甘肃省白银市第十中学2025-2026学年高二下学期7月期末考试生物试题

《2026高二生物》参考答案 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C B B D D B C B B C 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 B C A B D B B D A D 题号 21 22 23 24 25 答案 B D C A A 1．C 【详解】A、细胞学说揭示了动植物结构的统一性、生物界的统一性，但细胞学说提出时还未划分真核细胞和原核细胞，A错误； B、细胞是生物体结构和功能的基本单位，多细胞生物需要依赖分化的细胞密切合作，共同完成各项生命活动，单个细胞无法独立完成生物体的全部生命活动，B错误； C、细胞学说认为细胞是生物体结构和功能的基本单位，新细胞由老细胞产生，胡萝卜韧皮部细胞能发育为完整植株，证明了分化的细胞仍具有发育为完整个体的潜能，支持细胞学说的观点，C正确； D、细胞学说使动植物结构统一于细胞水平，D错误。 2．B 【详解】A、有包膜的病毒通常以出芽方式释放，释放过程中会包裹宿主细胞的细胞膜（脂质双层结构）形成自身包膜，因此痘病毒的包膜可能来源于最后的宿主细胞，A正确； B、题干明确说明痘病毒对宿主细胞的DNA和RNA依赖程度很低，且可完全在细胞质中完成复制和转录，说明其基因组复制与转录所需的酶并非全部来源于宿主细胞，部分由病毒自身携带或编码合成，B错误； C、痘病毒的复制过程完全在宿主细胞质中进行，不需要进入宿主细胞核，因此感染过程中宿主细胞核外（细胞质中）可检测到大量病毒DNA，C正确； D、病毒对特定宿主细胞的特异性亲和力，是病毒与宿主细胞长期相互选择、协同进化的结果，D正确。 3．B 【详解】A、好氧霉菌是需氧型生物，但酵母菌发酵产酒精的过程需要无氧环境，如果整个发酵过程不断通入氧气，酵母菌会进行有氧呼吸，不产生酒精，还会抑制无氧发酵，A错误； B、发酵前期好氧霉菌起主导作用，糖化率先启动，形成高糖环境，酵母菌的早期有氧呼吸能产生少量代谢水，所以酒酿制作过程中一般是先见水，后出酒，B正确； C、蒸熟糯米的高温可以起到杀菌作用，但应冷却后再加入菌种，以免菌种死亡，C错误； D、米酒发酵整个过程是放热反应，过程中会明显升温，前期温度较高（有氧呼吸放热量大），后期温度较低（无氧呼吸也放热，但放热量比有氧呼吸少），D错误。 4．D 【详解】A、培养基配制时，调节pH需要在灭菌之前完成，避免灭菌后再调节污染环境，A正确； B、由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养；微生物的纯培养的步骤是配制培养基、灭菌、接种、分离、培养，B正确； C、幽门螺杆菌是细菌，用细菌计数板可对细菌等较小细胞进行观察和计算，C正确； D、②号试管中微生物集中在培养基的中上层，说明该菌需要微需氧环境，D错误。 5．D 【详解】A、活的未融合原生质体、同种融合原生质体、异种融合原生质体都可以再生出细胞壁，仅观察细胞壁再生无法区分异种融合细胞，A错误； B、验证选择培养基的筛选作用时，对照组需要将微生物接种到完全培养基中，和选择培养基的菌落数做对比，不接种微生物的空白对照仅用于检验培养基是否被杂菌污染，B错误； C、仅当需要规避伴性遗传病等有性别筛选需求时，才会在试管婴儿操作中取滋养层细胞做性别鉴定，性别鉴定不是试管婴儿的必需步骤，C错误； D、制备单克隆抗体时，通过抗原-抗体杂交技术筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，该技术属于分子水平的检测方法，D正确。 6．B 【详解】A、培育过程中将完整的供体体细胞注入去核卵母细胞，供体体细胞的细胞质、去核卵母细胞的细胞质共同参与重构胚组成，因此“康康”的细胞质基因来源于供体细胞和受体卵母细胞，A错误； B、卵母细胞去核的方法包括显微操作法、梯度离心法、紫外光短时间照射法等，其中梯度离心法无需穿透透明带即可去除纺锤体—染色体复合物，B正确； C、电刺激、Ca2+载体处理、乙醇处理等均是常用的重构胚的激活方法，重构胚经过人工激活才能启动发育进程，而不是使其完成融合，C错误； D、囊胚的内细胞团将来发育为胎儿的各种组织，若取内细胞团细胞进行DNA分析会破坏胚胎结构，影响后续发育，应取将来发育为胎膜和胎盘的滋养层细胞进行检测，D错误。 7．C 【详解】A、胚胎移植的生理学基础要求供体、受体进行同期发情处理，使二者生殖器官生理状态一致，为胚胎移入提供相同的生理环境，因此受体D需和供体A、B同期发情处理，A正确； B、促性腺激素可促进雌性个体超数排卵，因此对供体雌性A注射促性腺激素可实现超数排卵，B正确； C、受体子宫对外来胚胎基本不发生免疫排斥，是胚胎移植的生理学基础之一，因此不需要对受体D进行免疫检测，C错误； D、后代E是A的卵细胞和C的精子体外受精发育而来，遗传物质来自A和C，因此性状与A、C一致；后代F是核移植（克隆）得到的个体，核遗传物质来自B的体细胞，细胞质遗传物质来自去核卵母细胞，因此性状与B不完全一致，D正确。 8．B 【详解】A、图中甲是桑椹胚，体外受精时，获能的精子和成熟的卵子在体外共培养可完成受精，受精卵早期发育可得到桑椹胚，因此甲可通过该方式获得，A正确； B、胚胎干细胞来源于早期胚胎（如囊胚内细胞团）或原始性腺，嵌合体的皮肤组织是高度分化的体细胞组织，即使发绿色荧光，也属于已分化的体细胞，无法从中分离出胚胎干细胞，B错误； C、①为胚胎移植，乙是囊胚，囊胚需要孵化（透明带破裂，胚胎脱出）后才能着床继续发育，该过程发生在代孕动物体内，C正确； D、该嵌合体的部分生殖细胞可携带目的基因（来自注入的转基因胚胎干细胞），因此可从嵌合体的后代中筛选得到所需转基因动物个体，D正确。 9．B 【详解】A、低温诱导植物细胞染色体数目加倍的原理是低温可抑制有丝分裂前期纺锤体的形成，洋葱根尖分生区细胞可进行有丝分裂，纺锤体形成受抑制后，着丝粒分裂产生的子染色体无法移向细胞两极，会引起细胞内染色体数目加倍，A正确； B、绿叶中的色素属于脂溶性有机物，易溶于无水乙醇等有机溶剂，因此无水乙醇可作为该实验的提取液；DNA不溶于无水乙醇，因此DNA粗提取实验中常用体积分数为95%的冷酒精使DNA析出，B错误； C、探究酵母菌细胞呼吸的方式实验中，自变量是氧气的有无，因变量是细胞呼吸产物的产生情况，温度、培养液用量、酵母菌初始数量等均为无关变量，需保持相同且适宜，C正确； D、模拟生物体维持pH的稳定实验中，清水组、HCO3-/H2CO3或HPO42-/H2PO4-缓冲液组均可作为对照组，生物材料组为实验组，D正确。 10．C 【详解】A、由图可知，A突变为a是碱基对的替换（原序列第二个T替换为G），不是碱基缺失，A错误； B、E.coli DNA连接酶能高效连接黏性末端，对平末端的连接效率较低，AluⅠ切割后会产生平末端，不宜用E.coli DNA连接酶连接，B错误； C、正常A基因有3个HindⅢ识别位点，酶切后可得到200bp、400bp两种长度的片段；突变后a基因中间的HindⅢ识别位点被破坏，仅剩下2个HindⅢ位点，酶切后只得到1条600bp的片段，酶切后产物长度不同，可以通过该酶酶切鉴定致病基因，C正确； D、限制酶的本质是蛋白质，高温会使酶的空间结构改变而变性失活，限制酶适宜在低温保存，D错误。 11．B 【详解】A、DNA的热稳定性强于蛋白质，60~75℃环境下蛋白质会发生变性沉淀，而DNA结构保持稳定，过滤即可除去变性的蛋白质杂质，措施合理，A不符合题意； B、研磨后过滤得到的沉淀是细胞碎片等不溶性杂质，目标DNA溶解在研磨后的滤液中，对沉淀进行蛋白酶处理无法作用于含DNA的滤液组分，不能提高DNA纯度，措施不合理，B符合题意； C、2mol/L的NaCl溶液中DNA溶解度很高，部分蛋白质在此浓度下溶解度低会析出，过滤去除析出的蛋白质后，再将NaCl浓度调至0.14mol/L让DNA析出，此时多数蛋白质仍溶解在溶液中，可进一步除杂，措施合理，C不符合题意； D、DNA不溶于冷却的95%酒精，而蛋白质等杂质可溶于酒精，重复沉淀、溶解DNA的操作可以逐步去除溶于酒精的杂质，提高DNA纯度，措施合理，D不符合题意。 12．C 【详解】A、EcoR Ⅰ切割产生黏性末端，EcoR V切割产生平末端，A错误； B、EcoR Ⅰ和Mfe Ⅰ切割产生的黏性末端相同，既能被E.coliDNA连接酶连接，也能被T4DNA连接酶连接，B错误； C、BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ切割产生的黏性末端相同，连接后的序列含有Sau3A Ⅰ的识别序列GATC，因此能被Sau3A Ⅰ切割，C正确； D、由五种限制酶的识别序列和酶切位点可知，这五种限制酶均能识别双链DNA的特定序列，并切开特定部位的磷酸二酯键，D错误。 13．A 【详解】在进行PCR操作时，引物应分别与基因两条链的3′端根据碱基互补配对原则结合，图所示碱基序列磷酸端为5′端，羟基（-OH）端为3′端，草甘膦抗性基因上面那条链的右边为3’端，引物5'-CTTGGATGAT-3'与该链的3'端互补结合；草甘膦抗性基因下面那条链的左边为3’端，引物5’-TCTGTTGAAT-3’与该链的3'端互补结合”，A符合题意。 14．B 【详解】A、PCR扩增中引物与DNA模板链的3’端通过氢键结合，A错误； B、1个图示DNA分子经PCR循环n次后，可获得两条脱氧核苷酸链等长的Bt基因（2n-2n）个，B正确； C、要使Bt基因与载体正确连接，则需在引物的5’端添加相应的限制酶识别序列，C错误； D、Bt抗虫蛋白只有在鳞翅目昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而牛的胃液呈酸性，而且牛的肠道细胞上没有相应的特异性受体，黄牛吃了转基因抗虫棉的叶片，不会导致其肠上皮细胞的细胞膜穿孔而死亡，D错误。 15．D 【详解】A、蛋白质工程的本质是通过改造或合成基因实现对蛋白质的改造，对水蛭素的改造属于蛋白质工程，必须对基因进行操作，A错误； B、天然蛋白质的合成过程是遵循中心法则从DNA到RNA再到蛋白质，而水蛭素改造（蛋白质工程）的基本思路是从预期蛋白质功能出发，反向推导得到对应的基因序列，二者思路不同，B错误； C、密码子具有简并性，即一种氨基酸可对应多种密码子，因此依据蛋白质的氨基酸序列推测得到的mRNA（b）核糖核苷酸序列不止一种，C错误； D、若改造后水蛭素抗凝血活性更高，会延缓凝血过程，小鼠尾静脉出血时间会更长，因此可通过该方法鉴定其抗凝血活性，D正确。 16．B 【详解】A、普通试管婴儿的作用是解决不孕不育问题，无需对胚胎进行遗传学诊断，“设计试管婴儿”需要在胚胎移植前做遗传学诊断以筛选符合特定要求的胚胎，A错误； B、将α-淀粉酶基因与目的基因共同转入植物后，可实现花粉中特异表达α-淀粉酶，分解花粉中的淀粉使花粉不育，避免转基因花粉携带目的基因扩散至近缘物种，可防止基因污染，B正确； C、生物武器包含致病菌、病毒、生化毒剂以及基因重组的致病菌等，干扰素是免疫调节用的免疫活性物质，抗生素是抑制细菌增殖的药物。二者都不属于生物武器，C错误； D、生殖性克隆需要经体细胞核移植、早期胚胎培养、胚胎移植最终获得完整克隆个体；治疗性克隆的目的是获取胚胎干细胞并诱导分化为所需组织器官用于疾病治疗，不需要进行胚胎移植，D错误。 17．B 【详解】A、1g土壤溶于99mL无菌水，相当于稀释了102倍，再稀释104倍后总稀释倍数为102×104=106倍，取0.1mL涂布得到120个菌落，因此1g土壤中尿素分解菌的数目为120÷0.1×106=1.2×109个，A正确； B、血细胞计数板规格为25中格×6 小格；台盼蓝等体积稀释菌液（稀释 2 倍）。一个中格内 无色活菌 9 个、蓝色死菌 6 个，平均每中格活菌=9个，总计数室活菌数 = 9×25=225，计数板体积为0.0001mL，原稀释梯度：土壤总稀释106倍，台盼蓝又等体积稀释×2，因此1g土壤活菌总数=225÷0.0001×106×2=4.5×1012个，B错误； C、尿素分解菌产生的脲酶可分解尿素产生氨，使酚红指示剂变红，菌株分解尿素能力越强，产生的氨越多，菌落周围红色圈范围越大，因此红色圈与菌落直径比值大的菌株分解尿素能力更强，C正确； D、双缩脲试剂显色原理是双缩脲试剂与两个及以上−CO−NH−的结构结合显紫色； 双缩脲分子H2N−CO−NH−CO−NH2含有 2 个−CO−NH−结构，可和双缩脲试剂生成紫色络合物，D正确。 18．D 【详解】A、第二幅图的细胞中有3套染色体，这三套染色体会进行复制形成P1、P1、P2、P2、M、M6套染色体，然后融合成P1P2（死亡）、MP1、MP2二倍染色体细胞，然后经过细胞分裂增殖及内细胞团一分为二，最终形成带有不同比例的MP1、MP2的胚胎，所以姐弟俩来源于母亲的染色体都是M，而来源于父亲的染色体为P1或P2，A错误； B、精子受精前的准备是获能，获能指的是获得受精能力，并非获得能量，B错误； C、该半同卵双胞胎是同一个卵细胞与两个精子受精所致，而不是被更多个精子受精所致，说明透明带和卵细胞膜均发生了一定的生理反应，而非均未发生生理反应，C错误； D、据过程5可知两个内细胞团共用一个滋养层，滋养层会发育成胎儿的胎膜和胎盘，所以双胞胎共用一个胎盘，D正确。 19．A 【详解】A、差速离心法通过控制不同的离心速率，可将质量不同的细胞组分分离，细胞核质量大，会在较低转速下最先沉淀，因此可从解冻组织匀浆液中获得细胞核，A正确； B、电融合法是用于诱导供体细胞与去核卵母细胞的细胞膜融合的操作，若已经直接将提取的细胞核注入去核卵母细胞的细胞质中，无需再进行电融合，只需进行激活处理即可，B错误； C、细胞核全能性是指细胞核含有发育为完整个体的全套遗传物质，具有发育成完整个体的潜能，利用心脏来源的细胞核未成功构建ntES是受当前实验条件限制，不能说明其细胞核本身不具有全能性，C错误； D、核移植的成功比例受冷冻对不同组织细胞核的损伤程度、操作误差等多种因素影响，不能仅根据成功率更低就直接判定胰腺细胞分化程度更高，且神经细胞属于高度分化的终末细胞，分化程度高于多数胰腺细胞，D错误。 20．D 【详解】A、由图可知，突变引物FP2和RP1存在互补的碱基序列，若将两对引物置于一个扩增体系中，则引物FP2和RP1会发生互补，影响其与模板结合，故过程①需要把两对引物分别加入两个扩增体系中以提高扩增效率，A错误； B、通用引物FP1与模板链的一端结合，经过一轮复制后，得到一个全长的DNA和一个含突变引物RP1的不等长的DNA，第二轮复制时，以含突变引物RP1的链作为模板即可扩增得到图示等长的片段，即过程①经2轮PCR即可得到图中所示PCR产物，B错误； C、过程②的产物不都可以完成延伸过程，因为子链只能从引物的3’端开始延伸，C错误； D、若过程④得到16个突变的基因，由于模板链中不含有通用引物，而每条子链合成都需要引物，则产生的16个突变基因中共需要消耗16×2－2=30个通用引物，而需要通用引物RP2的数量为30÷2=15个，D正确。 21．B 【详解】A、XhoⅠ的酶切位点在基因A内部，不能选择，否则会破坏基因A，A错误； B、F1位于基因A的下游，要让基因A正向插入质粒，F1的5'端需要带有HindⅢ的酶切位点，对应质粒上靠近β-半乳糖苷酶基因的酶切位点； F2位于基因A的上游，其5'端需要带有XbaⅠ的酶切位点，对应质粒上靠近启动子的酶切位点。 这样切割后，基因A的两端就能和质粒切割后的黏性末端互补连接，且保证基因A的转录方向和质粒上的启动子方向一致，B正确； C、F1位于基因A的下游， F2位于基因A的上游，若F1、F2的5'-端分别含有AccⅠ、HindⅢ酶切位点，会导致基因与质粒反接，C错误； D、PvuⅠ、ScaⅠ的酶切位点位于Ampr抗性基因内部，切割会破坏抗性标记基因，无法后续筛选重组质粒，D错误。 22．D 【详解】A、DNA子链的延伸方向为5'→3'，引物需要结合在目的片段两端，且延伸方向朝向目的片段内部，因此选择引物b和引物c可以扩增目标片段，A正确； B、PCR使用的酶是耐高温的Taq DNA聚合酶，该酶的激活确实需要Mg2+，B正确； C、PCR的三步流程中：变性后温度下降到50℃左右（复性阶段），引物才会通过碱基互补配对与单链DNA结合，C正确； D、双链等长的目的DNA片段最早在第3次循环后才会出现，D错误。 23．C 【详解】A、题干中X+Y融合蛋白由两个独立基因表达后经自我切除并无痕连接两侧肽链形成，非直接构建融合基因，构建X+Y融合蛋白基因，也不存在碱基序列相互影响问题，A错误； B、从图中可以看到，内含肽序列并未嵌入X蛋白的功能结构内，而是在X蛋白的功能结构外侧，这样才能保证X蛋白功能结构的完整，最终融合蛋白功能正常，B错误； C、从图中过程可以看出，内含肽的IntAN与IntAᶜ、IntBᶜ与IntBᴺ通过能匹配的结构相互识别，进而发挥特异性切除和连接作用，C正确； D、由图可知，内含肽在反应后被完全切除，得到的X+Y融合蛋白不含内含肽结合部位，所以再为X+Y融合蛋白提供“内含肽+某蛋白”，也不能实现自我切除并无痕连接两侧肽链，不能赋予X+Y融合蛋白新的结构，D错误。 24．A 【详解】A、PCR反应分为变性、复性、延伸三个阶段，Taq DNA聚合酶是耐高温的DNA聚合酶，主要在延伸阶段催化脱氧核苷酸连接合成子链，在延伸过程起作用，A正确； B、PCR反应缓冲液中添加的是Mg2+用于激活DNA聚合酶，B错误； C、DNA聚合酶只能从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸，子链合成方向为5’→3’，C错误； D、G和C之间通过3个氢键连接，A和T之间通过2个氢键连接，引物GC含量越高，双链结构越稳定，复性所需温度越高，D错误。 25．A 【详解】A、蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，也被称为第二代基因工程，A正确； B、蛋白质工程的操作对象是基因，通过改造或合成目的基因间接实现对蛋白质结构的改造，并不直接改造蛋白质结构，B错误； C、蛋白质工程既可以改造自然界已有的蛋白质，也可以制造自然界原本不存在的新型蛋白质，C错误； D、蛋白质工程最终需要借助基因工程技术，将改造后的目的基因导入受体细胞，使其表达获得目标蛋白质，离不开基因工程技术，D错误。 26．(1) BCDFG ABCDEFG CEF (2) 细胞膜 细胞质（细胞质基质） 蛋白质是生命活动的主要承担者，核糖体是合成蛋白质的场所 (3) ①④ 10 (4) 【详解】（1）A为T2噬菌体，B为细菌，C为蓝细菌，D为酵母菌，E为植物细胞，F为眼虫，G为草履虫，图示结构中，属于生命系统结构层次中个体层次的是BCDFG。病毒、原核生物和真核生物都能发生基因突变，能发生基因突变的是ABCDEFG；同化作用类型为自养型的是CEF。 （2）B~G共有的细胞结构是细胞膜、细胞质、核糖体。细胞都具有核糖体的原因是蛋白质是生命活动的主要承担者，核糖体是合成蛋白质的场所。 （3）（a）①②是目镜，目镜的镜头越长，其放大倍数越小；③④是物镜，物镜的镜头越长，其放大倍数越大。图像2中④的细胞数目最多说明放大倍数最小，应该选择①④。 （b）选择目镜5×，物镜10×时，则所观察到的物像是实际物体的5×10=50倍，此时遍布于视野中的细胞数目为160个，若目镜不变，物镜换为40×，由于放大倍数是放大的长或宽所以视野缩小的是长乘宽，因此视野中观察到的细胞约为160÷4÷4=10个。 （4）据图分析，显微镜下小动物先向右下再往右上移动，由于显微镜观察到的物像是倒像，为了能保证这只小动物始终在视野内，则玻片应先向右下，再往右上移动，移动的轨迹是。 27．(1) 有无以核膜为界限的细胞核 有氧条件利于酵母菌快速繁殖；防止发酵液溢出 (2) 选择 碳源、氮源 （酸性）重铬酸钾 (3) 平板划线法（或稀释涂布平板法） 乙酸（醋酸） 【详解】（1）果酒发酵的菌种是酵母菌，属于真核生物；果醋发酵的菌种是醋酸菌，属于原核生物，二者核心结构差异是有无核膜包被的成形细胞核。装瓶留1/3空间的作用有两点：一是预留的氧气可支持酵母菌前期有氧呼吸大量繁殖，增加菌种数量；二是可容纳发酵产生的CO2，避免发酵液溢出。 （2）选择培养基能定向筛选目标微生物，因此用于从杂菌中分离酵母菌。微生物生长需要的基础营养包括水、无机盐、碳源、氮源，黑枸杞果汁可以提供后两类营养。酸性条件下重铬酸钾与酒精反应会由橙色变为灰绿色，因此用于酒精检测。 （3）平板划线法、稀释涂布平板法都可以通过分离得到单菌落，是纯化微生物的常用接种方法。醋酸菌为好氧菌，当氧气、糖源都充足时，可直接将糖类分解为醋酸。 28．(1)胰蛋白（胶原蛋白） (2) 抗体检测 无菌、无毒 95% 空气 (3) 特异性强、灵敏度高，可大量制备 a (4)溶酶体 【详解】（1）动物细胞间的主要成分为蛋白质，胰蛋白酶或胶原蛋白酶可以分解该类物质，将动物组织分散为单个细胞，便于后续培养。 （2）细胞融合后得到的杂交瘤细胞种类复杂，需要经过克隆化培养和专一抗体阳性检测，才能筛选出能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞；动物细胞体外培养的首要条件是无菌、无毒的环境，避免杂菌污染和代谢废物毒害细胞；培养所需气体为95%的空气（提供O2，满足细胞有氧呼吸需求）和5%CO2（维持培养液的pH稳定）。 （3）单克隆抗体的核心优点是特异性强、灵敏度高，并且可以通过体外培养大量制备；ADC中a为抗体部分，负责特异性识别靶细胞（乳腺癌细胞），b为药物部分，因此单克隆抗体对应a。 （4）结合图2可知，ADC通过胞吞进入乳腺癌细胞后，会和溶酶体融合，溶酶体中含有多种水解酶，可将ADC裂解，释放出药物发挥作用。 29．(1) Mg2+ 脱氧核苷酸 能与DNA母链的一段碱基序列互补配对 变性 碱基对之间的氢键 让两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 (2) 农杆菌转化 携带目的基因进入植物细胞，并整合到植物细胞的染色体DNA上 【详解】（1）PCR反应体系应添加含Mg2+ 的缓冲液、引物、模板、4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶等。引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。PCR的变性阶段通过加热破坏DNA双链碱基对之间的氢键，使双链解开。复性时需要将温度设置为50 ℃左右，目的是让两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 （2）构建好的基因表达载体常通过农杆菌转化法导入白桦树细胞，农杆菌Ti质粒上的T-DNA可将携带的目的基因转移至植物细胞，并整合到植物细胞的染色体DNA上，使目的基因随受体细胞的DNA同步复制。农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物。 30．(1) pH 不会 胰蛋白酶处理时间过长会过度分解细胞表面蛋白质，损伤细胞 (2) ①④或③④ 将不含P基因的空质粒导入乳腺癌细胞 (3) 抑制 促进 【详解】（1）动物细胞培养中，CO₂的作用是维持培养液正常的pH，若CO₂不足会导致培养液pH异常；乳腺癌细胞是癌细胞，细胞膜上糖蛋白减少，失去了接触抑制特性，因此培养时不会出现接触抑制；胰蛋白酶处理贴壁细胞分散细胞时，处理时间过长会过度分解细胞蛋白、损伤细胞，因此需要控制处理时间。 （2）构建重组质粒时，需要保证目的基因插入方向正确：质粒启动子在插入位点左侧，转录方向从左到右，而P基因自身转录方向向左，因此需要将P基因的右端（转录起点侧）连接靠近启动子的Bgl II位点，左端连接靠近终止子的Hind III位点，但因质粒的复制原点有Hind III的酶切位点，在启动子和复制原点之间还有BamH I的酶切位点，故只能选择Bgl II作为靠近启动子的酶切位点、Spe I作为靠近终止子的酶切位点。根据碱基互补配对，Bgl II识别序列为AGATCT，P基因右端序列匹配引物③（5'-AGATCTAGGCAT-3'）；Spe I识别序列为ACTAGT，P基因左端序列匹配引物④（5'-ACTAGTCCGTGT-3'），因此选引物③④。BglⅡ和BamHⅠ酶切产生的黏性末端相同，扩增P基因时，也可以在上游引物的5'端添加BamHⅠ识别序列，选择引物①和④。 本实验探究P基因的作用，实验组导入含P基因的重组质粒，对照组需要排除质粒本身的影响，因此对照组为转入不含P基因的空质粒的乳腺癌细胞，其余条件与实验组一致。 （3）启动子甲基化会阻碍RNA聚合酶与启动子结合，因此P蛋白诱导S基因启动子甲基化，会抑制S基因的转录；S基因的作用是抑制DNA损伤修复、抑制肿瘤增殖，S基因表达被抑制后，DNA损伤修复可以正常进行，因此会促进肿瘤耐药。 31．(1) EcoRⅠ和SmaⅠ T4 DNA连接酶 (2) 引物和模板（或phyA基因） 变性、复性、延伸 (3) 不含组氨酸 导入重组质粒的菌株能合成组氨酸 (4) 使酵母菌快速大量增殖 甲醇 【详解】（1）要避免质粒自身环化和目的基因反向连接，需要选择两种不同限制酶进行双酶切，且不能破坏目的基因：AvrⅡ的酶切位点位于phyA基因内部，切割会破坏目的基因，SacⅠ会破坏质粒的启动子，应选用EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶切割目的基因与质粒；EcoRⅠ切割产生黏性末端，SmaⅠ切割产生平末端，T4 DNA连接酶既可以连接黏性末端也可以连接平末端，因此连接效率更高。 （2） PCR反应体系除了Taq酶、dNTP、缓冲液等，还需要引物和模板（或phyA基因）；PCR一次循环的三步为：高温变性（解开DNA双链）、复性（引物结合模板）、延伸（合成子链）。 （3）重组质粒携带HIS4(组氨酸合成基因)，而受体毕赤酵母是组氨酸缺陷型，自身不能合成组氨酸，因此使用不含组氨酸的培养基筛选：只有成功导入重组质粒的毕赤酵母才能合成组氨酸，在不含组氨酸的培养基存活，未导入的无法存活，从而初步筛选出工程菌。 （4）根据题干信息，该甲醇诱导型启动子在葡萄糖存在时不驱动转录，仅甲醇为碳源时驱动转录：因此先添加葡萄糖的目的是让工程菌先大量增殖、积累菌体数量，此时目的基因不表达，避免能量浪费；之后加入甲醇诱导目的基因表达。 答案第1页，共2页 答案第1页，共2页 学科网（北京）股份有限公司 $高二生物期末试卷 一、单选题（每题2分） 1.细胞学说是19世纪自然科学的三大发现之一，下列说法正确的是() A.细胞学说揭示了生物体结构的统一性以及真核细胞、原核细胞的统一性 B、细胞是生物体结构的基本单位，都能独立完成生物体的各项生命活动 C.“胡萝卜韧皮部细胞在适宜条件下能发育成新的植株”支持细胞学说的观点 D.细胞学说使动植物结构统一于分子水平，有力地证明了生物之间存在亲缘关系 2.痘病毒是一类双链DNA包膜（脂质双层膜结构)病毒，对动物黏膜上皮细胞具有特殊的亲和力。与其他 大多数DNA病毒不同，痘病毒可完全在宿主细胞质中完成复制，对宿主细胞的DNA和RNA依赖程度很低， 下列叙述错误的是() A.痘病毒的包膜可能来源于最后的宿主细胞 B.痘病毒基因组的复制与转录所需的酶全部来源于宿主细胞 C.在痘病毒感染过程中，宿主细胞核外可检测到大量病毒DNA D.痘病毒的“亲和力”是病毒与宿主细胞长期协同进化的结果 3.家庭酿造米酒是由蒸熟的糯米加入酒曲发酵而成，主要是好氧霉菌（糖化），酵母菌（产酒主力)，乳酸茵 (增香，调风味)等菌种的作用。下列叙述正确的是() A.好氧霉菌是需氧型生物，整个发酵过程要不断通入O2 B.发酵前期，糖化率先启动，形成高糖环境，所以酒酿制作过程中一般是先见水，后出酒 C.应在蒸熟的糯米中尽快加入酒曲，以免杂菌污染 D.米酒发酵过程中会明显升温，前期温度较低，后期温度较高 4.为研究培养幽门螺杆菌所需的气体条件，某小组利用半固体培养基（琼脂含量3.5gL)对幽门螺杆菌进行 培养。下图代表微生物可能出现的四种生长状态。下列叙述错误的是() 一微生物 微生物 徽生物 微生物 1】 ③ ④ A.配制该菌培养基时，应先调节pH,该操作在灭菌之前完成 B.微生物的纯培养的步骤是配制培养基、灭菌、接种、分离、培养 C.常用细菌计数板来对幽门螺杆菌进行计数 第1页共12而 D.若幽门螺杆菌的生长状态类似②号试管，则培养该菌的气体条件应为无氧环境 5.“筛选”是生物技术与工程中重要的环节。下列叙述正确的是() A.诱导植物原生质体融合时，观察是否再生细胞壁可筛选异种融合细胞 B.。用选择培养基筛选微生物，对照组不接种微生物，实验组接种微生物 C.在试管婴儿技术中，需取滋养层细胞进行性别鉴定来筛选所需的胚胎 D.制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞 6.中国克隆牛“康康“的培育过程是将良种肉牛的体细胞直接注入去核卵母细胞中，经诱导融合形成重构胚： 对重构胚人工激活与体外培养后，筛选合格胚胎移植至代孕母牛子宫内，使其完成胚胎发有，下列说法正确 的是() A.“康康”的细胞质基因来源于受体细胞 B.利用梯度离心法无需穿透透明带即可去除纺锤体一染色体复合物 C.可用电刺激或Ca2+载体激活重构胚，使其完成融合 D.将重构胚培养至囊胚期，取内细胞团细胞进行DNA分析后方可移植 7.雪豹是高原珍稀濒危物种，为恢复野生种群，科研人员利用体外受精、胚胎移植技术实现人工繁有，其流 程如下图所示。下列关于该过程的说法错误的是() 动物园雪豹，♀A 动物园雪豹♀B 超数排卵…… ② 野生雪豹 0 去核卵母细胞体细胞 88 3⑧ 受体维性D+⑧早重稍胚 t. 妊娠分娩 妊娠分娩 后代E 后代Fg A,受体雌性D必须和A、B进行同期发情处理 B.胚胎工程一般采用促性腺激素处理A使其超数排卵 C.胚胎移植后需要对受体雌性D进行免疫检测，防止胚胎发育异常 D.E后代遗传性状与A和C一致，F后代遗传性状与B不完全一致 8.利用胚胎干细胞法构建转基因动物的流程如图。下列叙述错误的是() @恩发绿色荧光的 胚胎干细胞 显微 妊娘 发育 ①代孕出生 动物 透明带 后代一 嵌合体 动物 第2页共12页 A。甲可以通过将获能的精子和成熟的卵子共培养获得 B.可从嵌合体动物发绿色荧光的皮肤组织中分离胚胎干细胞 C.进行①过程后乙须在代孕动物体内正常孵化才能继续发有 D.可从嵌合体动物的后代中筛选出所需转基因动物个体 9.关于表中生物学实验的相关叙述，错误的是() (表：低温诱导植物细胞染色体数目的变化：绿叶中色素的提取和DNA的粗提取：探究酵母菌细胞呼吸的 方式：模拟生物体维持pH的稳定) A.低温诱导植物细胞染色体数目的变化：低温能抑制洋葱根尖分生区细胞中纺锤体的形成，引起细胞内 染色体数目加倍 B.绿叶中色素的提取和DNA的粗提取：绿叶中的色素不溶于无水乙醇，DNA易溶于无水乙醇 C.探究酵母菌细胞呼吸的方式：细胞呼吸产物的产生情况是因变量，温度是无关变量 D.模拟生物体维持pH的稳定：可设置HCO3H2CO3缓冲液或HPO,2H2PO4缓冲液作为对照组 l0.如图表示人体正常基因A突变为致病基因a的过程，以及Hind皿的识别序列和切割位点。Alul的识别序 列和切割位点为5’-AGCT-3 。下列叙述正确的是() 3’-TCGA-5’ HindⅢ HindIⅢ HindIII 5达GCi.200bp- AAGCTT AAGCTT3 A基因3 TTCGAA TTCGAA --…400b-…… TTCGAAS HindⅢ 突变」 HindⅢ S:AAGCTT AAGCIT3 a基因 3:TTCGAA -.200bp --4GCTg.--·400bp TTCGAC -一“ TTCGAAS A.基因a不能合成正常蛋白的原因是碱基缺失使终止密码子提前出现 B.用HindⅢ或AluI酶切基因A后，都宜用E.coli DNA连接酶进行连接 C.产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限制酶开展酶切鉴定 D.两种限制酶适宜在70~75℃下保存，以维持空间结构稳定 I1.在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，某小组发现提取的DNA中含有较多蛋白质杂质，己知DNA在O.I4mo/L NaCl中溶解度较低，为提高DNA纯度，下列改进措施中不合理的是() A.将研磨滤液在60-75℃下保温，过滤除杂 B.向研磨过滤获得的沉淀中加入蛋白酶处理 C.研磨滤液中加入NaCl,使其浓度为2mo/L,过滤后再调节至0.14molL D.用冷却的95%酒精重复沉淀、溶解DNA2~3次 第3页共12页 12.限制酶是基因工程中必需的工具之一，下表为五种限制南的识别序列及切料位点。下列关于限制酶的叙 述、正确的是() 限制南 EcoR I BamHI Sau3A I Mfe I EcoR V 识别序列及 5-GAATTC-3' 5'-GGATC℃-3 5'-GATC-3 5'-CAATTG-3 5-GATATC-3 薛切位点 3'-CTTAAG-5' 3'-CCTAGG-5' 3'-CTA0-5 3'-OTTAAC-5' 3'-CTATAG-5' A.EcoR I和EcoR V切割DNA片段产生的未端分别为平末端和黏性末端 B.EcoR I和MfeI切割产生的DNA片段只能被E.coliDNA连接酶连在一起 C、BamH I和Sau3AI切割产生的DNA片段连接后能被Sau3AI切割 D、以上五种限制酶均能识别双链DNA的特定序列，并切开特定部位的氢键 13.草甘粪抗性基因一条链的两端序列如下图，采用PC技术扩增草甘膦抗性基因时应选用的引物组合是() ® OH HO AGACAACTTA TAGTAGGTTCD A.5'-CTTGGATGAT-3'5'-TCTGTTGAAT-3' B.5'-CTTGGATGAT-3'5'-TAAGTTGTCT-3' C.5-ATTCAACAGA-3'和5’-ATCATCCAAG-3 D.5'-ATTCAACAGA-3'5'-GAACCTACTA-3' 14.某兴趣小组通过PC技术获取苏云金芽孢杆菌中的Bt基因，然后将其导入棉花受精卵中获得转基因抗 虫棉，下列相关说法正确的是() Bt基因 A.PCR扩增中引物与DNA模板链的S端通过氢键结合 B.1个图示DNA分子经PCR循环n次后，可获得两条脱氧核苷酸链等长的Bt基因(2n-2n)个 C.要使Bt基因与载体正确连接，则孺在引物的3端添加相应限制酶的识别序列 D.若黄牛吃了转基因抗虫棉的叶片，会因其肠上皮细胞的细胞膜穿孔而死亡 15.水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂。利用某工程手段将水蛭素第47位的天冬酰胺替换成赖氨 酸，可以提高其抗凝血活性，能有效预防和治疗血栓，流程如图所示。下列叙述正确的是() 基因 分子设计蛋白质 …须期功能 DNA 折径 三维结构→生物功能 A.对水蛭素的改造过程利用了蛋白质工程，不需要对基因进行操作 B.水蛭素改造的基本思路与天然蛋白质的合成过程相同 C.b是mRNA,依据蛋白质的氨基酸序列只能推测出b的一种核糖核苷酸序列 D.通过检测活体小鼠尾静脉出血的时间以鉴定改造后水蛭素的抗凝血活性 16.下列关于生物技术的安全性和伦理问题的叙述，正确的是() A.“试管婴儿和“设计试管婴儿”都需要对胚胎进行遗传学诊断 B.将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可防止基因污染 C.生物武器是用微生物、毒素、干扰素及抗生素等来形成杀伤力 D.生殖性克隆和治疗性克隆都应用了体细胞核移植和胚胎移植技术 17.尿素分子结构式如图，能被脲酶分解，产物能使酚红指示剂变红。为从土壤中筛选出尿素分解菌，实验 人员配制不含氮源的培养基（添加酚红指示剂），向其中加入过滤除菌的尿素后用HC1调至橙黄色，然后倒 平板。将1g土壤样品溶于99mL无菌水后再稀释104倍，取菌液0.1mL涂布于上述平板并培养，统计平均菌 落数为120个。剩余菌液加等体积的台盼蓝染色后用血细胞计数板检测活菌数。下列错误的是() ©无色菌体 ●蓝色菌体 0 NH2一C-NH2 A.1g土壤样品中尿素分解菌的数目约为1.2×109个 B.若中格内菌数量代表所有中格菌数量的平均数，则1g土壤中活菌数约为2.25×10°个 C.红色圈与菌落直径比值大的菌落中的菌株分解尿素能力强 D.两个尿素分子经缩合反应形成双缩脲(HNCO-NH-CO-NH)可与双缩脲试剂反应生成紫色络合物 18.半同卵双胞胎的形成是一种较为特殊的生殖现象，与常规的双胞胎形成机制有所不同，如图表示一对姐 弟“半同卵双胞胎”的形成过程。下列叙述正确的是() 3.受精卵分製成3利 5.内细胞团一分为二，各自郁有 1,两个精子进入同一卵子 二倍染色体细胞 不同比例的MP1和MP2细胞 精子1 O父系PT MP 母系M 精子2 ⑦父系☑ 全父系P1P2死亡4.细胞分裂州雅 6.半同卵双胞粉形成 2.受精卵内有3套染色体 A. 这对姐弟来源于母亲和父亲的染色体是相同的 B.受精准备阶段，精子需要获得能量，卵子需要培养到MⅢ期 第5页共12页 C.图中半同卵双胞胎形成过程中，透明带和卵细胞膜均未发生生理反应 D.过程5内细胞团一分为二发育成的双胞胎共用一个胎盘 19.为探究从冰冻多年的组织细胞中“复活基因组的可能性，研究人员将-20℃冷冻后的实验小鼠解冻，检测 发现细胞均死亡，细胞膜受损：提取不同组织细胞的细胞核，分别注入去核卵母细胞进行克隆，结果如表， 下列叙述合理的是( 成功构建核移植胚胎 细胞核 激活的重构胚数 发育至桑葚胚的比 干细胞系(ntES)的比 来源 量（个） 例(%) 例(%) 脑 109 39.4 10.1 胰腺 85 15.3 1.2 心脏 82 6.1 0 A.利用差速离心法可从解冻组织匀浆液中获得细胞核 B.细胞核注入去核卵母细胞后还需采用电融合法将两者融合 C.利用心脏来源的细胞核未能成功构建tES,说明其没有全能性 D.利用胰腺细胞的核成功构建tES的比例比脑低，说明此分化程度更高 20.重叠延伸PCR可实现定点基因诱变，其操作过程如图所示（凸起处代表突变位点）。下列说法正确的是 () 通用引物FP1 突变引物FP2 突变引物RP1|通用引物RP2 ① 入① 第1对引物 的PCR产物 第2对引物 重登区域 的PCR产物 ②混合、变性、复性 3' 3' 3入3 一5 通用引物FP1@|延伸 PCR|④通用引物RP2 突变的基因 A.过程①需要把两对引物同时加入一个扩增体系以提高扩增效率 B.过程①需要3轮PCR才能得到第一对引物的PCR产物 C.过程②的产物都可以完成延伸过程 D.若过程④得到16个突变基因则孺要消耗15个通用引物RP2 第6页共12页 21.为了研究大肠杆菌中蛋白A的结构与功能，通过设计特异性引物F1、F2,用PCR技术从大肠杆菌DNA 中扩增基因A,再用质粒P构建表达载体。基因A和质粒P的部分酶切图谱如图所示。 F1 XhoI Agel 基因A 转录方向F2 Scal Pvul Xhol Accl Xbal HindlIl L—上不Ns%%w% ☐质粒P Amp抗性基因启动子复制原点启动子B-半乳糖苷酶基因 下列叙述正确的是() A.F1、F2的5'-端分别含有HidⅢ、XhoI酶切位点 B.Fl、F2的5-端分别含有HindIⅢ、XbaI酶切位点 C.Fl、F2的5-端分别含有AccI、HindⅢ酶切位点 D.Fl、F2的5-端分别含有PvuI、ScaI酶切位点 22.C0R47基因是拟南芥中的一种冷响应基因。实验小组为探究COR47基因的调控机制，将COR47基因进 行PCR扩增。下图表示COR47基因的部分序列。下列相关叙述错误的是() 引物a 引物b 5-ATGGGC------CACTAG-3 3-TACCCG-------GTGATC-5' 引物c 引物d 。转录方向 A.PCR扩增COR47基因的部分序列时，应当选用的引物组合是引物b和引物c B.PCR所用的酶是一种耐高温的DNA聚合酶，其激活需要Mg2 C.当温度下降到50C左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 D.COR47基因扩增时至少循环4次的产物中会出现双链等长的DNA片段 23.内含肽(It)可通过自我催化实现自我切除并无痕连接两侧肽链。构建编码“内含肽+X蛋白”和内含肽 +Y蛋白的基因，将其导入真核细胞表达后，内含肽自我切除生成X+Y融合蛋白，如图。 X蛋白的功能 结构外肽链 内含肽+Y蛋白 内含肚自我切除 IntA ntB X蛋白的 功能结构内含肽+X蛋白 X+Y融合蛋白 下列说法正确的是() A.构建X+Y融合蛋白基因导入细胞，会因碱基序列相互影响而使蛋白功能异常 B.内含肽序列需嵌入X蛋白的功能结构内，以保证获得的融合蛋白功能正常 C.不同内含肽之间通过能匹配的结构相互识别，发挥特异性切除和连接作用 D.为X+Y融合蛋白提供“内含肽+某蛋白”，可赋予X+Y融合蛋白新的结构 24.下列关于PCR技术相关叙述正确的是() A,PCR反应体系中需加入Taq DNA聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用 B.反应的缓冲液中一般要添加Ca2+用于激活DNA聚合酶 C.DNA聚合酶可从引物的5'端开始连接脱氧核苷酸 D.PCR复性温度与引物的GC含量有关，一般后者含量越高则复性温度越低 25.下列关于蛋白质工程的叙述，正确的是() A.蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的 B.蛋白质工程直接改造蛋白质的结构 C.蛋白质工程只能改造自然界已有的蛋白质 D.蛋白质工程不需要借助基因工程技术 二、解答题 26.生物世界多姿多彩，既具有多样性，也具有统一性。如图是几种不同生物或细胞的结构模式图，请据图 回答问题： ●】 G ()图示结构中，属于生命系统结构层次中个体层次的是 能发生基因突变的是 同化作用类型为自养型的是 (填字母) (2)BG共有的细胞结构是： 和核糖体，细胞都具有核糖体的原因是 (3)显微镜是生物学科中最为重要的观察工具之一，用显微镜观察同一标本4次，所用的镜头如图1，目镜标 有5×和10×，物镜标有10×和40×，观察结果如图2，回答下列问题： aa. ① ② ③ ① 图1 图2 a.请从图1的目镜与物镜中找出与图2中的图像中④对应的组合 (填图1中镜头对应的序号)。 b.选择目镜5×，物镜10×时，视野中充满了160个细胞，若目镜不变，物镜换为40×，则视野中细胞为 个。 (4)通过显微镜观察到的一个小动物的运动轨迹是“八”，为了能保证这只小动物始终在视野内，观察者需要 不断地移动装片，则玻片移动的轨迹是 (画出轨迹)。 27.黑枸杞具有治疗心热病及心脏病，降低胆固醇、 使大脑神经兴奋、增强免疫功能等效果，回答下列有关 利用黑枸杞制作果酒和果醋的问题： 进气口 接种菌种 酒 接 会排气口 挑选优质 榨 甲 黑枸杞 洗 精发 种菌种 乙 醋酸发酵 出料口2 图1 图2 (1)制备黑构杞果酒和果醋所用的菌种（微生物），它们的细胞在结构方面的主要区别 将黑枸杞榨汁后装瓶时，不能装满，要留出13的空间，目的是 (2)若是从混杂的微生物中分离酵母菌应使用（功能）培养基，从微生物培养的角度分析，黑枸杞果汁 能够为酵母菌的生长提供水、无机盐和 。黑枸杞果汁发酵后是否有酒精产生，可以用 来检验。 (3)若从食酷中分离纯化醋酸菌，常用的接种方法是 (写出一种即可)。当氧气、糖源都充足时， 该菌将黑枸杞果汁中的糖分解成 28.为降低人类乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物 (ADC),过程如图1所示。 第9页共12页 注射特定的抗原多种B淋巴细胞 一 8/ 它b 经+ 接头 培养骨简瘤细胞骨随瘤细胞 图1 不识别令识别并 细胞 r结合 正常细跑 ADC 乳腺癌细胞 图2 (1)动物细胞培养时，可以用 酶处理动物组织，得到分散的组织细胞，培养基中应含有细胞所需要的 各种营养物质。 (②)通过过程②得到的细胞还必须经过过程③克隆化培养和 才能筛选得到符合要求的杂交瘤细跑，杂 交滴细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行体外培养的方式进行扩大培养。体外培养时，首先应保证其处 于 的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是 与5%C02的混合气 体，此外在使用合成培养基时通常还需加入血清。 (③)单克隆抗体的优点是 。单克隆抗体是ADC中的 （填“a”或“b”)部分。 (4)ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中将其裂解并释放药物。 29.为研究BpMYB5基因的耐盐调控功能，科研人员利用无缝克隆技术，将BpMYB5基因与绿色荧光蛋白 (©GFP)基因构建成融合基因，插入pBII21载体中构建过表达载体，相关操作流程如图所示。回答下列问 题 断开位点 引物L引微2 终止子 引物3引物4 PCR 启动子 BpYB5基因 pBI121 eGFP基因 质粒 T-DNA 终止子 农杆菌→ 妙 罗 Tet 白粹树 BpMYB5基因R PBI121-BpMYB5-eGFP载体 PCR 24为☑ cGPP基因一 ③ R (I)PCR反应体系应添加含 离子的缓冲液、引物、模板、4种和耐高温的DNA聚合酶等。引物是 一小段 的短单链核酸。过程②PCR扩增BpMYB5基因时，加热使模板DNA双链解开的过程称为 该过程破坏的是：进行PCR的某一步骤时，需要将温度设置为50℃左右，目的是 。 (2)构建好的基因表达载体常通过法导入白桦树细胞，农杆菌T质粒上的T-DNA的作用是一。 第10页共12页 30.肿瘤化疗通过诱导肿痕细胞的DNA损伤，引发肿瘤细胞死亡。肿瘤细胞会激活DNA损伤修复途径，导 致肿瘤对化疗药物耐药。为探究P基因在乳腺癌中的作用机制，科研人员进行了相关研究。回答下列问题。 (1)培莽细胞时，若恒温培养箱内CO,不足，会导致培养液异常：乳腺癌细胞培养时 (填“会”或 “不会")出现接触抑制现象：细胞传代培养时需要用胰蛋白酶处理，使贴壁细胞分散成单个细胞，操作时需 要控制处理时间，原因是。 (2)P基因及转录方向、质粒图谱及目的基因插入位点的相关信息如图1所示（实线方框内横线处表示限制酶 的识别序列，箭头处表示酶切位点)。为构建重组质粒，扩增P基因时，应选择的一对引物为（填图2 中序号)。为探究P基因对乳腺癌细胞增殖的影响，将重组质粒导入乳腺癌细胞的处理组作为实验组，对照组 的处理是 P基因 5.…CCGTGT.ATGCCT….3 3…GGCACA:TACGGA…-5 转录方向 BglⅡ BamHI Spe I Hind I S-ACAGATCTCGGATCCCACTAGTCAAGCTTAACG-3 的基因插入位点 ①5…GGATCCAGGCAT-3 启动子、 ②5.…AGATCTTCCGTA-3 终止子 ③S-…AGATCTAGGCAT-3' BamH I· 质粒 ④S.…ACTAGTCCGTGT-3 Hind I. ⑤5.…ACTAGTGGCACA3 复制原点 漆精 ®5.…AAGCTTCCGTGT-3 图1 图2 ()S基因主要通过抑制DNA损伤修复途径来抑制肿瘤增殖，引发肿瘤细胞死亡。研究发现，P蛋白能诱导S 基因的启动子甲基化。这表明P基因S基因的转录， (填“促进”或抑制”)肿瘤耐药。 31.植酸酶可分解饲料中的植酸，减少畜禽粪便中磷的排放，在畜牧养殖中应用价值极高。科研人员欲利用 毕赤酵母（组氨酸缺陷型菌株，自身不能合成组氨酸）高效表达黑曲霉植酸酶基因phyA(图I),用pyA基因和 质粒pPIC9K(图2)构建重组质粒。图1和图2中EcoRI、SacI、Smal、Avrl、SnaBI等为限制酶：甲醇诱导型 启动子在葡萄糖等常规碳源存在时不驱动转录，仅在甲醇作为碳源时可驱动下游目的基因转录。回答下列问 题： 第11页共12页 甲醇诱导 SaclEcoRI 限制酶识别序列和切割位点 型启动子 转录方向一→ SnaBI SacI 5-GAGCTC-3' EcoR I AvrII SacI SmaI 复制 Smal 5-CCCGGG-3' 原点 工 质粒pPIC9K 终止子 ECoRI 5-GAATTC-3' phyA基因 图1 SnaBI 5'-TACGTA-3' HS4(组氨酸合成基因) ArlⅡS-CCTAGG-3' 图2 ()构建重组质粒时，为避免质粒自身环化和目的基因反向连接，应选用 限制酶切割 目的基因与质粒，将切割所得片段连接，选用 (填T4DNA连接酶”或E.coli DNA 连接酶)可获得更高的连接效率。 (2)在操作过程中，科研人员首先通过PCR扩增phyA基因，PCR体系中除需要加入TaqDNA聚合酶、dNTP、 缓冲液、Mg2*外，还需加入 。一次PCR循环一般可以分为 三步。 (3)将重组质粒导入毕赤酵母后，应选用 的固体培养基初步筛选转基因工程菌，原因 是 (4)在工业发酵培养上述转基因工程菌时，先在培养基中添加葡萄糖等常规碳源，目的是 ,再更换培养基加入 诱导目的基因表达。 ⊙ 第12页共12页