精品解析：广东省汕尾市部分校2025-2026学年高二下学期期末考试生物试卷

2025—2026学年度第二学期期末教学质量监测 高中二年级生物学 本试题共8页，考试时间75分钟，满分100分 注意事项： 1.答题前，考生先将自己的信息填写清楚、准确，将条形码准确粘贴在条形码粘贴处。 2.请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效。 3.答题时请按要求用笔，保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，不得使用涂改液、修正带、刮纸刀。考试结束后，请将本试题及答题卡交回。 一、选择题：本题共16小题，共40分。第1～12小题，每小题2分；第13～16小题，每小题4分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 下列调查方法中，不能用于调查群落物种丰富度的是（ ） A. 样方法 B. 标记重捕法 C. 取样器取样法 D. 黑光灯诱捕法 2. 人类道路、农田分割致使野生大熊猫栖息地破碎化，种群彼此隔离。当地修建生态廊道以连接破碎化的栖息地，廊道内除大熊猫的主食箭竹外，还搭配种植乔木、灌木和多种草本植物。下列相关叙述错误的是（ ） A. 修建连通栖息地的生态廊道属于就地保护措施 B. 生态廊道能打破地理隔离，促进种群基因交流，提升生物多样性 C. 廊道内搭配种植多种植物，主要依据生态工程的自生、协调原理 D. 廊道内的大熊猫粪便中的物质和能量可通过分解者流向生产者 3. 在我国温带地区，呼伦贝尔草原群落的不同地段水分、土壤盐碱度差异较大，植物多为耐寒、耐旱的草本植物；长白山红松阔叶林群落层次分明，环境条件相对稳定。关于这两个群落，下列说法正确的是（ ） A. 相较于长白山红松阔叶林群落，呼伦贝尔草原群落的水平镶嵌性分布更明显 B. 无外界人为干扰时，呼伦贝尔草原群落最终会演替至森林群落阶段 C. 区别这两个群落最重要的特征是群落外貌和物种丰富度 D. 长白山红松阔叶林群落中的动物以奔跑、穴居类型为主 4. 在进行土壤中尿素分解菌的分离实验时，下列说法正确的是（ ） A. 在使用接种室之前，可用紫外线照射以杀死空气中的全部微生物 B. 配制的培养基应以尿素为唯一的氮源，同时不需要加入碳源 C. 尿素分解菌产生的脲酶将尿素分解成NH3，NH3可作为其生长的氮源 D. 可用平板划线法接种分离，接种完后，需在恒温培养箱中正置培养 5. 如图是老陈醋的生产流程，大曲是指以优质大米、小麦等为原料经自然发酵制成的发酵剂。下列叙述正确的是（ ） A. 大曲中含有酵母菌以及可以分泌淀粉酶的微生物 B. 醋酸发酵的时候会产生明显的气泡 C. 醋酸发酵过程主要发生在醋酸菌的线粒体内 D. 酒精发酵的适宜温度为30~35℃，醋酸发酵的适宜温度为18~30℃ 6. “三亲婴儿”的培育过程如下，下列说法正确的是（ ） A. “三亲婴儿”的核基因全部来自亲生母亲，质基因来自卵母细胞捐献者 B. 对卵母细胞进行显微操作去核时，移除的其实是染色体—纺锤体复合物 C. 体外受精成功的标志是观察到透明带和卵细胞膜间存在雌、雄原核 D. 体外受精得到的胚胎需培养至囊胚或原肠胚阶段再进行胚胎移植 7. 下列关于iPS细胞诱导技术与体细胞核移植技术的叙述，错误的是（ ） A. 两者均可用高度分化的体细胞作为实验材料 B. 两者均可改变细胞原有基因的选择性表达 C. 两项实验操作均不会引发与胚胎相关的伦理争议 D. 二者细胞体外培养时，均需置于95%空气+5%CO2的混合气体环境中 8. 下图是二倍体玉米进行植物组织培养的实验流程，下列说法错误的是（ ） A. 从A→B和B→C所使用的植物激素比例、光照条件均不同 B. 从E→F体现了花粉细胞具有全能性 C. 若要使植株G可育，可对试管苗F进行秋水仙素处理 D. 若由同一植株D得到的试管苗F出现不同性状，最可能是基因突变导致的 9. 已知血清中含有可抑制胰蛋白酶活性的物质。下列关于贴壁生长的胚胎干细胞传代培养的操作及原理，叙述错误的是（ ） A. 先离心收集细胞，再用胰蛋白酶处理 B. 胰蛋白酶可以使细胞从培养瓶壁上脱离下来 C. 使用胰蛋白酶处理细胞后，可加入新鲜培养液终止消化 D. 悬浮培养的胚胎干细胞不会出现接触抑制 10. 下列有关胚胎分割技术的说法，正确的是（ ） A. 经同一胚胎分割得到的多个胚胎核遗传物质相同，该技术属于无性繁殖 B. 胚胎分割应选用桑葚胚、囊胚，这两个阶段细胞均未发生分化 C. 分割囊胚阶段的胚胎时，只需将滋养层细胞均等分割即可 D. 进行胚胎性别鉴定时，应取样内细胞团细胞开展DNA分析 11. 下列关于“DNA的粗提取”与“DNA片段的扩增及电泳”实验的叙述，正确的是（ ） A. 冷却的酒精可溶解某些蛋白质、析出DNA，实现DNA和蛋白质的初步分离 B. 鉴定DNA时，将析出的丝状物直接放入二苯胺中，沸水浴加热，溶液变为蓝色 C. 电泳鉴定PCR产物时，若出现多条非目的条带，有可能是PCR复性温度过高造成的 D. 电泳结束后，只有借助紫外灯照射才能观察到凝胶内指示剂的迁移位置 12. 柚皮素是柑橘类植物产生的黄酮类次生代谢物，具有抗氧化、抗炎作用，可用于食品防腐、保健护肝等领域。4CL是柚皮素生物合成过程中的关键酶，中国科学院微生物所团队利用蛋白质工程定向改造4CL，实现了微生物高效合成柚皮素。下列叙述正确的是（ ） A. 柚皮素是柑橘类植物生长和生存所必需的 B. 改造4CL时的直接操作对象是蛋白质的氨基酸序列 C. 利用蛋白质工程改造4CL时，需从预期4CL的功能出发 D. 改造后工程菌生产的柚皮素上市前无需进行安全性评估 13. 如图是某自然生态系统的能量流动简图，甲、乙、丙、丁构成该生态系统的生物群落，其中丁为分解者。下列有关说法正确的是（ ） A. 乙同化的能量除了流向丙和丁外，还有部分用于自身生长、发育和繁殖 B. 第二营养级到第三营养级的能量传递效率为18% C. 物质可以在甲、乙、丙、丁之间循环利用 D. 该自然生态系统可以维持能量和物质的自给自足 14. 精氨酸为某真菌生长所必需的物质。位于不同染色体上的、三种基因共同参与精氨酸的合成。上述任意一个基因发生突变后，突变株均不能在基本培养基上生长。利用三种突变株开展培养实验，结果如下表： argE突变株 argF突变株 argG突变株 基本培养基+瓜氨酸 + + - 基本培养基+精氨酸 + + + 基本培养基+鸟氨酸 + - - 注：“+”表示菌株能正常生长；“-”表示菌株不能正常生长。 下列说法错误的是（ ） A. 可通过人工诱变的方式获得该类突变菌株 B. 三种突变株的产生体现了基因突变的随机性 C. 该真菌中精氨酸的合成途径可能是：鸟氨酸→瓜氨酸→精氨酸 D. 突变株无法利用鸟氨酸合成瓜氨酸 15. 苯丙酮尿症是由一对等位基因控制的常染色体隐性遗传病。某地区该病患者因基因发生单个碱基对替换而致病。本实验提取3名受试个体的DNA，采用图中两组引物进行PCR扩增，扩增产物经经BamHⅠ酶切后进行电泳检测，结果如下图所示。下列说法正确的是（ ） A. 限制性内切核酸酶能够切割DNA分子中的磷酸二酯键与氢键 B. 经BamHⅠ切割后产生的黏性末端序列为 C. 1号个体表型正常，为致病基因携带者 D. 2号个体为患病个体，对应条带片段分子量为156bp 16. 瞬时转化技术是指外源基因导入宿主细胞后，不整合到宿主基因组中，以游离形式存在，并在短期内实现高效表达的技术。为探究A蛋白在植物细胞中的分布，研究者构建相应基因表达载体，利用农杆菌介导的瞬时转化技术将载体导入拟南芥植株，通过显微镜观察叶片表皮细胞中绿色荧光的分布。基因表达载体及实验结果如下图所示。下列说法错误的是（ ） A. A基因与GFP基因共用一套启动子和终止子，因此会同时转录，但形成两条不同的mRNA B. 实验结果中绿色荧光几乎仅分布在细胞膜上，可推测A蛋白为膜蛋白 C. 若绿色荧光只出现在叶片表皮细胞中，说明实验所用启动子为叶片表皮细胞中特异表达基因的启动子 D. 瞬时转化时，农杆菌T-DNA可进入受体细胞，但不会整合到受体细胞的染色体DNA上 二、非选择题：本题共5小题，共60分。 17. 为探究潮间带两种藤壶（动物）空间分布差异的成因，科研人员分别调查了自然环境下和移除藤壶B后两种藤壶的分布情况，结果如下图所示。请回答下列问题： （1）研究藤壶B的生态位时，通常会研究它的____________（至少答出2点）。自然环境下，两种藤壶各自占据相对稳定的生态位，这有利于________。结合上图，推测藤壶________（填“A”或“B”）更适应干旱环境。 （2）对比图中两组实验结果，藤壶A与藤壶B的种间竞争对二者种群分布的影响是：________。 （3）藤壶在潮间带分布还会受到荔枝螺捕食的影响。与存在荔枝螺捕食压力组相比，无捕食压力组中藤壶B的存活率反而显著降低，该现象出现的原因是：________。另有研究发现，藤壶B幼体感知到荔枝螺分泌的黏液化学信号后，在潮间带的附着率会显著下降，该现象体现了生态系统的信息传递能________，进而维持生态系统的平衡与稳定。 18. 单一种植荔枝容易导致土壤贫瘠、虫害频发，需施加大量化肥和农药，增加种植成本。有人尝试在荔枝园的株间种植矮小的山绿豆。对比研究荔枝—山绿豆复合种植园和荔枝单一种植园中各类昆虫所占的百分比，结果如下图所示。请回答下列问题： （1）单一种植荔枝园生态系统的总能量为________。植食性害虫属于________（填消费者级别）消费者，其同化的能量会以________中有机物的形式流向分解者。 （2）据图分析，复合种植园中________的比例增加是直接导致害虫明显减少的主要原因。与单一种植园相比，复合种植园的生物种类更多，________结构更为复杂，自我调节能力更强，生态系统的________稳定性更高。 （3）套种山绿豆既能防控虫害、改良土壤，又可以将其作为优质畜禽饲料，这体现了生物多样性的________价值。 （4）传统荔枝种植过程中还会引入红松茸（可食用菌菇）。请从生态系统物质循环的角度简述引入红松茸的两点作用：________。 19. 香蕉枯萎病会造成香蕉严重减产。本实验从香蕉根际土壤中筛选兼具固氮功能与拮抗香蕉枯萎病菌的菌株，以解决农业生产问题。请回答下列问题： （1）制备选择培养基，要分离出固氮菌，所用选择培养基主要成分为水、无机盐、________。 （2）固氮菌的分离与计数：称取5g香蕉根际土壤，采用图1所示方法进行梯度稀释，最终吸取0.1mL稀释菌液滴加到平板上，用________将菌液涂抹均匀。根据平板菌落数可以估算出香蕉根际土壤中固氮菌的密度为________个/g。 （3）配制马铃薯葡萄糖固体培养基，在两组平板中央接种等量香蕉枯萎病菌菌块：一组仅接种病原菌作为空白对照，另一组在病原菌四周等距接种等量待测固氮菌，作为抑菌实验组（如图2）。待对照组病原菌菌丝近乎铺满平板后，统计实验组中________的相对大小。该数值越大，代表待测固氮菌的抑菌效果越强。请写出本对照组的两个作用：________。此外，本实验还需增设________培养基，用以检验培养基灭菌是否彻底。 20. 下图表示细胞工程操作中的某些过程，请回答下列问题： （1）若该过程为体外受精的相关操作，为获取更多卵母细胞，可提前向雌性个体注射________。采集的卵母细胞需在体外培养至________期，方可参与受精作用。 （2）IOA会抑制有氧呼吸第一阶段，R6G会损伤线粒体，经两种药剂处理的原生质体都会永久失活。若黄瓜的原生质体经R6G处理，南瓜的原生质体经IOA处理。处理后的两种原生质体在显微镜下用________计数，确定原生质体的密度，并以1：1混合后，加入________溶液诱导原生质体融合。融合完成后，使用普通培养基________（填“能”或“不能”）筛选出杂种细胞。 （3）若该过程为单克隆抗体技术的相关操作，B淋巴细胞与________细胞经诱导融合后，先在特定选择培养基中筛选获得杂交瘤细胞，还需经过________处理，才能获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。HER2是某些肿瘤细胞表面的特征蛋白，其分子上有多个抗原决定簇，一个抗原决定簇仅能刺激机体产生一种抗体。HER2的单克隆抗体结合位点单一，当肿瘤细胞HER2表达水平降低时，该抗体容易从肿瘤细胞表面脱落。因此科研人员研发了一种双特异性抗体—药物偶联物（如下图所示）。相较于单克隆抗体，该双特异性抗体—药物偶联物在肿瘤治疗上的优势是：________。 21. 基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列发生重组，在特定位点上进行替换或修饰，从而改变细胞遗传特性的方法。猪体内的GGTA1基因相关表达产物会引发人体的急性排斥反应。现利用基因打靶技术获得GGTA1基因失活的猪肾细胞，过程如下，请据图回答： 注：NotⅠ、XbaⅠ、ClaⅠ、BstEⅡ为不同的限制酶切割位点；Neo基因为新霉素抗性基因；TK基因表达产生胸苷激酶，可以使无毒的丙氧鸟苷转化成有毒物质，从而杀死细胞。 （1）根据基因的碱基序列设计不同引物，利用PCR技术分别扩增出片段a、片段b。若基因的乙链为转录模板链，则PCR扩增片段b需选用的引物为___________。为确保片段b与质粒的连接方向正确，需在两种引物的5'端分别添加限制酶___________的识别序列。PCR过程选用耐高温的DNA聚合酶，而不使用普通DNA聚合酶，原因是___________。 （2）将重组质粒酶切后获得线性重组质粒，并导入猪肾细胞。线性重组质粒与细胞基因组发生同源片段交换后，___________基因会替换基因的部分序列，使基因表达失活。实验中除定点同源重组外，还易出现线性重组质粒整个随机整合到受体细胞染色体上的情况。为筛选出基因定点替换成功的猪肾细胞，需在细胞培养液中添加___________。 （3）为鉴定猪肾细胞的基因是否成功失活，可提取待测细胞中的___________，采用___________技术进行检测。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 2025—2026学年度第二学期期末教学质量监测 高中二年级生物学 本试题共8页，考试时间75分钟，满分100分 注意事项： 1.答题前，考生先将自己的信息填写清楚、准确，将条形码准确粘贴在条形码粘贴处。 2.请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效。 3.答题时请按要求用笔，保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，不得使用涂改液、修正带、刮纸刀。考试结束后，请将本试题及答题卡交回。 一、选择题：本题共16小题，共40分。第1～12小题，每小题2分；第13～16小题，每小题4分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 下列调查方法中，不能用于调查群落物种丰富度的是（ ） A. 样方法 B. 标记重捕法 C. 取样器取样法 D. 黑光灯诱捕法 【答案】B 【解析】 【详解】A、调查物种丰富度需要统计群落中物种的数目，样方法可调查植物的物种丰富度，A不符合题意； B、标记重捕法针对单一物种进行捕捉、标记、重捕，只能算出该物种的个体数量，无法统计区域内有多少种生物，B符合题意； C、取样器取样法可用于调查土壤中小动物类群的丰富度，C不符合题意； D、黑光灯诱捕法可诱集趋光性昆虫，统计捕获昆虫的物种种类，故能调查趋光性昆虫的丰富度，D不符合题意。 2. 人类道路、农田分割致使野生大熊猫栖息地破碎化，种群彼此隔离。当地修建生态廊道以连接破碎化的栖息地，廊道内除大熊猫的主食箭竹外，还搭配种植乔木、灌木和多种草本植物。下列相关叙述错误的是（ ） A. 修建连通栖息地的生态廊道属于就地保护措施 B. 生态廊道能打破地理隔离，促进种群基因交流，提升生物多样性 C. 廊道内搭配种植多种植物，主要依据生态工程的自生、协调原理 D. 廊道内的大熊猫粪便中的物质和能量可通过分解者流向生产者 【答案】D 【解析】 【详解】A、生态廊道修建在大熊猫原生分布区域，连通原有野生栖息地，属于就地保护范畴，A正确； B、栖息地碎片化造成种群地理隔离，生态廊道便于大熊猫不同种群往来交配，增加基因交流，提高区域生物多样性，B正确； C、多种植物构建复杂群落，依靠生物组分间自我维持稳定，体现自生原理；兼顾大熊猫食源、适配本地环境，体现协调原理，C正确； D、粪便中的有机物经分解者分解后，无机物能供给生产者利用（通过物质循环），但能量单向流动、不可循环，分解者利用的能量最终以热能的形式散失，不会流向生产者，D错误。 3. 在我国温带地区，呼伦贝尔草原群落的不同地段水分、土壤盐碱度差异较大，植物多为耐寒、耐旱的草本植物；长白山红松阔叶林群落层次分明，环境条件相对稳定。关于这两个群落，下列说法正确的是（ ） A. 相较于长白山红松阔叶林群落，呼伦贝尔草原群落的水平镶嵌性分布更明显 B. 无外界人为干扰时，呼伦贝尔草原群落最终会演替至森林群落阶段 C. 区别这两个群落最重要的特征是群落外貌和物种丰富度 D. 长白山红松阔叶林群落中的动物以奔跑、穴居类型为主 【答案】A 【解析】 【详解】A、呼伦贝尔草原不同地段的水分、土壤盐碱度差异大，导致不同地段的植物类群分布差异明显，水平镶嵌性分布更突出；而长白山红松阔叶林群落环境条件均一稳定，水平镶嵌性分布不明显，A正确； B、群落演替的终点受环境条件限制，呼伦贝尔草原的水分条件无法满足森林群落的生长需求，自然状态下不会演替到该阶段，B错误； C、区分不同群落最重要的特征是群落的物种组成，C错误； D、长白山红松阔叶林群落存在明显的垂直分层，动物以树栖、攀缘类型为主；以奔跑、穴居类型为主的是草原群落的动物类群，D错误。 4. 在进行土壤中尿素分解菌的分离实验时，下列说法正确的是（ ） A. 在使用接种室之前，可用紫外线照射以杀死空气中的全部微生物 B. 配制的培养基应以尿素为唯一的氮源，同时不需要加入碳源 C. 尿素分解菌产生的脲酶将尿素分解成NH3，NH3可作为其生长的氮源 D. 可用平板划线法接种分离，接种完后，需在恒温培养箱中正置培养 【答案】C 【解析】 【详解】A、紫外线属于消毒手段，不能杀死所有微生物（如芽孢、孢子），A错误； B、尿素分解菌是异养型细菌，需要添加碳源（如葡萄糖），B错误； C、尿素分解菌产生的脲酶将尿素分解为NH3，NH3可作为氮源被尿素分解菌利用，C正确； D、平板划线接种后，培养皿应倒置培养，防止皿盖上的冷凝水滴落，污染培养基，D错误。 5. 如图是老陈醋的生产流程，大曲是指以优质大米、小麦等为原料经自然发酵制成的发酵剂。下列叙述正确的是（ ） A. 大曲中含有酵母菌以及可以分泌淀粉酶的微生物 B. 醋酸发酵的时候会产生明显的气泡 C. 醋酸发酵过程主要发生在醋酸菌的线粒体内 D. 酒精发酵的适宜温度为30~35℃，醋酸发酵的适宜温度为18~30℃ 【答案】A 【解析】 【详解】A、糖化是指淀粉分解形成糖浆，故大曲中含有能分泌淀粉酶的微生物，另外，酒精发酵需要酵母菌的参与，A正确； B、当缺少糖源时，底物乙醇进行醋酸发酵不产生二氧化碳，所以酒精发酵后再进行醋酸发酵一般无气泡产生，B错误； C、醋酸菌属于原核生物，细胞内无线粒体，C错误； D、酵母菌酒精发酵的适宜温度为18～30℃，醋酸菌醋酸发酵的适宜温度为30～35℃，D错误。 6. “三亲婴儿”的培育过程如下，下列说法正确的是（ ） A. “三亲婴儿”的核基因全部来自亲生母亲，质基因来自卵母细胞捐献者 B. 对卵母细胞进行显微操作去核时，移除的其实是染色体—纺锤体复合物 C. 体外受精成功的标志是观察到透明带和卵细胞膜间存在雌、雄原核 D. 体外受精得到的胚胎需培养至囊胚或原肠胚阶段再进行胚胎移植 【答案】B 【解析】 【详解】A、“三亲婴儿”的核基因一半来自母亲、一半来自父亲，细胞质基因几乎全部来自卵母细胞捐献者，A错误； B、MⅡ期卵母细胞无成形细胞核，核遗传物质其实是染色体—纺锤体复合物，显微去核操作去除的就是该结构，B正确； C、体外受精成功的标志是观察到两个极体或者雌、雄原核，可在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体，雌、雄原核是在卵细胞内形成的，C错误； D、胚胎移植适宜阶段为桑葚胚、囊胚阶段，D错误。 7. 下列关于iPS细胞诱导技术与体细胞核移植技术的叙述，错误的是（ ） A. 两者均可用高度分化的体细胞作为实验材料 B. 两者均可改变细胞原有基因的选择性表达 C. 两项实验操作均不会引发与胚胎相关的伦理争议 D. 二者细胞体外培养时，均需置于95%空气+5%CO2的混合气体环境中 【答案】C 【解析】 【详解】A、制备iPS细胞可用成纤维细胞等高度分化的体细胞；体细胞核移植也是取动物高度分化的体细胞作为供核材料，A正确； B、高度分化的体细胞的形态、功能由特定基因选择性表达决定。iPS细胞诱导技术：导入相关诱导因子，关闭体细胞特异性基因、开启多能相关基因，获得类似于胚胎干细胞的一种细胞。体细胞核移植技术：供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中恢复到其分化前的功能状态，形成重构胚。二者都可改变原有基因的选择性表达，B正确； C、体细胞核移植会构建重构胚、形成早期胚胎，存在胚胎相关伦理争议，C错误； D.、动物细胞体外培养的气体条件为95%空气（供给细胞有氧呼吸所需氧气）（维持培养液pH），D正确。 8. 下图是二倍体玉米进行植物组织培养的实验流程，下列说法错误的是（ ） A. 从A→B和B→C所使用的植物激素比例、光照条件均不同 B. 从E→F体现了花粉细胞具有全能性 C. 若要使植株G可育，可对试管苗F进行秋水仙素处理 D. 若由同一植株D得到的试管苗F出现不同性状，最可能是基因突变导致的 【答案】D 【解析】 【详解】A、A→B是脱分化，需避光、生长素/细胞分裂素比例适中；B→C是再分化，需光照，生芽时细胞分裂素占比更多、生根时生长素占比更多，A正确； B、E→F为花药离体培养过程，花粉细胞经培养发育成完整试管苗F，体现了花粉细胞的全能性，B正确； C、F是单倍体试管苗，秋水仙素处理可使染色体数目加倍，得到可育的纯合二倍体植株G，C正确； D、花药中的花粉是减数分裂产生的，因此同一植株D经花药离体培养得到的F出现不同性状，最可能的原因是基因重组（减数分裂过程中发生），而非基因突变，D错误。 9. 已知血清中含有可抑制胰蛋白酶活性的物质。下列关于贴壁生长的胚胎干细胞传代培养的操作及原理，叙述错误的是（ ） A. 先离心收集细胞，再用胰蛋白酶处理 B. 胰蛋白酶可以使细胞从培养瓶壁上脱离下来 C. 使用胰蛋白酶处理细胞后，可加入新鲜培养液终止消化 D. 悬浮培养的胚胎干细胞不会出现接触抑制 【答案】A 【解析】 【详解】A、贴壁胚胎干细胞牢牢附着在培养瓶壁上，未用胰蛋白酶消化时细胞不会脱落，直接离心只能收集培养液里的少量悬浮死细胞，绝大多数活细胞仍留在瓶壁上，无法完成传代，A错误； B、胰蛋白酶不仅可以使细胞和细胞分离开，还可以使细胞从培养瓶壁上脱离下来，B正确； C、新鲜培养液中含血清，可抑制胰蛋白酶作用，从而终止消化，避免酶过度损伤细胞，C正确； D、悬浮培养的胚胎干细胞不贴壁生长，不会出现接触抑制，D正确。 10. 下列有关胚胎分割技术的说法，正确的是（ ） A. 经同一胚胎分割得到的多个胚胎核遗传物质相同，该技术属于无性繁殖 B. 胚胎分割应选用桑葚胚、囊胚，这两个阶段细胞均未发生分化 C. 分割囊胚阶段的胚胎时，只需将滋养层细胞均等分割即可 D. 进行胚胎性别鉴定时，应取样内细胞团细胞开展DNA分析 【答案】A 【解析】 【详解】A、胚胎分割取材于同一枚受精卵发育的早期胚胎，分割后子代胚胎细胞核遗传物质一致，该技术不涉及精卵结合，故属于无性繁殖，A正确； B、桑葚胚阶段细胞尚未分化，囊胚已经出现细胞分化，分为内细胞团和滋养层细胞，B错误； C、囊胚分割的核心要求是均等分割内细胞团，内细胞团将来发育为胎儿的各种组织，分割不均会造成胚胎发育不良，C错误； D、性别鉴定取滋养层细胞，内细胞团会发育成胎儿的各种组织，取样会破坏胚胎，D错误。 11. 下列关于“DNA的粗提取”与“DNA片段的扩增及电泳”实验的叙述，正确的是（ ） A. 冷却的酒精可溶解某些蛋白质、析出DNA，实现DNA和蛋白质的初步分离 B. 鉴定DNA时，将析出的丝状物直接放入二苯胺中，沸水浴加热，溶液变为蓝色 C. 电泳鉴定PCR产物时，若出现多条非目的条带，有可能是PCR复性温度过高造成的 D. 电泳结束后，只有借助紫外灯照射才能观察到凝胶内指示剂的迁移位置 【答案】A 【解析】 【详解】A、DNA不溶于酒精，但某些蛋白质可溶于酒精，因此使用冷却的酒精能析出DNA，实现DNA与蛋白质的初步分离，A正确； B、析出的DNA丝状物不能直接加入二苯胺中，需先用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA，再加二苯胺试剂，B错误； C、复性温度过高会使引物难以结合模板，扩增条带微弱甚至无条带；复性温度过低才会引发引物错配，产生多条非目的条带，C错误； D、指示剂本身带有颜色，自然光下就能观察其迁移位置；紫外灯可用来观察经染色的DNA条带，D错误。 12. 柚皮素是柑橘类植物产生的黄酮类次生代谢物，具有抗氧化、抗炎作用，可用于食品防腐、保健护肝等领域。4CL是柚皮素生物合成过程中的关键酶，中国科学院微生物所团队利用蛋白质工程定向改造4CL，实现了微生物高效合成柚皮素。下列叙述正确的是（ ） A. 柚皮素是柑橘类植物生长和生存所必需的 B. 改造4CL时的直接操作对象是蛋白质的氨基酸序列 C. 利用蛋白质工程改造4CL时，需从预期4CL的功能出发 D. 改造后工程菌生产的柚皮素上市前无需进行安全性评估 【答案】C 【解析】 【详解】A、柚皮素是次生代谢物，这类物质不是植物生长和生存所必需的，A错误； B、蛋白质工程的直接操作对象是基因，而不是蛋白质的氨基酸序列，B错误； C、蛋白质工程的基本流程是从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列或合成新的基因→获得所需的蛋白质，可见改造4CL时需要从预期4CL的功能出发，C正确； D、经蛋白质工程改造获得的基因工程菌及其产物属于转基因生物制品，上市前必须完成一系列的安全性评估，D错误。 13. 如图是某自然生态系统的能量流动简图，甲、乙、丙、丁构成该生态系统的生物群落，其中丁为分解者。下列有关说法正确的是（ ） A. 乙同化的能量除了流向丙和丁外，还有部分用于自身生长、发育和繁殖 B. 第二营养级到第三营养级的能量传递效率为18% C. 物质可以在甲、乙、丙、丁之间循环利用 D. 该自然生态系统可以维持能量和物质的自给自足 【答案】B 【解析】 【详解】A、乙同化的能量去向包括：①通过呼吸作用以热能形式散失；②用于自身生长、发育和繁殖（这部分能量又会流向丙、丁及未被利用）。选项中“除了流向丙和丁外，还有部分用于自身生长、发育和繁殖”的逻辑错误，因为流向丙和丁的能量本身就属于“用于自身生长、发育和繁殖”的能量，A错误； B、第二营养级（乙）的同化量为1.5×106 J/(m2⋅a)，第三营养级（丙）的同化量为2.7×105 J/(m2⋅a)。能量传递效率=第三营养级同化量/第二营养级同化量×100%=（2.7×105）÷（1.5×106）×100%=18%，B正确； C、物质循环是指在生物群落与无机环境之间循环，而甲、乙、丙、丁仅构成生物群落，物质不能在生物群落内部循环利用，C错误； D、能量流动是单向、逐级递减的，该生态系统需要不断从外界获取太阳能，无法实现能量的自给自足；物质循环具有全球性，不能在生态系统内部完全自给自足，D错误。 14. 精氨酸为某真菌生长所必需的物质。位于不同染色体上的、三种基因共同参与精氨酸的合成。上述任意一个基因发生突变后，突变株均不能在基本培养基上生长。利用三种突变株开展培养实验，结果如下表： argE突变株 argF突变株 argG突变株 基本培养基+瓜氨酸 + + - 基本培养基+精氨酸 + + + 基本培养基+鸟氨酸 + - - 注：“+”表示菌株能正常生长；“-”表示菌株不能正常生长。 下列说法错误的是（ ） A. 可通过人工诱变的方式获得该类突变菌株 B. 三种突变株的产生体现了基因突变的随机性 C. 该真菌中精氨酸的合成途径可能是：鸟氨酸→瓜氨酸→精氨酸 D. 突变株无法利用鸟氨酸合成瓜氨酸 【答案】D 【解析】 【详解】A、利用紫外线、化学诱变剂等人工诱变手段可以提高基因突变的频率，从而筛选出所需突变体，A正确； B、三种突变株的产生说明基因突变可发生在细胞内不同DNA分子上，体现了基因突变的随机性，B正确； C、某基因突变体加入中间产物能生长，说明该中间产物在该基因作用的下游。argG突变株仅加精氨酸能生长，说明精氨酸在最后；argF突变株仅加瓜氨酸、精氨酸能生长，说明瓜氨酸、精氨酸都在argF基因作用的下游；argE突变株加三种中间产物均可生长，说明三种中间产物都在argE作用的下游，由此可得出合成途径：鸟氨酸→瓜氨酸→精氨酸，C正确； D、argE突变株在添加鸟氨酸的培养基中可以正常生长，说明它能利用鸟氨酸合成瓜氨酸，D错误。 15. 苯丙酮尿症是由一对等位基因控制的常染色体隐性遗传病。某地区该病患者因基因发生单个碱基对替换而致病。本实验提取3名受试个体的DNA，采用图中两组引物进行PCR扩增，扩增产物经经BamHⅠ酶切后进行电泳检测，结果如下图所示。下列说法正确的是（ ） A. 限制性内切核酸酶能够切割DNA分子中的磷酸二酯键与氢键 B. 经BamHⅠ切割后产生的黏性末端序列为 C. 1号个体表型正常，为致病基因携带者 D. 2号个体为患病个体，对应条带片段分子量为156bp 【答案】D 【解析】 【详解】A、限制性内切核酸酶能够切割DNA分子中的磷酸二酯键，不能作用于氢键，A错误； B、根据图示，BamH Ⅰ切割后产生的黏性末端序列为5'-GATC-3'和，B错误； C、假如正常基因为A，致病基因为a。基因A内部存在一个BamH Ⅰ的切割位点，PCR扩增产物被酶切后形成两个片段，电泳出现2个条带。由于碱基对的替换，基因a的BamH I酶切位点消失，PCR扩增产物无法被酶切，电泳出现1个条带。基因型AA的个体只有A基因，故电泳出现2个条带，应为1号个体。基因型aa的个体只有a基因，故电泳出现1个条带，应为2号个体。基因型Aa的个体存在A和a基因，故电泳出现3个条带，应为3号个体，C错误。 D、致病基因发生单个碱基对替换，片段的总长度不变，故2号个体的致病基因对应条带片段的分子量为120+36=156bp，D正确。 16. 瞬时转化技术是指外源基因导入宿主细胞后，不整合到宿主基因组中，以游离形式存在，并在短期内实现高效表达的技术。为探究A蛋白在植物细胞中的分布，研究者构建相应基因表达载体，利用农杆菌介导的瞬时转化技术将载体导入拟南芥植株，通过显微镜观察叶片表皮细胞中绿色荧光的分布。基因表达载体及实验结果如下图所示。下列说法错误的是（ ） A. A基因与GFP基因共用一套启动子和终止子，因此会同时转录，但形成两条不同的mRNA B. 实验结果中绿色荧光几乎仅分布在细胞膜上，可推测A蛋白为膜蛋白 C. 若绿色荧光只出现在叶片表皮细胞中，说明实验所用启动子为叶片表皮细胞中特异表达基因的启动子 D. 瞬时转化时，农杆菌T-DNA可进入受体细胞，但不会整合到受体细胞的染色体DNA上 【答案】A 【解析】 【详解】A、A基因和GFP基因共用一套启动子与终止子，转录后只能产生一条mRNA，翻译得到融合蛋白，并不会形成两条不同的mRNA，A错误； B、本实验将A基因与GFP基因融合表达，绿色荧光蛋白的分布位置与A蛋白完全一致。荧光集中在细胞膜，可证明A蛋白定位于细胞膜，为膜蛋白，B正确； C、若绿色荧光只出现在叶片表皮细胞中，说明实验所用启动子为叶片表皮细胞中特异表达基因的启动子，C正确。 D、瞬时转化技术是指外源基因导入宿主细胞后，不整合到宿主基因组中，以游离形式存在，并在短期内实现高效表达的技术，D正确。 二、非选择题：本题共5小题，共60分。 17. 为探究潮间带两种藤壶（动物）空间分布差异的成因，科研人员分别调查了自然环境下和移除藤壶B后两种藤壶的分布情况，结果如下图所示。请回答下列问题： （1）研究藤壶B的生态位时，通常会研究它的____________（至少答出2点）。自然环境下，两种藤壶各自占据相对稳定的生态位，这有利于________。结合上图，推测藤壶________（填“A”或“B”）更适应干旱环境。 （2）对比图中两组实验结果，藤壶A与藤壶B的种间竞争对二者种群分布的影响是：________。 （3）藤壶在潮间带分布还会受到荔枝螺捕食的影响。与存在荔枝螺捕食压力组相比，无捕食压力组中藤壶B的存活率反而显著降低，该现象出现的原因是：________。另有研究发现，藤壶B幼体感知到荔枝螺分泌的黏液化学信号后，在潮间带的附着率会显著下降，该现象体现了生态系统的信息传递能________，进而维持生态系统的平衡与稳定。 【答案】（1） ①. 食物、栖息地、天敌以及和其他物种的关系 ②. 充分利用环境资源 ③. A （2）使藤壶A的分布范围缩小，且与藤壶B的分布错开（表达合理即可） （3） ①. 无捕食压力时，藤壶B缺少天敌控制，种群密度大幅升高，种内竞争加剧，导致存活率显著降低 ②. 调节生物的种间关系 【解析】 【小问1详解】 生态位指的是一个物种在群落中的地位和作用，包括所处的空间位置、占用资源的情况以及与其他物种的关系等。研究动物的生态位，通常研究它的食物、栖息地、天敌以及与其他物种的关系等。不同生物拥有稳定生态位，可降低种间竞争，利于不同生物充分利用环境资源。潮间带上层退潮后暴露时间长、环境干旱，图中只有藤壶A分布在上潮间带，因此推测藤壶A耐干旱能力更强。 【小问2详解】 自然环境即存在藤壶B，藤壶A只分布在上潮间带，且与藤壶B的分布错开；移除藤壶B后，藤壶A的分布范围明显向下拓展。藤壶A与藤壶B的种间竞争使藤壶A的分布范围缩小，且与藤壶B的分布错开。 【小问3详解】 荔枝螺是藤壶的捕食者，无捕食压力组中藤壶B的存活率反而显著降低，说明无捕食压力时，藤壶B缺少天敌控制，种群密度大幅升高，种内竞争加剧，导致存活率显著降低。荔枝螺分泌的黏液化学信号会调节藤壶B幼体的附着率，反映出藤壶B幼体躲避荔枝螺捕食的一种策略。这种化学信号对捕食关系的调控，体现了生态系统的信息传递能调节生物的种间关系，进而维持生态系统的平衡与稳定。 18. 单一种植荔枝容易导致土壤贫瘠、虫害频发，需施加大量化肥和农药，增加种植成本。有人尝试在荔枝园的株间种植矮小的山绿豆。对比研究荔枝—山绿豆复合种植园和荔枝单一种植园中各类昆虫所占的百分比，结果如下图所示。请回答下列问题： （1）单一种植荔枝园生态系统的总能量为________。植食性害虫属于________（填消费者级别）消费者，其同化的能量会以________中有机物的形式流向分解者。 （2）据图分析，复合种植园中________的比例增加是直接导致害虫明显减少的主要原因。与单一种植园相比，复合种植园的生物种类更多，________结构更为复杂，自我调节能力更强，生态系统的________稳定性更高。 （3）套种山绿豆既能防控虫害、改良土壤，又可以将其作为优质畜禽饲料，这体现了生物多样性的________价值。 （4）传统荔枝种植过程中还会引入红松茸（可食用菌菇）。请从生态系统物质循环的角度简述引入红松茸的两点作用：________。 【答案】（1） ①. 生产者所固定的太阳能以及人工输入有机物中的化学能 ②. 初级 ③. 自身遗体残骸、下一营养级的粪便 （2） ①. 肉食和寄生性昆虫 ②. 食物网（或“营养”） ③. 抵抗力 （3）间接和直接 （4）将荔枝枯枝落叶中的有机物分解为无机盐返还土壤、分解作用释放的二氧化碳可为荔枝光合作用补充原料 【解析】 【小问1详解】 该荔枝园属于人工生态系统，总能量包含两部分：生态系统内生产者固定的太阳能，以及人工施肥等额外输入的有机物中的化学能。植食性害虫直接取食生产者，属于初级消费者（第二营养级）。植食性害虫同化的能量流向分解者有两种形式：一是自身遗体残骸；二是下一营养级的粪便，因为粪便中的能量不属于下一营养级同化量，仍源自上一营养级。 【小问2详解】 据图可知，复合种植园中肉食和寄生性昆虫的比例增加，由于它们直接或间接以植食性害虫为食，该类昆虫占比升高，会大量捕食、寄生害虫，进而制约了植食性害虫的发展。与单一种植园相比，复合种植园的生物种类更多，生物种类越多，生态系统的食物网（营养）结构越复杂，自我调节能力越强，抵抗力稳定性越高。 【小问3详解】 套种山绿豆既能防控虫害、改良土壤，又可以将其作为优质畜禽饲料，防治虫害、改良土壤属于生态功能，体现间接价值；作为畜禽饲料可直接被人类利用，体现直接价值。 【小问4详解】 红松茸属于分解者，从物质循环角度分析引入它的作用表现在：将荔枝枯枝落叶中的有机物分解为无机盐返还土壤、分解作用释放的二氧化碳可为荔枝光合作用补充原料。 19. 香蕉枯萎病会造成香蕉严重减产。本实验从香蕉根际土壤中筛选兼具固氮功能与拮抗香蕉枯萎病菌的菌株，以解决农业生产问题。请回答下列问题： （1）制备选择培养基，要分离出固氮菌，所用选择培养基主要成分为水、无机盐、________。 （2）固氮菌的分离与计数：称取5g香蕉根际土壤，采用图1所示方法进行梯度稀释，最终吸取0.1mL稀释菌液滴加到平板上，用________将菌液涂抹均匀。根据平板菌落数可以估算出香蕉根际土壤中固氮菌的密度为________个/g。 （3）配制马铃薯葡萄糖固体培养基，在两组平板中央接种等量香蕉枯萎病菌菌块：一组仅接种病原菌作为空白对照，另一组在病原菌四周等距接种等量待测固氮菌，作为抑菌实验组（如图2）。待对照组病原菌菌丝近乎铺满平板后，统计实验组中________的相对大小。该数值越大，代表待测固氮菌的抑菌效果越强。请写出本对照组的两个作用：________。此外，本实验还需增设________培养基，用以检验培养基灭菌是否彻底。 【答案】（1）碳源、琼脂 （2） ①. 涂布器 ②. 7×106 （3） ①. 抑菌带 ②. 验证培养基与培养条件适宜病原菌生长；与实验组对比，判断固氮菌是否存在抑菌作用 ③. 未接种（或者空白） 【解析】 【小问1详解】 固氮菌可以以空气中的氮气作为氮源，因此筛选培养基为无氮选择培养基。另外固氮菌为异养型生物，其生长需要添加有机碳源。要分离固氮菌，还需固体培养基，故需加琼脂，即所用选择培养基主要成分为水、无机盐、碳源、琼脂。 【小问2详解】 稀释涂布平板法的接种工具为涂布器。根据题中操作过程可知，图中接种的菌液共稀释104倍，且获得的数据均在计数范围之内（30~300之间），据此可计算：每克土壤菌体数目=平均菌落数/涂布体积×稀释倍数=（68+75+67）÷3÷0.1×104=7×106个/g。 【小问3详解】 配制马铃薯葡萄糖固体培养基，在两组平板中央接种等量香蕉枯萎病菌菌块：一组仅接种病原菌作为空白对照，另一组在病原菌四周等距接种等量待测固氮菌，作为抑菌实验组。待对照组病原菌菌丝近乎铺满平板后，统计实验组中抑菌带的相对大小，通过测量抑菌带相对大小可判断抑菌能力强弱，且抑菌带相对大小越大，代表待测固氮菌的抑菌效果越强。对照组仅接种病原菌，若菌丝能正常铺满平板，说明培养基与培养条件适宜病原菌生长；对照组与实验组对比，判断固氮菌是否存在抑菌作用。此外，本实验还需增设未接种任何菌种的空白培养基，在相同条件下培养。若空白平板无菌落生长，证明培养基灭菌彻底、无杂菌污染；若出现菌落，说明灭菌失败，实验数据无效。 20. 下图表示细胞工程操作中的某些过程，请回答下列问题： （1）若该过程为体外受精的相关操作，为获取更多卵母细胞，可提前向雌性个体注射________。采集的卵母细胞需在体外培养至________期，方可参与受精作用。 （2）IOA会抑制有氧呼吸第一阶段，R6G会损伤线粒体，经两种药剂处理的原生质体都会永久失活。若黄瓜的原生质体经R6G处理，南瓜的原生质体经IOA处理。处理后的两种原生质体在显微镜下用________计数，确定原生质体的密度，并以1：1混合后，加入________溶液诱导原生质体融合。融合完成后，使用普通培养基________（填“能”或“不能”）筛选出杂种细胞。 （3）若该过程为单克隆抗体技术的相关操作，B淋巴细胞与________细胞经诱导融合后，先在特定选择培养基中筛选获得杂交瘤细胞，还需经过________处理，才能获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。HER2是某些肿瘤细胞表面的特征蛋白，其分子上有多个抗原决定簇，一个抗原决定簇仅能刺激机体产生一种抗体。HER2的单克隆抗体结合位点单一，当肿瘤细胞HER2表达水平降低时，该抗体容易从肿瘤细胞表面脱落。因此科研人员研发了一种双特异性抗体—药物偶联物（如下图所示）。相较于单克隆抗体，该双特异性抗体—药物偶联物在肿瘤治疗上的优势是：________。 【答案】（1） ①. 促性腺激素 ②. 减数分裂Ⅱ中（MⅡ中） （2） ①. 血细胞计数板 ②. 聚乙二醇（PEG）（或“高高pH”） ③. 能 （3） ①. 骨髓瘤 ②. 克隆化培养与抗体检测 ③. 双特异抗体可同时结合HER2的两个不同抗原决定簇，当肿瘤细胞HER2表达水平降低时不易脱落；与化疗药物偶联可靶向杀伤肿瘤细胞（表达合理即可） 【解析】 【小问1详解】 为获取更多卵母细胞需要用超数排卵技术，即对供体注射外源促性腺激素可促进雌性个体超数排卵；刚采集的卵母细胞未成熟，只有培养至MⅡ中期，才具备受精能力。 【小问2详解】 显微镜下统计细胞数量，需要用血细胞计数板或者细菌计数板，动物细胞、原生质体、酵母菌等较大的细胞用血细胞计数板计数，对于南瓜原生质体密度的观察需要用血细胞计数板；植物原生质体常用聚乙二醇（PEG）（或“高 Ca2+— 高pH”）溶液诱导原生质体融合。IOA阻断有氧呼吸第一阶段，R6G破坏线粒体，两种亲本原生质体单独存在或同源融合均无法正常呼吸、增殖；杂种细胞可实现代谢互补，正常完成有氧呼吸，因此普通培养基能筛选出杂种细胞。 【小问3详解】 若该过程为单克隆抗体技术的相关操作，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，先在特定选择培养基中筛选获得杂交瘤细胞，还需经过克隆化培养和抗体检测处理，才能获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，此时的杂交瘤细胞既能无限增殖，还能分泌所需抗体。HER2分子上有多个抗原决定簇，一个抗原决定簇仅能刺激机体产生一种抗体。图中两种HER2单克隆抗体的差异在于结合的抗原决定簇种类不同，两种单克隆抗体经过体外组装获得双特异性抗体，该抗体可同时结合HER2的两个不同抗原决定簇，据此推测，与单克隆抗体相比较，双特异性抗体的优势在于双特异抗体可同时结合HER2的两个不同抗原决定簇，当肿瘤细胞HER2表达水平降低时不易脱落；与化疗药物偶联可靶向杀伤肿瘤细胞。 21. 基因打靶技术是指利用外源性DNA与细胞DNA的相同或相似序列发生重组，在特定位点上进行替换或修饰，从而改变细胞遗传特性的方法。猪体内的GGTA1基因相关表达产物会引发人体的急性排斥反应。现利用基因打靶技术获得GGTA1基因失活的猪肾细胞，过程如下，请据图回答： 注：NotⅠ、XbaⅠ、ClaⅠ、BstEⅡ为不同的限制酶切割位点；Neo基因为新霉素抗性基因；TK基因表达产生胸苷激酶，可以使无毒的丙氧鸟苷转化成有毒物质，从而杀死细胞。 （1）根据基因的碱基序列设计不同引物，利用PCR技术分别扩增出片段a、片段b。若基因的乙链为转录模板链，则PCR扩增片段b需选用的引物为___________。为确保片段b与质粒的连接方向正确，需在两种引物的5'端分别添加限制酶___________的识别序列。PCR过程选用耐高温的DNA聚合酶，而不使用普通DNA聚合酶，原因是___________。 （2）将重组质粒酶切后获得线性重组质粒，并导入猪肾细胞。线性重组质粒与细胞基因组发生同源片段交换后，___________基因会替换基因的部分序列，使基因表达失活。实验中除定点同源重组外，还易出现线性重组质粒整个随机整合到受体细胞染色体上的情况。为筛选出基因定点替换成功的猪肾细胞，需在细胞培养液中添加___________。 （3）为鉴定猪肾细胞的基因是否成功失活，可提取待测细胞中的___________，采用___________技术进行检测。 【答案】（1） ①. 引物2和引物3 ②. XbaI、ClaI ③. PCR扩增需经过高温变性步骤，高温会导致普通DNA聚合酶因空间结构被破坏而失活 （2） ①. Neo ②. 新霉素和丙氧鸟苷 （3） ①. 蛋白质 ②. 抗原—抗体杂交 【解析】 【小问1详解】 转录方向即mRNA合成的方向（5'→3'），与转录模板链的方向相反。图中转录方向向右且乙链为转录模板链，故乙链的左侧为其3'端，其互补链甲链的右侧为其3'端。PCR扩增时，DNA子链延伸方向为5'→3'，“引物需结合在模板链的3'端引导子链合成，故选引物2和引物3。在重组质粒中，片段b插在Neo基因与TK基因之间，应选择XbaI和ClaI依次切割质粒和片段b，为保证片段b按正确方向插入质粒，需在片段b两种引物的5'端分别添加限制酶XbaI、ClaI的识别序列。 【小问2详解】 定点同源重组成功的细胞：片段a和片段b之间的Neo基因会替换GGTA1基因的部分序列进入染色体DNA，同时片段a和片段b之外的TK基因丢失。细胞含Neo基因，可在含新霉素的培养基上存活，无TK基因，不会将丙氧鸟苷转化为有毒物质，细胞正常存活。质粒随机整合的细胞，Neo、TK基因全部整合进染色体，细胞可抵抗新霉素，但TK基因表达产物会将丙氧鸟苷转为有毒物质，最终杀死细胞。因此在培养基中同时加入新霉素和丙氧鸟苷，可筛选出定点替换成功的细胞。 【小问3详解】 GGTA1基因成功失活即该基因无法合成对应功能的蛋白质，故采用抗原-抗体杂交技术检测有没有表达对应蛋白质。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $