专题13 发酵工程（10年汇编）（浙江专用）2017-2026年高考生物真题分类汇编

专题13 发酵工程 10年汇编1年模拟 考点分类 浙江考情 命题规律 考点1 传统发酵技术的应用 2025浙江（1题）、2024浙江（1题）、2023浙江（1题）、2021浙江（1题）、2017浙江（2题） ·情境设置围绕泡菜、果酒、果醋和白酒等传统食品制作。 ·考查菌种特点、发酵条件、制作流程及亚硝酸盐安全检测。 ·趋向以真实生产材料设问，综合考查微生物代谢、条件控制和食品安全。 考点2 微生物的培养与应用 2026浙江（1题）、2023浙江（1题）、2021浙江（2题）、2020浙江（1题）、2018浙江（1题） ·情境设置贴近土壤、泡菜和果醋生产，突出实际筛选任务。 ·考查培养基选择、无菌操作、灭菌、菌落筛选及细胞计数。 ·趋向结合实验设计与结果分析，强化选择培养和鉴别培养的综合应用。 考点3 发酵工程及其应用 2026浙江（1题）、2025浙江（1题）、2020浙江（1题） ·情境设置联系果醋、淀粉酶及现代食品医药生产。 ·考查发酵原料、工艺流程、微生物作用及发酵条件控制。 ·趋向从单一知识判断转向流程分析，突出标准化、可控化和工程化特点。 考点1 传统发酵技术的应用 1．（2025·浙江·1月高考真题）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（    ） A．泡菜的风味由乳酸菌的种类决定 B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌 C．家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸 D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵 【答案】A 【解析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 A、泡菜的风味由原料、发酵菌种类、发酵环境等因素共同决定的，A错误； B、用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧型微生物，B正确； C、家庭酿制米酒主要用的是酵母菌，在酿制米酒的过程中，首先让酵母菌在有氧的环境进行增殖，然后在无氧的环境中进行发酵，C正确； D、传统发酵食品所用的是自然菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，D正确。 故选A。 （2024·浙江·6月高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。 柿子具有较高的营养价值和药用价值。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。    2．下列关于酒精发酵和醋酸发酵的叙述，错误的是（    ） A．酒精发酵是吸能反应 B．酒精发酵在无氧条件下进行 C．醋酸发酵是放能反应 D．醋酸发酵在有氧条件下进行 3．下列关于柿子醋酿造过程的叙述，错误的是（    ） A．加酶榨汁环节加入果胶酶，有利于提高柿子汁产量 B．酒精发酵前可对柿子汁进行杀菌，以利于酒精发酵 C．若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵 D．用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味相同 【答案】2．A 3．D 【解析】酒精发酵是利用的酵母菌的无氧呼吸，需要的是无氧条件；醋酸发酵利用的是醋酸菌的有氧呼吸，需要的是有氧条件。 2．A、酒精发酵是利用的酵母菌的无氧呼吸，属于放能反应，A错误； B、酒精发酵是利用的酵母菌的无氧呼吸，需要的是无氧条件，B正确； C、醋酸发酵利用的是醋酸菌的有氧呼吸，属于放能反应，C正确； D、醋酸发酵利用的是醋酸菌的有氧呼吸，需要的是有氧条件，D正确。 故选A。 3．A、加酶榨汁环节加入果胶酶，破坏其细胞壁，有利于提高柿子汁产量，A正确； B、酒精发酵前可以可对柿子汁进行杀菌，再接种酵母菌，以利于酒精发酵，B正确； C、若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵，避免浓度过高影响醋酸菌生命活动，C正确； D、用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味不相同，D错误。 故选D。 （2023·浙江·6月高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。 小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。酿酒的原理主要是酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。传统酿造工艺流程如图所示。    4．小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正确的是（　　） A．有氧呼吸产生的【H】与O2结合，无氧呼吸产生的【H】不与O2结合 B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行 C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放 D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化 5．关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误的是（　　） A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖 B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测 C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严 D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵 【答案】4．A 5．D 【解析】有氧呼吸的第一、二、三阶段的场所依次是细胞质基质、线粒体基质和线粒体内膜。有氧呼吸第一阶段是葡萄糖分解成丙酮酸和【H】，合成少量ATP；第二阶段是丙酮酸和水反应生成二氧化碳和【H】，合成少量ATP；第三阶段是氧气和【H】反应生成水，合成大量ATP。 4．A、有氧呼吸产生的【H】在第三阶段与O2结合生成水，无氧呼吸产生的【H】不与O2结合，A正确； B、有氧呼吸的第一阶段在细胞质基质中进行，第二和第三阶段分别在线粒体基质和线粒体内膜中进行，无氧呼吸的两个阶段都在细胞质基质中进行，B错误； C、酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸过程中释放的能量均大多以热能散失，但无氧呼吸是不彻底的氧化分解过程，大部分能量存留在酒精，C错误； D、有氧呼吸和无氧呼吸过程都需要酶的催化，只是酶的种类不同，D错误。 故选A。 5．A、由于酿酒酵母不能直接利用淀粉发酵产生酒精（乙醇），故糖化过程主要是利用霉菌分泌的淀粉酶将淀粉分解为葡萄糖，以供发酵利用，A正确； B、发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测，若存在酒精，则酒精与酸性的重铬酸钾反应呈灰绿色，B正确； C、酿造过程中应在无氧条件下进行，若密封不严，会导致醋酸菌在有氧条件下发酵产生醋酸而使酒变酸，C正确； D、蒸熟并摊晾的原料需要冷却后才可加入糟醅，以免杀死菌种，且需要在有氧条件下培养一段时间，让酵母菌大量繁殖，此后再密封进行酒精发酵，D错误。 