项目7 农业微生物及其基本操作技术 安徽省（分类考试和对口招生）《农业生物技术》（高教版第三版） 单元过关卷（原卷版+解析版）

安徽省（分类考试和对口招生）农林牧渔类 《农业生物技术》（高教版第三版） 项目7 农业微生物及其基本操作技术 单元过关卷 时间：60分钟 总分：100分 班级＿＿＿＿　姓名＿＿＿＿　学号＿＿＿＿　成绩＿＿＿＿ 一、单项选择题（本大题共15小题，每题2分，共30分） 1. 下列不属于微生物特征的是（ ） A. 形体微小 B. 种类多 C. 不易发生变异 D. 生长繁殖快 2. 下列不属于真核生物的是（ ） A. 真细菌 B. 霉菌，单细胞藻类 C. 酵母菌、原生动物 D. 真菌 3. 放线菌的菌丝宽______左右，无横隔（ ） A. 1µm B. 4µm C. 5µm D. 2µm 4. 下图表示______微生物生活史。（ ） A. 细菌 B. 放线菌 C. 酵母菌 D. 霉菌 5. 培养农业微生物时，对培养基进行灭菌的常用方法是（ ） A. 高压蒸汽灭菌法 B. 紫外线照射灭菌法 C. 干热空气灭菌法 D. 过滤除菌法 6. 目前已知的大多数微生物是 （ ） A. 光能自养型 B. 光能异养型 C. 化能自养型 D. 化能异养型 7. 在无菌操作中，接种环使用前后通常采用的灭菌方法是（ ） A. 化学药剂浸泡法 B. 高压蒸汽灭菌法 C. 紫外线照射灭菌法 D. 火焰灼烧灭菌法 8. 下图中微生物根用于生产微生物肥料，在根瘤菌肥料制品中，起关键作用的是（ ） A. 死的根瘤菌 B. 活的根瘤菌 C. 死、活两种根瘤菌 D. 根瘤菌肥料制品中的所有物质 9. 根据菌落的形态进行初步筛选，选出平板中未退化的菌落，将其挑出，不得少于_____ 个菌落，接种于试管斜面上。（ ） A. 12 B. 25 C. 30 D. 60 10. 丝状真菌分离不宜采用（ ） A. 饵诱法 B. 组织分离法 C. 孢子分离法 D. 稀释法 11. 丝状真菌和产孢微生物常用_____接种方法。（ ） A. 画线法 B. 点种法 C. 涂布法 D. 浸洗法 12. 下图展示平板接种常使用的方法是（ ） A. 划线 B. 涂布 C. 点种 D. 摇管 13. 细菌和单细胞微生物的平板接种常使用_____接的方法。（ ） A. 画线 B. 涂布 C. 划线、涂布 D. 点种 14. 摇瓶培养技术中28℃，200～300 r/min振荡培养真菌，培养______，就可以收获了。（ ） A. 1～2 天 B. 2～3 天 C. 3～4天 D. 4～5 天 15. 苏云金芽孢杆菌菌体农药生产中，要及时镜检发酵液，当 _____的菌体产生芽孢时，即达到了发酵终点。（ ） A. 60% B. 70% C. 80% D. 100% 二、多项选择题（本大题共10小题，每题3分，共30分） 16. 进行微生物无菌操作时，正确的做法有（ ） A. 接种环使用前后灼烧灭菌 B. 试管塞取下后平放在桌面 C. 用口直接吸取菌液 D. 培养管管口经过火焰灭菌 17. 关于生物农药特点的表述，正确的有（ ） A. 对非靶标生物的影响相对较小 B. 在环境中通常较易降解 C. 对病虫害具有较强的选择性 D. 防治作用通常速效、持久 18. 关于苏云金芽孢杆菌生物学特性的表述，正确的有（ ） A. 属于好氧性细菌 B. 革兰氏染色呈阳性 C. 可形成具有杀虫作用的伴孢晶体 D. 主要依靠芽孢直接毒杀害虫 19. 关于微生物肥料优点的表述，正确的有（ ） A. 肥效发挥通常不受环境条件影响 B. 施用量通常较少 C. 对生态环境一般较为友好 D. 