2025-2026学年高二生物下学期期末自编模拟卷（人教版：选三模块）

**基本信息** 2025-2026学年高二生物下学期期末模拟卷（人教版选三），聚焦基因工程、细胞工程等核心模块，融入CRISPR-Cas9编辑、双特异性抗体制备等科技前沿情境，通过实验分析题考查科学思维与探究实践能力。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|15/30|发酵技术、限制酶切割、动物细胞培养|结合酸奶制作、质粒切割等基础实验，考查生命观念| |不定项|5/5|单克隆抗体制备、限制酶识别序列|通过限制酶对比表格分析，体现科学思维严谨性| |非选择题|5/55|CRISPR-Cas9编辑、原生质体融合、转基因草莓|以基因编辑抗病水稻、反义基因延长储藏期等综合实验设计，突出探究实践与态度责任|

2025-2026学年 高二生物下学期期末模拟卷（人教版：选三模块） （答案解析附后页） 姓名：___________班级：___________考号：___________ 1、 单选题（共15小题，每小题2分，共30分） 1．关于“利用乳酸菌发酵制作酸奶或泡菜”的实验，下列叙述正确的是(      ) A.制作泡菜的菜料不宜完全淹没在煮沸后冷却的盐水中 B.制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌 C.发酵装置需加满菜料或牛奶并封装，以抑制乳酸菌的无氧呼吸 D.控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质 2．用限制酶EcoRⅤ单独切割某普通质粒，可产生14kb(1kb即1000个碱基对)的长链，而同时用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ联合切割该质粒，可得到三种长度的DNA片段，见下图(其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一个黏性末端)。 若用MboⅠ限制酶单独切割该普通质粒，则产生的DNA片段的长度为(      ) A.6和8 B.2.5和11.5 C.14 D.5.5和8.5 3．胎牛血清(FBS)是动物细胞培养过程中最常用的添加剂，但其价格昂贵。我国科学家开展了用价格低廉的蜂王浆主蛋白(MRJPs)部分代替FBS培养中国仓鼠卵巢细胞的研究，结果如下表： 处理 细胞密度(104/mL) 细胞直径μm 细胞圆度 M/F0/100(CK) 32.08 16.29 0.77 M/F25/75 35.48 16.54 0.78 M/F50/50 39.67 17.00 0.75 M/F75/25 27.79 16.63 0.76 M/F100/0 无法正常生长 / / 注：处理M/F25/75代表蜂王浆主蛋白占比25%、胎牛血清占比75%。 下列叙述正确的是(      ) A.在细胞培养过程中需定期对培养液进行更换，以保证环境是无菌、无毒的 B.仓鼠卵巢细胞贴壁生长，传代前需用含胰蛋白酶的无菌水处理分散成单细胞 C.M/F50/50细胞直径显著大于CK，这可能与FBS促进蛋白质合成有关 D.M/F100/0细胞无法正常生长，说明FBS中的一些特殊因子是MRJPs所不具备的 4．为了获得抗白叶枯病的水稻品种，研究人员构建了含有抗病基因D的重组Ti质粒(如图)，通过农杆菌转化法将D基因导入水稻种子诱导的愈伤组织，最终获得抗病植株。下列叙述正确的是(      ) A.水稻愈伤组织细胞中RNA聚合酶无法识别U6启动子 B.愈伤组织再分化获得的含有D基因的幼苗属于抗病植株 C.农杆菌侵染愈伤组织后所用的筛选培养基中需加入潮霉素 D.在含重组Ti质粒的农杆菌中U6启动子能驱动卡那霉素抗性基因表达 5．从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽P1。目前科研人员想在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是(      ) A.合成编码目的肽的目的基因序列 B.依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽 C.构建含目的肽DNA片段的表达载体 D.筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽 6．生物技术的安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列叙述错误的是(      ) A.开展风险评估、预警跟踪和风险管理是保障转基因生物安全的前提 B.我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度 C.反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿 D.生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力 7．图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是(      ) A.步骤①添加盐酸以去除细胞壁 B.步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C.台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养 D.原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 8．谷氨酸发酵生产过程中，获得谷氨酸的条件是(      ) A.无氧、酸性条件 B.有氧、酸性条件 C.有氧、中性或弱碱性条件 D.无氧、中性或弱碱性条件 9．PCR定点突变技术是最常用的基因定点突变技术，通过设计含有非特异性配对碱基的引物，再通过PCR将突变位点引入产物中。右图是PCR定点突变技术流程图，据图分析错误的是(      ) A.该技术需要使用四条引物 B.引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点 C.利用引物1和2需要进行2次PCR可得到DNA片段A D.该技术具有突变回收率高、可在任何位点引入突变的优点 10．“当归补血汤”是出自《内外伤辨惑论》的中药配方，主要组成中药是当归和黄芪，具有一定的补气生血的功效。科研人员想利用现代生物技术将当归与黄芪进行体细胞杂交，培育过程如图所示。下列叙述正确的是(      ) A.过程①需要用纤维素酶或胰蛋白酶处理获得原生质体 B.过程④和⑤的培养基中植物激素的种类和比例相同 C.过程③结束后，形成杂种细胞代表植物体细胞杂交成功 D.过程②可以用聚乙二醇或高Ca2+-高pH溶液诱导融合 11．动物基因工程可利用基因工程技术使哺乳动物成为乳腺生物反应器，以生产所需要的药品，如利用转基因动物生产人的生长激素。科学家培养转基因动物成为乳腺生物反应器时，下列说法正确的是(      ) A.仅仅利用了基因工程一项现代生物技术 B.需要进入泌乳期才能成为“批量生产药物的工厂” C.利用农杆菌转化法将人的生长激素基因导入受精卵中 D.构建基因表达载体时可以用血清蛋白基因的启动子 12．为有效防范由各类生物因子和生物技术误用、滥用等引起的生物性危害，生物安全已纳入国家安全体系。下列叙述正确的是(      ) A.干细胞的利用不涉及伦理和道德问题，可任意运用于治疗多种疾病 B.克隆人会导致社会伦理等问题，我国禁止生殖性克隆和治疗性克隆 C.可以适量生产生物武器，以应对潜在的生物武器的威胁 D.为防止花粉传播带来的基因污染，可将目的基因转入叶绿体中 13．科研人员为实现咖啡渣资源化利用，开发出一款咖啡风味精酿啤酒，生产流程为：麦芽+咖啡渣→粉碎→糖化→过滤→蒸煮→主发酵→后发酵→消毒→终止。图为发酵过程中酒精度的变化情况。下列叙述正确的是(      ) 注：标有不同字母的数据之间存在显著差异，标有相同字母的数据之间无显著差异；酒精度>5.2%vol时达到国家优级标准。 A.糖化是让淀粉分解形成糖浆，蒸煮能够使酶失活并对糖浆灭菌 B.后发酵阶段完成酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成 C.随发酵天数的增加，酒精的产生速率逐渐上升 D.若用于实际生产，图中35天为最佳发酵天数 14．如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是(      ) A.双抗可同时与2种抗原结合 B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞 C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原 D.同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞 15．GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以GFP基因为材料进行设计和改造，获得了能发黄色荧光的蛋白(YFP)，与GFP相比，YFP第203位苏氨酸变为酪氨酸。下列有关叙述不正确的是(      ) A.YFP对应的脱氧核苷酸序列可能不止一种 B.通过此项研究改造后的性状不能在亲子代之间传递 C.此项研究的基础是蛋白质分子的结构规律及其与蛋白质的生物功能的关系 D.可以利用基因编辑技术获得YFP基因 二、不定项（共5小题，每小题3分，共15分） 16．下图是制备抗白细胞介素-6(IL-6)单克隆抗体的示意图。下列叙述错误的是(      ) A.步骤①给小鼠注射IL-6后，应从脾中分离筛选T淋巴细胞 B.步骤②在脾组织中加入胃蛋白酶，制成单细胞悬液 C.步骤③加入灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性 D.步骤④经过克隆化培养和抗体检测筛选出了杂交瘤细胞 17．下表为几种限制酶的识别序列及其切割位点。下列叙述正确的有(      ) 限制酶名称 识别序列和切割位点 限制酶名 识别序列和切割位点 BamHI 5'-G↓GATCC-3' Sau3AI 5'-↓GATC-3' AluI 5'-AG↓CT-3' SmaI 5'-CCC↓GGG-3' HindⅡ 5'-GTY↓RAC-3' - - 注：Y为C或T，R为A或G。 A.HindⅡ能识别GTTAAC序列，也能识别GTCGAC序列 B.AluI和SmaI切割后的序列可通过T4DNA连接酶相连 C.BamHI和Sau3AI两种限制酶可识别相同的序列但切割后形成不同的黏性末端 D.AluI和Sau3AI破坏的都是识别序列中心轴线处的磷酸二酯键，因而形成平末端 18．为研究病原微生物对启动子pL活性的影响，研究人员从图a所示结构中获取pL，将其与相同限制酶处理的Ti质粒(图b)连接，再导入烟草。随机选取3组转基因成功的烟草(P1、P2和P3)进行病原微生物接种，检测GUS酶(gus基因编码)活性，该活性可反映pL活性，结果如图c。下列说法中正确的是(      ) A.可选用限制酶XbaI、BamHI来获取pL B.pL是RNA聚合酶的结合位点，也是转录起始位点 C.可将新鲜的烟草叶片与含重组质粒的农杆菌共培养达到转化目的 D.三种病原微生物都能诱导增强pL的活性，其中交链格孢的诱导作用最强 19．下图为某DNA片段的结构示意图，其中L和R表示方向，①和②代表DNA的两条链，③和④为PCR所需的引物。下列叙述正确的是(      ) A.①链的复制方向为R→L，②链的复制方向为L→R B.所选择的两个引物(③和④)的碱基序列应当互补配对 C.若以该DNA为模板，并进行PCR扩增n次，则一共需要2n+1个引物 D.若要在新合成的DNA中添加限制酶的识别序列，则需要在引物的5’端进行设计 20．甘薯具有自交不育和杂交不亲和性，这使甘薯生产和育种存在诸多难以解决的问题。下列有关植物细胞工程的说法，不合理的是(      ) A.利用植物组织培养技术可以高效快速地实现种苗的大量繁殖 B.利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以显著提高基因突变率，定向获得有用的突变体 C.利用原生质体的融合实现体细胞杂交，可以克服杂交不亲和的障碍，充分利用遗传资源 D.利用茎尖分生组织培育脱毒苗，能使植株具备抗病毒的能力，同时使产品质量得到提高 三、非选择题：本题共5小题，共55分 21．突变体是植物功能基因组学研究的基础材料，科研人员利用玉米转座酶基因和D元件的双荧光2载体的转座系统(如图甲所示),进行二穗短柄草突变体培育实验。转座酶可识别D元件两端的反向重复序列并将其切离。此外，转座酶能够不断将D元件重新连接到染色体的任意位置，即完成了“转座”过程。相关实验过程、结果如图所示。 (1)使用引物F1/R1通过PCR技术可特异性扩增转座酶基因，原因是________________。可选用__________________基因作为筛选基因检测植物细胞是否被农杆菌成功转化。 (2)为了检测图中载体中的D元件是否成功在二穗短柄草基因组中发生切离，分别使用F2/R2引物禾F2/R4引物对T0转基因阳性苗进行PCR检测，已知若D元件未发生切离，使用F2/R4引物进行PCR扩增不出条带。据图丙所示植株1至10的电泳结果分析，既含有转座的细胞又含有未发生转座的细胞的植株是______________，原因是________________。 (3)对T0阳性植株自交得到的T1幼根同时观察绿色荧光(GFP)和红色荧光(RFP),得到4组结果：①GFP(+)、RFP(+);②GFP(+)、RFP(-);③GFP(-)、RFP(+);④GFP(-)、RFP(-)。根据上述实验结果推测含有D元件且D元件遗传稳定性高的是____________________(填序号)组。 (4)研究发现，D元件随机插入染色体后获得具有突变表型的植物个体的比率较低，可能的原因有______________。 22．通过研究表明，钝化植物对外源乙烯的敏感性比抑制内源乙烯的生物合成可以更为有效地延长植物的采后寿命。科学家从草莓中提取乙烯受体Ers1基因，通过基因工程将Ers1基因反向连接在启动子后，筛选转入反义Ers1基因的草莓，达到延长储藏期的效果。回答下列问题： (1)使用相关技术获得DNA后，需要通过PCR技术进行扩增Ers1基因(如图)。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ers1基因时需添加限制酶XhoI(识别序列为5′－CTCGAG－3′)的识别序列。已知Ers1基因左端①处的碱基序列为－TTCCAATTTTAA－，则其中一种引物设计的序列是5′－____________________________________－3′。PCR技术扩增出Ers1基因，该技术的原理为____________________________________。在PCR反应体系中因参与反应不断消耗而浓度下降的组分有____________________________________________________________(答出两点即可)。 (2)采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时，在凝胶中DNA分子的迁移速率与DNA分子大小呈____________________________________________________________(填“正相关”或“负相关”)，此外DNA分子的迁移速率还与____________________________________________________________(答两点)等有关。 (3)应将Ers1基因反向连接到质粒的____________之间。将筛选得到的反向连接质粒与Ca2⁺处理过的农杆菌混合，使重组质粒进入农杆菌，完成转化实验。农杆菌转化后的植物组织，应在添加了____________________________________________________________的固体培养基上培养筛选。 (4)转入反义Ers1基因的草莓，乙烯受体的合成受阻，可达到延长储藏期的效果，其原因是____________________________________________________________________________________________________________。 23．水稻白叶枯病(植株的叶片上会出现逐渐扩大的黄白色至枯白色病斑)由白叶枯病菌引起，严重威胁水稻生产和粮食安全。科学家利用CRISPR-Cas9基因组编辑技术，对水稻白叶枯病的感病基因SWEET(该基因被白叶枯病菌利用以侵染水稻)的启动子区进行了定点“修改”,编辑后的水稻幼胚通过植物组织培养技术获得抗病植株(如图)。回答下列问题。 (1)CRISPR-Cas9重组Ti质粒构建完成后，可通过_____(方法)将该质粒转入植物细胞，并将______________整合到该细胞的染色体上。为了能够筛选出转化成功的细胞，需要在植物组织培养基中添加______________。 (2)实验中用到的水稻幼胚在植物组织培养中被称为_______,对其消毒时需依次使用酒精和________处理。诱导形成再生植株的过程中需要使用生长素和细胞分裂素，原因是____________________________。 (3)为了检测基因编辑水稻是否成功，首先需采用________________技术检测目标基因的启动子区是否被成功编辑；然后，在个体水平需将基因编辑后的水稻与野生型水稻分别接种白叶枯病菌，通过比较______________来验证抗病性。 (4)在该研究中，基因编辑成功后的水稻可以抗白叶枯病的原因为____________________________。 24．小香猪是我国珍贵的地方猪种，由于肉质鲜美广受消费者喜爱。某课题组开展了小香猪体细胞转入绿色荧光蛋白(GFP)基因并进行克隆的研究，其基本流程如图所示。请分析回答： (1)过程①在原代培养时，细胞分裂生长到表面相互接触就会停止分裂增殖，这种现象叫__________________________。动物细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有______________________________。传代培养时，使用______________________处理贴壁细胞，得到单个细胞后再接种到新的培养液里培养。 (2)过程③表示通过__________对卵母细胞去核，实际去除的是________________。经过过程④操作后，可采用物理或化学方法，如__________(答出一种即可)方法激活重构胚，获得转基因重构胚胎。 (3)在转基因重构胚胎移植前开展遗传病筛查时，应选取胚胎的____________细胞进行DNA分析。 (4)在过程⑤中，将克隆的胚胎移植到代孕母猪的输卵管中，胚胎移植前需对代孕母猪进行发情处理，这一操作的目的是____________________________。 25．我国科学家研究发现了有望成为潜在的“后绿色革命”基因ATT2.ATT2蛋白可以微调赤霉素到最佳中等水平，从而同时提高半矮秆“绿色革命”水稻品种的碱-热耐受性和产量。科研人员提取了ATT2基因的成熟mRNA，通过基因重组技术，以Ti质粒为表达载体，导入水稻叶片细胞中，使水稻获得对高温的较强抗性。回答下列问题： (1)与实验稻的ATT2基因序列相比，图1中的ATT2基因的cDNA序列所含碱基对数目(填“较多”“较少”或“相等”)。采用PCR技术扩增ATT2基因的cDNA序列时，需要设计引物，引物的作用是________________________。为了使ATT2基因的cDNA序列能够被限制酶切割，并与载体准确连接，所选用的限制酶是________________________。 (2)PCR完成后常采用________________________来鉴定产物。对于PCR扩增后符合要求的产物，通常还需要进行基因测序，原因是________________________。 (3)利用农杆菌转化法将构建的Ti重组质粒转入水稻愈伤组织细胞后进行植物组织培养，培养基中需加入________________________进行筛选，最终获得四个水稻株系b1、b2、b3、b4，对这四个水稻株系的ATT2蛋白表达量进行测定，结果如图2所示。图2结果____________(填“能”或“不能”)说明b4株系未导入ATT2基因，原因是________________________。 (4)鉴定转基因水稻是否表现出了更强的抗性，需要进行个体水平的检测，检测的思路是________________________。 参考答案 1．答案：D 解析：A、制作泡菜时菜料必须完全浸没在煮沸冷却的盐水中，隔绝空气，营造严格无氧环境，利于乳酸菌无氧发酵；若菜料露出液面，有氧杂菌大量繁殖，泡菜变质，因此A错误； B、制作酸奶的牛奶不能高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌（121℃）会高温杀死牛奶中天然有益营养物质，同时破坏乳糖、蛋白质，且高温后冷却接种乳酸菌会大幅降低发酵风味；实际操作采用巴氏消毒（70~80℃）杀灭杂菌即可，保留营养，因此B错误； C、乳酸菌是严格厌氧菌，发酵装置加满原料密封是为隔绝氧气，促进乳酸菌无氧呼吸，而非抑制；若留有空气，氧气抑制乳酸菌代谢，发酵失败，因此C错误； D、乳酸菌无氧呼吸持续产生乳酸，发酵时间过长乳酸大量积累，过低pH会抑制乳酸菌活性，同时高乳酸会使酸奶、泡菜过酸，破坏口感与储存品质，因此需精准控制发酵时长，D正确。 故选D。 2．答案：A 解析：A、单独EcoRⅤ切割质粒得到14kb环状DNA，说明质粒总长14kb；双酶切（EcoRⅤ+MboⅠ）产生三段片段，结合图示片段长度计算，MboⅠ单独切割质粒产生6kb、8kb两段DNA，A正确； B、2.5kb和11.5kb长度不符合质粒总长度14kb的片段拆分逻辑，B错误； C、若MboⅠ仅一个酶切位点，双酶切只会产生两段片段，与题干三种片段矛盾，C错误； D、5.5kb与8.5kb相加14kb，但不符合双酶切片段长度推导结果，D错误。 故选A。 3．答案：D 解析：A、定期更换培养液的目的：一是清除细胞代谢产生的有毒代谢废物，二是补充营养物质；维持无菌环境依靠前期灭菌、添加抗生素，更换培养液无法保证无菌，A错误； B、动物细胞贴壁生长，传代处理时，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞分散，处理所用液体必须无菌，题干表述“含胰蛋白酶的无菌水”错误，应为无菌培养液配酶溶液，纯水会使细胞吸水涨破，B错误； C、M/F50/50组蜂王浆主蛋白占比50%、胎牛血清占比50%，细胞直径大于CK组，差异成因应为蜂王浆主蛋白与胎牛血清共同作用，无法单独归因于FBS促进蛋白质合成，C错误； D、M/F100/0组完全替换胎牛血清仅用蜂王浆主蛋白，细胞无法正常增殖生长，说明胎牛血清内含有蜂王浆主蛋白不具备的特殊生长因子，是细胞增殖必需物质，D正确。 故选D。 4．答案：C 解析：A、U6启动子为真核启动子，水稻是真核生物，愈伤组织细胞RNA聚合酶可识别U6启动子，驱动下游基因转录，A错误； B、含D基因仅代表转基因成功，若D基因转录、翻译异常，无抗病蛋白合成，植株不具备抗病性，不一定是抗病植株，B错误； C、重组Ti质粒T-DNA区域含潮霉素抗性基因，农杆菌转化后，整合到植物细胞染色体的片段携带潮霉素抗性，筛选培养基添加潮霉素，淘汰未转化愈伤组织，C正确； D、卡那霉素抗性基因不在U6启动子下游，U6启动子仅驱动D基因转录，无法驱动卡那霉素抗性基因表达，D错误。 故选C。 5．答案：B 解析：A、合成目的基因是后期步骤，不是第一步，A错误； B、蛋白质工程改造多肽流程：依据原有多肽P1氨基酸序列，设计多条氨基酸序列改变的模拟肽，降低溶血性、保留抗菌性，这是改造的第一步，B正确； C、构建表达载体属于设计模拟肽之后的操作，C错误； D、筛选优良模拟肽在载体构建、表达之后，D错误。 故选B。 6．答案：D 解析：A、转基因生物安全保障体系包含风险评估、预警跟踪、全程风险管理，是法规规定的前提流程，A正确； B、我国法律强制要求转基因食品、农产品标注，保障消费者知情权，B正确； C、设计试管婴儿若滥用，会出现性别筛选、性状定制，破坏性别平衡、引发伦理问题，是反对该技术的主要原因之一，C正确； D、干扰素是人体免疫活性物质，无杀伤作用，不属于生物武器范畴；生物武器包含致病菌、毒素、重组微生物等，D错误。 故选D。 7．答案：D 解析：A、去除植物细胞壁使用纤维素酶和果胶酶，盐酸会破坏原生质膜，造成原生质体破裂，不能用于去壁，A错误； B、原生质体无细胞壁，放入无菌水会因渗透吸水涨破，清洗需使用等渗甘露醇溶液维持形态，B错误； C、台盼蓝无法穿过活细胞膜，活原生质体不被染色；死细胞膜失去选择透过性，会被染成蓝色，培养需选取无色活原生质体，C错误； D、密度梯度离心时原生质体分层，上方为0.60mol/L甘露醇，下方为0.75mol/L蔗糖溶液，说明原生质体密度介于两种溶液之间，D正确。 故选D。 8．答案：C 解析：A、谷氨酸棒状杆菌是严格好氧微生物，无氧条件下菌体无法大量增殖，且酸性环境下发酵产物为乙酰谷氨酰胺，无法积累谷氨酸，A错误； B、谷氨酸棒状杆菌有氧呼吸才能大量繁殖，但酸性pH条件下代谢通路改变，不会生成谷氨酸，B错误； C、谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸两大关键条件：全程通入无菌空气维持有氧环境，培养液维持中性或弱碱性；有氧保证菌体正常增殖供代谢，中性/弱碱性环境引导代谢流向谷氨酸合成，C正确； D、无氧环境菌体生长停滞，无法大量合成谷氨酸，D错误。 故选C。 9．答案：A 解析：题干PCR定点突变：引物1、2一组PCR，引物3、4一组PCR，两条突变片段变性退火杂交延伸，再引物1、4全长扩增获得突变基因。 A、题图包含引物1、引物2、引物3、引物4四条独立引物，该技术全程需要四条引物参与扩增，A正确； B、引物2、3突起区域碱基与模板链无法互补配对，该位置为人为引入突变位点，PCR扩增后突变位点整合进DNA片段，B正确； C、引物1和引物2单次PCR即可扩增出片段A，无需2次PCR，C错误； D、PCR定点突变可精准在基因任意碱基位点引入突变，突变片段回收率高，是定点改造基因常用技术，D正确。 故选A。 10．答案：D 解析：流程：①去除细胞壁获得原生质体；②原生质体融合；③杂种细胞再生细胞壁；④脱分化形成愈伤组织；⑤再分化形成完整植株。 A、植物细胞壁成分为纤维素、果胶，过程①使用纤维素酶和果胶酶；胰蛋白酶用于动物细胞分散，不能分解植物细胞壁，A错误； B、④脱分化、⑤再分化培养基中生长素、细胞分裂素比例不同：生长素比例高促生根，细胞分裂素比例高促生芽，二者激素种类相同、比例不同，B错误； C、植物体细胞杂交成功的标志是培育出完整可育杂种植株；仅形成杂种细胞、愈伤组织不能代表杂交成功，C错误； D、原生质体融合的化学诱导方法：聚乙二醇（PEG）诱导、高Ca2+-高pH诱导法，二者均可打破细胞膜屏障促进原生质体融合，D正确。 故选D。 11．答案：B 解析：乳腺生物反应器原理：将目的基因与乳腺蛋白基因启动子融合，导入动物受精卵，转基因雌性动物泌乳期乳腺细胞特异性表达目的蛋白。 A、培育乳腺生物反应器综合运用基因工程、动物细胞培养、胚胎移植、早期胚胎培养多项生物技术，并非仅基因工程，A错误； B、目的基因受乳腺蛋白启动子调控，仅在泌乳期乳腺细胞大量表达药物蛋白，只有进入泌乳期才能批量生产药物，B正确； C、农杆菌转化法仅适用于双子叶、裸子植物；动物受精卵导入目的基因采用显微注射法，C错误； D、乳腺生物反应器需要乳腺蛋白基因启动子，保证目的基因仅在乳腺细胞表达；血清蛋白基因启动子无法实现乳腺特异性表达，D错误。 故选B。 12．答案：D 解析：A、干细胞应用存在严格伦理限制，胚胎干细胞获取、临床使用均受法律法规约束，不能任意用于各类疾病治疗，存在伦理争议，A错误； B、我国法律禁止生殖性克隆人，但允许合规开展治疗性克隆研究，用于器官修复、疾病治疗，并非禁止全部治疗性克隆，B错误； C、生物武器生产、储存、使用被国际公约严格禁止，任何国家不得研发、生产生物武器，不存在“适量生产”的说法，C错误； D、植物叶绿体基因属于细胞质基因，遵循母系遗传，花粉细胞不含叶绿体，将目的基因转入叶绿体，花粉传播时不会携带目的基因扩散，有效避免基因污染，D正确。 故选D。 13．答案：A 解析：A、糖化阶段依靠淀粉酶将麦芽、咖啡渣内含有的淀粉水解为麦芽糖、葡萄糖等糖类糖浆；蒸煮的高温条件，一方面会破坏原料内源淀粉酶的空间结构，让酶永久失活，另一方面高温能够杀灭糖浆内混杂的杂菌，完成灭菌操作，表述符合啤酒发酵的工业原理，A正确； B、酵母菌大量增殖、绝大多数糖类分解、基础代谢产物生成均发生在主发酵阶段；后发酵阶段仅缓慢分解剩余微量糖分，合成风味类次级代谢物，不存在大规模菌体繁殖过程，B错误； C、结合题干酒精度变化曲线趋势，发酵前期酒精度上升速度快，发酵中后期上升速率逐步减缓并趋于稳定，酒精生成速率先上升后下降，不会随发酵天数增加持续升高，C错误； D、题干仅给出酒精度评判标准，酒精度大于5.2%vol即为国家优级，但是实际工业生产还需要综合发酵周期、原料损耗、风味物质含量、生产成本等多项指标，仅依靠酒精度无法判定35天是最优发酵天数，D错误。 故选A。 14．答案：D 解析：A、双特异性抗体分别保留两种单克隆抗体的抗原结合位点，可同时特异性结合两种不同抗原，A正确； B、双抗一端结合靶细胞特异性抗原，另一端偶联蛋白药物，可定向将药物运送至靶细胞，实现靶向给药，B正确； C、筛选双抗时，需同时使用两种抗原检测，只有能同时结合两种抗原的抗体才是目标双特异性抗体，C正确； D、一种B淋巴细胞受单一抗原刺激后，只能分化产生分泌单一抗体的浆细胞；同时注射两种抗原会激活两类B细胞，分别产生两种单一抗体，无法直接分化出分泌双抗的浆细胞，双抗是体外人工重组制备，并非浆细胞天然合成，D错误。 故选D。 15．答案：B 解析：A、密码子具有简并性，一种氨基酸可对应多种密码子，YFP第203位酪氨酸可由多种密码子编码，因此编码YFP的脱氧核苷酸序列存在多种可能性，A正确； B、YFP基因是改造后的新基因，整合到细胞基因组后，可随细胞分裂传递给子代细胞，若改造生殖细胞，性状可在亲子代间遗传，B错误； C、蛋白质工程的设计基础是掌握蛋白质空间结构、氨基酸序列与生物功能之间的对应关系，以此反向改造基因，C正确； D、基因编辑技术可定点替换GFP基因中对应苏氨酸的碱基，突变为酪氨酸密码子，直接获得YFP基因，D正确。 故选B。 16．答案：ABD 解析：A、步骤①注射IL-6抗原后，应从小鼠脾脏分离B淋巴细胞（浆细胞前体），T淋巴细胞不分泌特异性抗体，A错误； B、动物组织解离使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶，胃蛋白酶适宜酸性环境，动物细胞培养液为中性，胃蛋白酶无活性，无法制备单细胞悬液，B错误； C、PEG化学融合、灭活病毒诱导融合均依靠细胞膜融合实现，原理是细胞膜具有流动性，C正确； D、步骤④初次筛选获得全部杂交瘤细胞，再通过克隆化培养+抗体阳性检测，筛选仅分泌抗IL-6抗体的杂交瘤细胞，D正确。 故选ABD。 17．答案：AB 解析：A、HindⅡ识别简并序列，可识别GTTAAC和GTCGAC，A正确； B、AluⅠ和SmaⅠ切割产生平末端，可由T4DNA连接酶连接，B正确； C、BamHⅠ和Sau3AI识别序列不同，切割产生相同黏性末端，C错误； D、Sau3AI切割产生黏性末端，并非平末端，D错误。 故选AB。 18．答案：CD 解析：A、要完整获取启动子pL，需要保证启动子结构完整，结合图a、图b的酶切位点，XbaI、BamHI会切割启动子内部或关键区域，破坏pL结构，不能选用；应选择两端不破坏启动子的限制酶。A错误； B、启动子是RNA聚合酶识别与结合的位点，转录起始位点位于启动子下游，启动子不等同于转录起始位点。B错误； C、将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，操作方式为将新鲜烟草叶片与含重组质粒的农杆菌共同培养，农杆菌的Ti质粒可将目的基因整合到植物细胞染色体DNA上，完成转化。C正确； D、由图c实验结果可知，接种三种病原微生物后，GUS酶活性均高于对照组，说明三种病原微生物都能诱导增强pL的活性；其中接种交链格孢的实验组GUS酶活性最高，代表其诱导作用最强。D正确。 故选CD。 19．答案：AD 解析：本题考查DNA分子结构、DNA复制、PCR技术、引物设计。DNA子链的合成方向始终为5'端→3'端。 A、DNA复制时子链延伸方向固定为5'→3'。结合图示链的方向，①链作为模板链时，新链复制方向为R→L；②链作为模板链时，新链复制方向为L→R。A正确； B、PCR的两个引物分别结合在目的基因两条链的两端，引物③和引物④的碱基序列不能互补配对，若互补会发生引物自身结合，无法正常结合模板DNA完成扩增。B错误； C、PCR扩增原理为DNA半保留复制，扩增n次后，共获得2n个DNA分子，总计2n+1条DNA单链。除去最初的2条模板链，需要引物的数量为2n+1−2，并非2n+1个。C错误； D、DNA聚合酶只能从引物的3'端延伸DNA链，引物的5'端不参与子链延伸。因此若要在新合成DNA两端添加限制酶识别序列，需要在引物的5'端设计对应序列。D正确。 故选AD。 20．答案：BD 解析：A、植物组织培养技术可以实现无性繁殖，短时间内获得大量性状一致的种苗，能够高效快速完成甘薯种苗的大规模繁殖，A合理； B、利用愈伤组织进行诱变育种，可提高基因突变频率，但基因突变具有不定向性，无法定向获得所需突变体，B不合理； C、植物体细胞杂交技术通过原生质体融合形成杂种细胞，能够克服远缘杂交不亲和的障碍，甘薯存在杂交不亲和问题，可利用该技术拓展遗传资源，C合理； D、茎尖分生组织几乎不含病毒，培育得到的脱毒苗体内无病毒，但脱毒苗不具备抗病毒的能力，依然会被病毒侵染，D不合理。 故选BD。 21．答案：（1）引物是根据转座酶基因的一段已知序列设计合成的（或引物能与转座酶基因的cDNA特异性结合，引物是一段与转座酶基因互补的序列）；HPH（GFP、RFP） （2）2～9；使用F2/R2引物进行PCR扩增出条带，说明检测的细胞中D元件未切离；使用F2/R4引物进行PCR扩增出条带，说明检测的细胞中D元件已切离 （3）③ （4）插入的是非基因序列（或插入的是未选择表达的基因/内含子/非编码区等，或插入D元件后引发的突变为隐性突变，或插入D元件后表达的蛋白质的功能未受影响/影响不大） 解析：（1）PCR技术中，引物需与目的基因两端特定序列互补配对才能特异性扩增目的基因，所以利用引物F1/R1能通过PCR特异性扩增转座酶基因是因为其能与该基因两端特定序列互补配对；若农杆菌成功将T－DNA（图中LB～RB序列）整合在植物细胞的染色体组DNA上，则植物细胞含有筛选基因HPH（潮霉素抗性基因）、GFP（绿色荧光蛋白基因）、RFP（红色荧光蛋白基因），因此，可选用它们作为筛选基因检测植物细胞是否被农杆菌成功转化。 （2）分析图甲，若载体中的D元件未切离（未完成“转座”过程），则使用F2/R2引物进行PCR能扩增出条带；已知若D元件未发生切离，使用F2/R4引物进行PCR扩增不出条带，即若使用F2/R4引物进行PCR能扩增出条带，则说明D元件已切离（完成“转座”过程）；分析图丙，既含有转座的细胞（即使用F2/R4引物进行PCR能扩增出条带）又含有未发生转座的细胞（即使用F2/R2引物进行PCR能扩增出条带）的植株是2~9。 （3）D元件含有RFP基因，会使植株发出红色荧光，若D元件完成转座过程，则植株只发红色荧光，对应③组。 22．答案：(1)CTCGAGTTCCAATTTTAA；DNA半保留复制；引物和脱氧核苷酸 (2)负相关；DNA分子构象、凝胶浓度(电场强度、缓冲液、温度) (3)启动子和潮霉素抗性基因；潮霉素 (4)Ers1基因的转录产物与反义Ers1基因转录的产物碱基互补配对，使得翻译过程受阻 解析：(1)限制酶XhoI识别序列5′-CTCGAG-3′，引物5′端需要添加酶切序列，再连接模板链序列-TTCCAATTTTAA-，完整引物序列5′-CTCGAGTTCCAATTTTAA-3′；PCR扩增DNA的原理为DNA半保留复制；PCR反应体系组分：模板DNA、引物、dNTP（脱氧核苷酸）、Taq酶、缓冲液；扩增过程中引物不断与模板结合、脱氧核苷酸不断合成新链，二者持续消耗，浓度下降；Taq酶、模板DNA可循环利用，浓度基本不变。 (2)琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子越小，迁移速度越快，分子越大迁移越慢，迁移速率与DNA分子量呈负相关；影响DNA迁移速率的其他因素：DNA自身空间构象（线性、环状、超螺旋速率不同）、凝胶琼脂糖浓度、电场强度、缓冲液离子浓度、电泳温度。 (3)目的基因需要反向插入启动子与终止子之间，才能完成转录；质粒中筛选标记为潮霉素抗性基因，T-DNA区域携带潮霉素抗性标记，因此筛选培养基添加潮霉素，未成功转化的植物细胞无法存活。 (4)反义Ers1基因转录产生的mRNA，与草莓内源Ers1基因转录的mRNA碱基互补配对，双链RNA无法完成翻译过程，乙烯受体蛋白合成受阻；细胞缺少乙烯受体，无法感知乙烯信号，果实成熟衰老进程延缓，延长储藏期。 23．答案：(1)农杆菌转化法；Ti质粒上的T-DNA；潮霉素 (2)外植体；次氯酸钠；生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素 (3)PCR-测序；病斑的大小(或病斑面积、发病情况等合理答案) (4)对感病基因SWEET的启动子区进行定点修改后，白叶枯病菌无法利用该基因侵染水稻 解析：(1)将重组Ti质粒转入植物细胞常用农杆菌转化法。因为农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA能够整合到植物细胞的染色体DNA上。利用农杆菌侵染植物细胞，从而将重组Ti质粒导入植物细胞。为了筛选出转化成功的细胞，由于重组Ti质粒上含有潮霉素抗性基因，所以需要在植物组织培养的培养基中添加潮霉素，只有成功导入重组Ti质粒的细胞才能在含有潮霉素的培养基上存活。 (2)在植物组织培养中，离体的植物器官、组织或细胞被称为外植体，所以实验中用到的水稻幼胚被称为外植体。对水稻幼胚消毒时需依次使用酒精、次氯酸钠处理。在植物组织培养诱导形成再生植株的过程中，生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。不同浓度的生长素和细胞分裂素的配比可以调控细胞的分裂和分化方向，从而诱导形成根和芽等不同的器官，最终形成再生植株。 (3)为了检测基因编辑水稻是否成功，首先需采用PCR-测序技术检测目标基因的启动子区是否编辑成功。通过PCR扩增目标基因的启动子区片段，然后进行测序，与编辑前的序列进行对比，看是否发生了预期的改变。在个体水平需将基因编辑后的水稻与野生型水稻分别接种白叶枯病菌，通过比较病斑的大小(或病斑面积、发病情况等)来验证抗病性。如果基因编辑后的水稻病斑明显小于野生型水稻，说明其抗病性增强。 (4)在该研究中，基因编辑成功后的水稻可以抗白叶枯病的原因为对感病基因SWEET的启动子区进行定点修改后，白叶枯病菌无法利用该基因侵染水稻，从而使水稻获得了抗病性。 24．答案：(1)接触抑制；血清；胰蛋白酶或胶原蛋白酶 (2)显微操作；纺锤体-染色体复合物；电刺激、乙醇、钙离子载体等 (3)滋养层 (4)使代孕母猪生殖器官处于接受胚胎的生理状态 解析：(1)接触抑制：动物细胞贴壁生长，细胞相互接触后停止增殖，是正常二倍体细胞特有特征；植物组织培养基添加植物激素、无机物、蔗糖，动物细胞培养液必须添加血清，血清含多种未知生长因子，是二者最主要区别。传代培养操作：贴壁细胞依靠细胞外基质附着培养瓶壁，胰蛋白酶/胶原蛋白酶可分解细胞间黏连蛋白，使细胞分散为单个悬浮细胞，再分装至新培养瓶传代。 (2)卵母细胞去核操作依靠显微操作仪完成，卵母细胞减数分裂Ⅱ中期，遗传物质集中为纺锤体-染色体复合物，去核操作实际去除该复合物，保留细胞质；重构胚融合后无自发分裂激活信号，需人工激活，物理方法有电刺激，化学方法有乙醇、钙离子载体、氯化锶等。 (3)囊胚阶段胚胎分为内细胞团、滋养层细胞；内细胞团细胞将来发育为胎儿本体，不可取样；滋养层细胞发育为胎膜胎盘，取样不损伤胚胎，胚胎遗传病筛查、基因检测均选取滋养层细胞提取DNA分析。 (4)胚胎移植生理学基础：供体、受体生殖器官生理状态同步。对代孕母猪同期发情处理，可使代孕母猪子宫内膜发育、激素水平与供体胚胎发育阶段匹配，生殖器官处于能够接纳、着床胚胎的生理状态，大幅提升胚胎移植成功率。 25．答案：(1)较少；使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸；BamHⅠ、HindⅢ (2)琼脂糖凝胶电泳；电泳技术仅能分析DNA分子的大小，无法确定DNA分子的碱基序列 (3)四环素；不能；b4株系中可能导入了目的基因，但目的基因未表达 (4)对转基因水稻植株进行高温处理，观察是否减产 解析：(1)cDNA是以成熟mRNA为模板逆转录形成的，真核生物的核基因（基因组基因）包含启动子、终止子、内含子、外显子等序列；而成熟mRNA在转录后加工过程中，内含子对应的序列被剪切去除，因此cDNA的碱基对数目少于细胞内原始的ATT2基因。PCR技术中引物的作用：引物是一段单链DNA片段，能够与模板DNA的末端序列互补配对，引导热稳定DNA聚合酶从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，启动DNA子链的合成。分析Ti质粒酶切位点：目的基因两端需要选择两种不同限制酶切割，防止目的基因和质粒自身环化、反向连接；质粒上四环素抗性基因为标记基因，潮霉素抗性基因内部存在BamHⅠ酶切位点，若使用BamHⅠ切割会破坏潮霉素抗性基因，结合图谱位点分布，应选择BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶。 (2)PCR扩增得到DNA片段后，实验室常用琼脂糖凝胶电泳技术，根据DNA片段分子量、迁移速率分离产物，鉴定PCR扩增产物的大小和纯度。琼脂糖凝胶电泳只能判断DNA片段的长度（分子量大小），无法检测DNA分子的碱基排列顺序，而碱基序列错误会导致目的基因功能异常，因此PCR产物经电泳筛选后，还需要进行基因测序，确认碱基序列完全正确。 (3)构建重组质粒时，目的基因插入位点位于潮霉素抗性基因内部，潮霉素抗性基因被破坏，而四环素抗性基因保持完整，因此转化成功的受体细胞可以在含四环素的培养基上存活，未导入重组质粒的细胞无法存活，筛选时培养基中需要加入四环素。图2中b4株系的ATT2蛋白相对表达量接近0，不能说明该株系未导入ATT2基因；原因是：该株系有可能已经成功导入目的基因，但由于基因表达调控、表观遗传等因素，目的基因发生沉默，无法转录和翻译，最终没有合成ATT2蛋白。 (4)个体水平鉴定转基因水稻的抗高温能力，实验设计遵循对照原则和单一变量原则。检测思路：将转基因水稻株系和野生型水稻置于相同的高温环境中培养，其他培养条件保持一致，观察并对比两组水稻的生长状况、结实率（产量），判断转基因水稻的高温抗性。 学科网（北京）股份有限公司 $