江西省全南中学2025-2026学年高二下学期期末考试生物试题

**基本信息** 江西省全南中学高二生物期末试卷聚焦传统发酵、基因工程、胚胎工程等核心内容，以果酒酿制、转基因安全、秸秆分解菌筛选等真实情境为载体，融合生命观念与探究实践，凸显学科应用价值。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|12/24|发酵技术、转基因安全、胚胎发育|结合黄酒酿制等传统工艺，考查操作原理与条件调控| |多选题|4/16|双特异性抗体、除草剂降解菌筛选|通过图表分析，强化科学思维与实验设计能力| |解答题|5/60|基因工程（胰岛素生产）、胚胎工程（试管牛克隆）、植物细胞工程（狼爪瓦松培养）|以微生物培养、次生代谢产物提取为线索，综合考查实验操作与结果分析，体现探究实践与态度责任|

江西省全南中学2025-2026学年度下学期期末考试 高二年级生物试卷 一、单选题(本题12小题，每一题2分，共24分。) 1．传统发酵食品可根据不同微生物的代谢特点制作，发酵条件的调控直接影响发酵效果。下列叙述错误的是（     ） A．氧气、糖源都充足时，醋酸菌可将糖类转化为乙酸，完成果醋发酵 B．利用同一批葡萄原料，先酿酒再酿醋，需依次调整通气状态与培养温度 C．腐乳发酵体系内存在多种微生物，毛霉分泌的蛋白酶、脂肪酶是发酵关键酶 D．腌制泡菜时添加陈年泡菜水，主要目的是引入杂菌，丰富泡菜风味 2．传统黄酒酿制中，先将曲霉（可产生淀粉酶）与蒸煮后的糯米、大米混合，再加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨得成品。下列叙述正确的是（      ） A．混合处理利于曲霉将淀粉水解成小分子糖B．酒母发酵需经常开盖通气以提高发酵效率 C．发酵后期，酒精积累不会抑制酵母菌代谢D．黄酒开封后易变酸，与霉菌作用密切相关 3．转基因农作物的研究成果令人兴奋，为粮食供应提供了重要保障，但也引发了民众对转基因安全性的担忧。下列对转基因技术安全性的叙述，错误的是（　　） A．转基因作物的花粉可能传播进入杂草，导致基因污染 B．转抗虫基因的植物，导致昆虫群体抗性基因频率增加 C．转基因植物一定能够合成对人体有潜在毒性的蛋白质 D．转基因植物的培育和种植应考虑可能造成的生态风险 4．下图为某哺乳动物体内受精作用及胚胎发育过程示意图。下列叙述正确的是（　　） 精子、卵子受精卵桑葚胚幼体 A．①过程精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜会立即发生反应，拒绝其他精子进入 B．②③④过程都发生有丝分裂，③过程中胚胎发生孵化 C．桑葚胚时期细胞具有全能性，并开始出现分化 D．在实际胚胎工程操作中，常以观察到两个极体或者雌雄原核作为受精的标志 5．基因工程中常用的DNA 测序技术，模拟了体外DNA 复制的过程。反应体系中除常规原料外，还会加入一类特殊的脱氧核苷酸：这类核苷酸缺少DNA 链继续延伸必需的化学基团，当它掺入新合成的子链后，会直接导致 DNA 链停止延长。下列关于该测序技术的叙述，正确的是（　　） A．这类特殊脱氧核苷酸可反复参与多条 DNA 链的合成 B．测序得到的长短不同的DNA 片段，可通过琼脂糖凝胶电泳分离 C．体外合成DNA时，DNA 聚合酶无需引物就能启动合成过程 D．该测序反应全程需要维持高温环境，以保证酶的活性 6．下列与DNA相关实验的叙述，错误的是（　　） A．DNA不溶于酒精，能溶于2mol/L的NaCl溶液 B．PCR扩增DNA时，可增设不加模板的对照组，检验体系中是否有外源DNA污染 C．具有相同碱基数量的环状DNA和链状DNA在同一电泳实验中的迁移速率不同 D．DNA粗提取时，将洋葱研磨液过滤并冷藏静置后，再弃上清液 7．下列有关胚胎工程的理论基础叙述不正确的是（     ） A．精原细胞和卵原细胞都可通过有丝分裂的方式增加数量 B．精子获能后，才具有与处于MⅡ期的卵母细胞受精的能力 C．精子入卵后，透明带会迅速发生生理反应，阻止其他精子入卵 D．桑葚胚以前的细胞均未分化，都是全能性细胞 8．动物细胞工程包括细胞培养、核移植、细胞融合和干细胞应用等技术。下列叙述正确的是（   ） A．不发生贴壁生长的动物细胞已经癌变 B．核移植的受体细胞一般是成熟的体细胞 C．异种的动物细胞不能发生细胞融合 D．人类胚胎干细胞可用于治疗性克隆 9．紫花苜蓿是利用广泛的牧草，但青饲易造成家畜臌胀病。百脉根富含缩合单宁（一种次生代谢产物），能防止反刍动物臌胀病的发生。为了改良苜蓿饲用品质，研究人员采用植物体细胞杂交技术培育抗臌胀病型苜蓿，过程如下图。下列叙述正确的是（　　） A．与传统杂交育种相比，该育种方式能产生新的基因和新的性状 B．过程①利用细胞膜的流动性原理，通过灭活病毒诱导原生质体融合 C．缩合单宁不是百脉根生长所必需的，一般在特定的组织或器官中产生 D．该技术获得的杂种植株能产生可育后代，说明两者之间不存在生殖隔离 10．啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的饮品，其传统工业化生产流程如下图所示，制麦和糖化环节为后续发酵提供关键条件。下列叙述错误的是（　　） A．蒸煮处理的主要目的是对糖浆灭菌并使淀粉进一步糊化 B．酵母菌种活化是为了让酵母菌快速恢复增殖能力 C．过滤工序可去除发酵液中的酵母菌和不溶性杂质 D．包装前采用高压蒸汽灭菌法以延长啤酒保质期 11．为从传统黄酒酒曲中分离根霉和酵母菌，研究人员开展微生物分离与筛选实验。下列叙述错误的是（      ） A．分离前需制备酒曲悬液并进行梯度稀释，便于涂布平板后在培养基上获得单菌落 B．可通过肉眼观察菌落的形态、大小差异区分两种菌 C．加青霉素的培养基可抑制酵母菌生长，筛选出根霉 D．稀释涂布平板法分离得到单菌落后，可进行纯化培养 12．将一种双链DNA分子用两种不同的限制酶切割，切割产物经PCR后进行电泳分离，结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．据图判断，加样孔位于图示上方 B．要在紫外灯下检测DNA，需要用核酸染料对DNA染色 C．根据图示结果无法判断该双链DNA分子是链状还是环状 D．若用NotⅠ单独切割得到两个片段，则大小为1 kb和9 kb 二、多选题(本题4小题，每一题4分，共16分。漏选得2分，错选得0分) 13．下列关于转基因植物的叙述，错误的是（    ） A．对转基因食品应持有客观科学的态度 B．转抗虫基因的植物，一定不会破坏生态平衡 C．微生物的基因转入植物后一定不能表达 D．如转基因植物的外源基因来源于自然界，则一定不存在安全性问题 14．双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前常用杂交—杂交瘤的方法来制备。其制备过程如下图所示：据图分析，下列叙述正确的是（     ） A．细胞B和细胞C是从已免疫小鼠的骨髓中取出的多种B淋巴细胞 B．过程②④均需要采用抗原-抗体杂交技术 C．过程⑤既可在体内培养也可在体外培养 D．与传统的单克隆抗体相比，双特异性抗体可能在免疫治疗方面有更广阔的应用前景 15．为修复被某含氮除草剂污染的农田土壤，科研人员从长期施用该除草剂的地块中取样，通过下图所示流程筛选能高效降解该除草剂的菌株，已知添加该除草剂的固体培养基呈不透明状态。下列叙述正确的是（　　） A．从长期施用该除草剂的土壤中取样，可提高获得目标菌株的概率 B．操作Ⅰ过程中，接种环灼烧后需立即进行连续划线操作 C．菌落周围的透明圈直径/菌落直径数值越大，说明该菌株降解除草剂的能力越强 D．涂布平板后需将平板正置放入恒温培养箱中培养 16．流感病毒HA蛋白是研制疫苗的重要靶点。图甲表示以病毒RNA为模板获取HA蛋白基因的过程，cDNA表示互补DNA。图乙是载体酶切后的部分结构示意图。下列说法错误的是（    ） A．逆转录酶从病毒RNA的起始密码子开始合成cDNA到终止密码子结束 B．过程②以单链DNA为模板，在引物2和DNA聚合酶作用下合成双链DNA C．若要获得插入方向正确的重组载体，引物1的5'端需添加的序列为5'-CGTACG-3' D．过程③中DNA复制n次后同时含有引物1、2的DNA分子数为2n-2 三、解答题(本题5小题，共60分。) 17．注射胰岛素是目前治疗Ⅰ型糖尿病（胰岛素依赖型糖尿病）最有效的手段，而利用基因工程技术获得人胰岛素是常用胰岛素最主要的来源。科研人员利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构如下图所示。已知β-半乳糖苷酶能分解β-半乳糖苷（无色）产生蓝色物质。 回答下列问题： (1)研究人员提取人________细胞中的总RNA，逆转录形成cDNA，再设计引物PCR扩增人胰岛素基因。在设计引物时，引物1需能与胰岛素基因________（填“A”或“B”）链的左侧序列互补配对，且需在引物1的_______（填“5'”或“3'”）端添加脱氧核苷酸序列5'-_____________-3'，使PCR扩增的人胰岛素基因能与上图中质粒正确连接。 (2)启动子包括组成型启动子（不需要诱导物，目的基因即可持续表达）、组织特异性启动子（使目的基因只在特定的器官或组织中表达）、诱导型启动子（当诱导物存在时，目的基因才能表达）等，为优化人胰岛素基因在大肠杆菌中的表达效果，持续高效生产人胰岛素，研究人员应选择________型启动子。 (3)研究人员将基因表达载体导入用______处理大肠杆菌细胞，并将上述大肠杆菌转入含有__ _______的培养基中，从培养基上挑选呈_____色的菌落，进行工业发酵培养，从而生产人胰岛素。 18．为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法。请根据图示信息回答下面问题： (1)试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的生物工程技术有___________，___________等。 (2)方法Ⅰ中对B牛进行激素处理使用的是___________激素，在完成受精前，需要对精子进行___________处理。 (3)方法Ⅱ中核移植的受体是________细胞，选此细胞的原因除体积大易操作外，还有______ __________________________________。 (4)方法Ⅰ、Ⅱ中的胚胎或重构胚发育至___________阶段，可利用胚胎移植技术转移到D牛子宫内以获得子代个体，如要提高胚胎利用率，还可采用胚胎分割技术分割，应对___________进行均等分割。 19．狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉，其生产的黄酮类化合物可入药。狼爪瓦松野生资源有限，难以满足市场化需求。因此，目前一般通过植物细胞工程手段进行培养，具体过程如图所示，其中的数字序号代表处理或生理过程，请回答下列问题： (1)狼爪瓦松植株乙、丙、丁的获得都利用了________技术，该技术的原理是________，启动②③的关键激素是_____________，①选择幼嫩的叶用于接种的原因是__________________，但也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞在________处理时化学药品渗透较快，后续用无菌水多次冲洗也不易清除，导致细胞失活甚至破裂。 (2)经过⑥过程获得的细胞需要转移到________培养基中进行扩大培养以获得________代谢物（黄酮类化合物），该过程利用了_____________原理，选用愈伤组织获得大量黄酮类化合物的原因是____________________________。若此时用射线或化学物质进行诱变，________（填“不一定”或“一定”）会得到青蒿素高产突变体。该过程与植物组织培养相比的优点有______。 A．细胞与培养基的结合更加充分     B．受培养基中成分差异的影响较小 C．对营养物质的吸收更容易 (3)⑤原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，请从细胞吸水与失水的角度分析原因:____ _______________________________________。 20．猕猴桃营养丰富，维生素C和多种抗氧化成分含量极高，能够中和体内自由基，减少氧化应激对细胞的损伤，延缓衰老过程，降低某些慢性疾病的发生概率，因而被称为“水果之王”。下图是以猕猴桃为原料发酵制作果酒和果醋的过程简图。结合所学知识，回答下列问题： (1)酿制果酒时，一般要先通气的目的是_________________________。在无氧条件下进行酒精发酵的反应式为________________________________________。 (2)醋酸菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源_____（填“充足”或“不足”）。为鉴定果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外，还可以通过检测_______________作进一步的鉴定。果酒和果醋发酵中都没有进行严格的消毒灭菌，但杂菌却不能正常生长繁殖，原因是________________________________________________。 (3)酿制成功的果酒，如果暴露在空气中会逐渐出现酸味，气温高的夏天更易如此，其原因是________________________________________________________________________________。 21．在小麦丰收的季节，经常焚烧秸秆导致火焰四起，烟雾弥漫，不但导致严重的雾霾而且造成资源浪费。科学家为了解决这个问题，努力寻找分解秸秆中纤维素的微生物，他们做了如下实验，请结合发酵工程与微生物实验室培养知识回答下列问题： （注：刚果红可与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，会出现透明圈。） (1) 培养基中通常含有碳源、______、水、无机盐等，培养基中加入的无机盐的作用为_______ _______________________（至少答出1点即可）。据图分析选择培养基应以__________为唯一碳源，制备该培养基一般需要经过_________灭菌。 (2)据图分析，图中的接种方法是________________。一段时间后3个培养皿中分别长出了54、46、50个菌落，根据实验结果，该1mL样本中约有分解纤维素的细菌______个。实验过程中还应培养1个不进行涂布或者用无菌水涂布平板，目的是____________________________________。 (3)培养基表面生长的是单菌落，运用这种方法统计的结果与实际值存在误差的原因是_____ __________________________；若用显微镜计数法统计，结果比实际活菌数______（偏大/偏小）。 (4) 可通过菌落周围的透明圈判断______（填“甲”或“乙”）分解纤维素能力更强。对筛选出的纤维素分解菌扩大培养时，需使用______（固体/液体）培养基。 高二生物期末考试答案 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 D A C D B D C D C D 题号 11 12 13 14 15 16 答案 C D BCD BCD AC AB 1．D 【详解】A、醋酸菌是好氧细菌，当氧气、糖源都充足时，可直接将糖类分解为乙酸，完成果醋发酵，A正确； B、酿酒利用酵母菌的无氧呼吸，适宜温度为18~30℃，发酵为无氧环境；酿醋利用醋酸菌的有氧呼吸，适宜温度为30~35℃，需持续通气。因此先酿酒再酿醋，需要调整通气状态和培养温度，B正确； C、腐乳发酵体系中有毛霉、酵母、曲霉等多种微生物，其中毛霉起主要作用，其分泌的蛋白酶可分解蛋白质为小分子肽和氨基酸，脂肪酶可分解脂肪为甘油和脂肪酸，二者是腐乳发酵的关键酶，C正确； D、陈年泡菜水中含有大量乳酸菌，腌制泡菜时添加陈年泡菜水的主要目的是接种乳酸菌，加快发酵速率，D错误。 2．A 【详解】A、曲霉可产生淀粉酶，与蒸煮后的米混合后，淀粉酶可将米中的淀粉水解为葡萄糖等小分子糖，为后续酵母菌发酵提供底物，A正确； B、酒母中的酵母菌进行酒精发酵需要无氧环境，经常开盖通气会抑制酵母菌的无氧呼吸，降低酒精产率，还易引入杂菌污染，B错误； C、酒精对酵母菌具有毒害作用，发酵后期酒精积累到一定浓度会抑制酵母菌的代谢活动，C错误； D、黄酒开封后接触氧气，其中的醋酸菌（细菌，不属于霉菌）可将酒精转化为醋酸，导致黄酒变酸，与霉菌无关，D错误。 3．C 【详解】A、转基因作物的花粉可携带目的基因传播至近缘杂草，使杂草获得相应基因，造成基因污染，A正确； B、转抗虫基因的植物会对昆虫种群进行定向选择，具备抗性的昆虫存活并繁殖后代，会使昆虫群体的抗性基因频率逐代增加，B正确； C、转基因植物是导入特定目的基因培育得到，并非“一定”能合成对人体有潜在毒性的蛋白质，多数转基因产品经过严格安全评估后对人体无害，C错误； D、转基因植物的培育和种植可能带来基因污染、影响物种多样性等生态风险，因此需要提前评估考量，D正确。 4．D 【详解】A、精子触及卵细胞膜的瞬间，首先发生的是透明带反应，这是阻止多精入卵的第一道屏障，卵细胞膜反应是精子进入卵细胞后才发生的第二道屏障，A错误； B、②③④过程细胞均进行有丝分裂，但孵化是囊胚期透明带破裂、胚胎从中伸展出来的过程，发生在a（囊胚）阶段，不属于③过程，B错误； C、桑葚胚时期细胞尚未出现分化，所有细胞都具有全能性，细胞分化从囊胚期才开始，C错误； D、胚胎工程中，判断受精完成的标志就是观察到卵细胞膜和透明带的间隙存在两个极体，或者观察到雌雄原核形成，D正确。 5．B 【详解】A、ddNTP 一旦掺入 DNA 子链，DNA 链直接终止，该核苷酸永久整合在链末端，无法脱离、重复利用，不能反复参与合成，A错误； B、测序过程中产生的长短不同的DNA片段可通过凝胶电泳依据分子量差异实现分离，短片段迁移速率更快，B正确； C、体外合成DNA时，DNA聚合酶无法从头启动合成过程，需要以一段具有3'端游离羟基的引物作为起点，C错误； D、双脱氧核苷酸测序过程中需经历变性、复性、延伸等不同温度阶段，全程需要调整温度，D错误。 6．D 【详解】A、DNA的溶解性特点为不溶于酒精，在2mol/L的NaCl溶液中溶解度较高，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，A正确； B、PCR扩增时，增设不加模板的对照组，若对照组出现扩增产物，说明反应体系存在外源DNA污染，该设计可检验污染情况，B正确； C、相同碱基数量的环状DNA和链状DNA空间结构存在差异，电泳时迁移速率不同，通常超螺旋环状DNA迁移速率快于等长度链状DNA，C正确； D、DNA粗提取时，洋葱研磨液过滤后冷藏静置，可使杂质沉淀，DNA溶解在上清液中，应取上清液进行后续DNA析出操作，而非弃去上清液，D错误。 7．C 【详解】A、精原细胞和卵原细胞通过有丝分裂的方式增加细胞数量，A 正确； B、卵母细胞必需发育到 MⅡ期才具有受精能力，精子获能后才可与其发生受精作用，B 正确； C、透明带反应发生于精子触及卵细胞膜的瞬间，而不是精子入卵后，C 错误； D、 桑葚胚以前的细胞均未发生分化，都具有发育成完整个体的全能性，D正确。 8．D 【详解】A、并非所有正常动物细胞都有贴壁生长的特性，因此不发生贴壁生长不能说明细胞已经癌变，A错误； B、核移植的受体细胞一般是去核的处于减数第二次分裂中期的卵母细胞，不是成熟体细胞，卵母细胞的细胞质存在调控细胞核全能性表达的物质，更适宜作为核移植受体，B错误； C、细胞融合的原理是细胞膜具有一定的流动性，在人工诱导条件下，异种动物细胞也可以发生融合，如经典的人-鼠细胞融合实验，C错误； D、人类胚胎干细胞具有发育的全能性，可被诱导分化为特定的组织、器官，可用于治疗性克隆，解决器官移植中供体不足、免疫排斥的问题，D正确。 9．C 【详解】A、只有基因突变能够产生新基因，该育种方式为植物体细胞杂交，遗传变异类型属于染色体数目变异，无法产生新基因，A错误； B、过程①为原生质体融合，原理是细胞膜的流动性，但灭活病毒是诱导动物细胞融合的方法，植物原生质体融合不能用灭活病毒诱导，B错误； C、缩合单宁属于植物次生代谢产物，不是百脉根生长发育所必需的物质，通常在特定的组织或器官中合成，C正确； D、生殖隔离指自然状态下不同物种之间不能相互交配，或交配后不能产生可育后代，紫花苜蓿和百脉根本身自然条件下无法杂交，存在生殖隔离，体细胞杂交是人为打破生殖隔离的技术，杂种植株可育不能说明二者不存在生殖隔离，D错误。 10．D 【详解】A、蒸煮处理的主要目的是对糖浆进行灭菌，同时使淀粉进一步糊化，更易被后续的酶分解，A正确； B、酵母菌种活化是为了让处于休眠状态的酵母菌快速恢复正常的生命活动和增殖能力，保证发酵的效率，B正确； C、过滤工序可以将发酵液中的酵母菌菌体以及不溶性的杂质去除，使啤酒澄清，C正确； D、包装前的消毒不能采用高压蒸汽灭菌法，因为高压蒸汽灭菌会破坏啤酒的风味和营养成分，通常采用巴氏消毒法，既能杀死大部分微生物，又能保留啤酒的品质，D错误。 11．C 【详解】A、分离前对酒曲悬液梯度稀释可降低菌体密度，涂布平板后能获得由单个活菌繁殖形成的单菌落，A正确； B、不同微生物的菌落形态、大小、颜色等特征存在明显差异，根霉和酵母菌的菌落特征区分度高，可通过肉眼观察区分，B正确； C、青霉素的作用机理是抑制原核生物细胞壁（肽聚糖）的合成，根霉和酵母菌均为真核生物，细胞壁不含肽聚糖，青霉素对二者生长均无抑制作用，无法筛选出根霉，C错误； D、稀释涂布平板法得到单菌落后，可挑取单菌落通过平板划线法等方式进一步纯化培养，D正确。 12．D 【详解】A、琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段因分子量不同而迁移速率不同，分子量越小迁移越远。由图可知，1 kb的条带位于最下方，8 kb的条带位于最上方，说明加样孔位于图示上方，DNA片段从加样孔向下方迁移，A正确； B、凝胶中的DNA分子通过染色，才可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，B正确； C、据图可知，EcoRⅠ切割该DNA时得到了两个片段，若这两个片段是切割一个位点得到，则该DNA分子为链状，若这两个片段是切割两个位点得到，则该DNA分子为环状，且无论DNA为环状还是链状，按上述切法，两酶（EcoRⅠ+NotⅠ）一起切割时的结果与图中结果相同，因此无法判断该双链DNA分子是链状还是环状，C正确； D、若DNA为链状，用NotⅠ单独切割得到两个片段，大小为1kb和9kb或3kb和7kb，若DNA为环状，用NotⅠ单独切割得到的是一个大小为10kb的链状DNA分子，D错误。 13．BCD 【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。 【详解】A、对转基因食品不能主观臆断，应持有客观科学的态度，A正确； B、转抗虫基因植物，可能会扩散到种植区外变成野生种类，或者进入新的生态区域，进而破坏生态平衡，B错误； C、由于密码子的通用性，微生物的基因转入植物后也可能会表达，C错误； D、转基因植物的外源基因来源于自然界，也会存在潜在的安全性问题，如可能会造成基因污染，D错误。 故选BCD。 14．BCD 【详解】A、能产生特异性抗体的已免疫B淋巴细胞（浆细胞）需要从已免疫小鼠的脾脏中分离，并非从骨髓中获取，A错误； B、过程②的目的是获得能分泌抗A抗体的单克隆杂交瘤细胞，过程④的目的是获得能同时分泌抗A、抗B抗体的杂交-杂交瘤细胞，两个过程的筛选阶段都需要使用抗原-抗体杂交技术检测抗体的产生情况，B正确； C、过程⑤为杂交- 杂交瘤细胞的扩增培养，和常规杂交瘤细胞的培养方式一致，既可以注射到小鼠腹腔内进行体内培养，也可以在体外培养液中培养，两种方式都可以获取双特异性抗体，C正确； D、双特异性抗体可以同时结合两种不同抗原或者同一抗原的不同表位，相比仅能结合一种抗原的传统单克隆抗体，在免疫治疗中可实现更精准的靶向作用或者招募免疫细胞提升疗效，因此应用前景更广阔，D正确。 15．AC 【详解】A、长期施用该除草剂的土壤中，能降解该除草剂的细菌经过定向选择数量相对较多，因此从该土壤中取样可提高获得目标菌株的概率，A正确； B、操作I为平板划线法，接种环灼烧后需冷却至室温再进行划线操作，避免高温杀死待接种的细菌，B错误； C、含该除草剂的培养基呈不透明状态，菌株降解除草剂后会使周围培养基变透明，透明圈直径/菌落直径数值越大，说明该菌株降解除草剂的能力越强，C正确； D、涂布平板后需将平板倒置放入恒温培养箱中培养，防止冷凝水滴落污染菌落，正置培养会导致冷凝水积聚，影响菌落生长，D错误。 16．AB 【详解】A、逆转录酶是以病毒的整个RNA为模板合成 cDNA，而不是以某种蛋白质的mRNA为模板，并非从起始密码子开始、终止密码子结束，A错误； B、过程②是合成双链 DNA 的过程，以逆转录得到的单链 DNA 为模板，在DNA聚合酶作用下合成双链 cDNA，不是引物2作为引物，B错误； C、引物1的序列与转录模板链的5’端相对应，模板链的3’端靠近启动子，5’端靠近终止子，引物1的5’端需添加的序列是5‘-CGTACG-3’，C正确； D、DNA 复制为半保留复制，过程③中第一次复制得到的2个DNA 分子，分别只含引物 1、引物 2；从第二次复制开始，会出现同时含引物1和2的DNA 分子。复制 n 次后共产生2n个 DNA 分子，其中仅 2 个 DNA 分子分别只含引物 1 或引物 2，因此同时含有引物 1、2 的 DNA 分子数为2n−2，D正确。 17．(1) 胰岛B B 5′ GAATTC (2)组成 (3) Ca2+ β-半乳糖苷和氨苄青霉素 无 【分析】基因工程技术的基本步骤： (1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 (2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 (3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。 (4)目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）胰岛素由胰岛B细胞合成、分泌，所以提取人胰岛B细胞的总RNA ，经逆转录得到cDNA。引物需要与模板链的3端结合，DNA分子中磷酸端为5'端，羟基(-OH)端为3'端，因此引物1与B链左侧序列互补配对。要使扩增的胰岛素基因与质粒正确连接需在引物1的5'端添加限制酶识别序列。在构建基因表达载体时，不能选择Mun Ⅰ，会破坏质粒的标记基因，由于Sal I和Nhe I会破坏目的基因(胰岛素基因)，因此不能选择Sal Ⅰ和Nhe Ⅰ。综上所述，需选择EcoR I和Xho I限制酶切割质粒，且根据启动子的位置和转录方向，需在引物1添加限制酶EcoR Ⅰ识别序列，引物2添加xho Ⅰ限制酶识别序列，即引物1的5“端添加核苷序列为5'-GAATTC-3'。 （2）为持续高效生产人胰岛素，需要目的基因在大肠杆菌中持续表达，组成型启动子（不需要诱导物，目的基因可持续表达）符合需求，所以选组成型启动子。 （3）将基因表达载体导入大肠杆菌，常用Ca2+（或CaCl2）处理细胞，使其处于感受态，便于吸收外源 DNA 。质粒上有lacZ基因（β-半乳糖苷酶基因），用限制酶切割质粒和目的基因构建载体时，若目的基因插入会破坏lacZ基因。培养基中加入β - 半乳糖苷 ，含重组质粒的大肠杆菌因lacZ基因被破坏，不能分解β-半乳糖苷产生蓝色物质，而含空质粒的会产生蓝色。但还需考虑质粒上的Ampr（氨苄青霉素抗性基因），实际应是含氨苄青霉素和β-半乳糖苷 （同时筛选抗性和利用lacZ基因筛选 ），不过根据题意及常见筛选，这里从lacZ基因功能看，培养基含β-半乳糖苷，成功导入重组质粒（含目的基因）的菌落，因lacZ被破坏，呈无色（未被破坏的分解底物显蓝色，被破坏的不能分解显无色）。 18．(1) 动物细胞培养 胚胎移植技术 (或早期胚胎培养) (2) 促性腺 获能 (3) 去核的卵母 细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质 (4) 桑葚胚或囊胚 内细胞团 【详解】（1）在试管牛的培育过程中，精子和卵细胞在体外受精形成受精卵，然后进行早期胚胎培养，最后将胚胎移植到受体母牛子宫内发育成新个体，克隆牛的培育过程中，先将供体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中形成重构胚，再进行早期胚胎培养，最后胚胎移植到受体母牛子宫内发育，所以均用到的生物工程技术有动物细胞培养、胚胎移植技术。 （2）在超数排卵处理中，对B牛进行激素处理使用的是促性腺激素，它能促使B牛排出更多的卵子，在完成受精前，需要对精子进行获能处理，因为刚排出的精子不能立即与卵子受精，只有经过获能后才具备受精能力。 （3）方法Ⅱ中核移植的受体是去核的卵母细胞，选此细胞的原因除体积大易操作外，还因为它含有促进细胞核全能性表达的物质，能够为重组细胞的发育提供良好的条件，使重组细胞能够更好地发育成胚胎。 （4）方法 I、Ⅱ中的胚胎或重构胚发育至桑葚胚或囊胚阶段可利用胚胎移植技术转移到D牛子宫内以获得子代个体，如要提高胚胎利用率，采用胚胎分割技术分割时，应将囊胚的内细胞团进行均等分割，因为内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，如果分割不均等，会影响分割后胚胎的发育。 19．(1) 植物组织培养 植物细胞的全能性 生长素和细胞分裂素 分裂能力强，分化程度低（或更易诱导形成愈伤组织） 消毒 (2) 液体 次生 细胞增殖 愈伤组织分裂能力强，代谢旺盛，可产生大量黄酮类化合物 不一定 AC (3)维持细胞膜内外渗透压平衡（或防止原生质体皱缩或破裂） 【详解】（1）狼爪瓦松植株乙、丙、丁的获得都是经过在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株的过程，都利用了植物组织培养技术；该技术的原理是植物细胞的全能性。在植物组织培养中，生长素用于诱导细胞的分裂和根的分化，细胞分裂素的主要作用是促进组织细胞的分裂或从愈伤组织和器官上分化出不定芽，所以启动②脱分化和③再分化的关键激素是生长素和细胞分裂素。幼嫩的叶有丝分裂旺盛，细胞分裂能力强，分化程度低，有利于植物组织培养，因此①选择幼嫩的叶用于接种，但也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞在消毒处理时化学药品渗透较快，后续用无菌水多次冲洗也不易清除，导致细胞失活甚至破裂。 （2）经过⑥过程获得的细胞需要转移到液体培养基中进行扩大培养以获得次生代谢物，该过程利用了细胞增殖原理，之所以选用愈伤组织获得大量黄酮类化合物，是由于愈伤组织分裂能力强，代谢旺盛，可产生大量黄酮类化合物。若此时使用射线或化学物质进行诱变，会提高突变的频率，但由于基因突变具有不定向性，因而不一定会得到青蒿素高产突变体。与植物组织培养相比较，该过程可使细胞与培养基的结合更加充分，也可以使细胞对营养物质的吸收更容易，但不具有受培养基中成分差异的影响较小的优点，AC正确。 （3）由于原生质体失去了细胞壁的保护作用，所以培养原生质体时加入适宜浓度的甘露醇，能够维持细胞膜内外渗透压平衡，防止原生质体皱缩或破裂。 20．(1) 让酵母菌在有氧条件下大量繁殖 C6H12O62C2H5OH＋2CO2＋少量能量 (2) 不足 发酵前后的pH 酵母菌及醋酸菌大量的代谢产物如酒精及醋酸抑制了其他杂菌的生长繁殖 (3)醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为30~35℃（夏天温度较高），导致醋酸菌大量生长产生醋酸 【详解】（1）制作果酒时，一般要先通气后密封，其中先通气的目的是让酵母菌在有氧条件下大量繁殖。在无氧条件下酵母菌能将葡萄糖发酵产生酒精和CO2，进行酒精发酵的反应式为：。 （2）醋酸菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源不足，在糖源和氧气都充足的情况下，醋酸菌将葡萄糖直接发酵成醋酸。醋酸产生会导致发酵液pH变化，鉴定果醋的常用方法是检测发酵液前后的pH变化。酵母菌及醋酸菌大量的代谢产物如酒精及醋酸会抑制其他杂菌的生长繁殖，因此通常不需要进行严格的消毒灭菌处理。 （3）醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为30~35℃，夏天温度较高，所以酿制成功的果酒如果暴露在空气中会导致醋酸菌大量生长而逐渐出现醋酸味。 21．(1) 氮源 维持培养基的渗透压、维持培养基的酸碱平衡、提供微生物生长所需的元素（答出任意1点即可） 纤维素 高压蒸汽/湿热灭菌 (2) 稀释涂布平板法 5×108 检测培养基是否被污染 (3) 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 偏大 (4) 甲 液体 【详解】（1）培养基中通常含有含有碳源、氮源、水、无机盐等，培养基中加入的无机盐的作用有：维持培养基的渗透压、维持培养基的酸碱平衡、提供微生物生长所需的元素。图中是为了获得分解纤维素的微生物，因此所用的选择培养基应以纤维素作为唯一碳源，制备该培养基一般需要经过高压蒸汽或湿热灭菌，该方法可以保留培养基中的水分。 （2）据图分析，图中的接种方法是稀释涂布平板法。一段时间后3个培养皿中分别长出了54、46、50个菌落，图中使用的菌液稀释的倍数是106，该1mL样本中约有分解纤维素的细菌（54+46+50）÷3÷0.1×106=5×108个。实验过程中还应培养1个不进行涂布或者用无菌水涂布平板，目的是检测培养基是否被污染，若该培养基上没有菌落则可证明检测的数据可靠。 （3）培养基表面生长的是单菌落，运用这种方法统计的结果往往比实际值偏小，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；若用显微镜计数法统计，结果比实际活菌数偏大，因为显微镜下难以分辨活菌和死菌。 （4）由于纤维素分解菌能将纤维素分解掉，因而红色的培养基上出现透明圈，相较于乙菌落，甲的透明圈/甲的菌落直径比值大于乙，因而可判断甲分解纤维素能力更强。对筛选出的纤维素分解菌扩大培养时，需使用液体培养基进行培养，因为在液体培养基中菌体能充分与培养液接触，进而可以大量增殖。 第3页 共8页 ◎ 第4页 共8页 第1页 共8页 ◎ 第2页 共8页 学科网（北京）股份有限公司 答案第8页，共8页 答案第1页，共1页 学科网（北京）股份有限公司 $