．概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。 2．原理 （1）由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 。 （2）当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。 二、缓冲溶液 1．作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液pH的影响，维持pH 。 2．配制：由 种缓冲剂溶解于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、电泳 1．概念：指 在电厂的作用下发生 的过程。 2．原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上 或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的分离。 4．方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。 四、实验操作 1．样品处理：通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。 （1）红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中没有 ，表明红细胞已洗涤干净。过程：血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层