生产成本通常较低 20. 下图展示平板接种常使用的划线的方法，适合用此方法进行平板接种的微生物有（ ） A. 产孢微生物 B. 丝状真菌 C. 单细胞微生物 D. 细菌 21. 下列微生物中属于化能自养型的有（ ） A. 硝化细菌 B. 硫化细菌 C. 铁细菌 D. 蓝细菌 22. 下列微生物的营养类型是化能自养型的是（ ） A. 铁细菌 B. 硫化细菌 C. 紫硫细菌 D. 硝化细菌 23. 平板培养细菌和单细胞微生物常用的接种方法是（ ） A. 摇管 B. 涂布 C. 点种 D. 划线 24. 苏云金杆菌制剂常用的质量检测方法有（ ） A. 血细胞板计数法 B. 平皿培养计数法 C. 生物测定法 D. 目测法 25. 种保藏包含的内容有（ ） A. 菌种的保持 B. 菌种的活化 C. 菌种的发酵 D. 菌种的贮存 三、填空题（本大题共5小题，每题2分，共10分） 26. 全部放线菌的营养类型是______。 27. 土壤中细菌的分离步骤：查资料、定方案→土壤样品采样方法→土壤样品预处理→______→______→鉴定及性能测试 28. 苏云金芽孢杆菌制剂的生产可采用______培养、______培养、______培养三种方法。 29. 对于保存下来的菌种，进行生产性状测定，如______、原料利用率，综合考虑，选出优秀的菌种加以保存。 30. 移植间隔时间因菌种特性、培养条件及保藏温度而异，以保藏温度影响最大，4℃保藏一般为______月。 四、分析题（本大题共2小题，每题5分，共10分） 31. 根据自己所学知识，简述摇瓶培养技术路线和操作步骤。 32. 根据自己所学知识，简述发酵罐液体深层培养技术的注意事项。 五、应用题（本大题共2小题，每题5分，共10分） 33. 某土壤样品需分离培养其中的细菌。现取 10.0 g 土样，加入 90 mL 无菌生理盐水，充分振荡制成土壤悬液，再进行连续 10 倍稀释。分别取 10-5 和 10-6 稀释液各 0.2 mL 涂布于固体培养基上，培养后两平板菌落数分别为 146 个和 18 个。请完成下列操作与分析。（1）写出土壤中细菌分离的主要操作步骤。（2）判断哪一个平板适合用于菌落计数，并计算原土样中细菌的活菌数，结果以 CFU/g 表示。（3）若获得目标菌落，简述其纯化培养和 4℃斜面保藏的基本操作。 34. 某植物叶片表面有疑似真菌病斑，实验室拟分离病原真菌并进行摇瓶培养。现有 4 个培养皿，每皿需加入 20 mL 马铃薯葡萄糖培养基；该培养基配方为每升含培养基粉末 39 g。请完成下列任务。（1）写出植物上真菌分离的主要步骤，并说明表面消毒的目的。（2）计算配制 4 个培养皿所需培养基粉末的质量，并写出培养基使用前的基本灭菌处理。（3）从平板上获得纯菌落后，说明接种到摇瓶进行液体培养时的主要操作和注意事项。 六、综合应用题（本大题共1小题，每题10分，共10分） 35. 某农业技术推广中心从连作蔬菜田采集土样，采用平板培养技术分离土壤细菌。称取土样10.00 g，加入90 mL无菌水充分振荡，制成土壤悬液；再进行梯度稀释，分别取10-4、10-5和10-6稀释液各0.1 mL涂布于培养基平板上。培养后，10-4稀释度平板菌落密集无法计数，10-5稀释度平板有156个菌落，10-6稀释度平板有18个菌落。假定菌液混合均匀，且每个菌落均由一个活菌形成。（1）根据10-5稀释度平板的结果，计算原始土壤悬液的活菌浓度，并换算为每克土壤中的菌落形成单位，结果用科学记数法表示。（2）判断上述哪一个稀释度的平板适合作为菌落计数依据，并说明理由。（3）该中心希望提高土壤中非优势菌的分离率，请提出两项改进措施，并说明平板培养过程中应注意的一项关键操作。 原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！ 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 安徽省（分类考试和对口招生）农林牧渔类 《农业生物技术》（高教版第三版） 项目7 农业微生物及其基本操作技术 单元过关卷 时间：60分钟 总分：100分 班级＿＿＿＿　姓名＿＿＿＿　学号＿＿＿＿　成绩＿＿＿＿ 一、单项选择题（本大题共15小题，每题2分，共30分） 1. 下列不属于微生物特征的是（ ） A. 形体微小 B. 种类多 C. 不易发生变异 D. 生长繁殖快 【答案】C 【解析】微生物具有独有的特征，如形体微小，结构简单；分布广，种类多；生长繁殖快，代谢能力强；易发生变异。 2. 下列不属于真核生物的是（ ） A. 真细菌 B. 霉菌，单细胞藻类 C. 酵母菌、原生动物 D. 真菌 【答案】A 【解析】真细菌没有成形的细胞核，属于原核生物；霉菌、单细胞藻类、酵母菌、原生动物和其他真菌的细胞内具有成形的细胞核，均属于真核生物。因此，不属于真核生物的是A真细菌。 3. 放线菌的菌丝宽______左右，无横隔（ ） A. 1µm B. 4µm C. 5µm D. 2µm 【答案】A 【解析】放线菌的菌丝细而长，菌丝宽度约为1µm，通常无横隔，形态上与真菌菌丝相似。因此选A。 4. 下图表示______微生物生活史。（ ） A. 细菌 B. 放线菌 C. 酵母菌 D. 霉菌 【答案】A 【解析】图为细菌生活史。 5. 培养农业微生物时，对培养基进行灭菌的常用方法是（ ） A. 高压蒸汽灭菌法 B. 紫外线照射灭菌法 C. 干热空气灭菌法 D. 过滤除菌法 【答案】A 【解析】高压蒸汽灭菌法利用高温高压蒸汽杀灭培养基中的微生物及其芽孢，适用于大多数耐热培养基。紫外线、干热空气和过滤除菌法分别适用于空气或表面、玻璃器皿以及不耐热液体等对象。 6. 目前已知的大多数微生物是 （ ） A. 光能自养型 B. 光能异养型 C. 化能自养型 D. 化能异养型 【答案】D 【解析】绝大多数细菌、全部放线菌及真核微生物的营养类型都是化能异养型。 7. 在无菌操作中，接种环使用前后通常采用的灭菌方法是（ ） A. 化学药剂浸泡法 B. 高压蒸汽灭菌法 C. 紫外线照射灭菌法 D. 火焰灼烧灭菌法 【答案】D 【解析】接种环能够耐受短时间高温，使用前后在火焰上灼烧可迅速杀灭环上的微生物，是常用的无菌操作方法。高压蒸汽、紫外线和化学药剂浸泡通常不适合作为接种环即时灭菌的主要方法。 8. 下图中微生物根用于生产微生物肥料，在根瘤菌肥料制品中，起关键作用的是（ ） A. 死的根瘤菌 B. 活的根瘤菌 C. 死、活两种根瘤菌 D. 根瘤菌肥料制品中的所有物质 【答案】B 9. 根据菌落的形态进行初步筛选，选出平板中未退化的菌落，将其挑出，不得少于_____ 个菌落，接种于试管斜面上。（ ） A. 12 B. 25 C. 30 D. 60 【答案】C 【解析】根据菌落形态进行初步筛选时，应从平板中挑取足够数量的、形态符合要求且未退化的菌落，以提高筛选结果的代表性。通常挑取的菌落数不得少于30个，因此选C。 10. 丝状真菌分离不宜采用（ ） A. 饵诱法 B. 组织分离法 C. 孢子分离法 D. 稀释法 【答案】D 【解析】丝状真菌菌丝发达，易形成菌丝团，采用稀释法时菌丝和孢子不易均匀分散，难以形成分离良好的单菌落。因此，丝状真菌分离通常采用组织分离法、孢子分离法或饵诱法，不宜采用稀释法。 11. 丝状真菌和产孢微生物常用_____接种方法。（ ） A. 画线法 B. 点种法 C. 涂布法 D. 浸洗法 【答案】B 【解析】丝状真菌和产孢微生物通常以孢子或菌丝块为接种材料，采用点种法可将接种物分别接种于培养基的不同位置，便于观察其萌发、生长和产孢情况。 12. 下图展示平板接种常使用的方法是（ ） A. 划线 B. 涂布 C. 点种 D. 摇管 【答案】B 13. 细菌和单细胞微生物的平板接种常使用_____接的方法。（ ） A. 画线 B. 涂布 C. 划线、涂布 D. 点种 【答案】C 【解析】细菌和单细胞微生物的菌体分散性较好，平板接种时常用划线法和涂布法。划线法可通过连续划线逐步稀释菌液，涂布法可使菌液均匀分布在培养基表面，二者均可用于分离单菌落。因此选C。 14. 摇瓶培养技术中28℃，200～300 r/min振荡培养真菌，培养______，就可以收获了。（ ） A. 1～2 天 B. 2～3 天 C. 3～4天 D. 4～5 天 【答案】B 【解析】摇瓶培养技术振荡培养及收获：细菌一般在30℃，380～480 r/min振荡，培养24～48 h；真菌为28℃，200～300 r/min振荡，培养48～72 h，就可以收获了。 15. 苏云金芽孢杆菌菌体农药生产中，要及时镜检发酵液，当 _____的菌体产生芽孢时，即达到了发酵终点。（ ） A. 60% B. 70% C. 80% D. 100% 【答案】C 【解析】苏云金芽孢杆菌菌体农药生产中，要及时镜检发酵液，当80%的菌体产生芽孢时，即达到了发酵终点 二、多项选择题（本大题共10小题，每题3分，共30分） 16. 进行微生物无菌操作时，正确的做法有（ ） A. 接种环使用前后灼烧灭菌 B. 试管塞取下后平放在桌面 C. 用口直接吸取菌液 D. 培养管管口经过火焰灭菌 【答案】AD 【解析】接种环使用前后灼烧以及培养管管口经过火焰灭菌，均可减少杂菌污染。试管塞不能平放在桌面，吸取菌液也不能用口直接进行。 17. 关于生物农药特点的表述，正确的有（ ） A. 对非靶标生物的影响相对较小 B. 在环境中通常较易降解 C. 对病虫害具有较强的选择性 D. 防治作用通常速效、持久 【答案】ABC 【解析】生物农药通常具有选择性较强、环境相容性较好和易于降解等特点，对非靶标生物的影响相对较小。与化学农药相比，生物农药的作用速度通常较慢，持效期也不一定较长，因此D项错误。 18. 关于苏云金芽孢杆菌生物学特性的表述，正确的有（ ） A. 属于好氧性细菌 B. 革兰氏染色呈阳性 C. 可形成具有杀虫作用的伴孢晶体 D. 主要依靠芽孢直接毒杀害虫 【答案】ABC 【解析】苏云金芽孢杆菌属于好氧性、革兰氏染色阳性的芽孢杆菌，产孢过程中可形成含有杀虫性晶体蛋白的伴孢晶体。芽孢主要有利于菌体抵抗不良环境，并不是直接发挥杀虫作用的主要物质。 19. 关于微生物肥料优点的表述，正确的有（ ） A. 肥效发挥通常不受环境条件影响 B. 施用量通常较少 C. 对生态环境一般较为友好 D. 生产成本通常较低 【答案】BCD 【解析】微生物肥料主要通过有益微生物的生命活动发挥肥效，通常具有生产成本较低、施用量较少和对生态环境较为友好等特点。其肥效受温度、水分、酸碱度等环境条件影响，不能认为完全不受环境条件影响。 20. 下图展示平板接种常使用的划线的方法，适合用此方法进行平板接种的微生物有（ ） A. 产孢微生物 B. 丝状真菌 C. 单细胞微生物 D. 细菌 【答案】CD 21. 下列微生物中属于化能自养型的有（ ） A. 硝化细菌 B. 硫化细菌 C. 铁细菌 D. 蓝细菌 【答案】ABC 【解析】化能自养型微生物以无机物氧化释放的能量为能源，并以二氧化碳等无机碳源合成有机物。硝化细菌利用含氮化合物的氧化获得能量，硫化细菌利用硫化物或单质硫的氧化获得能量，铁细菌利用亚铁离子的氧化获得能量，三者均属于化能自养型。蓝细菌主要依靠光合作用获取能量，属于光能自养型。因此正确选项为A、B、C。 22. 下列微生物的营养类型是化能自养型的是（ ） A. 铁细菌 B. 硫化细菌 C. 紫硫细菌 D. 硝化细菌 【答案】ABD 【解析】化能自养型 硝化细菌、硫化细菌、 铁细菌、氢细菌等 23. 平板培养细菌和单细胞微生物常用的接种方法是（ ） A. 摇管 B. 涂布 C. 点种 D. 划线 【答案】BD 【解析】细菌和单细胞微生物的平板接种常使用划线和涂布的方法。 24. 苏云金杆菌制剂常用的质量检测方法有（ ） A. 血细胞板计数法 B. 平皿培养计数法 C. 生物测定法 D. 目测法 【答案】ABC 【解析】苏云金芽孢杆菌制剂的质量检测可采用血细胞板计数法测定孢子或芽孢数量，采用平皿培养计数法测定活菌数，还可通过生物测定法评价其杀虫活性。目测法只能进行粗略观察，不能作为可靠的质量检测方法。因此A、B、C正确。 25. 种保藏包含的内容有（ ） A. 菌种的保持 B. 菌种的活化 C. 菌种的发酵 D. 菌种的贮存 【答案】AD 【解析】菌种保藏，包含两方面的内容： 一是菌种的保持，即保持其存活和不受污染；二是菌种的贮存，使其在相当长时期内维持稳定的遗传潜力，两者缺一不可。 三、填空题（本大题共5小题，每题2分，共10分） 26. 全部放线菌的营养类型是______。 【答案】化能异养型 【解析】放线菌不能进行光合作用，主要通过分解和吸收有机物获得能量和碳源，营养类型属于化能异养型。因此填“化能异养型”。 27. 土壤中细菌的分离步骤：查资料、定方案→土壤样品采样方法→土壤样品预处理→______→______→鉴定及性能测试 【答案】① 稀释分离 ② 纯化 【解析】土壤中细菌的分离通常先查阅资料、确定实验方案，再进行土壤样品采样和预处理；随后通过梯度稀释和平板分离获得菌落，再对目标菌落进行纯化，最后开展菌株鉴定及性能测试。因此两处依次应填“稀释分离”和“纯化”。 28. 苏云金芽孢杆菌制剂的生产可采用______培养、______培养、______培养三种方法。 【答案】① 液体深层 ② 固体发酵 ③ 液体浅层 【解析】苏云金芽孢杆菌制剂生产可根据培养基状态和培养设备采用液体深层培养、固体发酵和液体浅层培养三种方法。液体深层培养适于在发酵罐中进行，固体发酵以固体基质为培养基，液体浅层培养则在较浅的液体培养基中进行。因此三处依次填“液体深层”“固体发酵”“液体浅层”。 29. 对于保存下来的菌种，进行生产性状测定，如______、原料利用率，综合考虑，选出优秀的菌种加以保存。 【答案】产量、生产周期 【解析】对于保存下来的菌种，进行生产性状测定，如产量、生产周期、原料利用率，综合考虑，选出优秀的菌种加以保存。 30. 移植间隔时间因菌种特性、培养条件及保藏温度而异，以保藏温度影响最大，4℃保藏一般为______月。 【答案】3~6个 【解析】移植间隔时间因菌种特性、培养条件及保藏温度而异，以保藏温度影响最大，4℃保藏一般为3~6个月。 四、分析题（本大题共2小题，每题5分，共10分） 31. 根据自己所学知识，简述摇瓶培养技术路线和操作步骤。 【答案】技术路线：斜面菌种→活化→摇瓶接种→振荡培养→收获 操作步骤： （1）菌种活化：同斜面菌种保藏法。 （2）摇瓶接种: 一般500 mL三角瓶，装液体培养基100 mL，接种量一般为10%。 （3）振荡培养及收获： 细菌一般在30℃，380～480 r/min振荡，培养24～48 h；真菌为28℃，200～300 r/min振荡，培养48～72 h，就可以收获了。 【解析】摇瓶培养的基本技术路线为：斜面菌种菌种活化摇瓶接种振荡培养收获。操作时，先将斜面保藏菌种转接到适宜培养基上进行活化，确认菌种生长正常且无污染；再将活化菌种以无菌操作接入装有液体培养基的三角瓶中，控制装液量和接种量，通常可采用500mL三角瓶装液100mL、接种量约10%的条件。接种后塞好瓶口，置于适宜温度和转速下振荡培养。细菌通常可在约30℃、380～480r/min条件下培养24～48h；真菌通常可在约28℃、200～300r/min条件下培养48～72h。培养结束后，根据菌体生长量、培养液状态或目标产物含量确定收获时间。全过程应严格执行无菌操作，防止杂菌污染。 32. 根据自己所学知识，简述发酵罐液体深层培养技术的注意事项。 【答案】（1）接种时，应注意保持罐压在0.05MPa，停止搅拌，接种要快、准、稳。 （2）整个培养过程，都要维持发酵罐的罐内正压，一般为0.05 MPa。 （3）培养过程要注意防止染菌，及时取样检查和测定各项指标，保证发酵正常进行。 （4）发酵与控制 在发酵过程中，要进行控温、控pH、控通气量、控转速、中间补料及消泡等操作，及时检测生物量、残糖量、粗蛋白含量等指标。 【解析】发酵罐液体深层培养的注意事项主要包括：接种前后保持适宜的罐压，接种时可将罐压维持在约0.05MPa，必要时停止搅拌，接种操作应迅速、准确、平稳；培养过程中持续维持罐内正压，降低外界空气进入造成污染的风险；定期或按需取样，检查菌体生长、培养液状态及相关理化指标；根据培养需要及时控制温度、pH、通气量、搅拌转速，并进行补料和消泡。还应检测生物量、残糖量、粗蛋白含量等指标，及时调整培养条件，保证发酵正常进行。 五、应用题（本大题共2小题，每题5分，共10分） 33. 某土壤样品需分离培养其中的细菌。现取 10.0 g 土样，加入 90 mL 无菌生理盐水，充分振荡制成土壤悬液，再进行连续 10 倍稀释。分别取 10-5 和 10-6 稀释液各 0.2 mL 涂布于固体培养基上，培养后两平板菌落数分别为 146 个和 18 个。请完成下列操作与分析。（1）写出土壤中细菌分离的主要操作步骤。（2）判断哪一个平板适合用于菌落计数，并计算原土样中细菌的活菌数，结果以 CFU/g 表示。（3）若获得目标菌落，简述其纯化培养和 4℃斜面保藏的基本操作。 【答案】（1）称取土样并加入无菌生理盐水，充分振荡混匀；按10倍梯度进行系列稀释；选择适宜稀释度，吸取一定体积稀释液涂布于固体培养基；倒置培养并观察菌落；挑取形态不同的单菌落进行划线纯化。（2）146个菌落的平板适合计数。原始土壤悬液中的活菌浓度为：N=146÷（0.2×10^-5）=7.3×107 CFU/mL。该悬液由10g土样加90mL无菌生理盐水制得，共约100mL，因此原土样中细菌的活菌数为：7.3×107×100÷10=7.3×108 CFU/g。18个菌落低于通常适宜计数范围，不能作为主要计数依据。（3）从目标菌落边缘挑取少量菌体，在新鲜固体培养基上连续划线培养，直至菌落形态一致；将纯培养物接种于斜面培养基，培养至适宜程度后密封，标明菌种、日期和编号，置于4℃保藏，并定期转接。 【解析】土样经无菌生理盐水振荡混匀后，连续10倍稀释，取适量稀释液涂布培养并挑取单菌落纯化。146个菌落在30～300个范围内，适合计数；活菌数=146÷(0.2×10^-5)×100÷10=7.3×108 CFU/g。纯培养物接种斜面，培养、标记后密封，置4℃保藏并定期转接。 34. 某植物叶片表面有疑似真菌病斑，实验室拟分离病原真菌并进行摇瓶培养。现有 4 个培养皿，每皿需加入 20 mL 马铃薯葡萄糖培养基；该培养基配方为每升含培养基粉末 39 g。请完成下列任务。（1）写出植物上真菌分离的主要步骤，并说明表面消毒的目的。（2）计算配制 4 个培养皿所需培养基粉末的质量，并写出培养基使用前的基本灭菌处理。（3）从平板上获得纯菌落后，说明接种到摇瓶进行液体培养时的主要操作和注意事项。 【答案】（1）选取病健交界处组织，剪成小块；用无菌水清洗后进行适度表面消毒，再用无菌水漂洗并吸干；将组织块接种于固体培养基，培养并观察菌丝；挑取菌丝尖端或边缘转接，获得纯培养物。表面消毒用于去除材料表面附着的杂菌，减少外源污染。（2）总培养基体积为 mL。所需粉末质量为 g。称取 3.12 g 培养基粉末，加适量蒸馏水溶解并定容至 80 mL，分装后经高压蒸汽灭菌，冷却至适宜温度后倒平板。（3）挑取纯培养物接种入无菌液体培养基，控制接种量和培养液体积，塞好瓶口并置于适宜温度下振荡培养；操作中应严格无菌，避免培养基污染，并根据菌丝生长和培养液状态判断培养情况。 【解析】（1）病健交界处含有较活跃的病原菌，表面消毒可降低杂菌干扰。（2）按培养基浓度与总体积换算，需 3.12 g 粉末。（3）摇瓶培养要求纯菌种、无菌接种、适宜装液量和振荡条件。 六、综合应用题（本大题共1小题，每题10分，共10分） 35. 某农业技术推广中心从连作蔬菜田采集土样，采用平板培养技术分离土壤细菌。称取土样10.00 g，加入90 mL无菌水充分振荡，制成土壤悬液；再进行梯度稀释，分别取10-4、10-5和10-6稀释液各0.1 mL涂布于培养基平板上。培养后，10-4稀释度平板菌落密集无法计数，10-5稀释度平板有156个菌落，10-6稀释度平板有18个菌落。假定菌液混合均匀，且每个菌落均由一个活菌形成。（1）根据10-5稀释度平板的结果，计算原始土壤悬液的活菌浓度，并换算为每克土壤中的菌落形成单位，结果用科学记数法表示。（2）判断上述哪一个稀释度的平板适合作为菌落计数依据，并说明理由。（3）该中心希望提高土壤中非优势菌的分离率，请提出两项改进措施，并说明平板培养过程中应注意的一项关键操作。 【答案】（1）原始土壤悬液活菌浓度：156÷（0.1×10-5）＝1.56×108 CFU/mL。每克土壤的活菌数：1.56×108×100÷10＝1.56×109 CFU/g。（2）选择10-5稀释度平板。该平板有156个菌落，处于通常适宜计数的30～300个菌落范围内；10-4平板菌落过密，10-6平板菌落数过少，代表性较差。（3）可采用低营养培养基或选择性培养基，抑制优势菌过快生长；可设置不同培养温度、培养时间或预富集条件，扩大非优势菌的检出范围。平板涂布时应使用无菌器具，并使菌液均匀分布，避免交叉污染和菌落融合。 【解析】（1）每毫升原始悬液所含活菌数按156÷（0.1×10-5）计算，再根据100 mL悬液由10 g土样制得，换算每克土壤菌数。（2）菌落数在30～300之间的平板计数较可靠。（3）非优势菌分离应改变培养条件或利用选择性培养，并严格执行无菌操作。 原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！ 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $