2018版高考生物（北师大版）大一轮复习讲义（课件+Word版文档）第十一单元 生物技术实践 （4份打包）

[考纲要求]　1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。4.利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用。 考点一　培养基对微生物的选择作用及微生物的纯培养 一、培养基的制备 1．培养基的配制和灭菌 (1)实验原理 ①培养基 a．含义：人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定和保存各种微生物。 b．成分：一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和无机盐等。 ②选择培养基 a．选择依据：不同种类微生物的生长繁殖对营养的要求不同。 b．选择途径：人为控制培养基的pH、碳源、氮源、渗透压等条件。 c．选择结果：使选择的培养基利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他微生物的生存，可以达到分离、培养不同微生物的目的。 ③灭菌 a．灭菌原因：及时杀灭培养基中的微生物，同时防止微生物大量繁殖造成的培养基营养成分的改变。 b．常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌。 (2)方法步骤 培养基的制作流程为：称量→溶化→调pH→分装→加塞和包扎→灭菌→摆斜面及倒平板。 2．培养基的种类 培养基按物理状态可分为液体培养基和固体培养基。 二、培养基对微生物的选择作用 1．探究不同培养基中生长的优势菌群 探究程序：问题→作出假设→设计实验→实施实验→得出结论→表达交流。 2．菌落 (1)含义：将微生物通过某种方法接种到适于生长的固体培养基表面上，在适宜的温度下培养一段时间后，单个的菌体或孢子生长繁殖成的一个个肉眼可见的细胞群体。 (2)细菌与酵母菌的菌落特征 细菌菌落的共同特征为：湿润、黏稠、易用接种环挑起，菌落各部位颜色一致。酵母菌菌落外形上与细菌极为相似，但比细菌菌落大而厚，颜色也较单调。霉菌菌落较疏松，常呈绒毛状、絮状或蜘蛛网状，一般比细菌菌落大几倍到几十倍。 (3)优势菌群的培养基 细菌生长需要的氮源高(C/N为4∶1)，pH中性或微碱性(pH7.2～7.6)，因此培养细菌常采用牛肉膏蛋白胨培养基。酵母菌和霉菌生长所需的碳源含量高(C/N为16∶1)，pH偏酸性(pH5～6)，因此分离真菌常采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(简称PDA)。 三、实验：微生物的分离与纯化 (一)实验原理 1．分离的依据：微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。 2．纯化的依据：将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。 (二)方法步骤 1．微生物的分离 (1)稀释：用1 mL无菌吸管吸取1 mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9 mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。 (2)划线或涂布 ①平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液一环在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。 ②涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上10－4、10－5、10－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1_mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10 min，使菌液吸附进培养基。 (3)培养：将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 ℃培养16～24 h，即可长出单个菌落。 2．接斜面 分别从培养后长出的单个菌落上挑取少许细胞，接种到斜面培养基上，置培养箱或温室37 ℃培养24 h，斜面上菌种长好后，4_℃保存备用。 1．判断常考语句，澄清易混易错 (1)培养基一般都含有水分、碳源、氮源和无机盐等，有时还需要加入一些特殊的物质(　√　) (2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(　×　) (3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(　√　) (4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(　×　) (5)用涂布分离法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落(　√　) 2．分析命题热图，明确答题要点 如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考： (1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？ 提示　获得效果A的接种方法为涂布分离法，获得效果B的接种方法为平板划线分离法。 (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ 提示　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先