湖北省十堰市第一中学2025-2026学年高二下学期周测（二）生物试题

**基本信息** 以生态系统能量流动、基因编辑等为情境，融合秸秆利用、固氮菌应用等实践案例，考查生命观念与科学思维，适配高中生物周测巩固需求。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|18/36|生态系统功能、微生物培养、基因工程|结合农田与森林生态系统数据对比，考查物质与能量观；以CRISPR/Cas9技术情境，提升科学思维| |填空题|4/64|固氮菌分离、病毒感染机制、胚胎工程|通过固氮菌分离实验流程设计，强化探究实践；结合转基因油菜含油量调节案例，体现态度责任|

十爆一中2024数局二卜字期间测4 生物试题 考试时间：2026.5.16 命题人：陈淑宏 审题人：黄歌 一、单选题(18小题，共36分) 1.总初级生产量(PP)代表生态系统中生产者同化的总能量，它与生态系统总呼吸量(T)的比值或 差值可以体现生态系统的成熟程度。连接指数-(C)代表食物网的复杂程度，循环效率(Ec)代表系统内 被循环利用的物质质量与总输入物质质量的比值。研究人员调查了某地农田生态系统和森林生态系统的相 关数据，结果如下表。下列分析正确的是( 类别 TPP/TR TPP与TR差值的相对值 CI Ec 农田生态系统 4.574 5601 0.101 5% 森林生态系统 2.581 1562 0.318 22% A.TPP/TR越接近1，说明系统内的能量越接近收支平衡，这是群落演替的起始条件 B.TPP与TR差值的相对值可以代表生产者用于自身生长、发育、繁殖的能量 C.秸秆还田、堆肥利用、增大CI均可以增加农田生态系统的Ec D.与农田生态系统相比，森林生态系统能量积累更快，生物量增加更快 2.某海水立体养殖生态系统的能量流动示意图如下，M、N表示营养级。以下分析错误的() 呼吸作用<6553 3281 生产者 M☐3619，呼吸作用 6561 2826 2102 386 分解者←6005 遗体 168 N 217→呼吸作用 残骸 A.“生产者→M→N可构成一条食物链 B.M流向分解者的能量没有包含其粪便中的能量 C.流经该生态系统的总能量为16395k(m2a) D.该生态系统中M既是消费者又是分解者，且M到N能量传递效率约为6.3% 3.某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。主要流程如下图所示：先将粉碎的作物 秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T,培养一段时间后，用清水淋洗秸秆堆，再在装有淋 洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵。下列说法正确的是(） 浸润、接种蓝T 清水淋洗 粉碎 的秸杆 培养 灭菌、接种 淋洗液 培养、发酵、飞爵 醇母茵 A.菌T是纤维素分解菌，在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入酚红可鉴别该菌 B.淋洗液的灭菌方法为于热灭菌法，其中的葡萄糖可为酵母菌提供碳源和能源 C,接种酵母菌后应拧紧瓶盖进行发酵，但发酵过程中需适时拧松瓶盖 D.若要在此基础上再进行醋酸发酵，应打开培养瓶瓶盖并降低发酵温度 4.谷氨酸棒状杆菌可用于微生物发酵工程生产谷氨酸，从而制取味精（主要成分为谷氨酸钠）。谷氨酸发 酵的培养基成分主要有葡萄糖、氨水（弱碱性）、磷酸盐、生物素等，发酵装置如图所示。甲工厂用谷氨 酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸，结果代谢物中出现了大量的乳酸。下列叙述错误的是() 新鲜培养液·=—一√流速控制阀 无菌空气一 流出物 微生物的连续培养装置 A.从物理性质看，谷氨酸发酵的培养基属于液体培养基 B.根据题干与图示判断，谷氨酸棒状杆菌的代谢类型是异养需氧型 C.培养基中的氨水可以为谷氨酸棒状杆菌提供氮源，应一次性加入 D.甲工厂最终代谢物中出现大量乳酸可能是生产时氧气供应不足所致 5.微量点样法是目前实验室微生物计数常用的方法。大致原理与涂布平板法相似：将固体培养基划分为4 个区域，每个区域滴加微量（1~10L)的不同稀释度菌液，选取菌落数在一定范围内的区域进行计数作 为有效值。下列说法错误的是() A.微量点样法和稀释涂布平板法的接种工具都是移液枪 B.