故选D。 6．（2021·浙江·1月高考真题）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是（　　） A．将白萝卜切成小块 B．向容器中通入无菌空气 C．添加已经腌制过的泡菜汁 D．用沸水短时处理白萝卜块 【答案】B 【解析】1、泡菜腌制过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌，在无氧条件下乳酸菌无氧呼吸产生乳酸。 2、泡菜的制作流程是：选择和处理原料、洗净泡菜坛、调味装坛、密封发酵。 A、将白萝卜切成小块可以扩大白萝卜与腌料的接触面积，缩短腌制时间，A正确； B、泡菜制作所需菌种为乳酸菌，制作过程中应保持无氧环境，向容器中通入无菌空气不利于腌制，B错误； C、泡菜汁中含有一定量的发酵菌种，所以在腌制过程中，加入一些已经腌制过泡菜汁可缩短腌制时间，C正确； D、用沸水短时处理，可抑制某些微生物的繁殖，提高泡菜品质，也可缩短腌制时间，D正确。 故选B。 7．（2017·浙江·11月高考真题）回答下列小题 回答与酿酒和制醋有关的问题: （1）为了获得优良的酿酒红曲霉菌株,将原菌株的孢子诱变处理后制成较稀浓度的单孢子悬液,这样做的目的是在培养时有利于获得__________ （2）大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后,用某酿酒酵母进行酒精发酵,发酵完毕后得到新鲜红曲酒,酒中乙醇浓度不超过15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度接近15%时,__________（A.乙醇氧化逐渐增强直至平衡B.葡萄糖分解逐渐增强直至平衡C.乙醇氧化逐渐减弱直至停止D.葡萄糖分解逐渐减弱直至停止）。 （3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色,采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含量的步骤如下:第一步,标准曲线的制作。用蒸馏水配置__________,与蒽酮试剂反应后,用比色计测定,并制作以__________的标准曲线。第二步,样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色,其目的是__________。第三步,样品测定与计算。 （4）影响红曲酒风味的主要因素,除了温度、pH、氧气等环境因素外,还有__________（答出2点即可）。 （5）在红曲醋生产工艺中,将适量的红曲酒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳糠等制成松散的发酵料,其目的是__________,以利于醋酸发酵。 回答与植物克隆和动物克隆有关的问题: （1）利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径:一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株的__________途径,二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径。另外也可不通过愈伤组织阶段而直接采用带腋芽带的茎段培养成丛状苗,再诱导生根获得再生植株,其原因是腋芽中存在__________。 （7）利用植物克隆培育新品种,一方面可利用带有目的基因的__________侵染植株，或将目的基因通过__________方法导入植物细胞、组织、器官获得转基因植株，另一方面利用异源植株的__________ 进行融合产生杂种植株,或利用异源植株在试管内进行__________,对其产生的胚进行培养产生杂种植株。 （8）下列属于植物克隆和动物克隆共有培养方法是（_____） A悬浮培养、器官培养             B.贴壁培养、传代培养         C.器官培养、愈伤组织培养         D原生质体培养、传代培养 【答案】 单菌落 D 一系列浓度的葡萄糖标准溶液 葡萄糖浓度与光密度值的关系 排除酒原有颜色的干扰 不同的菌株、不同的原料 增加通气性 器官发生 分生组织 农杆菌 显微注射 原生质体 受精 【解析】解答本题需要学生掌握果酒、果醋的制作原理及植物克隆的过程。酵母菌是异养兼性厌氧微生物，在有氧气存在时，其进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧气存在时，其进行发酵，产物是酒精与二氧化碳；醋酸菌是一种异养需氧型微生物，在当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。植物克隆就是植物组织培养的过程，是一种无性繁殖方式，即不需要经过受精过程，直接由母体的一部分直接形成新个体的繁殖方式。 回答与酿酒和制醋有关的问题: （1）为了获得优良的酿酒红曲霉菌株,将原菌株的孢子诱变处理后制成较稀浓度的单孢子悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得单菌落。 （2）在利用酵母菌进行酿酒过程中，乙醇浓度会越来越大，当发酵液中的乙醇浓度接近15%时，会对酵母菌的繁殖起抑制作用，甚至杀死酵母菌，这样会导致葡萄糖分解逐渐减弱直至停止。故选D。 （3）用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含量时，需要有标准的颜色作对比，因此用蒸馏水配置一系列浓度的葡萄糖标准溶液，与蒽酮试剂反应后,用比色计测定,并制作以葡萄糖浓度与光密度值的关系的标准曲线。待测酒品有颜色会干扰实验结果，为排除酒原有颜色的干扰，将待测酒样品通过活性炭脱色。 （4）在制作红曲酒过程中，温度、pH、氧气等环境因素均会影响酵母菌的繁殖，进而影响红曲酒风味，除此之外，不同的菌株、不同的原料也会影响红曲酒风味。 （5）制作红曲醋的微生物是醋酸菌，其是一种好氧菌，将适量的红曲酒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳糠等制成松散的发酵料，其目的是增加通气性，以利于醋酸发酵。 回答与植物克隆和动物克隆有关的问题: （1）利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径:一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株的器官发生途径，二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径。由于胚芽中存在分生组织，其能够不断的分裂，所以也可不通过愈伤组织阶段而直接采用带腋芽的茎段培养成丛状苗，再诱导生根获得再生植株。 （2）农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力，因此可将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上，导入农杆菌，利用带有目的基因的农杆菌侵染植株，通过显微注射方法导入植物细胞、组织、器官获得转基因植株。另一方面利用异源植株的原生质体进行融合产生杂种植株，或利用异源植株在试管内进行受精，对其产生的胚进行培养产生杂种植株。 （3）动物细胞培养即动物克隆的过程是：取动物组织或器官→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→二氧化碳培养箱；植物组织培养属于植物克隆技术。植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养需要离体培养、无菌条件，植物激素（生长素和细胞分裂素）、一定的营养条件、维持适宜的温度和一定的光照条件等。在植物组织细胞培养过程中，需要将植物愈伤组织通过液体悬浮培养，分散成单细胞，这种单细胞能发育成胚状体。由以上分析可知，在植物克隆和动物克隆过程中，共同的培养方法有悬浮培养、器官培养。故选：A。 【点睛】解答本题的关键是需要学生识记果酒、果醋的制作过程，明确制作过程中的微生物的代谢类型及产物。酒精发酵过程中的代谢产物酒精的含量会影响酵母菌的繁殖，要注意控制。醋酸菌是一种好氧菌，因此在进行醋酸发酵时，要不断的通气，植物组织培养的过程是离体的植物器官、组织或细胞→脱分化→愈伤组织→再分化→形成根、芽→植物体。 8．（2017·浙江·4月高考真题）回答下列（一）、（二）小题： （一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题： （1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用________蘸取少量的稀释液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是________。 （2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_______进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与_______发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1cm 的_______，在550nm 光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的_______比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。 （3）已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和_______环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解。 （二）回答与生态工程有关的问题： （1）对农作物秸秆多途径利用的基本过程示意图如下，贯穿全过程的核心技术是________技术。 其中“过腹还田”的具体途径是________。将秸秆和动物粪便等通过微生物发酵产生沼气，这是利用了农业生态工程中的________技术。 （5）农业生产上，畜牧业依赖和受制于种植业，可以通过种植业和畜牧业的________技术提高经济和社会效益。“退耕还林”后，林地的增加可以减少________，更有利于受损生态系统的恢复。使用农药能有效控制农业害虫，但也使生态系统的________减少，因此利用生物的________进行生物防治是今后的发展方向。 【答案】 接种环 B 假丝酵母 对氨基苯磺酸 比色杯 标准曲线 酸性 物质的良性循环 通过农作物秸秆喂养家畜 家畜的粪便再作为肥料施投到农田 洁净可再生的新能源开发 合理优化水土流失 生物多样性 种间关系 【解析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 （一） （1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌，用无菌蒸馏水稀释后，再用接种环蘸取少量的稀释液，在 MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。平板划线的过程为：烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连，因此B正确。 （2）醇类主要是乙醇，由酵母菌进行无氧呼吸产生。在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，然后用光程为 1cm 的比色环，在 550nm 光波下测定光密度值，与已知浓度的亚硝酸钠制作的标准曲线比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。（3）泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和酸性环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解所导致的。 （二） （1）根据对农作物秸秆多途径利用的基本过程示意图可知，贯穿全过程的核心技术是物质的良性循环技术。其中“过腹还田”的具体途径是秸秆→家畜→粪便→农田。将秸秆和动物粪便等通过微生物发酵产生沼气，这是利用了农业生态工程中的洁净可再生的新能源开发技术。 （2）农业生产上，畜牧业依赖和受制于种植业，可以通过种植业和畜牧业的合理优化技术提高经济和社会效益。“退耕还林”后，林地的增加可以减少水土流失，更有利于受损生态系统的恢复。使用农药能有效控制农业害虫，但也使生态系统的生物多样性减少，因此利用生物的种间关系进行生物防治是今后的发展方向。 【点睛】本题考察难度不大，但是对于生态工程的内容，部分同学可能比较陌生，进而造成较大失分。 考点2 微生物的培养与应用 1．（2026·浙江·6月高考真题）在含CaCO3的培养基中，醋酸菌产生的乙酸能与CaCO3反应，使其菌落周围出现透明圈。拟从果园附近的土壤中筛选产酸能力强的醋酸菌，按照取样、扩大培养、筛选、鉴定等步骤进行实验。下列叙述正确的是（     ） A．采集土壤样本时，取地表以下30cm的深层土 B．将土样稀释后，接种至以葡萄糖为唯一碳源的液体培养基进行振荡培养 C．将扩大培养后的菌液进行梯度稀释，涂布于含乙醇及CaCO3的平板上培养 D．挑选平板上直径最大的菌落，提取DNA，测序后比对序列进行鉴定 【答案】C 【解析】A、醋酸菌是好氧微生物，主要分布在氧气充足的土壤表层，30cm深层土氧气含量低，醋酸菌数量少，A错误； B、筛选醋酸菌应使用以乙醇为唯一碳源的选择培养基，葡萄糖为唯一碳源的培养基可支持多种异养微生物生长，无法针对性筛选醋酸菌，B错误； C、梯度稀释后涂布平板可分离得到单菌落，含乙醇的培养基能筛选出可利用乙醇的醋酸菌，CaCO3 可与醋酸菌产生的乙酸反应形成透明圈，便于筛选产酸菌株，C正确； D、产酸能力的判断依据是透明圈直径与菌落直径的比值，比值越大产酸能力越强，而非直接挑选菌落直径最大的菌落，D错误。 2．（2023·浙江·1月高考真题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（    ） A．培养基pH需偏碱性 B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C．需在无氧条件下培养 D．分离得到的微生物均为乳酸菌 【答案】C 【解析】泡菜是利用附生在蔬菜表面的植物乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等发酵制成的。这些微生物一般为厌氧、兼性厌氧或微好氧菌。它们的发酵产物不仅有乳酸，还会有醇、酯等，因而使泡菜具有特殊的风味。 A、因为乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性，A错误； B、平板划线接种时不需要稀释，B错误； C、乳酸菌是厌氧型微生物，所以需在无氧条件下培养，C正确； D、参与泡菜发酵的微生物有乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等，所以分离得到的微生物除了乳酸菌，还会有其他耐高盐的微生物，D错误。 故选C。 3．（2021·浙江·6月高考真题）下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是（　　） A．测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板 B．红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数 C．涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数 D．酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度 【答案】C 【解析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。其中稀释涂布平板法可以用来进行微生物的计数，而平板划线法不能。 A、可用血细胞计数板对原生质体进行计数，一般计数总数不少于300个细胞，A正确； B、活细胞的细胞膜具有选择透过性，红墨水中的色素分子不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，红墨水中的色素分子能进入细胞，所以可用红墨水检测细胞的存活状态并计数，B正确； C、划线分离法不能用于细胞计数，C错误； D、酵母细胞的密度与浑浊度指标存在一定的数量关系，所以酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度，D正确。 故选C。 4．（2020·浙江·7月高考真题）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（    ） A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物 B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒 D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化 【答案】A 【解析】1、微生物培养的关键是防止杂菌污染；培养基制作完成后需要进行灭菌处理，培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌；2、接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。 A、利用尿素固体培养基，由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生长繁殖，而保留利用尿素的微生物，并非杀死，A错误； B、不同的微生物所需的pH不同，所以配置培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确； C、酵母菌不能直接利用淀粉，应用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化，再用酵母菌发酵得到糯米酒，C正确； D、醋化醋杆菌在有氧条件下利用酒精产生醋酸，D正确。 故选A。 5．（2021·浙江·6月高考真题）回答下列（一）、（二）小题： （一）回答与甘蔗醋制作有关的问题： （1）为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经__________后加入3%体积的无水乙醇。然后将10 g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，振荡培养24 h。用__________将少量上述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上，在30 ℃培养48h。再挑取分离培养基上具有__________的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的__________培养基上培养24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。 （2）优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌液在30 ℃、150 r/min 条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中______含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有____________________（答出2点即可）等特点。 （3）制醋过程中，可将甘蔗渣制作成固定化介质，经_________后用于发酵。其固定化方法为_________。 （二）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用于水质监测，基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。 （4）由于人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体__________，导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。 （5）为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制，用 DNA 连接酶将该基因连接到质粒载体形成_______，导入到大肠杆菌菌株 DH5α 中。为了能够连接上该目的基因、并有利于获得含该目的基因的 DH5α 阳性细胞克隆，质粒载体应含有__________（答出2点即可）。提取质粒后，采用____法，将该基因导入到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。 （6）为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选，可用__________分散斑马鱼囊胚的内细胞团，取分散细胞作为初始材料进行__________培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为__________，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。 【答案】 冷却 玻璃刮刀 较大透明圈 斜面 乙醇 耐酒精度高、耐酸高 灭菌 吸附法 富营养化 重组DNA分子 限制性核酸内切酶的识别序列、抗生素抗性基因 显微注射 胰蛋白酶 原代 饲养层细胞 【解析】1、涂布法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在固体培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，是筛选高表达量菌株的常用方法； 2、基因工程的基本操作步骤为：获取目的基因、形成重组DNA分子、将重组DNA分子导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达。 （一） （1）高压蒸汽灭菌刚结束时，培养基温度较高，要等培养基冷却后再加入3%体积的无水乙醇。涂布分离法可用于单菌落分离，使用玻璃刮刀将待分离的菌液涂布到分离培养基的整个平面上。醋酸菌发酵产生的醋酸会使培养基中的CaCO3分解，形成透明圈。菌落小，透明圈大，代表着高产醋酸菌。菌种的贮存方法：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面培养基上，培养24h后，置于4℃冰箱中保存。 （2）醋酸发酵结束的标志性：产物不再增加（醋酸浓度不再上升）或原料消耗到最低值（乙醇含量达到最低）。优质菌种不光要产酸高，还要耐高酸，同时还要耐酒精（原料）等特点。 （3）我们在利用微生物时，常常要求所利用的微生物不被其他微生物污染。因此，在培养微生物时必须进行无菌操作，所以作为固定化介质的甘蔗渣需要经过灭菌处理。甘蔗渣类似果醋发酵装置中的锯末，可使醋杆菌吸附在甘蔗渣上进行发酵。 （二） （1）生活污水富含N、P，未经处理就大量排放，会导致水体富营养化，导致藻类大量繁殖形成水华或赤潮。 （2）具有相同黏性末端的目的基因和载体DNA（如质粒），经DNA连接酶处理后，会形成重组DNA分子。与目的基因相同的限制性核酸内切酶识别序列，可以确保限制性内切酶处理后与目的基因形成相同的黏性末端，以便于和目的基因的连接。标记基因（抗生素抗性基因）的存在，便于筛选含有目的基因的受体细胞。动物基因工程，通常采用显微注射法将重组DNA分子导入动物受精卵中。 （3）使用胰蛋白酶处理囊胚的内细胞团，借助酶的专一性，可分解细胞间质的蛋白质，让细胞分散，便于培养。将分散的细胞初次在卡氏瓶中培养，称之为原代培养。提高细胞克隆形成率的措施有：选择适宜的培养基、添加血清（胎牛血清最好）、饲养层细胞（滋养细胞如经射线照射本身失去增殖力的小鼠成纤维细胞）支持生长、激素（胰岛素等）刺激、使用CO2培养箱、调节pH等。 【点睛】1、熟练掌握微生物的筛选、分离和保存，以及微生物固定化方法是解题的关键； 1、熟练掌握基因工程的基本操作步骤，并了解每一步的目的是解题的关键。 6．（2018·浙江·11月高考真题）回答下列（一）、（二）小题： （一）回答与微生物培养及应用有关的问题： （1）对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从__________时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采用__________方式可较快地进行过滤灭菌。 （2）酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加__________的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是__________。 （3）为筛选胞外A–淀粉酶分泌型菌种，一般从__________（A果园树下      B肉类加工厂周围      C 米酒厂周围 D枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个__________比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取__________用于检测酶活性。 （二）某农业生态工程示意图如下，回答下列问题； （1）该农业生态工程体现的生态工程原理主要是__________。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、__________、系统的有效贡献等三方面进行核算。 （5）若要提高该工程的经济效益，可采用农业生产的__________技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的__________技术放养适量的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。 （6）某小组应用基因工程方法开展适用于该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有____________________（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，__________，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中__________。 【答案】 达到设定的温度或压力值 抽滤 将淀粉分解成糖 作为碳源 C 水解圈直径与菌落直径 上清液 物质循环 系统的实际消费 间种 种植业和畜牧业合理优化 重组DNA的质量和浓度、受体细胞的生长状态与密度 携带目的基因的Ti质粒转移到受体细胞 稳定和高效地表达 【解析】1、酿造果醋的原理：C6H12O6C2H5OH＋CO2，C2H5OH＋O2CH 3COOH＋H2 O。 2、生态工程的原理：物质循环再生原理、协调与平衡原理、整体性原理。 【解析】（一）（1）对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从达到设定的温度或压力值时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采用抽滤方式可较快地进行过滤灭菌，例如尿素。 （2）大米、高粱等原料中富含淀粉，醋化醋杆菌无法直接利用淀粉，应先将淀粉分解为糖。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中蛋白胨为微生物提供氮源，酵母提取物和甘露醇为微生物提供碳源。 （3）以淀粉原料生产酒时，淀粉需在淀粉酶的催化作用下水解为可以进行发酵的糖。因此，可从米酒厂周围获得土样，筛选胞外ａ–淀粉酶分泌型菌种。淀粉遇碘液变蓝，淀粉在ａ–淀粉酶的催化作用下水解生成糊精，糊精滴加碘液，不会变蓝。在培养基表面滴加碘液，由于菌种产生胞外ａ–淀粉酶水解淀粉形成透明圈，透明圈越大，说明ａ–淀粉酶的活性越高。因此，挑选透明水解圈直径与菌落直径比值大的菌落来筛选酶活性较高的菌种。然后利用液体培养基振荡培养进行扩增，再对培养液进行离心取上清液得到淀粉酶提取液，用于检测酶活性。 （二）（1）根据题图中农业生态工程示意图可知，蔗叶、蚕沙养鱼，塘泥作为甘蔗和桑树的肥料回到桑基和蔗基，桑叶养蚕，而桑葚、蚕茧、鱼和甘蔗均可加工，为人类利用，这样实现物质的良性循环。可从系统内部的投入和产出、系统的实际消费、系统的有效贡献等三方面分析该工程的经济效益。 （2）为了提高该工程的经济效益，可采用间种技术在桑基上种植大豆，也可以适量放养鸡鸭等动物来优化种植业和畜牧业等产业结构。 （3）为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有重组DNA的质量和浓度、受体细胞的生长状态与密度等。将重组DNA分子导入受体细胞方法有农杆菌转化法、显微注射技术和氯化钙处理法。其中农杆菌转化法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，携带目的基因的Ti质粒转移到受体细胞，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中稳定和高效地表达。 【点睛】1、识记无菌技术和微生物接种的常用方法及微生物的筛选等进行解答。 2、了解生态工程建设的意义，理解生态工程的概念和遵循的五项基本原理，利用生态工程原理，分析生态环境问题及探求解决问题对策。 3、了解基因工程的基本操作步骤程序，尤其是将重组DNA分子导入受体细胞这一步。 考点3 发酵工程及其应用 1．（2026·浙江·1月高考真题）现代发酵工程已广泛应用于食品、医药等领域。下列叙述错误的是（　　） A．发酵原料无需灭菌处理 B．标准化工艺可控制药品质量 C．常用经选育的优良菌种 D．调控发酵条件可改善食品风味 【答案】A 【解析】A、发酵原料需彻底灭菌（如高压蒸汽灭菌），以消灭杂菌，避免干扰目标菌种代谢或产生有害物质。若原料不灭菌，杂菌繁殖会导致发酵失败，A错误； B、标准化工艺通过控制温度、pH、溶氧量等参数，确保微生物代谢稳定，使药品有效成分含量一致，B正确； C、优良菌种（如高产青霉素的青霉菌）经诱变育种或基因工程改造，可提升产物产量和纯度，是发酵工程的核心要素，C正确； D、调控发酵条件（如乳酸菌发酵的温度、时间）直接影响代谢产物种类（如有机酸、酯类），从而改善酸奶、奶酪等食品的风味和质地，D正确。 故选A。 2．（2025·浙江·6月高考真题）猕猴桃醋生产的基本工艺流程如下，其中①②③表示发酵的三个环节，糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。 下列叙述错误的是（　　） A．通过蒸煮可以杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物 B．麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 C．环节③需要通入无菌空气 D．①②③都需要控制温度、pH 等条件 【答案】B 【解析】A、蒸煮过程中高温可以破坏微生物的细胞结构等，从而杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物，A正确； B、麸曲中的曲霉主要作用是将淀粉等多糖分解为葡萄糖等单糖，而不是对糖类进行氧化分解，B错误； C、环节③是醋酸发酵，醋酸菌是好氧菌，所以需要通入无菌空气，C正确； D、①糖化过程、②酒精发酵、③醋酸发酵都需要适宜的温度和pH等条件来保证微生物的正常生长和代谢，D正确。 故选B。 3．（2020·浙江·1月高考真题）下列关于淀粉酶的叙述，错误的是 A．植物、动物和微生物能产生淀粉酶 B．固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高 C．枯草杆菌淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高 D．淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色 【答案】D 【解析】1.酶 （1）作用:酶是生物体内各种化学反应的催化剂。 （2）特点:它有高度的专一性和高效性、酶的作用受多种因素的影响。 2.固定化酶 概念:将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 A、淀粉酶可以分解淀粉，植物、动物和微生物都能产生淀粉酶，A正确； B、固相淀粉酶不溶于水，比水溶液中的淀粉酶稳定性更高，可以反复利用，B正确； C、枯草杆菌淀粉酶的最适温度为50～75℃，比唾液淀粉酶的高，C正确；     D、淀粉水解时一般先生成糊精（遇碘显红色），再生成麦芽糖（遇碘不显色），最终生成葡萄糖，D错误。 故选D。 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题13 发酵工程 10年汇编1年模拟 考点分类 浙江考情 命题规律 考点1 传统发酵技术的应用 2025浙江（1题）、2024浙江（1题）、2023浙江（1题）、2021浙江（1题）、2017浙江（2题） ·情境设置围绕泡菜、果酒、果醋和白酒等传统食品制作。 ·考查菌种特点、发酵条件、制作流程及亚硝酸盐安全检测。 ·趋向以真实生产材料设问，综合考查微生物代谢、条件控制和食品安全。 考点2 微生物的培养与应用 2026浙江（1题）、2023浙江（1题）、2021浙江（2题）、2020浙江（1题）、2018浙江（1题） ·情境设置贴近土壤、泡菜和果醋生产，突出实际筛选任务。 ·考查培养基选择、无菌操作、灭菌、菌落筛选及细胞计数。 ·趋向结合实验设计与结果分析，强化选择培养和鉴别培养的综合应用。 考点3 发酵工程及其应用 2026浙江（1题）、2025浙江（1题）、2020浙江（1题） ·情境设置联系果醋、淀粉酶及现代食品医药生产。 ·考查发酵原料、工艺流程、微生物作用及发酵条件控制。 ·趋向从单一知识判断转向流程分析，突出标准化、可控化和工程化特点。 考点1 传统发酵技术的应用 1．（2025·浙江·1月高考真题）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（    ） A．泡菜的风味由乳酸菌的种类决定 B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌 C．家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸 D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵 （2024·浙江·6月高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。 柿子具有较高的营养价值和药用价值。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。    2．下列关于酒精发酵和醋酸发酵的叙述，错误的是（    ） A．酒精发酵是吸能反应 B．酒精发酵在无氧条件下进行 C．醋酸发酵是放能反应 D．醋酸发酵在有氧条件下进行 3．下列关于柿子醋酿造过程的叙述，错误的是（    ） A．加酶榨汁环节加入果胶酶，有利于提高柿子汁产量 B．酒精发酵前可对柿子汁进行杀菌，以利于酒精发酵 C．若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵 D．用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味相同 （2023·浙江·6月高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。 小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。酿酒的原理主要是酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。传统酿造工艺流程如图所示。    4．小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正确的是（　　） A．有氧呼吸产生的【H】与O2结合，无氧呼吸产生的【H】不与O2结合 B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行 C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放 D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化 5．关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误的是（　　） A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖 B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测 C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严 D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵 6．（2021·浙江·1月高考真题）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是（　　） A．将白萝卜切成小块 B．向容器中通入无菌空气 C．添加已经腌制过的泡菜汁 D．用沸水短时处理白萝卜块 7．（2017·浙江·11月高考真题）回答下列小题 回答与酿酒和制醋有关的问题: （1）为了获得优良的酿酒红曲霉菌株,将原菌株的孢子诱变处理后制成较稀浓度的单孢子悬液,这样做的目的是在培养时有利于获得__________ （2）大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后,用某酿酒酵母进行酒精发酵,发酵完毕后得到新鲜红曲酒,酒中乙醇浓度不超过15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度接近15%时,__________（A.乙醇氧化逐渐增强直至平衡B.葡萄糖分解逐渐增强直至平衡C.乙醇氧化逐渐减弱直至停止D.葡萄糖分解逐渐减弱直至停止）。 （3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色,采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含量的步骤如下:第一步,标准曲线的制作。用蒸馏水配置__________,与蒽酮试剂反应后,用比色计测定,并制作以__________的标准曲线。第二步,样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色,其目的是__________。第三步,样品测定与计算。 （4）影响红曲酒风味的主要因素,除了温度、pH、氧气等环境因素外,还有__________（答出2点即可）。 （5）在红曲醋生产工艺中,将适量的红曲酒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳糠等制成松散的发酵料,其目的是__________,以利于醋酸发酵。 回答与植物克隆和动物克隆有关的问题: （1）利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径:一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株的__________途径,二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径。另外也可不通过愈伤组织阶段而直接采用带腋芽带的茎段培养成丛状苗,再诱导生根获得再生植株,其原因是腋芽中存在__________。 （7）利用植物克隆培育新品种,一方面可利用带有目的基因的__________侵染植株，或将目的基因通过__________方法导入植物细胞、组织、器官获得转基因植株，另一方面利用异源植株的__________ 进行融合产生杂种植株,或利用异源植株在试管内进行__________,对其产生的胚进行培养产生杂种植株。 （8）下列属于植物克隆和动物克隆共有培养方法是（_____） A悬浮培养、器官培养             B.贴壁培养、传代培养         C.器官培养、愈伤组织培养         D原生质体培养、传代培养 8．（2017·浙江·4月高考真题）回答下列（一）、（二）小题： （一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题： （1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用________蘸取少量的稀释液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是________。 （2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_______进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与_______发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1cm 的_______，在550nm 光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的_______比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。 （3）已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和_______环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解。 （二）回答与生态工程有关的问题： （1）对农作物秸秆多途径利用的基本过程示意图如下，贯穿全过程的核心技术是________技术。 其中“过腹还田”的具体途径是________。将秸秆和动物粪便等通过微生物发酵产生沼气，这是利用了农业生态工程中的________技术。 （5）农业生产上，畜牧业依赖和受制于种植业，可以通过种植业和畜牧业的________技术提高经济和社会效益。“退耕还林”后，林地的增加可以减少________，更有利于受损生态系统的恢复。使用农药能有效控制农业害虫，但也使生态系统的________减少，因此利用生物的________进行生物防治是今后的发展方向。 考点2 微生物的培养与应用 1．（2026·浙江·6月高考真题）在含CaCO3的培养基中，醋酸菌产生的乙酸能与CaCO3反应，使其菌落周围出现透明圈。拟从果园附近的土壤中筛选产酸能力强的醋酸菌，按照取样、扩大培养、筛选、鉴定等步骤进行实验。下列叙述正确的是（     ） A．采集土壤样本时，取地表以下30cm的深层土 B．将土样稀释后，接种至以葡萄糖为唯一碳源的液体培养基进行振荡培养 C．将扩大培养后的菌液进行梯度稀释，涂布于含乙醇及CaCO3的平板上培养 D．挑选平板上直径最大的菌落，提取DNA，测序后比对序列进行鉴定 2．（2023·浙江·1月高考真题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（    ） A．培养基pH需偏碱性 B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C．需在无氧条件下培养 D．分离得到的微生物均为乳酸菌 3．（2021·浙江·6月高考真题）下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是（　　） A．测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板 B．红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数 C．涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数 D．酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度 4．（2020·浙江·7月高考真题）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（    ） A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物 B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒 D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化 5．（2021·浙江·6月高考真题）回答下列（一）、（二）小题： （一）回答与甘蔗醋制作有关的问题： （1）为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经__________后加入3%体积的无水乙醇。然后将10 g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，振荡培养24 h。用__________将少量上述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上，在30 ℃培养48h。再挑取分离培养基上具有__________的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的__________培养基上培养24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。 （2）优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌液在30 ℃、150 r/min 条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中______含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有____________________（答出2点即可）等特点。 （3）制醋过程中，可将甘蔗渣制作成固定化介质，经_________后用于发酵。其固定化方法为_________。 （二）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用于水质监测，基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。 （4）由于人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体__________，导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。 （5）为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制，用 DNA 连接酶将该基因连接到质粒载体形成_______，导入到大肠杆菌菌株 DH5α 中。为了能够连接上该目的基因、并有利于获得含该目的基因的 DH5α 阳性细胞克隆，质粒载体应含有__________（答出2点即可）。提取质粒后，采用____法，将该基因导入到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。 （6）为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选，可用__________分散斑马鱼囊胚的内细胞团，取分散细胞作为初始材料进行__________培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为__________，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。 6．（2018·浙江·11月高考真题）回答下列（一）、（二）小题： （一）回答与微生物培养及应用有关的问题： （1）对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从__________时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采用__________方式可较快地进行过滤灭菌。 （2）酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加__________的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是__________。 （3）为筛选胞外A–淀粉酶分泌型菌种，一般从__________（A果园树下      B肉类加工厂周围      C 米酒厂周围 D枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个__________比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取__________用于检测酶活性。 （二）某农业生态工程示意图如下，回答下列问题； （1）该农业生态工程体现的生态工程原理主要是__________。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、__________、系统的有效贡献等三方面进行核算。 （5）若要提高该工程的经济效益，可采用农业生产的__________技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的__________技术放养适量的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。 （6）某小组应用基因工程方法开展适用于该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有____________________（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，__________，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中__________。 考点3 发酵工程及其应用 1．（2026·浙江·1月高考真题）现代发酵工程已广泛应用于食品、医药等领域。下列叙述错误的是（　　） A．发酵原料无需灭菌处理 B．标准化工艺可控制药品质量 C．常用经选育的优良菌种 D．调控发酵条件可改善食品风味 2．（2025·浙江·6月高考真题）猕猴桃醋生产的基本工艺流程如下，其中①②③表示发酵的三个环节，糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。 下列叙述错误的是（　　） A．通过蒸煮可以杀灭猕猴桃自带的绝大多数微生物 B．麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 C．环节③需要通入无菌空气 D．①②③都需要控制温度、pH 等条件 3．（2020·浙江·1月高考真题）下列关于淀粉酶的叙述，错误的是 A．植物、动物和微生物能产生淀粉酶 B．固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高 C．枯草杆菌淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高 D．淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题13 发酵工程 考点1 传统发酵技术的应用 1.【答案】A 2.【答案】A 3.【答案】D 4.【答案】A 5.【答案】D 6.【答案】B 7.【答案】 单菌落 D 一系列浓度的葡萄糖标准溶液 葡萄糖浓度与光密度值的关系 排除酒原有颜色的干扰 不同的菌株、不同的原料 增加通气性 器官发生 分生组织 农杆菌 显微注射 原生质体 受精 8.【答案】 接种环 B 假丝酵母 对氨基苯磺酸 比色杯 标准曲线 酸性 物质的良性循环 通过农作物秸秆喂养家畜 家畜的粪便再作为肥料施投到农田 洁净可再生的新能源开发 合理优化水土流失 生物多样性 种间关系 考点2 微生物的培养与应用 1.【答案】C 2.【答案】C 3.【答案】C 4.【答案】A 5.【答案】 冷却 玻璃刮刀 较大透明圈 斜面 乙醇 耐酒精度高、耐酸高 灭菌 吸附法 富营养化 重组DNA分子 限制性核酸内切酶的识别序列、抗生素抗性基因 显微注射 胰蛋白酶 原代 饲养层细胞 6.【答案】 达到设定的温度或压力值 抽滤 将淀粉分解成糖 作为碳源 C 水解圈直径与菌落直径 上清液 物质循环 系统的实际消费 间种 种植业和畜牧业合理优化 重组DNA的质量和浓度、受体细胞的生长状态与密度 携带目的基因的Ti质粒转移到受体细胞 稳定和高效地表达 考点3 发酵工程及其应用 1.【答案】A 2.【答案】B 3.【答案】D 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $