精品解析：安徽省芜湖市第一中学2025-2026学年高二下学期期末质量检测生物试题

芜湖一中2025-2026学年第二学期期末教学质量检测 高二生物试卷 一、单选题（15题，每题3分，共45分） 1. 下列对生物体有机物的相关叙述，正确的是（ ） A. 蛋白质中的N元素主要存在于氨基中 B. 支原体和植物细胞的细胞壁组成成分不同 C. 淀粉与脂肪酸、胆固醇、几丁质的组成元素相同 D. 蛋白质和核酸都是以碳链为骨架，均可形成氢键 2. 下列关于科学实验或研究的叙述，正确的是（　　） A. 施莱登和施旺运用不完全归纳法得出一切生物都是由细胞构成的 B. 细胞质膜成分和结构的探索过程，多次用到“提出假说”的科学方法 C. 研究细胞质膜的流动性时，用到了放射性同位素标记的方法 D. 科学家拍摄细胞膜结构的电镜微照片属于构建物理模型的方法 3. 2025年5月，我国公布了在中国空间站发现的细菌新种——天宫尼尔菌，其细胞膜上的P蛋白可特异性结合因辐射产生的自由基，因而具备高效的辐射损伤修复能力。有关天宫尼尔菌的叙述，正确的是（ ） A. P蛋白易使磷脂、DNA、蛋白质等生物大分子受损 B. P蛋白的合成和运输需要内质网和高尔基体的参与 C. 该菌的遗传物质是DNA，其DNA通常呈环状 D. 该菌与酵母菌的核糖体的形成都与核仁有关 4. 人工合成DNA常用的原料是dNTP（d表示脱氧），包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP。科学研究常用标记DNA分子，现用α、β、γ表示ATP或dATP上三个磷酸基团所处的位置，即A-Pα～Pβ～Pγ或dA-Pα～Pβ～Pγ。下列叙述正确的是（ ） A. 可用α位磷酸基团为的dATP制备标记的DNA片段 B. 以dNTP作为人工合成DNA的原料时，需添加ATP供能 C. ATP水解掉“γ”位磷酸基团则得到RNA的单体之一 D. 细胞中ATP的水解往往伴随着放能反应，ATP的合成伴随着吸能反应 5. 下列有关酶实验的叙述合理的有几项（ ） ①利用过氧化氢和过氧化氢酶探究酶的最适温度 ②若用淀粉、蔗糖、淀粉酶验证酶专一性，可用斐林试剂检测 ③探究温度对蛋白酶活性影响的实验中，可选择双缩脲试剂检测实验结果 ④“探究pH对酶活性的影响”实验中，将酶与底物混合后保存于特定的pH缓冲液中反应一段时间 ⑤用淀粉和淀粉酶探究温度对蛋白酶活性影响的实验中，可用斐林试剂作为检测试剂 ⑥比较过氧化氢在不同条件下的分解实验中，可用常温常压组和加酶组验证“酶的高效性” A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项 6. 据研究报道，涝胁迫（创造无氧环境）处理某植物幼苗时，发现该植物幼苗根部细胞中编码丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的基因均能表达，并能同时产生乙醇和乳酸。在涝胁迫初期，根部细胞中检测不到，而后期能检测到。下列叙述正确的是（ ） A. 涝胁迫初期该植物幼苗根部细胞主要进行有氧呼吸 B. 涝胁迫后期检测到的CO来自细胞质基质和线粒体 C. 上述三种呼吸相关酶分别存在于线粒体、细胞质基质和细胞质基质中 D. 该植物细胞中分解等量葡萄糖分别产生乙醇和乳酸时，生成的ATP一样多 7. 绿色植物叶肉细胞合成的蔗糖主要通过图中①②途径转移，最终进入筛管进行长距离运输。下列叙述错误的是（ ） A. 光合作用的另一种产物淀粉在叶绿体基质中形成 B. 蔗糖运出薄壁细胞进入细胞间隙的方式是协助扩散 C. H⁺运出伴胞细胞的过程中转运蛋白会发生磷酸化导致空间结构改变 D. 适度升高薄壁细胞与伴胞细胞间隙的pH会使蔗糖转运速率加快 8. 某同学利用红叶李果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述正确的是（　　） A. 果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同 B. 过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率 C. 过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气 D. 过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌 9. 蓝色的美兰是一种弱氧化剂，活酵母可将其还原呈无色，基本上不影响酵母菌的生命活性；该指示剂可将死细胞染成蓝色。在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，用血细胞计数板计数，用美兰染色酵母菌，实验结果如下图。下列说法正确的是（ ） A. 图1所示的血细胞计数板有2个计数室，共容纳0.1mm3的酵母菌液，一个计数室有16个中方格 B. 样液摇匀后用滴管吸出样液直接滴加在血细胞计数板上，再盖上盖玻片，进行计数 C. 美兰不能进入活酵母菌中，所以活酵母菌呈无色，死酵母菌呈蓝色 D. 按照图3的数据计数，染色后的10mL酵母菌液中活酵母菌的数量为2.25×107个 10. 花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：下列表述正确的是（ ） A. ③和④过程涉及的激素主要是生长素和赤霉素 B. 用①处理细胞时需要在较高渗透压溶液中进行 C. 灭活是指利用物理或化学手段破坏病毒或细菌的抗原结构进而使其失去感染能力，但是灭活的仙台病毒不可促进②过程 D. 显微镜下供体染色体的存在可作为初步筛选杂种细胞的标志 11. 2017 年，我国科学家利用体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植等技术培育出了克隆猴“中中”和“华华”。如图为科学家培育克隆猴的基本步骤，下列相关叙述正确的是（　　） A. A 猴卵母细胞去核实际上是去除 MⅠ期卵母细胞中的纺锤体 - 染色体复合物 B. B 猴体细胞进行体外培养时需对培养液、培养用具、培养细胞进行灭菌处理 C. 克隆猴的性状主要由提供体细胞核的 B 猴决定，与 A 猴也有关系 D. 为了获得更多的克隆猴可以采用胚胎分割技术对囊胚或原肠胚进行胚胎分割 12. 小型猪的心血管系统、消化系统及生理指标与人类高度近似，其被公认为异种器官移植的理想供体。我国科学家通过基因编辑技术将利用体细胞克隆技术（如图）获得的猪肝成功植入人体，实现异种器官移植新突破。下列说法正确的是（ ） A. 猪耳朵细胞培养需加血清，并充入95%氧气和5%二氧化碳的混合气体 B. 敲除猪的CMAH基因，能完全避免猪肝植入人体后的免疫排斥反应 C. 通过电融合法使供体细胞和去核的卵母细胞融合，形成重构胚 D. 代孕母猪用外源促性腺激素超数排卵后才具备胚胎移植的生理学基础 13. 近年来，我国科学家利用一系列生物技术对野生动物进行保护，使200多种珍稀、濒危野生动物进入恢复性增长阶段。下列叙述错误的是（ ） A. 离体培养的麋鹿耳郭细胞，可经历脱分化和再分化过程形成新个体 B. 借助人工授精技术繁殖大熊猫时，输入的精子在雌性的输卵管中完成受精 C. 利用试管技术培育藏羚羊，属于有性繁殖技术 D. 杂交瘤技术不适合用于克隆珍稀、濒危野生动物 14. 基因PCR定点突变是蛋白质工程的重要技术，该技术需要设计含有非特异性配对碱基的引物，再通过PCR将突变位点引入到产物中。重叠延伸PCR是发展最早的定点突变技术，其操作流程如下图所示。下列分析错误的是（ ） A. 蛋白质工程可以创造新的、自然界中不存在的蛋白质 B. 应将引物1、2与引物3、4置于两个独立的反应体系中 C. 步骤④使用DNA聚合酶可对杂交分子甲和乙进行延伸 D. 步骤⑤中如果完成6轮循环一共需要消耗63个引物1 15. 大肠杆菌经溶菌酶和研磨液处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。用三种限制酶处理提取的产物，电泳结果如图所示。下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述错误的是（ ） A. 由电泳结果可知，加样孔位于电泳条带下方 B. 将提取的DNA溶于2mol/L的NaCl溶液后，加入二苯胺试剂沸水浴加热后可呈现蓝色 C. 设置一组加二苯胺但是不加DNA的对照组用来排除二苯胺受热变蓝的可能 D. 由电泳结果推测，质粒上有一个限制酶Ⅰ和Ⅱ的切点，两个III限制酶的切点 二、非选择题（5题，共55分） 16. 莱茵衣藻不仅能进行光合作用（光合色素种类与绿色植物相同），还能进行有氧呼吸和无氧呼吸，是科学家研究三者之间相互作用的理想模式生物，其细胞结构和部分代谢过程如图1所示。 （1）图1中，物质PYR的名称是________。 （2）测定莱茵衣藻细胞中叶绿素含量时应将光合色素提取液置于________（填“红光”、“红光和蓝紫光”、“蓝紫光”或“白光”）下测定吸光度，使用该种光源的原因是________________________________。 （3）据图1分析，莱茵衣藻类囊体中，来自于________（填生理过程）。 （4）莱茵衣藻无氧呼吸产生的有机小分子弱酸（HA），能跨膜进入类囊体。HA从产生部位进入类囊体，需要跨越的生物膜层数为________层。 （5）为研究莱茵衣藻无氧呼吸对其光合作用的影响，研究人员开展下列实验：在光照适宜且氧气充足的条件下测定莱茵衣藻类囊体膜上的电子传递速率（图2）。据上述实验结果推断，莱茵衣藻无氧呼吸对光合作用的影响是________（填“促进”或“抑制”）。 17. 下图是番茄叶肉细胞进行光合作用的示意图，其中PSII和PSI是由蛋白质和光合色素组成的复合物，RuBP羧化酶是催化固定的酶。 （1）图一中的生物膜为________，RuBP羧化酶的激活________（填“需要”、“不需要”）黑暗条件。 （2）据图一分析，驱动ATP合成所需的能量直接来自________，在还原的过程中除需要ATP水解为其提供能量外，还需要NADPH为该过程________。 （3）M1蛋白是PSⅡ的核心蛋白。研究发现，在高温强光（HH）条件下，过剩的光能会损伤M1蛋白，进而影响植物的光合作用。为研究HH对番茄光合作用的影响，研究人员进行了相关实验，结果如图二所示。据图二可知，HH条件下，过剩光能产生的原因不是气孔因素引起的，依据是________________，而是由于________，使合成速率下降，导致光反应产物积累，使光能转化效率降低造成光能过剩，对植物造成危害。 （4）研究发现，M1蛋白周转和叶黄素循环是植物应对高温高光强条件的重要保护机制。研究人员利用长势一致的番茄植株，随机均分为四组，并进行处理：A组在适宜温度和光照强度下培养；B组________；C组在HH条件下培养，并用叶黄素循环抑制剂（DTT）处理；D组在HH条件下培养，并用M1蛋白周转抑制剂（SM）处理。结果如图三所示。据图三分析，在HH条件下，M1蛋白周转比叶黄素循环对番茄植株的保护作用________（选填“强”或“弱”） 18. 人类表皮因子受体（HER-2）会在某些乳腺癌细胞中合成，该类癌细胞称为HER-2阳性乳腺癌细胞，恩美曲妥珠是一种靶向HER-2的抗体-药物偶联物（ADC），是曲妥珠单抗和药物美坦新的偶联物。制备ADC的过程如图所示，请回答下列问题。 （1）该过程涉及的动物细胞工程技术有________。 （2）制备单克隆抗体的过程中，灭活的病毒可以使细胞相互凝集，细胞膜上的________分子重新排布，进而促进细胞融合。 （3）③过程需对得到的杂交瘤细胞进行________和________，经多次筛选，以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 （4）图中获得的单克隆抗体经过过程④制备成ADC，图中ADC中代表曲妥珠单抗的是________（填“a”或“b”），其主要作用是__________________。 19. 某种物质X（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。请分析并回答下列问题： （1）该实验中，培养基灭菌前需将pH调至________。实验时，一般对配制的培养基采用________方法进行灭菌，乙培养基中的Y物质是________。 （2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释________倍，该方法统计出的结果往往比实际值________（偏大/不变/偏小）。 （3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的X超过某一浓度时，某菌株对X的降解量反而下降，其原因可能是_______________________。 20. 种子休眠是抵御穗发芽的一种机制。通过对Ti质粒的改造，利用农杆菌转化法将Ti质粒上的T-DNA随机整合到小麦基因组中，筛选到2个种子休眠相关基因的插入失活纯合突变体。与野生型相比，突变体种子的萌发率降低，小麦基因组序列信息已知。 （1）农杆菌在自然条件下侵染________植物，其含有的Ti质粒上与其在农杆菌中的复制能力相关的结构为________。 （2）选用图甲中的SmaⅠ对抗除草剂基因X进行完全酶切，再选择SmaⅠ和________对Ti质粒进行完全酶切，将产生的黏性末端补平，补平时使用的酶是________。利用DNA连接酶将酶切后的包含抗除草剂基因X的片段与酶切并补平的Ti质粒进行连接，构建重组载体，转化大肠杆菌；经卡那霉素筛选并提取质粒后再选用限制酶________进行完全酶切并电泳检测，若电泳结果呈现________个条带，较短的条带长度近似为________bp，则一定为正向重组质粒。 （3）为证明这两个突变体是由于T-DNA插入到小麦基因组中同一基因导致的，提取基因组DNA，经酶切后产生含有T-DNA的基因组片段（图乙）。在此酶切过程中，限于后续PCR难以扩增大片段DNA，最好使用识别序列为________（填“4”“6”或“8”）个碱基对的限制酶，且________中应不含该酶的酶切位点。需首先将图乙的片段________，才能利用引物P1和P2成功扩增未知序列。PCR扩增出未知序列后，进行了一系列操作，其中可以判断出2条片段的未知序列是否属于同一个基因的操作为________（填“琼脂糖凝胶电泳”或“测序和序列比对”）。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 芜湖一中2025-2026学年第二学期期末教学质量检测 高二生物试卷 一、单选题（15题，每题3分，共45分） 1. 下列对生物体有机物的相关叙述，正确的是（ ） A. 蛋白质中的N元素主要存在于氨基中 B. 支原体和植物细胞的细胞壁组成成分不同 C. 淀粉与脂肪酸、胆固醇、几丁质的组成元素相同 D. 蛋白质和核酸都是以碳链为骨架，均可形成氢键 【答案】D 【解析】 【详解】A、蛋白质中的N元素主要存在于“—CO—NH—”中，仅少量存在于游离氨基和R基中，A错误； B、支原体结构中没有细胞壁，植物细胞壁成分为纤维素和果胶，B错误； C、淀粉属于糖类，脂肪酸、胆固醇属于脂质，组成元素均为C、H、O，但几丁质是含氮的多糖，组成元素为C、H、O、N，与前几类物质元素组成不同，C错误； D、蛋白质、核酸均以碳链为基本骨架，多肽链在形成蛋白质的二级结构时可形成链内氢键，核酸单链（如tRNA自身折叠形成的三叶草结构）也可形成链内氢键，D正确。 2. 下列关于科学实验或研究的叙述，正确的是（　　） A. 施莱登和施旺运用不完全归纳法得出一切生物都是由细胞构成的 B. 细胞质膜成分和结构的探索过程，多次用到“提出假说”的科学方法 C. 研究细胞质膜的流动性时，用到了放射性同位素标记的方法 D. 科学家拍摄细胞膜结构的电镜微照片属于构建物理模型的方法 【答案】B 【解析】 【详解】A、施莱登和施旺运用不完全归纳法得出的是一切动植物都由细胞和细胞产物构成，并非“一切生物”，病毒无细胞结构，A错误； B、细胞质膜成分和结构的探索过程中，科学家先后根据实验现象提出“膜由脂质组成”“蛋白质-脂质-蛋白质三层结构”“流动镶嵌模型”等假说，多次用到“提出假说”的科学方法，B正确； C、研究细胞质膜流动性的人鼠细胞融合实验，用到的是荧光标记法，C错误； D、物理模型是指以实物或图画形式直观地表达认识对象的特征，科学家拍摄的细胞膜结构电镜显微照片是实际结构的影像记录，不属于构建物理模型，D错误。 3. 2025年5月，我国公布了在中国空间站发现的细菌新种——天宫尼尔菌，其细胞膜上的P蛋白可特异性结合因辐射产生的自由基，因而具备高效的辐射损伤修复能力。有关天宫尼尔菌的叙述，正确的是（ ） A. P蛋白易使磷脂、DNA、蛋白质等生物大分子受损 B. P蛋白的合成和运输需要内质网和高尔基体的参与 C. 该菌的遗传物质是DNA，其DNA通常呈环状 D. 该菌与酵母菌的核糖体的形成都与核仁有关 【答案】C 【解析】 【详解】A、由题意可知，P蛋白可特异性结合辐射产生的自由基，而自由基会攻击磷脂、DNA、蛋白质等造成损伤，因此P蛋白可减少上述物质的损伤，且磷脂不属于生物大分子，A错误； B、原核生物仅含有核糖体一种细胞器，没有内质网、高尔基体等复杂细胞器，因此P蛋白的合成和运输不需要内质网和高尔基体参与，B错误； C、该菌为细菌，遗传物质是DNA，且原核生物的DNA通常呈环状（位于拟核），C正确； D、该菌为原核生物，无核仁，其核糖体形成与核仁无关；酵母菌为真核生物，核糖体形成与核仁有关，D错误； 4. 人工合成DNA常用的原料是dNTP（d表示脱氧），包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP。科学研究常用标记DNA分子，现用α、β、γ表示ATP或dATP上三个磷酸基团所处的位置，即A-Pα～Pβ～Pγ或dA-Pα～Pβ～Pγ。下列叙述正确的是（ ） A. 可用α位磷酸基团为的dATP制备标记的DNA片段 B. 以dNTP作为人工合成DNA的原料时，需添加ATP供能 C. ATP水解掉“γ”位磷酸基团则得到RNA的单体之一 D. 细胞中ATP的水解往往伴随着放能反应，ATP的合成伴随着吸能反应 【答案】A 【解析】 【详解】A、dATP作为合成DNA的原料时，会断裂β、γ位的特殊化学键，脱去两个磷酸基团，仅含α位磷酸的dAMP会参与DNA链的组成，因此可用α位磷酸基团为32P的dATP制备32P标记的DNA片段，A正确； B、dNTP本身含有特殊化学键，在作为DNA合成原料时，自身断裂特殊化学键即可释放能量，无需额外添加ATP供能，B错误； C、ATP水解掉γ位磷酸基团得到的是ADP，只有同时水解掉β、γ两个磷酸基团后得到的腺嘌呤核糖核苷酸才是RNA的单体之一，C错误； D、ATP水解释放能量，一般与吸能反应相联系，ATP合成吸收能量，一般与放能反应相联系，D错误。 5. 下列有关酶实验的叙述合理的有几项（ ） ①利用过氧化氢和过氧化氢酶探究酶的最适温度 ②若用淀粉、蔗糖、淀粉酶验证酶专一性，可用斐林试剂检测 ③探究温度对蛋白酶活性影响的实验中，可选择双缩脲试剂检测实验结果 ④“探究pH对酶活性的影响”实验中，将酶与底物混合后保存于特定的pH缓冲液中反应一段时间 ⑤用淀粉和淀粉酶探究温度对蛋白酶活性影响的实验中，可用斐林试剂作为检测试剂 ⑥比较过氧化氢在不同条件下的分解实验中，可用常温常压组和加酶组验证“酶的高效性” A. 1项 B. 2项 C. 3项 D. 4项 【答案】A 【解析】 【详解】①过氧化氢本身受热易分解，温度升高会加快其自身分解速率，干扰酶活性的测定，不能用于探究酶的最适温度，①错误； ②淀粉和蔗糖均为非还原糖，淀粉酶只能催化淀粉水解为还原糖，还原糖可与斐林试剂水浴加热产生砖红色沉淀，蔗糖不被水解则无该现象，可用斐林试剂检测验证酶的专一性，②正确； ③蛋白酶本质为蛋白质，可与双缩脲试剂发生紫色反应，无论底物是否被分解，都会出现显色反应，无法检测实验结果，③错误； ④探究pH对酶活性的影响时，需先将酶和底物分别调至设定pH后再混合，若先混合再放缓冲液，未达到目标pH时酶已发生反应，会干扰实验结果，④错误； ⑤斐林试剂检测还原糖需要水浴加热，会改变实验的自变量（温度），影响实验结果，不能作为该实验的检测试剂，⑤错误； ⑥酶的高效性是指酶的催化效率远高于无机催化剂，需将加酶组与加无机催化剂组对比，常温常压组为空白对照，只能验证酶有催化作用，不能验证高效性，⑥错误。 综上，②正确，A正确，BCD错误。 6. 据研究报道，涝胁迫（创造无氧环境）处理某植物幼苗时，发现该植物幼苗根部细胞中编码丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的基因均能表达，并能同时产生乙醇和乳酸。在涝胁迫初期，根部细胞中检测不到，而后期能检测到。下列叙述正确的是（ ） A. 涝胁迫初期该植物幼苗根部细胞主要进行有氧呼吸 B. 涝胁迫后期检测到的CO来自细胞质基质和线粒体 C. 上述三种呼吸相关酶分别存在于线粒体、细胞质基质和细胞质基质中 D. 该植物细胞中分解等量葡萄糖分别产生乙醇和乳酸时，生成的ATP一样多 【答案】D 【解析】 【详解】A、涝胁迫是无氧环境，且初期检测不到CO2（酒精发酵会产生CO2，乳酸发酵不产生CO2），说明此时根部细胞主要进行乳酸型无氧呼吸，而非有氧呼吸。若主要进行有氧呼吸，会大量产生CO2，A错误； B、胁迫后期根部细胞进行的是产生酒精的无氧呼吸，检测到的CO₂来自细胞质基质，B错误； C、在涝胁迫初期和后期进行的都是无氧呼吸，三种酶均参与无氧呼吸，无氧呼吸的场所是细胞质基质，C错误； D、两种无氧呼吸均仅在第一阶段（葡萄糖→丙酮酸）产生ATP，第二阶段不产生ATP。因此分解等量葡萄糖时，两种类型生成的ATP数量相同，D正确。 7. 绿色植物叶肉细胞合成的蔗糖主要通过图中①②途径转移，最终进入筛管进行长距离运输。下列叙述错误的是（ ） A. 光合作用的另一种产物淀粉在叶绿体基质中形成 B. 蔗糖运出薄壁细胞进入细胞间隙的方式是协助扩散 C. H⁺运出伴胞细胞的过程中转运蛋白会发生磷酸化导致空间结构改变 D. 适度升高薄壁细胞与伴胞细胞间隙的pH会使蔗糖转运速率加快 【答案】D 【解析】 【详解】A、光合作用中淀粉在叶绿体基质形成，A正确； B、蔗糖顺浓度梯度运出薄壁细胞进入细胞间隙时需要细胞膜上转运蛋白协助、不消耗能量，属于协助扩散，B正确； C、H+运出伴胞为主动运输，H+−ATP酶（转运蛋白）催化ATP水解时，自身会发生磷酸化，空间结构改变从而完成H+转运，C正确； D、分析题图可知，H+−ATP酶消耗ATP，将伴胞细胞内的H+主动运输到细胞间隙，使细胞间隙H+浓度高于伴胞细胞内，蔗糖-H+同向转运体依靠H+的浓度梯度势能，将蔗糖和H+一同转运进入伴胞，适度升高细胞间隙pH，会使细胞间隙H+浓度降低，H+的浓度差减小，蔗糖转运的动力下降，蔗糖转运速率会减慢，D错误。 8. 某同学利用红叶李果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述正确的是（　　） A. 果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同 B. 过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率 C. 过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气 D. 过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌 【答案】B 【解析】 【详解】A、果酒发酵所需的菌种是酵母菌，是真核生物，果醋发酵所需的菌种是醋酸菌，是原核生物，两者的细胞结构不同，A错误； B、过程①为榨汁，果胶酶能分解细胞壁中的果胶，添加适量果胶酶，有利于提高出汁率，B正确； C、过程③是利用乙醇的果醋发酵，醋酸菌利用乙醇产醋过程中不产生气体，不会产生大量气泡，也无需放气，C错误； D、过程②为果酒发酵，需要在无氧条件下进行，每日多次开盖会引入氧气抑制无氧呼吸，抑制酒精发酵，并增加杂菌污染风险，D错误。 故选B。 9. 蓝色的美兰是一种弱氧化剂，活酵母可将其还原呈无色，基本上不影响酵母菌的生命活性；该指示剂可将死细胞染成蓝色。在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，用血细胞计数板计数，用美兰染色酵母菌，实验结果如下图。下列说法正确的是（ ） A. 图1所示的血细胞计数板有2个计数室，共容纳0.1mm3的酵母菌液，一个计数室有16个中方格 B. 样液摇匀后用滴管吸出样液直接滴加在血细胞计数板上，再盖上盖玻片，进行计数 C. 美兰不能进入活酵母菌中，所以活酵母菌呈无色，死酵母菌呈蓝色 D. 按照图3的数据计数，染色后的10mL酵母菌液中活酵母菌的数量为2.25×107个 【答案】D 【解析】 【详解】A、图 1 血细胞计数板一个计数室有 25 个中方格（或 16 个 ，但图示是 25 个中方格样式 ），且计数板通常 1 个计数室容纳0.1mm3 菌液，A 错误； B、操作应为先盖盖玻片，再用滴管吸样液滴在盖玻片边缘，让其自行渗入，B 错误； C、美兰是弱氧化剂，活酵母可还原美兰呈无色，不是美兰不能进入活酵母，C 错误； D、图 3 中，计数原则是计无色菌体（活酵母 ），一个中方格中活酵母是 9 个，25 个中方格就是9×25=225 个。计数室体积0.1mm3=10−4mL ，则 10mL 中活酵母数量为225÷0.1×103×10=2.25×107 个，D 正确。 故选D。 10. 花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：下列表述正确的是（ ） A. ③和④过程涉及的激素主要是生长素和赤霉素 B. 用①处理细胞时需要在较高渗透压溶液中进行 C. 灭活是指利用物理或化学手段破坏病毒或细菌的抗原结构进而使其失去感染能力，但是灭活的仙台病毒不可促进②过程 D. 显微镜下供体染色体的存在可作为初步筛选杂种细胞的标志 【答案】B 【解析】 【分析】分析题图：图示为采用植物体细胞杂交技术获得抗黑腐病杂种植株的流程图，其中①表示采用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁的过程；②表示诱导原生质体融合的过程；之后再采用植物组织培养技术即可得到杂种植株。 【详解】A、③和④过程为植物组织培养的脱分化和再分化过程，涉及的激素主要是生长素和细胞分裂素，A错误； B、原生质体没有细胞壁的保护，因此用①处理细胞时需要在较高渗透压溶液中进行，防止细胞吸水涨破，B正确； C、灭活是指用物理或化学手段杀死病毒、细菌等，但是不损害它们体内有用抗原的方法。灭活的病毒会使病毒蛋白的高级结构受到破坏，蛋白不再有生理活性，所以失去感染、致病和繁殖能力，而灭活的仙台病毒不可用于②过程（植物细胞融合），一般用于动物细胞融合，C错误； D、用于融合的细胞一个是花椰菜的根细胞，一个是黑介苗的叶肉细胞，其中供体细胞特有的结构为叶绿体，故可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志，供体叶肉细胞高度分化，其染色体显微镜下不可见，D错误。  故选B。 11. 2017 年，我国科学家利用体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植等技术培育出了克隆猴“中中”和“华华”。如图为科学家培育克隆猴的基本步骤，下列相关叙述正确的是（　　） A. A 猴卵母细胞去核实际上是去除 MⅠ期卵母细胞中的纺锤体 - 染色体复合物 B. B 猴体细胞进行体外培养时需对培养液、培养用具、培养细胞进行灭菌处理 C. 克隆猴的性状主要由提供体细胞核的 B 猴决定，与 A 猴也有关系 D. 为了获得更多的克隆猴可以采用胚胎分割技术对囊胚或原肠胚进行胚胎分割 【答案】C 【解析】 【详解】A、A猴卵母细胞去核实际上是去除MⅡ期卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物，A错误； B、动物细胞体外培养时，培养细胞不能进行灭菌处理，否则高温会导致细胞死亡，B错误； C、由图可知，重组细胞的细胞核来自B猴体细胞，细胞质来自A猴的卵母细胞，生物的性状由细胞核遗传物质和细胞质遗传物质共同决定，因此克隆猴的性状主要由提供体细胞核的B猴决定，与A猴也有关系，C正确； D、为了获得更多的克隆猴可以采用胚胎分割技术对囊胚或桑葚胚进行胚胎分割，D错误。 故选C。 12. 小型猪的心血管系统、消化系统及生理指标与人类高度近似，其被公认为异种器官移植的理想供体。我国科学家通过基因编辑技术将利用体细胞克隆技术（如图）获得的猪肝成功植入人体，实现异种器官移植新突破。下列说法正确的是（ ） A. 猪耳朵细胞培养需加血清，并充入95%氧气和5%二氧化碳的混合气体 B. 敲除猪的CMAH基因，能完全避免猪肝植入人体后的免疫排斥反应 C. 通过电融合法使供体细胞和去核的卵母细胞融合，形成重构胚 D. 代孕母猪用外源促性腺激素超数排卵后才具备胚胎移植的生理学基础 【答案】C 【解析】 【详解】A 、动物细胞培养时，需充入95%空气和5%二氧化碳的混合气体，A错误； B、虽然敲除猪的CMAH基因可减少猪抗原，但不能完全避免猪肝植入人体后的免疫排斥反应，B错误； C、重构胚是通过电融合法使供体细胞（敲除相关基因的猪耳朵细胞）和去核的卵母细胞融合形成的，C正确； D、代孕母猪用雌激素或孕激素刺激其同期发情是具备胚胎移植的生理学基础，D错误。 13. 近年来，我国科学家利用一系列生物技术对野生动物进行保护，使200多种珍稀、濒危野生动物进入恢复性增长阶段。下列叙述错误的是（ ） A. 离体培养的麋鹿耳郭细胞，可经历脱分化和再分化过程形成新个体 B. 借助人工授精技术繁殖大熊猫时，输入的精子在雌性的输卵管中完成受精 C. 利用试管技术培育藏羚羊，属于有性繁殖技术 D. 杂交瘤技术不适合用于克隆珍稀、濒危野生动物 【答案】A 【解析】 【详解】A、脱分化、再分化是植物组织培养过程中需要经历的过程，植物体细胞具有全能性，适宜条件下离体培养可获得完整个体，但高度分化的动物体细胞的全能性受到限制，离体培养的麋鹿耳郭细胞无法经脱分化、再分化过程发育为完整个体，A错误； B、哺乳动物的受精场所为雌性个体的输卵管，人工授精时输入的精子会在雌性个体的输卵管中与成熟卵子结合完成受精过程，B正确； C、试管动物技术在体外完成受精，属于有性繁殖技术，C正确； D、杂交瘤技术主要用于制备单克隆抗体，无法获得完整动物个体，因此不适合用于克隆珍稀、濒危野生动物；若要进行动物克隆，应选用体细胞核移植技术，D正确。 14. 基因PCR定点突变是蛋白质工程的重要技术，该技术需要设计含有非特异性配对碱基的引物，再通过PCR将突变位点引入到产物中。重叠延伸PCR是发展最早的定点突变技术，其操作流程如下图所示。下列分析错误的是（ ） A. 蛋白质工程可以创造新的、自然界中不存在的蛋白质 B. 应将引物1、2与引物3、4置于两个独立的反应体系中 C. 步骤④使用DNA聚合酶可对杂交分子甲和乙进行延伸 D. 步骤⑤中如果完成6轮循环一共需要消耗63个引物1 【答案】C 【解析】 【详解】A、蛋白质工程是通过改造基因来设计具有新功能的蛋白质，能够创造自然界中原本不存在的蛋白质，A正确； B、引物1、2用于扩增含突变位点的上游片段，引物3、4用于扩增含突变位点的下游片段。若将四组引物置于同一反应体系，会导致引物交叉结合、干扰PCR产物的特异性，因此需在两个独立的反应体系中分别扩增上下游片段，B正确； C、步骤④使用DNA聚合酶可对分子乙进行延伸，甲不可延伸，C错误； D、PCR过程中，引物的消耗数量为2n+1－2（n为循环数），初始模板不消耗引物。6轮循环后，总产物数为27－2=126，因此消耗的引物1数量为126÷2=63，D正确。 故选C。 15. 大肠杆菌经溶菌酶和研磨液处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。用三种限制酶处理提取的产物，电泳结果如图所示。下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述错误的是（ ） A. 由电泳结果可知，加样孔位于电泳条带下方 B. 将提取的DNA溶于2mol/L的NaCl溶液后，加入二苯胺试剂沸水浴加热后可呈现蓝色 C. 设置一组加二苯胺但是不加DNA的对照组用来排除二苯胺受热变蓝的可能 D. 由电泳结果推测，质粒上有一个限制酶Ⅰ和Ⅱ的切点，两个III限制酶的切点 【答案】D 【解析】 【详解】A、由图像可知，限制酶Ⅰ和Ⅱ都会将质粒DNA切出一种片段，即为质粒DNA本身的长度，而限制酶Ⅲ可将质粒切除两种长度的片段，这两种片段的长度肯定小于质粒DNA本身的长度，越小的片段在电场中的迁移速率越大，结束电泳后的条带离点样孔越远，说明加样孔应位于电泳条带下方，A正确； B、DNA溶于2 mol/L NaCl溶液后，加入二苯胺试剂并沸水浴加热，会发生颜色反应生成蓝色物质，这是DNA的鉴定方法，B正确； C、设置不加DNA的对照组可以排除二苯胺试剂本身受热变蓝的干扰，确保蓝色是由DNA引起的，C正确； D、根据电泳结果，限制酶Ⅰ和Ⅱ各产生一条条带，说明限制酶Ⅰ和Ⅱ在质粒上没有切点或只有一个切点；限制酶Ⅲ产生两条条带，说明有两个切点，D错误。 二、非选择题（5题，共55分） 16. 莱茵衣藻不仅能进行光合作用（光合色素种类与绿色植物相同），还能进行有氧呼吸和无氧呼吸，是科学家研究三者之间相互作用的理想模式生物，其细胞结构和部分代谢过程如图1所示。 （1）图1中，物质PYR的名称是________。 （2）测定莱茵衣藻细胞中叶绿素含量时应将光合色素提取液置于________（填“红光”、“红光和蓝紫光”、“蓝紫光”或“白光”）下测定吸光度，使用该种光源的原因是________________________________。 （3）据图1分析，莱茵衣藻类囊体中，来自于________（填生理过程）。 （4）莱茵衣藻无氧呼吸产生的有机小分子弱酸（HA），能跨膜进入类囊体。HA从产生部位进入类囊体，需要跨越的生物膜层数为________层。 （5）为研究莱茵衣藻无氧呼吸对其光合作用的影响，研究人员开展下列实验：在光照适宜且氧气充足的条件下测定莱茵衣藻类囊体膜上的电子传递速率（图2）。据上述实验结果推断，莱茵衣藻无氧呼吸对光合作用的影响是________（填“促进”或“抑制”）。 【答案】（1）丙酮酸 （2） ①. 红光 ②. 叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，置于红光下测定吸光度，可排除类胡萝卜素的吸收干扰 （3）水的光解、HA的分解（细胞呼吸） （4）3 （5）抑制 【解析】 【小问1详解】 图1中生理过程X为细胞呼吸第一阶段，葡萄糖在细胞质基质中分解为丙酮酸和NADH。物质PYR是细胞呼吸第一阶段的产物，可进入线粒体参与有氧呼吸，其名称是丙酮酸。 【小问2详解】 叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，为避免其他色素对叶绿素测定的干扰，测定莱茵衣藻细胞中叶绿素含量时应将光合色素提取液置于红光下测定吸光度，可排除类胡萝卜素的吸收干扰，准确测定叶绿素含量。 【小问3详解】 由图可知，莱茵衣藻类囊体中的H+有两个来源：一是光合作用光反应阶段，进行水的光解产生H+；二是细胞呼吸产生的HA进入类囊体后被分解，也会产生H+。 【小问4详解】 莱茵衣藻无氧呼吸产生HA的场所是细胞质基质。叶绿体是双层膜结构，类囊体是单膜结构，所以HA从产生部位（细胞质基质）进入叶绿体需要穿过2层膜，再进入类囊体还需要穿过1层膜，一共需要跨越3层生物膜。 【小问5详解】 HA是无氧呼吸的产物，由图2可知，与HA不处理相比，HA处理后类囊体膜上的电子传递速率降低，说明莱茵衣藻无氧呼吸对光合作用起抑制作用。 17. 下图是番茄叶肉细胞进行光合作用的示意图，其中PSII和PSI是由蛋白质和光合色素组成的复合物，RuBP羧化酶是催化固定的酶。 （1）图一中的生物膜为________，RuBP羧化酶的激活________（填“需要”、“不需要”）黑暗条件。 （2）据图一分析，驱动ATP合成所需的能量直接来自________，在还原的过程中除需要ATP水解为其提供能量外，还需要NADPH为该过程________。 （3）M1蛋白是PSⅡ的核心蛋白。研究发现，在高温强光（HH）条件下，过剩的光能会损伤M1蛋白，进而影响植物的光合作用。为研究HH对番茄光合作用的影响，研究人员进行了相关实验，结果如图二所示。据图二可知，HH条件下，过剩光能产生的原因不是气孔因素引起的，依据是________________，而是由于________，使合成速率下降，导致光反应产物积累，使光能转化效率降低造成光能过剩，对植物造成危害。 （4）研究发现，M1蛋白周转和叶黄素循环是植物应对高温高光强条件的重要保护机制。研究人员利用长势一致的番茄植株，随机均分为四组，并进行处理：A组在适宜温度和光照强度下培养；B组________；C组在HH条件下培养，并用叶黄素循环抑制剂（DTT）处理；D组在HH条件下培养，并用M1蛋白周转抑制剂（SM）处理。结果如图三所示。据图三分析，在HH条件下，M1蛋白周转比叶黄素循环对番茄植株的保护作用________（选填“强”或“弱”） 【答案】（1） ①. 类囊体薄膜 ②. 不需要 （2） ①. 膜两侧H+浓度差产生的电化学势能 ②. 提供能量，同时作为还原剂 （3） ①. 气孔开度降低，但胞间CO2浓度却升高（或胞间CO2浓度升高） ②. RuBP羧化酶活性下降 （4） ①. 在HH条件下培养（并用清水处理） ②. 强 【解析】 【小问1详解】 图一生物膜参与光合作用光反应过程，故该生物膜为类囊体薄膜，RuBP羧化酶参与暗反应过程，该酶的激活不需要黑暗条件。 【小问2详解】 据图一分析，驱动ATP合成所需的能量直接来自膜两侧H+浓度差产生的电化学势能，还原的过程中除需要ATP水解为其提供能量外，还需要NADPH为该过程提供能量，同时作为还原剂。 【小问3详解】 为研究HH对番茄光合作用的影响，实验的自变量是温度和光照强度，图二数据显示HH组与对照组相比，气孔导度下降，但胞间CO2浓度却上升，说明过剩光能产生的原因不是气孔因素引起的，而是由于RuBP羧化酶的活性降低，该酶可以催化CO2固定，所以C3的合成速率下降，导致光反应产物积累，进而使光能转化效率降低而造成光能过剩，对植物造成危害。 【小问4详解】 M1蛋白周转和叶黄素循环是植物应对高温高光强条件的重要保护机制。研究人员利用番茄植株进行了四组处理：A组在适宜温度和光照强度下培养，由于B组的光合效率比A组（对照组）更低，但比C组与D组都更高，故B组的处理方式为：在HH条件下培养，并用清水处理。据图可知，与对照比，SM和DTT处理下番茄光合效率下降，且SM处理组下降得更多，因此在HH条件下，M1蛋白周转比叶黄素循环对番茄植株的保护作用更强。 18. 人类表皮因子受体（HER-2）会在某些乳腺癌细胞中合成，该类癌细胞称为HER-2阳性乳腺癌细胞，恩美曲妥珠是一种靶向HER-2的抗体-药物偶联物（ADC），是曲妥珠单抗和药物美坦新的偶联物。制备ADC的过程如图所示，请回答下列问题。 （1）该过程涉及的动物细胞工程技术有________。 （2）制备单克隆抗体的过程中，灭活的病毒可以使细胞相互凝集，细胞膜上的________分子重新排布，进而促进细胞融合。 （3）③过程需对得到的杂交瘤细胞进行________和________，经多次筛选，以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 （4）图中获得的单克隆抗体经过过程④制备成ADC，图中ADC中代表曲妥珠单抗的是________（填“a”或“b”），其主要作用是__________________。 【答案】（1）动物细胞培养技术、动物细胞融合技术 （2）蛋白质和脂质（或蛋白质和磷脂） （3） ①. 克隆化培养 ②. 抗体检测 （4） ①. a ②. 发挥靶向运输作用（即通过特异性结合靶细胞表面抗原将连接的药物输送到靶细胞） 【解析】 【小问1详解】 图示为抗体-药物偶联物（ADC）制备过程，该过程涉及的动物细胞工程技术有动物细胞培养技术和动物细胞融合技术。 【小问2详解】 灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用， 使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，进而促进细胞融合。 【小问3详解】 单克隆抗体的制备过程中需要两次筛选，③过程需对得到的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 【小问4详解】 图中ADC中代表曲妥珠单抗的是a，a通过特异性结合靶细胞表面抗原将连接的药物输送到靶细胞，即发挥靶向运输作用。 19. 某种物质X（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。请分析并回答下列问题： （1）该实验中，培养基灭菌前需将pH调至________。实验时，一般对配制的培养基采用________方法进行灭菌，乙培养基中的Y物质是________。 （2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释________倍，该方法统计出的结果往往比实际值________（偏大/不变/偏小）。 （3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的X超过某一浓度时，某菌株对X的降解量反而下降，其原因可能是_______________________。 【答案】（1） ①. 中性或微碱性 ②. 高压蒸汽灭菌 ③. 琼脂 （2） ①. 104 ②. 偏小 （3）X的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长（或X的浓度过高导致渗透压升高，抑制菌株生长） 【解析】 【小问1详解】 细菌适宜生长pH为中性/微碱性，因此培养细菌时需要将培养基的pH调至中性或微碱性；实验室对培养基的灭菌常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。乙培养基为稀释涂布接种的培养基，属于固体培养基，结合题干“甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y”，说明X应能为细菌提供碳源和氮源，则Y物质是琼脂（凝固剂）。 【小问2详解】 利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数不超过200，假设稀释倍数为a，在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液，则有200×a÷0.1=2×107，则稀释倍数a=104。由于当两个或多个菌体连在一起生长时，平板上形成的是一个菌落，因此用稀释涂布平板法进行菌体计数时，统计出的结果比实际值一般会偏小。 【小问3详解】 在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的X超过某一浓度时，某菌株对X的降解量反而下降，其原因可能是X的浓度超过某一值时，此时外界溶液浓度大于细菌细胞内的浓度，导致细菌细胞由于渗透作用失水过多，从而抑制菌株的生长。 20. 种子休眠是抵御穗发芽的一种机制。通过对Ti质粒的改造，利用农杆菌转化法将Ti质粒上的T-DNA随机整合到小麦基因组中，筛选到2个种子休眠相关基因的插入失活纯合突变体。与野生型相比，突变体种子的萌发率降低，小麦基因组序列信息已知。 （1）农杆菌在自然条件下侵染________植物，其含有的Ti质粒上与其在农杆菌中的复制能力相关的结构为________。 （2）选用图甲中的SmaⅠ对抗除草剂基因X进行完全酶切，再选择SmaⅠ和________对Ti质粒进行完全酶切，将产生的黏性末端补平，补平时使用的酶是________。利用DNA连接酶将酶切后的包含抗除草剂基因X的片段与酶切并补平的Ti质粒进行连接，构建重组载体，转化大肠杆菌；经卡那霉素筛选并提取质粒后再选用限制酶________进行完全酶切并电泳检测，若电泳结果呈现________个条带，较短的条带长度近似为________bp，则一定为正向重组质粒。 （3）为证明这两个突变体是由于T-DNA插入到小麦基因组中同一基因导致的，提取基因组DNA，经酶切后产生含有T-DNA的基因组片段（图乙）。在此酶切过程中，限于后续PCR难以扩增大片段DNA，最好使用识别序列为________（填“4”“6”或“8”）个碱基对的限制酶，且________中应不含该酶的酶切位点。需首先将图乙的片段________，才能利用引物P1和P2成功扩增未知序列。PCR扩增出未知序列后，进行了一系列操作，其中可以判断出2条片段的未知序列是否属于同一个基因的操作为________（填“琼脂糖凝胶电泳”或“测序和序列比对”）。 【答案】（1） ①. 双子叶和裸子植物 ②. 复制原点 （2） ①. Xba I ②. DNA聚合酶 ③. Sma I和Spe I ④. 2 ⑤. 550 （3） ①. 4 ②. T-DNA中 ③. 环化 ④. 测序和序列比对 【解析】 【小问1详解】 农杆菌在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，其含有的Ti质粒上与在农杆菌中复制能力相关的结构为复制原点，复制原点是质粒在宿主细胞中复制的关键结构。 【小问2详解】 根据Sma I限制酶识别序列可知，酶切形成的是平末端，若质粒仅用Sma I酶切，抗除草剂基因和质粒可以正向接入也可以反向接入，且无法区分，为了确定是否是正向重组质粒，因此在构建重组质粒时需要用到另一种限制酶，抗除草剂因需要插入到启动子和终止子之间，因此不能选择BamH I，因为该限制酶会破坏终止子，因此可选择Xba I和Sma I进行酶切，Xba I酶切会形成黏性末端，需要用DNA聚合酶聚合脱氧核糖核苷酸单体将产生的黏性末端补平（可使重组质粒最小，同时Pst I酶切后产生的黏性末端无法用DNA聚合酶抹平，因为DNA聚合酶只能从3'延伸子链）。利用DNA连接酶将酶切后的包含抗除草剂基因X的片段与酶切并补平的Ti质粒进行连接，构建重组载体，转化大肠杆菌。重组的T-DNA片段上含有一个Sma I酶切位点和一个Spe I酶切位点，可以选择用Sma I和Spe I进行酶切，转录的方向是从模板的3'→5'，和质粒对应的方向相同，经过两种酶的酶切后并电泳呈现一长一短2条带，较短的条带长度近似为550bp，若反向接，较短的条带长度近似为200bp。 【小问3详解】 为使后续PCR能扩增大片段DNA，最好使用识别序列为4个碱基对的限制酶，因为4个碱基对的限制酶识别序列出现的概率相对较高，能得到较合适长度的片段；且T-DNA中应不含该酶的酶切位点，避免破坏T-DNA结构。需首先将图乙的片段环化，才能利用引物P1和P2成功扩增未知序列。判断2条片段的未知序列是否属于同一个基因的操作是测序和序列比对，通过对序列的测定和比对来确定。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $