作业(三) 基因工程-【假期作业】2026年高二生物学暑假假期作业（B版）

[每日格言]只有一条路不能选择，那就是放弃的路；只有 [真题体验] 1.A在植物组织培养中，生长素和细胞分裂素的比例直接 影响细胞的分化方向。当二者比例适中时，促进愈伤组织 的形成；比例过高时促进生根，比例过低时促进生芽，A正 确；培养基含大量水分，需用高压蒸汽灭菌法灭菌(121℃，！ 15~20分钟)；千热灭菌法适用于耐高温且千燥的物品（如 玻璃器皿)，不能用于培养基灭菌，B错误；外植体可以是植 物的任何活细胞、组织或器官，只要具有全能性。芽原基细 胞是分生组织的一部分，全能性高，可作为外植体。基因选 择性表达是细胞分化的基础，不影响其作为外植体的能力， C错误；细胞产物的工厂化生产正是通过植物组织培养技 术实现的，如大量培养红豆杉细胞，从培养液中提取紫杉 醇。因此，紫杉醇可通过此方法获取，植物组织培养的优势 (如快速增殖、大量生产细胞产物)在此体现，D错误。 2.B由题图可知，牛乙提供卵母细胞，故对牛乙注射促性腺 激素是为了收集更多的卵母细胞，A正确；卵母细胞去核 应在其减数分裂Ⅱ中期进行，B错误；培养牛甲的体细胞时 应定期更换培养液，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成 危害，C正确；可用PCR技术鉴定犊牛丁是否含有目的基 因，以鉴定其是否为转基因牛，D正确。 [易错清零] 1.A人工授精后形成的早期胚胎在一定时间内并未与母体 子宫建立组织上的联系，A错误。 2.A造血干细胞分化时，细胞器的种类和数量会改变（如红 细胞成熟后细胞器消失)，但功能并非“均”改变（如线粒体 仍负责供能，仅数量减少)，A错误：细胞分化的本质是基因 选择性表达，导致合成特定蛋白质（如血红蛋白、抗体等）， B正确；胚胎多能祖细胞分化为淋巴细胞时，细胞分化程度 提高，全能性随之降低，C正确；胚胎多能干细胞可分化为 血细胞，移植后可能修复缺陷细胞，改善血液病症状，D 正确。 作业（三）基因工程 [知识巩固]一跟踪训练 1.D载体需和目的基因一起进入宿主细胞并与其共存，因 此载体应对宿主细胞无伤害，以免影响宿主细胞的正常生 命活动，A正确：载体应具有一个至多个限制酶切割位点， 以便与目的基因拼接形成重组载体，B正确；天然的质粒往 往存在不足，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基 础上进行过人工改造的，C正确；切割DNA分子的酶为限 制酶，是基因工程的工具之一，但不是运载体，D错误。 2.B图中目的基因两侧都有EcoR I酶切位点，质粒上也存 在EcoR I酶切位点，若只用一种限制酶完成对质粒和外源 DNA的切割，可选EcoR I,A正确；EcoR I切割外源DNA 分子和质粒，再用DNA连接酶连接，形成的含目的基因的 重组DNA分子中，EcoR I酶切割位点有2个，B错误；为 了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶 切时可使用BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒 和目的基因，C正确；该质粒分子经EcoR I切割后，产生两 个黏性末端，含有2个游离的磷酸基团，D正确。 3.D在农杆菌转化法中，需要将目的基因插入到T-DNA片 段上，有利于介导外源DNA整合到植物的染色体DNA 上，A错误；农杆菌侵染植物细胞不需要用Ca2+处理，B错 误；Ti质粒是一种环状DNA分子，是存在于细菌细胞质中 的DNA,具有双螺旋结构，C错误。 4.C启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因 转录出mRNA,A正确；图中有启动子和终止子等，因此质 粒还需具备的结构有限制酶的切割位点、标记基因、复制原 点等，B正确；引物F2与R1或F1与R2结合部位包含目 的基因的碱基序列，因此推测为了确定目的基因连接到质 一条路不能拒绝，那就是成长的路。 高二生物学 粒中且插入方向正确，进行PCR检测时，若仅用一对引物， 应选择图中的引物F2和R1或F1与R2,C错误；若引物 F1与a链相应部位序列相同，根据转录时碱基互补配对原 则，那么b链为转录的模板链，D正确。 5.Ca过程是以DNA的一条链为模板合成mRNA的转录 过程，b过程是以mRNA为模板合成具有一定氨基酸顺序 的多肽链的翻译过程，A正确；蛋白质工程是指以蛋白质 分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改 造或合成基因，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的 蛋白质，以满足人类的生产和生活需求，因此蛋白质工程 中对蛋白质分子结构的了解是非常关键的工作，B正确；蛋 白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因 工程，C错误；蛋白质工程中，可能根据已经明确的蛋白质 的结构构建出一种全新的基因，D正确。 6.B天然蛋白质的合成遵循中心法则(DNA→RNA→蛋白 质)，蛋白质工程是从预期蛋白质功能出发，反向推导基因 序列（蛋白质→氨基酸序列基因），与中心法则方向相 反，A正确；蛋白质工程的操作对象是基因（通过修饰或合 成基因来改造蛋白质)，而非蛋白质（千扰素）本身。若直 接操作蛋白质，无法实现可遗传的改造，B错误；经改造后 的干扰素基因可导入工程菌，工程菌繁殖时会复制该基 因，从而实现基因的遗传（进而持续表达改造后的千扰 素)，C正确：蛋白质的高级结构（空间结构）十分复杂，而蛋 白质工程需精准设计蛋白质的空间结构以实现预期功能， 这是改造过程中面临的最大难题之一，D正确。 [综合演练] 1.C质粒的复制原点上有DNA聚合酶的结合位点，A错 误；①②③三种重组后细菌的外源基因插入点①是b,②是 c,③是a,B错误；将外源基因与质粒连接时需用DNA连 接酶，D错误。 2.C质粒为环状DNA,SmaI切割后形成线性DNA,含2 个游离磷酸基团，A错误；基因工程核心是构建基因表达 载体，B错误；PstI和EcoR I切割可避免质粒自身环化 和目的基因反向连接，C正确；PCR检测目的基因是否导 入，抗原一抗体杂交检测是否翻译，D错误。 3.B可通过农杆菌转化法将农杆菌导入菊花受体细胞，显 微注射法是用于将目的基因导入动物细胞的方法，B错误。 4.BC启动子是DNA上RNA聚合酶识别和结合的位点， RNA中不含启动子（启动子不被转录），药用蛋白基因的 mRNA经逆转录得到的cDNA仅包含编码区序列，无需去 除启动子，A错误；乳腺生物反应器中使用的启动子A通 常是乳腺特异性启动子，其特点是仅在乳腺细胞中启动下 游基因的转录，使药用蛋白基因特异性在乳腺细胞中表 达，B正确；已知mRNA的序列为5-JUACUUCCUG… CAAGUUUCAU-3',逆转录得到cDNA序列为5'-AT GAAACTTTG...CAGGAAGTAA-3',由此可知与cDNA 互补的另一条链的序列为5 TTACTTCCTG… CAAGTTTCAT-3,利用PCR技术对cDNA进行扩增， PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3'端 通过碱基互补配对结合，且转录的方向为启动子到终止子 (DNA模板链的3'→5')，并结合题意可知，要在引物5′端 加上限制酶EcoR I和PstI的识别序列，因此两种引物分 别是5'-GAATTCTTACTT-3'和5'-CTGCAGATGAAA- 3',C正确；构建的基因表达载体还需通过显微注射的方法 导入受精卵（雌性）中，最后发育的转基因动物进入泌乳期 后，可以通过分泌乳汁来生产药用蛋白，D错误。 暑假作业当一个人先从自己的内心开始奋斗，他 5.解析人生长激素基因只在垂体细胞中表达，所以所用的 RNA从垂体细胞中获得。受体菌在A培养基中不能形 成菌落，在B培养基中能形成菌落，说明目的基因插入氨 苄青霉素抗性基因中，所以使用的限制酶是PstI。 答案(1)垂体逆转录酶、DNA聚合酶引物 (2)PstI氨苄青霉素抗性(AmpR) (3)乳腺启动子 (4)显微注射法抗原一抗体杂交 (5)(性状分离导致)目的基因丢失 [真题体验] 1.C使用氯化钙处理大肠杆菌，可使其处于感受态，提高转 化效率，即更多的大肠杆菌能吸收质粒，无论吸收的是含 目的基因的重组质粒（可能形成白色菌落）还是未重组的 质粒K(形成蓝色菌落)，都可增加筛选平板上白色和蓝色 菌落数，A正确；如果筛选平板中仅含卡那霉素，能生长出 的菌落都具有卡那霉素杭性，白色菌落可能是导入了重组 质粒（含目的基因），也可能是其他情况导致B-半乳糖苷酶 基因不能正常表达而呈现白色，所以不可判定为含目的基 因的菌株，B正确；因质粒K中含两个标记基因，筛选平板 中长出的白色菌落应为含目的基因的菌株，能否表达相应 蛋白，需进一步检测，C错误；若筛选平板中蓝色菌落偏多， 原因可能是质粒K经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌， 因为自身环化的质粒K中B-半乳糖苷酶基因完整，能表 达活性B-半乳糖苷酶，分解X-gl形成蓝色菌落，D正确。 2.BD对比A基因和a基因的序列，A基因中“AAGCTT” 变为a基因中“AAGCTG”,是碱基替换(T→G),并非碱基 增添，A错误；HindⅢ切割产生黏性末端，AluI切割后产 生的是平末端，二者末端类型不相同，B正确；观察图中a 基因，HindⅢ有2个切割位，点，切割后会产生1个片段， AuI有3个切割位点，切割后会产生2个片段，一个片段 长度是200bp左右，另一个是400bp左右，用两种限制酶 分别酶切a基因后，产生的片段大小不一致，C错误；因为 正常基因A和致病基因a的HindⅢ切割位点不同，所以 产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限制酶开展酶切鉴 定，D正确。 [易错清零] 1.D构建L1-GFP融合基因需要先用限制酶处理获得L1 基因和GFP基因，并将二者连接，故需要用到E1、E2、E4 三种酶，A正确；根据题意，限制酶E1~E4处理产生的黏 性末端均不相同，E1、E4双酶切可以有效减少载体自身连 接和融合基因自身连接，保证L1-GFP融合基因与载体准 确连接，B正确；GFP基因可作为标记基因用于检测目的 基因是否表达，根据表达出的荧光蛋白(GFP)在紫外光或 蓝光激发下会发出绿色荧光，利用这一特性可用于检测细 胞中目的基因是否表达，C正确；为了获得L1蛋白，因为受 精卵具有全能性，因而可将表达载体转入受精卵中而不是 乳腺细胞，用于培育乳汁中含有L1蛋白的转基因羊， D错误。 2.B过程②是PCR扩增过程，PCR需要四种脱氧核糖核苷 酸（不是核糖核苷酸）和耐高温的DNA聚合酶(Tag酶)，A 错误；过程③是PCR扩增含有突变位点的DNA片段，由 于引物与模板链的结合位置不同，至少需要两次循环才能 得到两条链等长的DNA分子，B正确；过程④经混合、变性 后，杂交的两条单链均可为DNA聚合酶提供3'端，无需引 物即可获得目的基因，C错误；合成的DNA分子经混合、 变性、杂交后，通过引物2和3延伸形成的两条链杂交在一 起，说明引物2和3的碱基序列互补，而不是相同，D错误。 5 就是个有价值的人。 [每日格言] 作业（四）生物技术安全性问题 [知识巩固]一跟踪训练 1.C转基因作物的长期、大规模种植有利于侵染力更强的 害虫的出现，因为转基因生物能起到选择作用，A错误；转 基因生物可能会对生物多样性构成咸胁，也可能会影响生 态系统的稳定性，B错误；严格选择种植区域可减少转基因 作物发生外源基因扩散的可能性，降低风险，C正确；有证 据表明某种转基因食品有害，应该马上停止实验，并销毁 该重组生物，而不应全面禁止转基因技术在食品上的应 用，D错误。 2.B吃了转基因食品，其中的基因会被消化分解，不会整合 到人的基因组中，A错误：转基因大米经过严格鉴定后种 植，不一定会对人的健康造成危害，C错误；抗除草剂植物 生产的食品经过严格检验安全后方可作为食品，不会导致 人患癌症，D错误。 3.C生殖性克隆需将细胞核移植到去核卵母细胞中构建形 成重组细胞，A正确：生殖性克隆需借助动物细胞核移植 技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植 技术，B正确；治疗性克隆是利用克隆技术生产特定的细 胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和 器官，以达到治疗疾病的目的，不需要借助胚胎移植技术， C错误：治疗性克隆需要的胚胎干细胞可来自囊胚中的内 细胞团，D正确。 4.D治疗性克隆的目的是得到组织或器官，用于治疗疾病； 生殖性克隆的目的是通过无性繁殖得到相同的个体，A错 误；治疗性克隆不需要进行胚胎移植，B错误；生殖性克隆 人属于无性繁殖，不能丰富人类基因的多样性，C错误；克 隆人一旦成功，将严重威胁着人类社会的稳定，打破原有 的人际关系，可能引发一系列社会伦理、道德和法律问题， 故应研究治疗性克隆而禁止生殖性克隆人，D正确。 [综合演练] 1.B构成基因的物质DNA(脱氧核糖核酸)进入人体后，都 会被酶分解成小分子，不可能将外来遗传信息整合到人的 基因组中，B错误。 2.A间隔种植非转基因棉的主要目的是作为害虫的庇护 所，延缓害虫对转基因抗虫棉产生抗性，A错误；将α淀粉 酶基因与目的基因共转入植物，可阻断花粉中淀粉的储 存，导致花粉失活，从而防止转基因植物通过花粉传播基 因污染，B正确；我国政府明确反对生殖性克隆人实验，但 对治疗性克隆持支持态度，C正确；根据《禁止生物武器公 约》，所有缔约国均承诺禁止生产和使用生物武器，D正确。 3.D转基因产品加贴“转基因”标识的目的是维护消费者的 知情权和选择权，A错误；我国政府坚持主张对治疗性克 隆进行有效监控和严格审查，B错误；通过基因筛查禁止重 大疾病基因携带者就业，属于基因歧视，C错误；转基因技 术有利有弊，需要基于完备的科学知识理性的讨论转基因 作物的安全性问题，D正确。 4.ACD转基因作物长期种植会对害虫产生自然选择压力， 导致抗性害虫逐渐增多，反而可能促进侵染力更强的害虫 出现，A错误；我国政策明确支持治疗性克隆，但严格禁止 生殖性克隆人，符合伦理规范，B正确；转基因技术的应用 需科学评估，单一有害案例不能全盘否定技术本身，应具 体分析并加强监管，C错误；生物武器包括致病菌类、病毒 类和生化毒剂类等，毒品类（如海洛因）属于违禁药物，不 属于生物武器，D错误。[每日格言]成功与不成功之间有时距离很短一只要 作业（三） 基因工程 1知识现固 知识点一 基因工程的基本工具 识别特定的核苷酸序列并切开特 限制性 作用上定部位的两个核苷酸之间的磷酸 内切核 二酯键 酸酶 结果产生黏性末端或平末端 基 作用 在两个核苷酸之间形成磷酸二酯 键以连接两个DNA片段 程 DNA E.coli DNA连接酶：连接互补的 的基本 连接酶 黏性末端和平末端，但连接平末 种类 端效率低 T4DNA连接酶：连接互补的黏性 端和平末端 种类质粒、噬菌体、动植物病毒等 载体 须具备能白我复制：有一个至多个限制 的条件酶切割位点：有特殊的标记基因 ■跟踪训练 1.将外源基因导入受体细胞的过程中需要使用 载体，下列有关载体的叙述错误的是() A.载体应对宿主细胞无伤害，以免影响宿主细 胞的正常生命活动 B.载体应具有一个至多个限制酶切割位点，以 便于目的基因的插入 C.基因工程中被用作载体的质粒都是在天然 质粒的基础上改造的 D.将外源基因送入受体细胞的载体可以是切 割DNA分子的酶 2.(2025·石家庄调研)图1为某种质粒简图，图 2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指 分别为限制酶EcoR I、BamH I、HindⅢ的酶 切位点。下列有关叙述错误的是 （) BamHI HindⅢ EcoRI EcoRI ↓外源 质粒 ←EcoRI II DNA BamHI Hindll 图1 图2 A.在基因工程中若只用一种限制酶完成对质 粒和外源DNA的切割，则可选EcoR I B.如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别 用EcoR I酶切后，再用DNA连接酶连接， 后者再向前儿步。 高二生物学 今 月 日 日 星期 天气 形成一个含有目的基因的重组DNA,此重 组DNA中EcoR I切割位点有1个 C.为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片 段自身环化，酶切时可使用BamH I和 HindⅢ两种限制酶同时处理质粒和目的 基因 D.一个如图1所示的质粒分子经EcoR I切割 后，含有2个游离的磷酸基团 知识点二基因工程的操作步骤 1.目的基因的筛选与获取 目的基 从基因文库中获取 因获取 利用PCR技术扩增 的三种 途径 人工合成厂利用mRNA逆转录合成 L通过DNA合成仪用化学方法合成 提醒：从cDNA文库获取的目的基因不含启动 子和终止子。 2.基因表达载体的构建一重组质粒的构建 是一段有特殊结构的 是一段有特殊结 DNA片段，位于基因 构的DNA片段，位 的上游，是RNA聚合 酶识别和结合的部位 表达载体止子引 于基因的下游， 复制标记 RNA聚合酶脱离 能驱动基因转录出 原 恭因 的部位，使转录过 mRNA 程停止 此处A一T含量高，G一C含量低 其作用为鉴别受体细胞中是否含有目的基因， 从而将含有目的基因的细胞筛选出来 3.将目的基因导入受体细胞 植物植物体细胞或 :农杆菌转化法、 目的基因 受精卵 花粉管通道法 导入受体 动物 细胞的方 般为受精卵 显微注射法 法 微生物 原核生物 Ca2*转化法 4.目的基因的检测与鉴定 分子水平 (个体水平 得入检测 转录检测 翻译检测 :个体生物学 水平检测 目的基 转惑mRN 睡蛋白质 →[个体】 ↓检测 ↓检测 ↓检测 ↓鉴定 PCR技术 抗原一抗 抗性接 体杂交 种实验 暑假作业生命是一条艰险的峡谷，只有勇敢的人 ■跟踪训练 3.土壤农杆菌侵染植物细胞时，Tⅰ质粒上的 T-DNA片段转入植物的基因组。利用农杆菌 以Ti质粒作为载体进行转基因，下列相关叙述 正确的是 ( A.目的基因应插入T-DNA片段外，以防止破 坏T-DNA B.用Ca2+处理农杆菌，以利于其侵染植物 细胞 C.Ti质粒是一种环状DNA分子，没有双螺旋 结构 D.可以用PCR技术检测外源DNA是否整合 到植物的染色体DNA上 4.某基因表达载体部分结构如图所示，F1、F2、 R1、R2表示不同的引物。下列相关叙述错误 的是 ( ) 启动子 终止子 F2 FI -a 目的基因 b RI R2 A.启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点 B.该基因表达载体至少还包含复制原点和标 记基因 C.PCR检测目的基因插入方向是否正确时，引 物可选择F2和R2 D.若引物F1与a链相应部位序列相同，则b 链为转录的模板链 知识点三 蛋白质工程 改造或 合成基 操作 预期的蛋白质功能 因 手段 蛋 设计预期的蛋白质结构 改造现 设计 有蛋白 流程 程 推测应有的氨基酸序列 质，或 制造一 结果 ! 种新的 找到并改变相对应的脱 蛋白质 氧核苷酸序列（基因）或 合成新的基因 获得所需要的蛋白质 才能通过。 [每日格言] ■跟踪训练 5.下图表示蛋白质工程的操作过程，相关说法错 误的是 ( ) 分子 基因 DNA合成 氨基酸 设计 蛋白质 预期功能 序列（多 (三维 DNA 4 mRNA b. 肽链) 结构) 生物功能 折叠 A.a、b过程分别是转录、翻译 B.蛋白质工程中对蛋白质分子结构的了解是 非常关键的工作 C.蛋白质工程是完全摆脱基因工程技术的一 项全新的生物工程技术 D.蛋白质工程中可能构建出一种全新的基因 6.利用蛋白质工程对干扰素进行改造，可在一定 条件下延长其保存时间。下列叙述错误的是 ) A.天然蛋白质合成的过程按照中心法则进行， 蛋白质工程与之相反 B.利用蛋白质工程对干扰素进行改造时，操作 对象是干扰素 C,经改造后的干扰素基因能通过工程菌的繁 殖实现遗传 D.对干扰素的改造遇到的最大难题是干扰素 的高级结构十分复杂 2综合演练 1.(2026·连云港高二检测)质粒是基因工程中最 常用的载体，质粒有标记基因（如图所示），通过 标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转 移成功。质粒上箭头表示三种限制酶的酶切位 点。外源基因插人的位置不同，细菌在培养基 上的生长情况不同。如表是外源基因插入（插 入点有a、b、c)后细菌的生长情况。下列有关 叙述正确的是 四环素抗性基因 b 质粒 氨苄青霉素 复制原点 抗性基因 [每日格言]成功呈概率分布，关健是你能不能坚持到 细菌在含氨苄青霉素 细菌在含四环素的 项目 的培养基上生长情况 培养基上生长情况 ① 能生长 不能生长 ② 能生长 能生长 ③ 不能生长 能生长 A.质粒的复制原点上有RNA聚合酶的结合 位点 B.①②③三种重组后细菌的外源基因插人点 ①是a,②是c,③是b C.质粒被一种限制酶切开时，被水解的磷酸二 酯键有2个 D.将外源基因与质粒连接时需用DNA聚合酶 2.如图是利用基因工程技术培育抗除草剂作物 的部分过程，其中PstI、SmaI、EcoR I、 ApaI为四种限制酶，且切割DNA分子后形 成的末端均不同。下列说法正确的是() Pst I Sma I EcoR I 含bar抗除草 剂目的基因的而 DNA片段 bar基因 表达 -Pst I 载体 质粒 Sma I EcoR I 抗卡那霉 -Apa I 素基因 A.图示质粒分子在SmaI切割前后分别含有 0或1个游离的磷酸基团 B.培育抗除草剂作物的核心是将含bar基因的 表达载体导入受体细胞 C.可选用PstI和EcoR I切割质粒和bar基 因，确保目的基因正确插入 D.利用PCR技术可从分子水平检测bar基因 是否翻译出抗除草剂蛋白 3.几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质 酶可催化其水解。将几丁质酶基因转入菊花 体内，可增强其抗真菌病的能力。下列有关叙 述错误的是 () A.将几丁质酶基因插人Ti质粒的T-DNA上 构建表达载体 B.可通过显微注射法将农杆菌导入菊花受体 细胞 功开始呈现的那一刻。 高二生物学 C.可用PCR等技术检测目的基因是否成功 导入 D.可用真菌接种实验检测转基因菊花对真菌 的抗性程度 4.(多选)研究人员利用基因工程技术制备乳腺生 物反应器生产某种药用蛋白，已知该药用蛋白基 因的mRNA序列为5'-UUACUUCCUG CAAGUUUCAU-3',经逆转录得到cDNA,在 其两端添加限制酶识别序列后利用PCR技术 扩增，将扩增后的DNA与启动子A等元件重 组构建基因表达载体，如下图所示。下列叙述 正确的是 () 终止子 启动子A 限制酶识别序列 抗性基因 EcoR I-→5'GIAATTC-3' Pst I 5-CTGCAG-3 启动子B 人终止子 A.含该药用蛋白基因的启动子，构建基因表达 载体前需将其去除 B.由于启动子A具有组织特异性，该药用蛋白 基因只在乳腺细胞中表达 C.PCR扩增时两种引物分别是5'-GAATTCT TACTT-3 5'-CTGCAGATGAAA-3' D.构建的基因表达载体还需通过显微注射的 方法导入雌性动物的乳腺细胞中 5.(2026·河南名校联考)科学家将人的生长激素 基因与pBR322质粒进行重组，得到的重组质 粒导入奶牛受精卵，使其发育为转基因奶牛。 pBR322质粒含氨苄青霉素抗性基因(AmpR) 和四环素抗性基因(TetR),含5个限制酶切点 (PstI、EcoR I、HindⅢ、BamH I和SalI), 如图1所示。重组质粒形成与否需要鉴定和筛 选，方法是将重组DNA分别导入大肠杆菌并 在含抗生素的培养基上培养，观察大肠杆菌的 生长、繁殖情况以进行判断，如图2所示。请回 答下列问题： EcoR I Hind Ill 受体菌 BamH I AmpR Sal I 含氨苄青霉素的培养基 Pst】 A TetR 受体菌 含四环素的培养基 pBR322 B 图1 图2 暑假作业读书之法，在循序而渐进，熟读而精 (1)获取人生长激素基因可以采用逆转录法合 成，该过程中用的mRNA是从 细胞 中获得的。以mRNA为模板获取DNA的过 程中，需要用到的酶有 该过程中除需要酶、原料外，还需要加入适量的 (2)如果用某种限制酶切割质粒和人的生长激 素基因，形成重组质粒，再将重组质粒导入大肠 杆菌中，若受体菌在A培养基中不能形成菌 落，在B培养基中能形成菌落。则使用的限制 酶可能是 ,即目的基因插入在 基因中。 (3)为了利用转基因奶牛生产人生长激素，最好 让目的基因在 细胞中进行表达，在构 建基因表达载体时，需要对 进行改造。 (4)将重组DNA分子转入奶牛中的常用方法 是 ,检测转基因奶牛能否产生人 生长激素常用的方法是 (5)如果要加速转基因奶牛的繁育速度，采用核 移植技术比杂交技术更好，这是因为杂交技术 容易造成 3真题体验 1.(2025·安徽卷)质粒K中含有B-半乳糖苷酶 基因，将该质粒导入大肠杆菌细胞后，其编码 的酶可分解X-gal,产生蓝色物质，进而形成蓝 色菌落，如图所示。科研小组以该质粒作为载 体，采用基因工程技术实现人源干扰素基因在 大肠杆菌中的高效表达。下列叙述错误的是 启动子 BamH I 质粒K 导入 o B半乳糖苷酶基因 卡那霉素抗性基因 大肠杆菌 表达活性β-半乳糖苷酶 蓝色菌落 筛选平板 (含Xgal和卡那霉素) A.使用氯化钙处理大肠杆菌以提高转化效率， 可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数 [每日格言] B.如果筛选平板中仅含卡那霉素，生长出的白 色菌落不可判定为含目的基因的菌株 C.因质粒K中含两个标记基因，筛选平板中长 出的白色菌落即为表达目标蛋白的菌株 D.若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质 粒K经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌 2.(多选)(2025·江苏卷)图示人体正常基因A 突变为致病基因a及HindⅢ切割位点。AluI 限制酶识别序列及切制位点为：，下 列相关叙述正确的有 Hindl Hind HindⅢ 2-.200bp- AaucIt .---400bp--- AAGCIT3' A基因34 TCGAA TTCGAA TTCGAA 5 Hind 突变 HindⅢ a烟产…20p… TTCGAC -----400bp A.基因A突变为a是一种碱基增添的突变 B.用两种限制酶分别酶切A基因后，形成的末 端类型不同 C.用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片 段大小一致 D.产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限 制酶开展酶切鉴定 4易错清零 易错一基因表达载体中启动子、终止子的 来源 1.(2026·西安质检)将某病毒的外壳蛋白(L1) 基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因连接，构建 L1-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接 构建下图所示表达载体。图中限制酶E1~E4 处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述错 误的是 ( ) 启动子 L1基因 GFP基因 终止子 El E E3 E4 A.构建L1-GFP融合基因需要用到限制酶有 E1、E2、E4 B.E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载 体的正确连接 [每日格言]平凡的脚步也可以走完伟大的行程。 C.GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否 表达 D.培育乳汁中含L1的转基因羊需将表达载体 转入乳腺细胞 易错警示 (1)如果目的基因是从自然界中已有的物种中 分离出来的，在构建基因表达载体时，不需要 在质粒上目的基因的前后端接上特定的启动 子、终止子，因为目的基因中已含有启动子、终 止子。 (2)如果目的基因是通过人工方法合成的，或 通过cDNA文库获得的，则目的基因是不含启 动子和终止子的。若只将基因的编码序列导 入受体生物中，目的基因没有启动子、终止子， 是无法转录的，因此，在构建基因表达载体时， 需要在与质粒结合之前，在目的基因的前后端 接上特定的启动子、终止子。 易错二PCR过程 2.某科研小组利用PCR定点突变技术培育抗冻 蔬菜新品种。设计含有非特异性碱基配对的 引物，将突变位点引入编码抗冻蛋白的基因 中，获得抗冻能力更强的突变基因。下列叙述 正确的是 拟突变位点 物2 引物4 3 3 3 引物1 ② 引物31③ 3 3 ④ 混合、变性后，杂交 3 5 ⑤ 3 突变后的基因 注：引物突起处代表与模板链不能互补的突变位点。 A.过程②还需要四种核糖核苷酸和耐高温的 DNA聚合酶 B.过程③至少需要两次循环才能得到两条链 等长的DNA分子 高二生物学 C.过程④需要使用引物1和4才能获得目的 基因 D.合成的DNA分子经混合、变性、杂交后发现 通过引物2和3延伸形成的两条链杂交在 一起，说明引物2和3的碱基序列相同 易错警示 (1)复性不一定均为引物与DNA模板结合。 复性时，引物与DNA模板的结合是随机的，也 存在DNA解开的两条链的结合。 (2)PCR反应的结果不都是所需的DNA片段。 因为第一次循环得到的DNA片段只有一种引 物，比所需的DNA片段要长，从第二次循环才 出现所需的DNA片段，这样的片段存在两种 引物。 5趣味生物 植物不能代谢亚磷酸盐(Phi),但导入并表达 ptxD基因的转基因植物可将Phi转化为供作物 生长发育所需的Pi,以获得更高产量。当施用 Phi时，杂草不能与txD转基因农作物竞争可利 用的磷，因此，pxD转基因植株相比于杂草有明 显的竞争优势。Phi不能被藻类代谢且对藻类没 有毒性，施用后不会促进赤潮的发生，对水生生 态系统生物多样性不构成威胁。某研究团队将 txD基因转入野生型油菜“Westar'”(WT)中，获 得转基因油莱。 ∽mRNA ￥a 质粒 潮霉素 ↓b =大量的ptxD基因 抗性基因 重组质粒○ 含重组质粒的农杆菌 doo e f诱导愈吕油菜 用农杆伤组织 植株 菌悬浮 幼苗下胚轴 液浸泡