2025-2026学年 高二生物下学期期末自编模拟卷（人教版：选三模块）

**基本信息** 本试卷聚焦高二生物选三模块，以基因工程、细胞工程、发酵工程为核心，融合iPS细胞治疗、PET降解菌分离等科技前沿及酸奶制作、泡菜发酵等生活实践，通过真实情境考查科学思维与探究实践能力。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|15/30|动物细胞融合、单克隆抗体、限制酶|如第6题结合iPS细胞治疗镰状细胞贫血，考查细胞分化与应用| |不定项|5/15|胚胎工程、乳酸菌发酵|如17题分析泡菜腌制中乳酸菌数量变化，体现生命观念| |非选择|5/55|基因工程操作、原生质体融合、微生物计数|如22题转基因菊花培育整合农杆菌转化与PCR检测，21题酸奶乳酸菌计数考查实验设计与误差分析，突出探究实践|

2025-2026学年 高二生物下学期期末模拟卷（人教版：选三模块） （答案解析附后页） 1、 单选题（共15小题，每小题2分，共30分） 1．下列关于动物细胞融合的说法，错误的是(      ) A.常用于诱导动物细胞融合的方法有灭活病毒诱导法、紫外线照射法等 B.动物细胞融合就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 C.动物细胞融合可用于染色体上的基因定位 D.动物细胞融合的原理是细胞膜具有一定的流动性 2．很多生活实例中蕴含着生物学原理，下列相关说法不准确的是(      ) A.酿酒时先来“水”后来“酒”——酵母菌先进行有氧呼吸后进行无氧呼吸 B.夏天开瓶后的红酒容易变酸——醋酸菌将乙醇直接转化为醋酸 C.制作泡菜时加入“老汤”——“老汤”中含纯度较高的乳酸菌，可加速发酵 D.含抗生素的牛奶无法用来制成酸奶——抗生素会抑制乳酸菌生长、繁殖 3．下图为单克隆抗体制备过程的示意图。下列相关叙述，正确的是(      ) A.每个脾B淋巴细胞可产生多种抗体 B.细胞融合可使用灭活病毒，灭活病毒的抗原结构依然存在 C.细胞筛选和细胞融合时所用的培养液在成分上相同 D.克隆化培养过程中杂交瘤细胞会出现接触抑制的现象 4．获取纯净微生物的关键在于无菌技术，主要包括消毒和灭菌。下列相关叙述错误的是(      ) A.牛奶一般通过100℃煮沸5~6min来消毒 B.紫外线照射30min可以杀死物体表面的微生物 C.配制好的培养基应采用湿热灭菌法进行灭菌 D.接种环、试管口通过灼烧灭菌法进行灭菌 5．通过植物细胞工程技术，可利用甲高产不耐盐、乙低产耐盐的两种二倍体植物培育高产耐盐的杂种植株，实验流程如图所示。下列叙述正确的是(      ) A.①过程利用了酶的专一性，获得的原生质体结构与动物细胞相同 B.诱导形成②的方法有聚乙二醇(PEG)融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等 C.目的植株相对于甲、乙而言发生了染色体结构变异 D.由④到目的植株需进一步筛选的原因是④中可能含有低产耐盐品种 6．科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，称为诱导多能干细胞(iPS细胞)，并用iPS细胞治疗了小鼠的镰状细胞贫血。下列推测错误的是(      )。 A.iPS细胞的分化程度低于小鼠成纤维细胞 B.这一过程类似于植物细胞的再分化过程 C.iPS细胞经诱导可以定向分化成红细胞 D.iPS细胞诱导产生的特定细胞，可在新药的测试中发挥作用 7．在反刍动物瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能以尿素为唯一氮源。某小组计划从牛瘤胃中分离出该类微生物进行研究，如图为实验所用的培养基配方。下列说法正确的是(      ) A.该培养基为固体培养基，倒平板操作后，进行高压蒸汽灭菌 B.该培养基上只有尿素分解菌能够存活，因而长出的菌落无须菌种鉴定 C.接种针可以通过灼烧灭菌，灼烧时使用酒精灯的内焰效果更好 D.尿素分解菌能够使培养基的pH升高，可据此初步确定所需菌种 8．黑茶是一种后发酵茶，通常用采摘的鲜茶经过数道工序制成，富含多肽、氨基酸、维生素等营养物质。黑茶刚制成时有酒香气，滑润甘甜，保存时间越久的老茶，茶香味越浓厚。下列叙述错误的是(      ) A.黑茶制作过程主要利用酵母菌等多种微生物进行发酵 B.发酵过程中发酵条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢途径 C.黑茶发酵可以将蛋白质、纤维素等大分子转化成小分子有机物 D.新茶发酵完成后要进行灭菌并密封，有利于茶的长期保存 9．对下图所示黏性末端的相关说法，错误的是(      ) A.图甲、乙、丙所示的黏性末端是由三种不同的限制酶催化产生的 B.图甲、乙所示的黏性末端可连接，形成重组DNA分子，但图甲、丙所示的黏性末端不能连接 C.DNA连接酶作用位点在b处，催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键 D.切割产生图甲所示黏性末端的限制酶不能识别由图甲、乙所示黏性末端形成的重组DNA片段 10．质粒是基因工程中常用的基因载体，下列哪项不是质粒作为基因载体必需的(      ) A.具控制质粒转移的基因 B.具标记基因 C.具多个限制酶的单切点 D.具有终止密码 11．植物细胞工程的几项应用如图所示，下列相关叙述正确的是(      ) A.若外植体为茎尖分生组织，则脱毒植株a有抗病毒能力 B.除植株b、c外，另两类植株的基因型一般与外植体相同 C.突变体植株c的获得说明该过程中能发生定向突变 D.若外植体为花粉，则得到单倍体植株b的过程即单倍体育种 12．聚对苯二甲酸乙二酯醇(PET)是世界上应用最广泛的人造合成塑料之一，但其在自然环境中不易降解，对生态环境造成了巨大的威胁。研究人员从富含PET的土壤中采样，通过选择培养基富集PET降解菌，然后用适宜的培养基进行分离和纯化。下列叙述正确的是(      ) A.富集培养PET降解菌时，适宜选用以PET为唯一碳源的固体培养基 B.选择培养前，从富含PET的土壤中采集的样本和培养基均需进行灭菌处理 C.与平板划线法相比，稀释涂布平板法既可分离菌种，又可测定菌种的数量 D.纯化的PET降解菌通常直接投入自然环境，以快速评估其降解PET的效率 13．用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是(      ) A.若用PvuI酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 B.若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 C.若用SphI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定目的基因与质粒是否正确连接 D.受体菌本身应不具有对这两种抗生素的抗性 14．如图表示含有目的基因D的DNA片段中部分序列。现有BamHI、MboI、SmaI3种限制性内切核酸酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为-G↓GATCC-、-↓GATC-、-CCC↓GGG-。若图中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，则基因D突变为基因d。下列叙述错误的是(      ) A.限制性内切核酸酶的作用位点是磷酸二酯键 B.上述3种酶中，能切割产生平末端的酶是SmaI C.经BamHI和MboI切割后得到的DNA片段可以相互连接，且连接后仍能被MboI切割 D.从杂合子中分离出D和d基因，用SmaI完全切割后，共有3种不同长度的DNA片段 15．下图1和图2表示利用患者自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞(iPS细胞)类似于人类的胚胎干细胞。下列叙述正确的是(      ) A.两种方法所得组织器官的遗传物质均与患者完全相同 B.可利用农杆菌转化法或显微注射法将相关基因导入成纤维细胞 C.两种方法都需在诱导分化的过程中调整培养基中激素的种类和比例 D.两种方法都需要将细胞置于含有95%O2和5%CO2的CO2培养箱中 二、不定项（共5小题，每小题3分，共15分） 16．科学家通过如图流程成功克隆出“中中”和“华华”，攻克了当时技术无法通过体细胞克隆非人灵长类动物的世界难题，为建立人类疾病的动物模型、研究疾病机理、研发诊治药物等带来光明前景。下列叙述正确的是(      ) A.将乙猕猴的卵母细胞培养至MII期，具备支持细胞核全能性表达的物质和环境 B.对代孕猕猴丙进行同期发情处理，可为供体胚胎移入受体提供相同的生活环境 C.可用电刺激、蛋白酶合成抑制剂等激活重构胚，使其完成细胞分化和发育进程 D.过程③还可以通过将囊胚的内细胞团均等分割，从而提高胚胎的数量与成活率 17．下列有关泡菜制作过程中，不同时期泡菜坛中乳酸菌含量的叙述，正确的是(      ) A.制作泡菜初期并无乳酸菌存在 B.腌制过程中乳酸菌的数量会逐渐增多并达到最高峰 C.腌制后期乳酸菌的数量会下降 D.腌制的全过程乳酸菌的数量不变，活性有变化 18．乳酸链球菌素（Nisin）是乳酸链球菌分泌的一种抗菌肽。研究者对Nisin发酵生产过程相关指标进行了检测，结果如图。下列叙述正确的是(      ) A.适度提高乳酸链球菌接种量可缩短Nisin发酵生产周期 B.发酵的中后期适量补加蔗糖溶液可促进菌体生长 C.向发酵罐内适时适量添加碱溶液可提高Nisin产量 D.发酵结束后主要通过收获并破碎菌体以分离获得Nisin产品 19．能进行原生质体融合的生物种类极为广泛，不仅包括植物细胞，而且还包括各种微生物。科学家选用两株具有特殊价值且有选择性遗传标记的真菌作为亲本菌株。如图为进行原生质体融合获得具有双亲优良性状的融合子过程，相关叙述错误的有(      ) A.①可加入纤维素酶和果胶酶去除细胞壁获得原生质体 B.②可加入PEG进行诱导融合，该过程需要在等渗或略高渗溶液中进行 C.③应接种到能促使融合子再生细胞壁和进行细胞分裂的培养基上 D.④通过检验、筛选出合格的菌株细胞中具有来自亲本的2个细胞核 20．杂交瘤细胞在培养过程中会随机丢失来自B淋巴细胞的染色体。研究者将经已免疫的B淋巴细胞，用EBV（一种病毒颗粒）感染，使其“染色体核型稳定”。如图表示制备抗A抗原单克隆抗体制备的部分过程，不考虑基因互作和其他变异。下列叙述正确的是(      ) 注：EBV转化细胞能够在选择培养基X中存活，但对乌本苷敏感，骨髓瘤细胞在选择培养基X中不能存活，对乌本苷不敏感。①～⑤代表相关过程，a～g代表相关细胞。 A.①向小鼠多次注射A抗原后从脾脏中获得大量a细胞 B.③用不含乌本苷的选择培养基X筛选融合的杂交瘤细胞 C.⑤过程中通过离心获得的培养液中可获得抗A抗原的单克隆抗体 D.若未用EBV感染a细胞，通过研究g中细胞可对抗体基因初步定位 三、非选择题：本题共5小题，共55分 21．酸牛奶是以优质鲜牛奶为原料，添加活性乳酸菌经发酵后制成的。因活性乳酸菌能调节肠道菌群平衡，且鲜牛奶经发酵后，其营养物质如蛋白质、脂肪、乳糖等能得到部分分解，易被人体吸收，具有一定的营养保健功能。有些国家将乳酸菌的活菌数量作为区分酸奶质量的重要依据。请回答： 蛋白胨 10.0 牛肉浸粉 5.0 酵母浸粉 4.0 葡萄糖 20.0 磷酸氢二钾 2.0 柠檬酸三铵 2.0 醋酸钠 5.0 硫酸镁 0.2 硫酸锰 0.05 琼脂 15.0 吐温80 1.0 （1）将样品接种于MRS培养基中，让乳酸菌生长并形成可计数的菌落。MRS培养基的成分（g/L）如表所示，蛋白胨为乳酸菌的生长提供________________。配制好的培养基需用________________方法进行灭菌。 （2）某同学采用如下操作研究某品牌酸奶中的乳酸菌含量。 ①移取10mL充分摇匀的检样于含有90mL生理盐水的广口瓶内制成1：10的均匀稀释液。 ②用1mL移液管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL生理盐水0的试管内。 ③另取1mL移液管，按上述操作顺序，作梯度稀释，每稀释一次，换用1支移液管。 ④将冷至50℃的MRS培养基注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。 ⑤选择3个适宜稀释度，分别移取0.1mL稀释液涂布，每个稀释度做3个平行重复。 ⑥待琼脂凝固后，翻转平板，置于恒温厌氧培养箱内培养48h取出，观察乳酸菌菌落特征，选取菌落数在30~300之间的平板进行计数。 上述操作存在的主要错误有两个，分别是________________；________________。 （3）若该同学培养和操作正确，在检样为10-4的稀释液接种平板上，生成的可疑菌落平均为30个，随机取10个鉴定，证实的乳酸菌有8个，则1mL检样中乳酸菌数为________________个。 （4）酸奶中乳酸菌的含量还可采用显微计数法，与上述方法相比，显微计数法统计的乳酸菌含量可能________________（填“多”“少”或“大体相当”），原因是________________。 22．菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。如图是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答下列问题： 注：卡那霉素抗性基因（kanR）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感。 (1)为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用Ca2+处理农杆菌，目的是使其处于____________状态。 (2)将重组质粒导入农杆菌的目的是利用农杆菌能够____________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的____________，最终形成转基因植株 (3)将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。 (4)用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据____________的核苷酸序列设计特异引物，以____________为模板进行第一轮扩增。PCR的产物一般通过____________来鉴定，在凝胶中DNA分子的迁移速率与______DNA分子的大小和____________等有关。利用添加____________的凝胶对PCR。产物进行电泳后，在____________下观察结果。 23．紫花苜蓿被誉为“牧草之王”，其营养价值位列各种牧草之首，但耐酸性差，青饲易造成家畜臌胀病；百脉根又称“瘠地苜蓿”，耐酸性强，因富含缩合单宁，饲喂时可防止家畜臌胀病的发生。某研究人员选择紫花苜蓿体细胞(基因型为Aaaa)和百脉根体细胞(基因型为YYrr)，设计了下列技术路线，以获得抗臌胀病的新型苜蓿。回答下列问题： (1)杂种植株的培育所涉及的原理有________________。植物体细胞杂交技术的研究在________(意义)，培育植物新品种等方面，取得了巨大突破。 (2)②过程表示将该植物的两个原生质体进行融合，融合前常用化学试剂________________进行诱导。融合后得到的杂种细胞其基因型为________________，含有________________个染色体组。在培养基配制时，加入一定量蔗糖，蔗糖的作用是________________。还需加入一定比例的________(激素)才能获得愈伤组织。 (3)该植物富含缩合单宁，缩合单宁不是其生长和生存所必需的产物，属于________________代谢物，可利用________________技术工厂化生产缩合单宁。 24．蓝莓酸甜宜人、细腻多汁、气味清香,如图是以鲜蓝莓为原料天然发酵制作蓝莓酒和蓝莓醋的过程简图。结合图形和相关知识回答下列问题 (1)制作蓝莓酒的微生物来自________,因此过程①冲洗时不要过度冲洗,防止该微生物被冲洗掉,该微生物的呼吸类型是________型。 (2)在过程③发酵阶段,发酵罐要预留1/3的空间,原因是:________(至少答1点)。 (3)酿制蓝莓醋的微生物是________,在糖源不足时它能将乙醇变为醋酸,对应的化学反应简式为________。 (4)在酿制蓝莓酒的过程中出现酒变酸的原因是________,同时在酒的表面观察到的________就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。 (5)果汁发酵后是否有酒精产生,可以在酸性条件下,用________溶液来检验,若出现________色,则说明有酒精产生。 25．BCL11A蛋白是一种转录抑制因子，能与γ珠蛋白基因启动子上游的调控序列中特异性结合位点结合，抑制γ珠蛋白基因的表达。为确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员利用下列多对引物扩增了γ珠蛋白基因上游7种不同长度的片段，分别将这些片段插入载体中并导入受体细胞，一段时间后进行荧光检测，相关信息如图所示。请回答： (1)PCR扩增γ珠蛋白基因上游不同长度的片段过程中，在缓冲体系除需要加入Mg2+和模板外，还需要添加的主要成分有________________________________________(至少答两点)。PCR每次循环要经历变性、复性(退火)和延伸三步，其中复性的目的是________________________________________。 (2)载体上P的基本组成单位是______________________________，启动子的作用是________________________________________________。 构建成功的基因表达载体上荧光蛋白基因和BCL11A基因转录时的模板链______(填“是”或“不是”)在同一条DNA链上。据图可知，为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，切割质粒载体用的限制酶是____________________________，要在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是__________________，在R末端添加的序列所对应的限制酶是________________________。 (3)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞后，含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞均有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白，无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白的原因是________________________________________________________________________。 (4)若BCL11A蛋白结合位点位于引物F3与F4在调控序列上所对应序列之间的区段上，若向培养液中添加适量的雌激素，则含__________________(选填“F1~F6”)与R扩增产物的受体细胞有荧光。 参考答案 1．答案：A 解析：A.常用于诱导动物细胞融合的方法有灭活病毒诱导法、PEG融合法、电融合法等，紫外线照射法不能用于诱导细胞融合，A错误； B.将两个或多个动物细胞融合后，形成了具有原来两个或多个细胞的遗传信息的细胞，该细胞即为杂交细胞，B正确； C.动物细胞融合技术可通过染色体选择性丢失与筛选机制实现基因定位，C正确； D.动物细胞融合的基础是细胞膜可以发生融合，原理是细胞膜具有一定的流动性，D正确。 2．答案：B 解析：A、酿酒初期容器内有氧气，酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，氧气耗尽后酵母菌进行无氧呼吸产生酒精，因此会出现先产生水（有氧呼吸产物）后产生酒的现象，A正确； B、醋酸菌发酵分为两个阶段，首先将乙醇转化为乙醛，再将乙醛进一步转化为醋酸，并非直接将乙醇转化为醋酸，B错误； C、制作泡菜加入的“老汤”中含有大量活性乳酸菌，相当于接种菌种，能够加快泡菜的发酵速率，C正确； D、抗生素具有抑制或杀死细菌的作用，乳酸菌属于细菌，因此含抗生素的牛奶会抑制乳酸菌的生长繁殖，无法制作酸奶，D正确。 故选B。 3．答案：B 解析：A、每一个浆细胞（脾B淋巴细胞）具有特异性，只能产生一种特异性抗体，不能产生多种抗体，A错误； B、动物细胞融合可使用灭活病毒诱导，灭活只是破坏病毒的侵染能力，病毒表面的抗原结构依然保留，能够介导细胞融合，B正确； C、细胞融合阶段使用普通动物细胞培养液，细胞筛选阶段使用选择性培养基（如HAT培养基），二者成分存在明显差异，C错误； D、杂交瘤细胞继承了骨髓瘤细胞无限增殖的特点，不会出现接触抑制，可以无限传代培养，D错误。 故选B。 4．答案：A 解析：A、牛奶消毒常用巴氏消毒法，分为两种方式，一种是70~75℃煮30min，另一种是80℃煮15min；100℃煮沸5~6min属于煮沸消毒法，该方法会破坏牛奶中的营养成分，一般不用于牛奶消毒，A错误； B、紫外线可以破坏微生物的DNA结构，紫外线照射30min能够有效杀死物体表面以及空气中的微生物，常用于无菌室、超净工作台的消毒，B正确； C、配制好的培养基常规采用高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）进行灭菌，该方法灭菌彻底，适用于液体、固体培养基，C正确； D、接种环、试管口、培养瓶口等器具和部位，通常采用灼烧灭菌法，利用高温瞬间杀死全部微生物及其芽孢、孢子，D正确。 故选A。 5．答案：D 解析：A、①过程为去除植物细胞壁，使用纤维素酶和果胶酶，利用了酶的专一性；植物原生质体无细胞壁，但含有液泡、叶绿体等植物细胞特有的结构，和动物细胞结构不同，A错误； B、植物原生质体融合的诱导方法分为物理法（聚乙二醇PEG融合法、电融合法）和化学法，灭活病毒诱导法仅用于动物细胞融合，不能用于植物原生质体融合，B错误； C、甲、乙为二倍体植物，二者原生质体融合后形成的杂种细胞，染色体数目为两者之和，属于染色体数目变异，并非染色体结构变异，C错误； D、④为融合后的杂种细胞发育形成的愈伤组织或幼苗，融合过程中可能出现不同融合类型，因此需要进一步筛选，淘汰低产耐盐、高产不耐盐的个体，保留高产耐盐的目的植株，D正确。 故选D。 6．答案：B 解析：A、iPS细胞为诱导多能干细胞，干细胞分化程度低、分裂能力强；小鼠成纤维细胞是高度分化的体细胞，因此iPS细胞分化程度低于成纤维细胞，A正确； B、该过程是将高度分化的成纤维细胞诱导为干细胞，属于脱分化过程；植物细胞的再分化是由愈伤组织分化为根、芽等器官，二者过程不同，B错误； C、iPS细胞具有多向分化潜能，可以经过定向诱导分化形成红细胞，用于治疗镰状细胞贫血，C正确； D、利用iPS细胞诱导形成的特定体细胞，可以用于新药毒性、药效的测试，减少实验动物的使用，D正确。 故选B。 7．答案：D 解析：A、培养基配制流程为先灭菌再倒平板，若倒平板后再高压蒸汽灭菌，会导致培养基凝固、平板碎裂，无法正常使用；该培养基添加了琼脂，属于固体培养基，A错误； B、该培养基以尿素为唯一氮源，能生长的主要是尿素分解菌，但也可能存在少数可以利用空气中氮气的固氮微生物，因此长出的菌落仍需要进一步菌种鉴定，B错误； C、接种针灼烧灭菌时，应使用酒精灯外焰，外焰温度最高，灭菌效果最好，内焰温度较低，灭菌不彻底，C错误； D、尿素分解菌可产生脲酶，将培养基中的尿素分解为氨，氨会使培养基的pH升高，可借助pH变化初步鉴别尿素分解菌，D正确。 故选D。 8．答案：D 解析：A、黑茶制作属于微生物后发酵过程，主要依靠酵母菌、霉菌等多种微生物协同发酵完成，A正确； B、微生物的生长繁殖、代谢途径都受温度、氧气、pH等发酵条件影响，发酵条件改变会直接改变微生物的代谢活动，B正确； C、茶叶中含有蛋白质、纤维素等大分子有机物，发酵过程中微生物产生的酶可将这些大分子逐步分解为多肽、氨基酸、单糖等小分子有机物，提升茶叶口感与营养，C正确； D、新茶发酵完成后若进行灭菌处理，会杀死茶叶中继续进行后发酵的微生物，老茶的风味依靠后续缓慢发酵形成，因此不能灭菌，只需密封保存即可，D错误。 故选D。 9．答案：C 解析：A、三种黏性末端的碱基序列不同，识别序列不同，是由三种不同的限制酶催化切割产生，A正确； B、甲和乙的黏性末端碱基可以互补配对，能够连接形成重组DNA；甲和丙的黏性末端碱基无法互补，不能连接，B正确； C、b处为碱基对之间的氢键，DNA连接酶作用于磷酸二酯键（图中a位置），不作用于氢键，C错误； D、甲、乙连接形成的重组DNA片段，碱基序列发生改变，原切割甲的限制酶无法识别新的序列，不能再次切割，D正确。 故选C。 10．答案：D 解析：A、质粒作为运载体，需要具备控制质粒转移的基因，便于将外源基因导入受体细胞，是运载体必备条件，A不符合题意； B、标记基因（如抗生素抗性基因、荧光标记基因）可用于筛选含有外源基因的受体细胞，是质粒作为载体的必备条件，B不符合题意； C、具有多个限制酶单一切点，便于插入不同的外源DNA片段，是运载体的必备条件，C不符合题意； D、终止密码子位于mRNA上，作用是终止翻译过程；质粒为环状DNA分子，DNA上存在终止子（终止转录），不存在终止密码子，该条件不是质粒作为载体的要求，D符合题意。 故选D。 11．答案：B 解析：A、茎尖分生组织细胞几乎不含病毒，培育得到脱毒植株，但脱毒植株≠抗病毒植株，脱毒植株只是体内无病毒，依然会被病毒侵染。A错误。 B、植株a（脱毒苗）、植株c（突变体）、利用体细胞培养的植株，基因型与外植体一致；植株b是花粉培育的单倍体，染色体数目减半、基因型改变；还有杂交获得的植株基因型也会改变。因此除植株b、c外，其余植株基因型一般和外植体相同。B正确。 C、基因突变具有不定向性，利用植物组织培养获得突变体，变异方向无法人为控制，不能发生定向突变。C错误。 D、外植体为花粉，培养得到单倍体植株，该过程只是花药离体培养；单倍体育种还需要后续用秋水仙素处理单倍体幼苗，使染色体数目加倍，因此该过程不等于完整的单倍体育种。D错误。 故选B。 12．答案：C 解析：本题考查微生物的分离、纯化与选择培养等微生物培养相关实验知识点。 A、富集培养PET降解菌时，目的是增加目标菌的数量，一般选用液体选择培养基；固体培养基多用于菌种的分离、纯化和计数。因此A错误； B、采集的土壤样本中含有目标菌种，若对土壤样本灭菌，会杀死PET降解菌，实验无法进行；实验中只需要对培养基、培养器具进行灭菌处理。因此B错误； C、平板划线法主要用于分离纯化菌种，无法统计活菌数量；稀释涂布平板法既可以实现菌种的分离纯化，也能通过统计单菌落数计算活菌数目。因此C正确； D、纯化后的PET降解菌不能直接投入自然环境，需要先进行安全性评估、小范围试验，避免造成生态失衡。因此D错误。 故选C。 13．答案：C 解析：A.若用PvuI酶切，则破坏了氨苄西林抗性基因，导入普通质粒和重组质粒的受体菌形成的菌落都具有抗四环素的能力，都能在含Tet（四环素）培养基中生存，A正确； B.若用HindⅢ酶切，目的基因可能会以不同的方向插入质粒，因此目的基因转录的产物可能不同，B正确； C.若用SphI酶切，目的基因可以和质粒进行正向拼接或反向拼接，但两种拼接方式形成的重组DNA分子碱基对数量相等，电泳形成的条带是一样的，因此不可通过DNA凝胶电泳技术鉴定目的基因与质粒是否正确连接，C错误； D.我们利用氨苄西林或四环素来对受体菌进行筛选，首要条件就是受体菌本身应不具有对这两种抗生素的抗性，若受体菌本身有抗性，则无论是否成功导入质粒，受体菌都能在相应抗生素的培养基中活下来，D正确。 14．答案：D 解析：A、限制酶切割DNA磷酸二酯键，A错误； B、SmaI平末端切割（CCC↓GGG），BamHI、MboI黏性末端，B错误； C、BamHI（G↓GATCC）和MboI（↓GATC）切割后黏性末端互补，可连接；连接后序列为GGATCC，仍能被MboI切割，C错误； D、杂合子D/d，D含SmaI酶切位点，突变后d无；SmaI切割后产生2种片段，D正确。 故选D。 15．答案：C 解析：A、图2重构胚含患者体细胞核和卵母细胞细胞质，遗传物质与患者不完全相同，A错误； B、农杆菌转化法适用于植物，动物细胞导入基因用显微注射法，B错误； C、诱导干细胞分化需调整培养基中激素种类和比例，调控分化方向，C正确； D、动物细胞培养需95%空气（O2）和5%CO2，非95%O2，D错误。 故选C。 16．答案：ABC 解析： 17．答案：BC 解析：A、蔬菜原料本身附着天然乳酸菌，泡菜制作初期坛内已有乳酸菌，A错误； B、发酵初期营养充足、无氧环境适宜，乳酸菌快速增殖，数量持续上升至峰值，B正确； C、发酵后期乳酸大量积累，pH过低抑制乳酸菌代谢繁殖，菌体大量死亡、数量下降，C正确； D、全程乳酸菌数量先升后降，并非恒定不变，D错误。 故选BC。 18．答案：ABC 解析：图像分析： Nisin为乳酸链球菌的分泌产物，主要存在于发酵液，可采取适当的提取、分离和纯化措施从发酵液中获得Nisin产品，不需要破碎菌体，D错误。 19．答案：AD 解析：真菌细胞壁的主要成分是几丁质，①加入纤维素酶和果胶酶无法去除细胞壁获得原生质体，A错误；可加入PEG进行诱导融合，该过程需要在等渗或略高渗溶液中进行以避免原生质体吸水涨破，B正确；筛选出合格的菌株细胞中来自亲本的2个细胞核已融合为1个细胞核，D错误。 20．答案：ACD 解析：①向小鼠多次注射A抗原获得能产生相应抗体的a细胞（已免疫的B淋巴细胞），A正确；根据图注中“EBV转化细胞能够在选择培养基X中存活，但对乌本苷敏感，骨髓瘤细胞在选择培养基X中不能存活，对乌本苷不敏感”可知，③用含乌本苷的选择培养基X筛选出杂交瘤细胞，B错误；抗体会分泌到细胞外，故⑤过程中通过离心获得的培养液中可获得抗A抗原的单克隆抗体，C正确；由题可知，杂交瘤细胞在传代培养时，来自B淋巴细胞的染色体会随机丢失，从而导致得到的杂交瘤细胞不能产生抗体，故若未用EBV感染a细胞，通过研究g中的细胞可对抗体基因初步定位，D正确。 21．答案：（1）碳源、氮源和维生素等；湿热灭菌 （2）各步骤没有进行无菌操作；没有设置将MRS培养基涂布0.1mL灭菌生理盐水（无菌水）的灭菌平皿作空白对照 （3）2.4×106 （4）多；稀释涂布平板法统计的是活菌形成的菌落数，而显微计数法统计的一般是活菌数和死菌数的总和 解析： 22．答案：(1)一种能吸收周围环境中DNA分子的生理 (2)侵染菊花（或植物）细胞，并将T-DNA（或可转移的DNA）转移至受体细胞（或侵染双子叶植物和裸子植物，并将T-DNA（或可转移的DNA）转移至受体细胞)染色体DNA (3)卡那霉素 (4)抗虫基因（目的基因)转基因菊花的DNA；琼脂糖凝胶电泳；凝胶的浓度；构象；核酸染料；波长300nm紫外灯 解析：（1）用Ca2-处理土壤农杆菌，使其处于感受态，易于吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 （2）农杆菌的Ti质粒上有一段特殊的DNA片段叫T-DNA（可转移DNA），它能在农杆菌侵染植物细胞时，转移并整合到植物细胞的染色体DNA上。因此，我们把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，就能借助农杆菌的侵染能力，把目的基因“送”进植物细胞，并稳定整合到宿主的染色体DNA上，随宿主基因组同步复制、表达。 （3）标记基因是卡那霉素抗性基因（kanᴿ），导入重组质粒的细胞能表达出抗性，在含卡那霉素的培养基上存活；未导入的细胞（菊花本身对卡那霉素敏感）会被杀死。因此培养基中添加卡那霉素，可筛选出成功导入重组质粒的愈伤组织，进而再生为转基因植株。 （4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据目的基因的核苷酸序列设计特异引物，以含目的基因的菊花DNA为模板进行第一轮扩增。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶浓度越高，孔径越小，DNA迁移越慢；DNA分子越小，迁移越快；线性DNA、环状DNA（如质粒）的构象不同，迁移速率也不同（超螺旋环状迁移最快，线性次之，开环最慢）。利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳。核酸染料能嵌入DNA双链，在紫外光下发出荧光，使DNA条带可见。在波长300nm（或260-300nm）紫外灯下观察结果。原因是核酸染料结合DNA后，在紫外光激发下会发出荧光，因此需在紫外灯照射下才能看到DNA条带。 23．答案：(1)细胞膜的流动性、植物细胞的全能性；打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 (2)聚乙二醇(PEG)；AaaaYYrr；6/六；提供碳源(能源或提供营养)或维持渗透压；生长素和细胞分裂素 (3)次生；植物细胞培养 解析：(1)植物体细胞杂交包括原生质体融合和植物组织培养，原生质体融合依赖细胞膜的流动性，植物组织培养依赖植物细胞的全能性。该技术打破物种间生殖隔离，实现远缘杂交育种，克服远缘杂交不亲和障碍，在育种领域意义重大。 (2)原生质体融合常用聚乙二醇（PEG）作为化学诱导剂。紫花苜蓿体细胞基因型Aaaa（4个染色体组）、百脉根体细胞基因型YYrr（2个染色体组），杂种细胞基因型为AaaaYYrr，含6个染色体组。培养基中蔗糖作用：提供碳源（能源物质）、维持培养基渗透压，防止原生质体吸水涨破。植物组织培养需添加生长素和细胞分裂素，二者比例调控愈伤组织形成及分化方向。 (3)缩合单宁不是植物生长必需的代谢产物，属于次生代谢物（次生代谢产物是植物适应环境产生的非必需产物）。利用植物细胞培养技术，在无菌条件下大规模培养杂种植物细胞，工厂化生产次生代谢物缩合单宁。 24．答案：(1)附着在蓝莓皮上的野生酵母菌;兼性厌氧 (2)先让酵母菌进行有氧呼吸,快速繁殖,耗尽O2后,再进行酒精发酵;防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出 (3)醋酸菌;C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量 (4)醋酸菌把酒精转化成乙酸;白色菌膜 (5)重铬酸钾;灰绿 解析：(1)制作蓝莓酒的微生物来自附着在蓝莓皮上的野生酵母菌,因此过程①冲洗时不要过度冲洗,防止酵母菌被冲洗掉,酵母菌既能进行有氧呼吸,又能进行无氧呼吸,故该生物的呼吸类型是兼性厌氧型。 (2)过程③发酵阶段,在缺氧,呈酸性的发酵液中酵母菌能生长繁殖,而绝大多数其它微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。 (3)酿制蓝莓醋的微生物是醋酸菌,是好氧型微生物,故该微生物只有在氧气充足的时候,才能进行旺盛的生理活动;在酿制蓝莓酒的过程中出现酒变酸的原因是醋酸菌把酒精转化成乙酸,同时在酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。 (4)当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将蓝莓汁中的糖分解成乙酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇转化为乙醛,再将乙醛转化为乙酸。 (5)在酸性条件下,重铬酸钾溶液与酒精反应呈现灰绿色,故果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验。 25．答案：(1)dNTP、TaqDNA聚合酶、引物对；使两种引物分别与两条单链DNA结合 (2)(4种)脱氧核苷酸；RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录；不是；MunⅠ和XhoⅠ；SalⅠ；EcoRⅠ (3)F7与R扩增产物不含启动子(调控序列)，荧光蛋白基因不表达 (4)F4、F5、F6 解析：(1)PCR扩增的缓冲体系中，除模板DNA外，还需添加dNTP（脱氧核糖核苷酸，原料）、TaqDNA聚合酶（热稳定DNA聚合酶，催化延伸）、引物对（与模板互补，定位扩增片段）。PCR复性（退火）阶段，温度降低，使两种引物分别与两条单链DNA结合，为后续延伸做准备，保证扩增的特异性。 (2)载体上P为雌激素诱导的启动子，启动子是DNA片段，基本组成单位为**（4种）脱氧核苷酸**。启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动下游基因转录，启动转录过程。荧光蛋白基因和BCL11A基因在载体上的转录方向不同，转录模板链不是同一条DNA链。由图可知，载体上荧光蛋白基因上游为MunⅠ和XhoⅠ酶切位点，为定向插入扩增产物，切割质粒用MunⅠ和XhoⅠ；扩增产物F端需与载体SalⅠ位点连接，故F1~F7末端添加SalⅠ序列；R端需与载体EcoRⅠ位点连接，故R末端添加EcoRⅠ序列。 (3)BCL11A蛋白是转录抑制因子，结合调控序列后抑制荧光蛋白基因表达，受体细胞无荧光；无结合位点时，荧光蛋白基因正常表达，有荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光，说明F7与R扩增产物不含BCL11A蛋白结合的调控序列（启动子上游调控片段缺失），BCL11A蛋白无法结合，荧光蛋白基因不表达。 (4)BCL11A蛋白结合位点位于F3与F4对应序列之间，含F1~F3与R的扩增产物包含结合位点，BCL11A蛋白结合后抑制荧光表达；含F4~F6与R的扩增产物不含结合位点，BCL11A蛋白无法结合，雌激素诱导下荧光蛋白基因正常表达，受体细胞有荧光。 学科网（北京）股份有限公司 $