菌液浓度一定的情况下，点样量大小不影响菌落计数 C.微量点样法所选取的菌落数范围小于30~300范围 D.微量点样法计数值比稀释涂布平板法计数较准确 6.鸡粪高温堆肥过程中会释放出大量恶臭的有害气体硫化氢，影响家禽和人体健康。除硫化氢菌株能够 促进硫化氢转化为硫酸盐，从而减少硫化氢释放。下列初步筛选除硫化氢菌株的实验思路合理的是(、 A.从鸡粪中分离出不同的菌株，分别接种到灭菌后的鸡粪浸提液中并检测浸提液的臭味程度 B,将鸡粪样本稀释液经系列梯度稀释后涂布到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，进行纯化培养· (·将鸡粪样本稀释液接种到以硫化氢为唯一碳源的培养基电，挑取菌落进行平板划线纯化 D.将经选择培养后筛选出的菌株接种到含有硫化氢的固体培养基上，并检测硫化氢的含量 7.如图是利用烟草叶片分离原生质体的过程示意图。下列说法错误的是() 圆撕去下表皮 保湿 吸掉酶液健离心 >18h>-→→ 生质体悬浮 罕清洗塔养离翼 重新悬浮 心洗培养基 适当的密 团V生日 度重新悬浮 重新悬浮 于培养基中 数板计数 于培养基 原生质体山髀 A、应使用酒精和次氯酸钠对需要处理的叶片进行消毒 B.计数时加入适量染色剂并计数被染色的原生质体能使结果更准确 C.将酶解装置改为锥形瓶，置于低速摇床上轻轻振荡，有利于原生质体从组织中释放 D.用血细胞计数板检测原生质体的密度时，应先盖盖玻片，再滴加培养液 第2页共8页 8.利用植物细胞培养进行药用次生代谢产物的生产具有显著优势，下图表示根据不同的需求所采用的技 术流程。下列相关叙述正确的是() 转基因细胞系饰选，培养体系1] 转基因 外植体 激素诱导 培养体系2 诱导产生 固体培养基 伤超因收养 毛状根 筛选 培养体系3 A.培养体系1、2、3中的细胞基因型相同 B.在将灭菌处理后的外植体诱导成愈伤组织期间，一般不需要光照 C.培养体系2中获得的愈伤组织细胞具有全能性，其形态与外植体细胞不同 D.植物细胞培养技术主要是通过提供适宜培养条件，促进细胞生长，提高单个细胞中次生代谢物产量 9.将人眼脸成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段 时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及·) A.制备细胞悬液 B.置于CO2恒温培养箱中培养 C.离心收集细胞 D.用胰蛋白酶消化支架后分离片层 10.某小组进行DNA粗提取与鉴定”实验，部分流程如图所示。下列有关该实验操作及原理的叙述，正确 的是() 95%酒精 含DNA的 研磨 研磨液 滤液 浓NaCI溶液 A.获取的研磨液经过滤后取沉淀物倒入烧杯中备用 B.倒入95%的常温酒精后沿一个方向轻轻搅拌可得到DNA丝状物 C.将提取的DA直接加入二苯胺试剂中水浴加热即可观察到蓝色现象 D.DNA不溶于酒精，且在不同浓度的NaCI溶液中溶解度存在差异 11.HEK293是具有无限增殖能力的细胞，在体外培养时呈现贴壁生长特性。科学家采取了图示方法将 EK293驯化成为悬浮培养细胞，培养中细胞一且沉入培养瓶底，会试图重新贴壁。下列叙迷正确的是 ( 用低血清培养 用无血清培养 将细胞稀释分配 处理贴壁细胞， 液，摇床振荡培 液多次传代培 到多孔板中培 使其形成小的细 养，让培养液静 养并逐步提高 养，筛选出悬浮 胞团块 置几分钟，获取 摇床的转速 培养细胞 细胞 A. 常用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理贴壁细胞 B.悬浮培养细胞常因发生接触抑制而停止增殖 C.血清中的天然成分有利于HEK293的悬浮培养 一洗蛠罾几分钟后，应吸取上清液中的细胞传代 l2.Rag2基因缺陷导致大鼠无法产生B、T淋巴细胞。将正常大鼠的胚胎干细胞（ES细胞)注射到Rag2 基因缺陷大鼠的桑葚胚中，使其产生具有正常E$细胞来源的淋巴细胞群的体细胞嵌合体，从而补充其缺 失的淋巴细胞，其过程如图所示。下列分析正确的是() 8 89 ES细胞 桑葚胚 嵌合夔胚 嵌合原肠胚 嵌合体大鼠 A.获得的嵌合大鼠的大部分细胞的Rag2基因没有缺陷 B.胚胎发育早期，会因胚胎中细胞数目不断增加而导致胚胎总体积不断增加 C.注入桑葚胚的ES细胞在囊胚期主要存在于内细胞团，可发育为胚胎的组织器官 D.该实验最终获得了嵌合体大鼠证明ES细胞具有全能性 13.我国科学家成功地用PS细胞克隆出.了活体小鼠，部分流程如图所示，其中Kdm4d为组蛋白去甲基化 酶，TSA为组蛋白脱乙酰酶抑制剂。下列说法正确的是() 四种小分子化合物 小鼠成纤 1①) →iPS细胞 Kdm4d的mRNA 维细胞 ③→重构胚 ④→克隆鼠 卵母细胞②→去核卵丹细胞 个 TSA A.过程①中小分子化合物诱导成纤维细胞基因突变为PS细胞 B.过程②“去核”的“核其实是“细胞核中的DNA” C.过程③中可使用具有感染能力的病毒来诱导细胞融合 D.组蛋白去甲基化和乙酰化均有利于重构胚后续的胚胎发育过程 l4.研究表明，DNA连接酶能够封闭DNA双螺旋骨架上的切口（图），却无法封闭缺口（图b),下列叙述 正确的是() 失去磷酸二键的切口 缺失核苷酸的缺口 Ti匹 mmdhm 连接酶封闭切口 连接酶无法封闭的缺口 TITTT mnm 图a 图6 A.DNA连接酶封闭切口时，需要识别DNA片段特定的核苷酸序列 B.DNA连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C.用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D.修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA聚合酶沿缺口5'→3'方向进行 15.CRISPR/Cs9是一种基因编辑技术，被誉为基因剪刀”。它的核心原理是利用一段向导RNA(“定位 系统”)引导Cas9蛋白(“剪刀”)精确切割目标DNA序列。CRISPR/Cas9技术在农业育种和疾病治疗等 多个方面具有广泛应用。下列相关叙述正确的是) BR 5x 靶序 工多 靶基因山经 -Cas9 A.若目标靶序列（部分）为5'-ATCCGAA-3',向导RNA的序列应设计为5'-UAGGCUU-3' B.Cas9类似于基因工程中的限制酶，其作用位点是磷酸二酯键 C.向导RNA的碱基序列越短，则其在基因上出现定位错误的概率越低 D.利用CRISPR/Cas9技术编辑瘤细胞的原癌基因一定能抑制其无限增殖 16、某实验利用PC技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有 2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是(】 A.增加模板DNA的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 17.Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因，筛选Bt基因后可以利用PCR技术对其进行大量扩 增，下图为抗虫棉的培育过程，下列相关叙述错误的是() Bt 苏云金 基因 转入 杆菌 农杆菡 构建基因 T-DNA 表达载体 感染 Ti质粒 目的基因 组织 插入染色 培养 体DNA中 抗虫棉 棉珠细胞 A.PCR扩增Bt基因需要知道Bt基因的全部核苷酸序列 B,以上导入目的基因的方法是农杆菌转化法，农杆菌中Ti质粒上的TDNA可转移 C.如果把目的基因整合到线粒体DNA或叶绿体DNA上，可能导致后代目的基因丢失 D.检测目的基因是否成功表达所用的分子水平上的方法之一为抗原一抗体杂交 l8.RNA千扰原理是指mRNA与其它RNA分子形成局部互补结构后阻断mRNA翻译。野生型油菜中的 PEP基因表达会降低油菜籽的含油量。我国科学家将启动子置于PEP基因的下游，终止子置于PEP基因 的上游构建基因表达载体，并将该基因表达载体导入野生型油菜细胞中获得转基因油菜。下列相关叙述错 误的是() A.转基国油菜中既有自身的PEP基因又有反向连接的PEP基因 B.转基因油菜中的PEP基因只能转录出一种mRNA C.转基因油菜中存在RNA干扰 D.与野生型油菜相比，转基因油菜的油菜籽含油量更高 二、填空题(4小题，每空2分，共64分) 19.自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，将玉米和自生固氮菌混合后种植，可显著提高产 量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程 如图1。 1mL 1mL 0.1mL 扩大培养 固氮能力鉴定 土壤10g 90mL无菌水 土壤悬浮液 多次纯 9mL无菌水 化培养 ① ② ③ ④ ⑤ 图1 (1)固氮菌将N2转化为离子形式进而被植物吸收，植物吸收的N元素可用于合成以下物质中的 A.脂肪 B.叶绿素 C.蛋白质 D.核酸 (2)图1中的步骤④选用的培养基应添加的成分包括 A.牛肉膏 B.蛋白胨 C.甘露醇(C6H4O6) D.无机盐(KHPO4MgSO4、NaCI等) E.蒸馏水 F,琼脂 G.抗生素 H.植物激素 (3)若在④的各组平板上统计的菌落的数量为108、120、138个，则每克土壤样本中含有的固氮菌约为 个。 (4)在步骤③和④中，下列几种物品不需要的有 A酒精灯 B.培养皿 C.显微镜 D.涂布器 E.接种环 将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行 固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种A。为进一步鉴定其应用潜力，科研人员选用生长状态相近 的玉米植株进行3组盆栽实验，30天后测定结果如表。 叶片氮素 土壤有效氮 叶绿素含 蛋白质含量 净光合速率 积累量 (mg.kg1) 量(mgg) (mgkg1) (μmolm2sl) (mg) 对照组 85 140 1.5 90 6.08 尿素处理组 95 200 1.8 100 7.12 菌种A处理 110 220 2.2 120 8.53 组 (⑤)菌种A处理组净光合速率高于其他组，据表和厮学知识推测基原因可能是 第8页共多页 图2为通过发酵工程培养菌种A的生产流程示意图。 菌种A 改变遗传特性，生产用菌种→扩大培养 多发酵罐—分离提纯 培养基 图2 (⑥)图2中改变菌种A的某种遗传特性获得可稳定遗传的生产用菌种，利用的原理可能是 A.基因突变 B.基因重组 C.染色体结构变异 2 D.染色体数目变异 越 (⑦)发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节。有关认识或操作正确的是 医 A.发酵罐外壁夹层通入冷却水可帮助控制发酵温度 B.发酵罐内叶轮搅拌可促进营养物质、氮气等与菌种A充分混合 C.培养基和发酵罐都必须经过严格灭菌处理 D.发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌种A分离，于燥后制成微生物肥料 20.某种昆虫病毒的遗传物质为双链环状DNA.该病毒具有包膜结构包膜上的蛋白A与宿主细胞膜上 的受体结合后，两者的膜发生融合，从而使病毒DNA进入细胞内进行自我复制。回答下列问题： (1)要清楚观察病毒的形态结构需要使用的显微镜类型是 0 (2)体外培养的梭形昆虫细胞，被上述病毒感染后会转变为圆球形，原因是病毒感染引起了昆虫细胞内 (填细胞结构名称)的改变。 (3)这类病毒的基因组中通常含有抗细胞调亡的基因，这类基因对病毒的生物学意义是： 引 (4)该病毒DNA能在宿主细胞中自我复制，却无法在大肠杆菌中复制。为解决这一问题可在该病毒的DNA 2 中插入 序列，以实现利用大肠杆菌扩增该病毒DNA的目的。 在 (⑤)用该病毒感染哺乳动物细胞，可以在细胞内检测到该病毒完整的基因组DNA,但无对应的转录产物。 的 推测其无法转录的原因是： (3 (6)采用脂溶剂处理该病毒颗粒可使病毒失去对宿主细胞的感染性，原是 基 目 21.随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相 关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图分析并回答下列问题。 供体1 优良。 款A绸B供体2 公牛摩 受 ©精 →早期胚胎 恩应用4 应用2 重组细胞 囊胚 胚胎干 受体 细胞分 能应用3】 应用1一感 离培养 ①② 1分娩 早期胚胎 二分胚 组织和器官 小牛 (1)图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的有应用 《填数字)。 (2)应用1中，为了大量获取细胞B,需对供体2注射 使用 技术获得 第7页共8页 重组细胞，最终获得的良种小牛性别为 (3)供体1完成体内受精的场所在 在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结 合，需要对精子进行处理，使其 胚胎移植前需要对受体进行 处理， (填“需要”或“不需要)注射免疫抑制剂。 (④)应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过 技术获得二分胚①和②， 操作时需要注意 否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。 22.研究发现，双斑蟋蟀中的Gbdsx基因对雄性发育至关重要，且只在雄性中表达。为验证Gbdsx基因在 雄性中的特异性表达与其启动子受雄性中存在的物质X的调控，科研人员构建了含有Gbdsx-RFP融合基 因的转基因大肠杆菌，Gbdsx基因和质粒部分结构如图所示。 下Ghdsx 四启动子 终止子 RFP为红色荧光蛋白基因： Amp为氨节青霉素抗性基因 F1、F2、R1、R表示引物： Xho I:CTCGAG Xho I BamH I:GGATCC San3A I Bg III:AGATCT Bg nr Sau3A I:GATC BamHI (a可利用PCR特异性地快速增Gbdsx基因，据图分析，需选择 作为本实验的引物， 物的作用是 (2)培育转基因大肠杆菌的核心步骤是 。为目的囍因能够与质粒正确相连，需要 在引物的 (填3’端或“5'端”)添加限制酶识别序列，在F引物添加的序列所对应 的限制酶是 在R引物添加的序列所对应的限制酶是 (3)将重组质粒转入大肠杆菌过程中，一般选用 处理大肠杆菌。科研人员用含有氨苄青霉素的培养 基接种处理后的大肠杆菌， (填“能”或“不能”)筛选出导入重组质粒的大肠杆菌。若要证明实验 目的，还应进行的操作和实验结果分别是： 十堰一中2024级 生物试题 考试时间: 2026.5.16 命题人：陈淑宏 审题人：黄歌 一、单选题(18小题，共36分) 1.总初级生产量(TPP)代表生态系统中生产者同化的总能量，它与生态系统总呼吸量(TR)的比值或差值可以体现生态系统的成熟程度。连接指数-(CI)代表食物网的复杂程度，循环效率(Ec)代表系统内被循环利用的物质质量与总输入物质质量的比值。研究人员调查了某地农田生态系统和森林生态系统的相关数据，结果如下表。下列分析正确的是 ( ) 类别 TPP/TR TPP 与TR 差值的相对值 CI Ec 农田生态系统 4.574 5601 0.101 5% 森林生态系统 2.581 1562 0.318 22% A. TPP/TR 越接近1，说明系统内的能量越接近收支平衡，这是群落演替的起始条件 B. TPP与TR 差值的相对值可以代表生产者用于自身生长、发育、繁殖的能量 C.秸秆还田、堆肥利用、增大CI均可以增加农田生态系统的 Ec D.与农田生态系统相比，森林生态系统能量积累更快，生物量增加更快 2.某海水立体养殖生态系统的能量流动示意图如下，M、N表示营养级。以下分析错误的 ( ) A.“生产者→M→N”可构成一条食物链. B. M流向分解者的能量没有包含其粪便中的能量 C.流经该生态系统的总能量为16395kJ/( ) D.该生态系统中M既是消费者又是分解者，且M到N能量传递效率约为6.3% 3.某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。主要流程如下图所示：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，用清水淋洗秸秆堆，再在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵。下列说法正确的是( ) A.菌T是纤维素分解菌，在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入酚红可鉴别该菌 B.淋洗液的灭菌方法为于热灭菌法，其中的葡萄糖可为酵母菌提供碳源和能源 学科网（北京）股份有限公司 C.接种酵母菌后应拧紧瓶盖进行发酵，但发酵过程中需适时拧松瓶盂 D.若要在此基础上再进行醋酸发酵，应打开培养瓶瓶盖并降低发酵温度 4.谷氨酸棒状杆菌可用于微生物发酵工程生产谷氨酸，从而制取味精(主要成分为谷氨酸钠)。谷氨酸发酵的培养基成分主要有葡萄糖、氨水(弱碱性)、磷酸盐、生物素等，发酵装置如图所示。甲工厂用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸，结果代谢物中出现了大量的乳酸。下列叙述错误的是( ) A.从物理性质看，谷氨酸发酵的培养基属于液体培养基 B.根据题干与图示判断，谷氨酸棒状杆菌的代谢类型是异养需氧型 C.培养基中的氨水可以为谷氨酸棒状杆菌提供氮源，应一次性加入 D.甲工厂最终代谢物中出现大量乳酸可能是生产时氧气供应不足所致 5.微量点样法是目前实验室微生物计数常用的方法。大致原理与涂布平板法相似：将固体培养基划分为4个区域，每个区域滴加微量(1~10μL)的不同稀释度菌液，选取菌落数在一定范围内的区域进行计数作为有效值。下列说法错误的是 ( ) A.微量点样法和稀释涂布平板法的接种工具都是移液枪 B.菌液浓度一定的情况下，点样量大小不影响菌落计数 C.微量点样法所选取的菌落数范围小于30~300 范围 D.微量点样法计数值比稀释涂布平板法计数较准确 6.鸡粪高温堆肥过程中会释放出大量恶臭的有害气体硫化氢，影响家禽和人体健康。除硫化氢菌株能够促进硫化氢转化为硫酸盐，从而减少硫化氢释放。下列初步筛选除硫化氢菌株的实验思路合理的是( A.从鸡粪中分离出不同的菌株，分别接种到灭菌后的鸡粪浸提液中并检测浸提液的臭味程度 B.将鸡粪样本稀释液经系列梯度稀释后涂布到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，进行纯化培养 C.将鸡粪样本稀释液接种到以硫化氢为唯一碳源的培养基中，挑取菌落进行平板划线纯化 D.将经选择培养后筛选出的菌株接种到含有硫化氢的固体培养基上，并检测硫化氢的含量 7.如图是利用烟草叶片分离原生质体的过程示意图。。下列说法错误的是 ( ) A.应使用酒精和次氯酸钠对需要处理的叶片进行消毒 B.计数时加入适量染色剂并计数被染色的原生质体能使结果更准确 C.将酶解装置改为锥形瓶，置于低速摇床上轻轻振荡，有利于原生质体从组织中释放 D.用血细胞计数板检测原生质体的密度时，应先盖盖玻片，再滴加培养液 第 2 页 共 8 页 学科网（北京）股份有限公司 8.利用植物细胞培养进行药用次生代谢产物的生产具有显著优势，下图表示根据不同的需求所采用的技术流程。下列相关叙述正确的是( ) A.培养体系1、2、3中的细胞基因型相同 B.在将灭菌处理后的外植体诱导成愈伤组织期间，一般不需要光照 C.培养体系2中获得的愈伤组织细胞具有全能性，其形态与外植体细胞不同 D.植物细胞培养技术主要是通过提供适宜培养条件，促进细胞生长，提高单个细胞中次生代谢物产量 9.将人眼睑成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及、) A.制备细胞悬液 B. 置于 CO₂恒温培养箱中培养 C.离心收集细胞 D.用胰蛋白酶消化支架后分离片层 10.某小组进行“DNA粗提取与鉴定”实验，部分流程如图所示。下列有关该实验操作及原理的叙述，正确的是( ) A. 获取的研磨液经过滤后取沉淀物倒入烧杯中备用 B. 倒入95%的常温酒精后沿一个方向轻轻搅拌可得到 DNA 丝状物 C.将提取的 DNA 直接加入二苯胺试剂中水浴加热即可观察到蓝色现象 D. DNA 不溶于酒精，且在不同浓度的 NaCl溶液中溶解度存在差异 11. HEK293是具有无限增殖能力的细胞，在体外培养时呈现贴壁生长特性。科学家采取了图示方法将HEK293驯化成为悬浮培养细胞，培养中细胞一旦沉入培养瓶底，会试图重新贴壁。下列叙述正确的是( ) 处理贴壁细胞，使其形成小的细胞团块 → 用低血清培养液，摇床振荡培养，让培养液静置几分钟，获取细胞 → 用无血清培养液多次传代培养并逐步提高摇床的转速 → 将细胞稀释分配到多孔板中培养，筛选出悬浮培养细胞 A.常用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理贴壁细胞 B.悬浮培养细胞常因发生接触抑制而停止增殖 C.血清中的天然成分有利于 HEK293 的悬浮培养 ·······分钟后，应吸取上清液中的细胞传代 学科网（北京）股份有限公司 12. Rag2基因缺陷导致大鼠无法产生B、T淋巴细胞。将正常大鼠的胚胎干细胞(ES细胞)注射到Rag2基因缺陷大鼠的桑葚胚中，使其产生具有正常ES细胞来源的淋巴细胞群的体细胞嵌合体，从而补充其缺失的淋巴细胞，其过程如图所示。下列分析正确的是 ( ) A.获得的嵌合大鼠的大部分细胞的 Rag2基因没有缺陷 B.胚胎发育早期，会因胚胎中细胞数目不断增加而导致胚胎总体积不断增加 C.注入桑葚胚的ES细胞在囊胚期主要存在于内细胞团，可发育为胚胎的组织器官 D.该实验最终获得了嵌合体大鼠证明ES细胞具有全能性 13.我国科学家成功地用iPS细胞克隆出了活体小鼠，部分流程如图所示，其中 Kdm 4d为组蛋白去甲基化酶，TSA 为组蛋白脱乙酰酶抑制剂。下列说法正确的是( ) A.过程①中小分子化合物诱导成纤维细胞基因突变为iPS 细胞 B.过程②“去核”的“核”其实是“细胞核中的DNA” C.过程③中可使用具有感染能力的病毒来诱导细胞融合 D.组蛋白去甲基化和乙酰化均有利于重构胚后续的胚胎发育过程 14.研究表明，DNA 连接酶能够封闭DNA 双螺旋骨架上的切口(图a)，却无法封闭缺口(图b)，下列叙述正确的是 ( ) A. DNA 连接酶封闭切口时，需要识别DNA片段特定的核苷酸序列 B. DNA 连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C.用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D.修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA 聚合酶沿缺口 方向进行 15. CRISPR/Cas9是一种基因编辑技术，被誉为“基因剪刀”。它的核心原理是利用一段向导RNA (“定位系统”)引导Cas9蛋白 (“剪刀”)精确切割目标DNA 序列。CRISPR/Cas9技术在农业育种和疾病治疗等多个方面具有广泛应用。下列相关叙述正确的是( ) 学科网（北京）股份有限公司 A.若目标靶序列(部分)为5'-ATCCGAA-3',向导RNA 的序列应设计为5'-UAGGCUU-3' B. Cas9类似于基因工程中的限制酶，其作用位点是磷酸二酯键 C.向导 RNA 的碱基序列越短，则其在基因上出现定位错误的概率越低 D.利用CRISPR/Cas9技术编辑癌细胞的原癌基因一定能抑制其无限增殖 16.某实验利用PCR 技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是( ) A.增加模板 DNA 的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 17. Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因，筛选 Bt基因后可以利用PCR 技术对其进行大量扩增，下图为抗虫棉的培育过程，下列相关叙述错误的是( ) A. PCR 扩增 Bt基因需要知道 Bt基因的全部核苷酸序列 B.以上导入目的基因的方法是农杆菌转化法，农杆菌中 Ti质粒上的T-DNA 可转移 C.如果把目的基因整合到线粒体 DNA 或叶绿体DNA上，可能导致后代目的基因丢失 D.检测目的基因是否成功表达所用的分子水平上的方法之一为抗原—抗体杂交 18. RNA 干扰原理是指 mRNA 与其它 RNA 分子形成局部互补结构后阻断mRNA 翻译。野生型油菜中的PEP 基因表达会降低油菜籽的含油量。我国科学家将启动子置于 PEP 基因的下游，终止子置于 PEP 基因的上游构建基因表达载体，并将该基因表达载体导入野生型油菜细胞中获得转基因油菜。下列相关叙述错误的是( ) A.转基因油菜中既有自身的 PEP 基因又有反向连接的 PEP 基因 B.转基因油菜中的 PEP 基因只能转录出一种 mRNA C.转基因油菜中存在 RNA 干扰 D.与野生型油菜相比，转基因油菜的油菜籽含油量更高 学科网（北京）股份有限公司 二、填空题(4小题，每空2分，共64分) 19.自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，将玉米和自生固氮菌混合后种植，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图1。 (1)固氮菌将 转化为离子形式进而被植物吸收。植物吸收的N元素可用于合成以下物质中的 。 A.脂肪 B.叶绿素 C.蛋白质 D.核酸 (2)图1中的步骤④选用的培养基应添加的成分包括 。 A.牛肉膏 B.蛋白胨 C.甘露醇(C )D.无机盐( 、 、NaCl等) E.蒸馏水 F.琼脂 G.抗生素 H.植物激素 (3)若在④的各组平板上统计的菌落的数量为108、120、138个，则每克土壤样本中含有的固氮菌约为 个。 (4)在步骤③和④中，下列几种物品不需要的有 。 A 酒精灯 B.培养皿 C.显微镜 D.涂布器 E.接种环 将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种A。为进一步鉴定其应用潜力，科研人员选用生长状态相近的玉米植株进行3组盆栽实验，30天后测定结果如表。 土壤有效氮 叶片氮素 积累量 (mg) 叶绿素含量(mg·g¹) 蛋白质含量 净光合速率 对照组 85 140 1.5 90 6.08 尿素处理组 95 200 1.8 100 7.12 菌种A处理组 110 220 2.2 120 8.53 (5)菌种A 处理组净光合速率高于其他组，据表和所学知识推测其原因可能是 第6页 共多页 学科网（北京）股份有限公司 图2为通过发酵工程培养菌种A 的生产流程示意图。 菌种A-改变遗传特性生产用菌种-扩大培养-发酵罐-分离提纯 (6)图2中改变菌种A的某种遗传特性获得可稳定遗传的生产用菌种，利用的原理可能是 A.基因突变 B.基因重组 C.染色体结构变异 D.染色体数目变异 (7)发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节。有关认识或操作正确的是 。 A.发酵罐外壁夹层通入冷却水可帮助控制发酵温度 B.发酵罐内叶轮搅拌可促进营养物质、氮气等与菌种A充分混合 C.培养基和发酵罐都必须经过严格灭菌处理 D.发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌种A分离，于燥后制成微生物肥料 20.某种昆虫病毒的遗传物质为双链环状DNA.该病毒具有包膜结构 包膜上的蛋白A与宿主细胞膜上的受体结合后，两者的膜发生融合，从而使病毒DNA 进入细胞内进行自我复制。回答下列问题： (1)要清楚观察病毒的形态结构需要使用的显微镜类型是 。 (2)体外培养的梭形昆虫细胞，被上述病毒感染后会转变为圆球形，原因是病毒感染引起了昆虫细胞内 (填细胞结构名称)的改变。 (3)这类病毒的基因组中通常含有抗细胞凋亡的基因，这类基因对病毒的生物学意义是： (4)该病毒DNA 能在宿主细胞中自我复制，却无法在大肠杆菌中复制。为解决这一问题 可在该病毒的DNA中插入 序列，以实现利用大肠杆菌扩增该病毒DNA 的目的。 (5)用该病毒感染哺乳动物细胞，可以在细胞内检测到该病毒完整的基因组DNA，但无对应的转录产物。推测其无法转录的原因是： (6)采用脂溶剂处理该病毒颗粒可使病毒失去对宿主细胞的感染性，原因是 。 21.随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图分析并回答下列问题。 (1)图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的有应用 ”(填数字)。 (2)应用1中，为了大量获取细胞B，需对供体2注射 ，使用 技术获得 第 7 页 共 8 页 学科网（北京）股份有限公司 重组细胞，最终获得的良种小牛性别为 。 (3)供体1完成体内受精的场所在 。在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其 胚胎移植前需要对受体进行 处理， (填“需要”或“不需要”)注射免疫抑制剂。 (4)应用3 可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过 技术获得二分胚①和②，操作时需要注意 ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。 22.研究发现，双斑蟋蟀中的 Gbdsx基因对雄性发育至关重要，且只在雄性中表达。为验证 Gbdsx 基因在雄性中的特异性表达与其启动子受雄性中存在的物质X的调控，科研人员构建了含有 Gbdsx-RFP 融合基因的转基因大肠杆菌，Gbdsx基因和质粒部分结构如图所示。 (2)可利用PCR 特异性地快速抗增 Gbdsx基因，据图分析，需选择 作为本实验的引物，引物的作用是 (2)培育转基因大肠杆菌的核心步骤是 。为目的基因能够与质粒正确相连，需要在引物的 (填“3’端”或“5’端”)添加限制酶识别序列，在F引物添加的序列所对应的限制酶是 ，在R 引物添加的序列所对应的限制酶是 。 (3)将重组质粒转入大肠杆菌过程中，一般选用 处理大肠杆菌。科研人员用含有氨苄青霉素的培养基接种处理后的大肠杆菌， (填“能”或“不能”)筛选出导入重组质粒的大肠杆菌。若要证明实验目的，还应进行的操作和实验结果分别是： 。 学科网（北京）股份有限公司 $