2018-2019学年中图版高中生物选修一教学案：1.3 测定微生物的数量

第三节测定微生物的数量 一、测定微生物数量的方法 测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。 利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？ 【提示】　血球计数板测出的是全部菌体数，而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。 二、间接计数法的实验设计 1．制备土壤稀释液 取土壤表层5～10 cm处的土样。准确称取1 g土样，放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液。然后进行系列稀释，得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。 2．取样及倒平板[来源:学科网ZXXK] 3．培养 4．观察记录 (1)计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。 (2)计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品菌数＝×稀释倍数。 预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中 问题1 问题2 问题3 问题4 一、微生物生长量的测定 1.测重量法 干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间，再称重。以细菌为例，一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度(如40 ℃)下进行真空干燥。 湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%～25%。 2．计数法 (1)直接计数法 这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌与活菌。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成。 将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