内容正文:
微生物的分离和纯培养
目的要求
1.学会将混杂的微生物分离成纯种,掌握统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。
2.学会通过菌落以及培养形态特征区分细菌、放线菌和霉菌。
3.掌握几种纯化微生物的基本操作技术(制作平板、连续稀释、平板划线)。
实验原理
自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起,要研究某种微生物的特性,必须从混杂的微生物类群中分离它,使该微生物处于纯培养状态。这种方法称为微生物的分离与纯化。
纯种:是微生物的某一个种或株,培养中的所有细胞有着共同的来源或仅是同一细胞的后代。
为了获得单个菌体,要把待分离的材料进行适当地稀释,按其生长所需要的条件,使其在平板上,单个菌体繁殖成单个菌落。
由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同,将样品在不同培养基制成的平板上进行分离,依据菌落形态的差异,可以区分细菌、放线菌和霉菌三大类群,并计算出其数量。
菌落特征
大小、形状(圆形,假根状,不规则状)
表面特征(光滑,皱缩,颗粒状,龟裂状,同心圆状)
隆起形状(扩展,台状,凹面,凸面,乳头状)
边缘情况(整齐,波状,裂叶状,锯齿状)
表面光泽(无光泽,金属光泽,闪光)
质地(油脂状,膜状,粘脆)
颜色、透明度
霉菌菌落
酵母菌落
青霉
曲霉
大肠杆菌菌落
伊红美蓝培养基
A:诺尔斯氏链霉菌
B:皮疽诺卡氏菌
C:酒红指孢囊菌
D:游动放线菌
E:小单胞菌
F:马杜拉放线菌
放线菌菌落
A:卡特利链霉菌
B:弗氏链霉菌
C:吸水链霉菌金泪亚种
D:卡那霉素链霉菌
E:除虫链霉菌
F:生磺酸链霉菌
产抗菌素的放线菌
实验材料
1、土壤样品
2、培养基
(1)牛肉膏蛋白胨培养基
(2)高氏1号培养基
(3)马铃薯培养基(PDA培养基)
实验方法与步骤
1.平板的制作:
将已灭菌的培养基融化,冷却到40-50℃,倒入平板。
2.连续稀释法分离土壤中的微生物
计算每克土样中微生物的数量
选择刚好能把菌分开,而稀释倍数最低的平板(含菌落数30~300个)计数。
微生物的细胞个数(个/g)=
平均菌落数×稀释倍数
土壤克数
微生物分离基本方法及原则
分离微生物时一般是根据该微生物对营养,pH,氧气,温度等要求的不同,供给它们合适的条件或加入某种抑制剂,形成只利于该菌种生长,不利于其他菌种生长的环境,从而淘汰不需要的菌种。
分