内容正文:
第1课时 动物细胞培养
1
一、动物细胞工程
1.常用技术:动物细胞培养、______________和________________等。
2.基础:______________。
动物细胞融合
动物细胞核移植
动物细胞培养
预 习 梳 理
2
二、动物细胞培养
1.概念:指从动物体中取出相关的组织,将它分散成__________,然后
在适宜的培养条件下,让这些细胞____________的技术。
单个细胞
生长和增殖
预 习 梳 理
3
2.基本条件
(1)营养
①有机营养:______、氨基酸、维生素等;合成培养基通常还需加
入______等一些天然成分。
②无机营养:________等。
注:血清中含有细胞所需而人们尚未完全研究清楚的营养物质。培
养动物细胞一般使用____________,也称为________。
糖类
血清
无机盐
液体培养基
培养液
预 习 梳 理
4
(2)无菌、无毒的环境
①对培养液和所有培养用具进行______处理以及在______环境下进
行操作。
②培养液还需要定期更换,以便清除代谢物,防止_______________
对细胞自身造成危害。
灭菌
无菌
细胞代谢物积累
(3)温度、 和渗透压
①温度:哺乳动物细胞培养的温度多以______________为宜;
多数动物细胞生存的适宜 为_________;
③适宜的渗透压。
预 习 梳 理
5
(4)气体环境
动物细胞培养所需气体主要有____和_____。
① 是________________的。
② 的主要作用是________________。
③进行细胞培养时,通常采用培养皿或____________,并将它们置
于含有__________________的混合气体的___________中进行培养。
细胞代谢所必需
维持培养液的
松盖培养瓶
空气和
培养箱
预 习 梳 理
6
3.动物细胞培养的过程
(1)细胞贴壁:细胞悬液中的细胞贴附在瓶壁上。
(2)接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面__________时,细胞通常会
______分裂增殖的现象。
(3)原代培养:分瓶之前的细胞培养,即动物组织________后的初次培养。
相互接触
停止
经处理
预 习 梳 理
7
(4)传代培养:分瓶后的细胞培养。进行传代培养时,悬浮培养的细胞
直接用________进行收集;贴壁细胞需要重新用__________等处理,
使之分散成单个细胞,再用离心法收集。
离心法
胰蛋白酶
(5)动物细胞培养的原理:__________。
细胞增殖
预 习 梳 理
8
三、干细胞培养及其应用
1.干细胞的来源:早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中。
2.干细胞的类型
(1)胚胎干细胞(简称 细胞)
①分布:__________中。
②特点:具有分化为成年动物体内的任何一种类型的______,并进
一步形成机体的________________________的潜能。
早期胚胎
细胞
所有组织和器官甚至个体
预 习 梳 理
9
(2)成体干细胞
①分布:________________内。
②分类:包括骨髓中的____________、神经系统中的____________
和睾丸中的____________等。
③特点:具有__________性,只能分化成特定的____________,不
具有发育成__________的能力。
成体组织或器官
造血干细胞
神经干细胞
精原干细胞
组织特异
细胞或组织
完整个体
预 习 梳 理
10
(3)诱导多能干细胞(简称 细胞)
①来源:体外诱导成纤维细胞。
②特点:诱导过程无须破坏胚胎,不涉及______问题;可以避免
__________反应。
伦理
免疫排斥
预 习 梳 理
11
3.干细胞的应用
(1)实例
①______干细胞:治疗白血病,一些造血系统、免疫系统功能障碍
等疾病。
②______干细胞:治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病等。
③__________干细胞:用于治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域
的研究。
造血
神经
诱导多能
(2)前景:在__________、药物安全性与有效性检测等领域发挥大作用。
再生医学
预 习 梳 理
12
(1)动物细胞培养体现了动物细胞的全能性。( )
×
[解析] 动物细胞培养时细胞只进行生长和增殖,没有分化成各种细
胞或形成新个体,没有体现动物细胞的全能性。
(2)肝细胞培养过程中通常在培养液中通入的 以刺激细胞呼吸。
( )
×
[解析] 肝细胞培养过程中通常在培养液中通入的 的目的是维
持培养液的 。
预 习 检 测
13
(3)原代培养的细胞是指从贴壁生长到发生接触抑制之前的细胞。
( )
×
[解析] 动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。
(4)将动物组织分散成单个细胞可选用胃蛋白酶或胶原蛋白酶进行处
理。( )
×
[解析] 将动物组织分散成单个细胞可选用胰蛋白酶或胶原蛋白酶进
行处理,不能使用胃蛋白酶处理,因为大多数动物细胞培养的适宜
为,此 条件下,胃蛋白酶不具有活性。
预 习 检 测
14
(5)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞。( )
×
[解析] 培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成一层细胞。
(6)癌细胞无接触抑制现象,可以无限增殖。( )
√
(7)胚胎干细胞具有分化为动物各种组织的潜能。( )
√
(8)不同类型的干细胞,它们的分化潜能无差别。( )
×
[解析] 不同类型的干细胞,它们的分化潜能是有差别的,如胚胎干
细胞的分化潜能大于多能干细胞。
(9)造血干细胞的分化程度低于胚胎干细胞。 ( )
×
[解析] 造血干细胞的分化程度高于胚胎干细胞。
预 习 检 测
15
任务一 动物细胞培养
【资料】阅读教材第 页,以及图“动物细胞培养过程示意图”。
(1)补充动物细胞培养过程图。
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
任 务 活 动
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细胞密度过大
接触抑制
离心
胰蛋白酶
传代培养
任 务 活 动
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(2)动物细胞培养过程的原理是__________,其方式是__________。
(3)动物细胞培养应在___________中进行,其结果是得到了大量______。
细胞增殖
有丝分裂
培养箱
细胞
任 务 活 动
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【情境】下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图:
(1)②过程中可用胰蛋白酶或胶原
蛋白酶处理,说明细胞间连接物
蛋白质
不能
多数动物细胞培养的适宜为,在此条件下,胃蛋白酶失
去活性
(2)过程③为__________,过程④为__________。
(3)培养过程中添加血清的原因是_______________________________
_______________________。
原代培养
传代培养
血清中含有细胞所需而人们尚未
完全研究清楚的营养物质
的主要成分是________。______ (填“能”或“不能”)使用胃蛋白酶,理由
是____________________________________________________________
________。
任 务 活 动
19
(4)动物细胞培养和植物组织培养
过程中,就细胞增殖、分化来说,
脱分化和再分化
(5)请分析图示过程选用皮肤成纤维细胞或干细胞的原因。_________
___________________。动物细胞培养时一般选择动物胚胎和幼龄动
物组织的原因是_____________________________________。
细胞分
裂能力强,易于培养
细胞分化程度低,增殖能力强,更易于培养
二者除了都需要增殖外,植物组织培养不同于动物细胞培养的是还要进
行________________。
任 务 活 动
20
1.原代培养和传代培养的划分:划分原代培养和传代培养是以分瓶为
界,即配制细胞悬液后转入培养瓶或培养皿中的第一次培养为原代
培养,分瓶后的培养(无论分瓶多少次)均为传代培养。
任 务 活 动
21
2.胰蛋白酶的使用次数:动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰
蛋白酶或胶原蛋白酶,第一次使用的目的是使组织细胞分散开;第
二次使用是贴壁细胞传代培养时,使用的目的是使细胞从瓶壁上脱
离下来,分散成单个细胞,便于分瓶后继续培养。
使用胰蛋白酶时,要控制好作用时间,因为胰蛋白酶不仅能分解细胞
间的蛋白质,长时间作用还会分解细胞膜蛋白等,对细胞造成损伤。
任 务 活 动
22
3.动物细胞培养和植物组织培养的比较
项目 植物组织培养 动物细胞培养
区
别 原理 植物细胞的全能性 细胞增殖
培养基 固体培养基,包括矿质元
素、蔗糖、维生素、琼
脂、植物激素等 液体培养基,包括无机
盐、糖类、维生素、氨基
酸、动物血清等
细胞来
源 离体植物器官、组织或细
胞 胚胎或幼龄动物组织、器
官
过程 脱分化、再分化 原代培养、传代培养
任 务 活 动
23
项目 植物组织培养 动物细胞培养
区
别 结果 获得新植株 产生大量细胞
相同点 ①都需要进行人工条件下的无菌、无毒操作,无菌培
养
②都进行有丝分裂
续表
任 务 活 动
24
例1 下列与动物细胞培养有关的表述,不正确的是( )
A.动物细胞培养需要无菌、无毒的环境,充足的营养,适宜的温
度、 和渗透压,适宜的气体环境等条件
B.用胰蛋白酶等作用于离体的动物组织,使其分散成单个细胞
C.动物细胞放入培养箱中培养的主要目的是满足细胞对 的需求
D.原代培养是指动物组织经处理后的初次培养
√
任 务 活 动
25
[解析] 动物细胞培养需要无菌、无毒的环境,且需要充足的营养,适
宜的温度、 和渗透压,适宜的气体环境等条件,A正确;用胰蛋白
酶或胶原蛋白酶作用于离体的动物组织,可使其分散成单个细胞,B
正确;动物细胞放入培养箱中培养的主要目的是维持培养液的 ,
C错误;原代培养是指动物组织经处理后的初次培养,D正确。
任 务 活 动
26
例2 从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行
贴壁培养,在传代后的不同时间点检测细胞数目,
结果如图。下列叙述正确的是( )
A.传代培养时,培养皿需密封防止污染
B.选取延迟期的细胞进行传代培养比选取指数增
长期的更合理
C.直接用离心法收集细胞进行传代培养
D.细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
√
任 务 活 动
27
[解析] 传代培养时需要营造无菌、无毒以及
空气 的气体环境,而非密封,A错误;进
行传代培养时,选取指数增长期的细胞更合理,B
错误;对于贴壁生长的细胞进行传代培养时,需要
先用胰蛋白酶等处理,使之分散为单个细胞,然后再用离心法收集,
C错误;细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大导致接触抑制有关,
D正确。
任 务 活 动
28
任务二 干细胞的种类及作用
【情境】科研人员利用人类诱导多能干细胞( 细胞)同时培育出肝
脏、胆管和胰脏3种迷你器官。该项研究成功研发了多器官系统再生
技术,是解析人体内复杂器官形成发育的有效方法。
(1)利用 细胞同时培育出构成肝脏、胆管和胰脏的多种细胞群,这
是细胞进行____________的结果。
增殖和分化
(2) 细胞能培育出多种“迷你器官”是因为______________________
___________________,该过程________(填“体现”或“未体现”)动物
细胞的全能性。
细胞含有本物种生长
发育所需的全套基因
未体现
任 务 活 动
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(3) 细胞的应用前景优于胚胎干细胞,其原因是________________
___________________________________________________________
____________________________________。
细胞诱导过
程无须破坏胚胎,可避免伦理问题,而且细胞可来源于病人自身
的体细胞,理论上可避免免疫排斥反应
(4)你认为干细胞在临床医疗的应用中,可能存在哪些问题?
[提示]本题为开放性问题,答案合理即可,如存在导致肿瘤发生
的风险等。
任 务 活 动
30
四种干细胞的比较
名
称 全能干细胞 多能干细胞 专能干细胞 诱导多能干
细胞
特
点 具有分化为成年动
物体内的任何一种
类型的细胞,并进
一步形成机体的所
有组织和器官甚至
个体的潜能 具有分化成多
种细胞或组织
的潜能,但不
能发育成完整
的个体 只能分化成某
一种类型或功
能密切相关的
两种类 型 的
细胞 类似胚胎干
细胞
任 务 活 动
31
名
称 全能干
细胞 多能干细胞 专能干细胞 诱导多能干细
胞
举
例 胚胎干
细胞 造血干细胞 神经干细胞 小鼠的成纤维
细胞诱导出的
细胞
应
用 用于病
人的器
官移植
等 造血干细胞移植是
治疗血液系统疾
病、遗传性血液病
等的有效手段 神经干细胞移植
可治疗神经组织
损伤和神经系统
退行性疾病 用于治疗阿尔
茨海默病、心
血管疾病等领
域的研究
续表
任 务 活 动
32
例3 [2024·江苏卷]我国科学家利用人的体细胞制备多能干细胞,
再用小分子 成功诱导衍生成胰岛B细胞。下列相关叙述错误的
是( )
A.基因选择性表达被诱导改变后,可使体细胞去分化成多能干细胞
B.在小分子 诱导下,多能干细胞发生基因突变,获得胰岛素基因
C.衍生的胰岛B细胞在葡萄糖的诱导下能表达胰岛素,才可用于移植
治疗糖尿病
D.若衍生的胰岛B细胞中凋亡基因能正常表达,细胞会发生程序性死亡
√
任 务 活 动
33
[解析] 细胞分化的实质是基因选择性表达,当基因选择性表达被诱
导改变后,可使体细胞去分化成多能干细胞,A正确; 胰岛素基因
在人体细胞中都存在,但只有在胰岛B细胞中才表达,所以在小分子
诱导下,多能干细胞分化成为胰岛B细胞,只是发生了基因选
择性表达,并没有发生基因突变,B错误;衍生的胰岛B细胞需在葡
萄糖的诱导下成功表达胰岛素,以确保移植后衍生的胰岛B细胞能够
正常发挥作用,C正确;凋亡基因的正常表达会导致衍生的胰岛B细
胞发生程序性死亡,也就是发生细胞凋亡,D正确。
任 务 活 动
34
例4 某科研团队利用7个小分子化合物的组合处理小鼠体细胞,使其
重编程为多潜能干细胞(称为 细胞),使得转入外源基因的方法不
再是细胞编程所必需的。下列相关叙述错误的是( )
A.这一过程类似于植物细胞的脱分化过程
B.小鼠的体细胞诱导成 细胞后,细胞周期会变短
C.与小鼠的体细胞相比,诱导形成的 细胞全能性较低
D.小鼠体细胞诱导成 细胞是形态、结构和功能发生稳定性差异
的过程
√
任 务 活 动
35
[解析] 已高度分化的小鼠体细胞,使其重编程为具有分裂、分化能
力的多潜能干细胞细胞 ,这一过程类似于植物细胞的脱分化过
程,A正确;小鼠的体细胞诱导成 细胞后,细胞增殖能力增强,
细胞周期会变短,B正确;与小鼠的体细胞相比,诱导形成的 细
胞分裂能力强,分化程度低,细胞全能性较高,C错误;小鼠体细胞
诱导成 细胞的过程发生了基因的选择性表达,其形态、结构、
功能发生了稳定性差异,D正确。
任 务 活 动
36
备用习题
37
1.海拉细胞是一种人工培养的具有无限增殖能力的细胞,广泛应用于科学研究,极大程度地推动了医学发展。如图是海拉细胞培养部分过程,下列说法正确的是( )
A.丙和丁的过程不一定会出现细胞接触抑制的现象
B.甲→乙过程需要用胃蛋白酶或胶原蛋白酶等处理
C.丙、丁过程中通常会通入O2和CO2的混合气体刺激细胞呼吸
D.为避免培养过程中的杂菌污染,丙、丁过程中培养瓶盖必须旋紧不漏气
√
备 用 习 题
[解析]丙表示原代培养,丁表示传代培养,
海拉细胞是一种具有无限增殖能力的细胞,
其在原代培养和传代培养的过程中不会出现细胞接触抑制的现象,A正确;在动物细胞培养过程中,需要用胰蛋白酶、胶原蛋白酶,而不用胃蛋白酶的原因是在多数动物细胞培养液适宜的pH范围内,胃蛋白酶已失去活性,B错误;丙、丁过程中通常会通入95%空气和5%的CO₂的混合气体,前者维持细胞进行有氧呼吸,后者维持培养液适宜的pH,C错误;为避免培养过程中的杂菌污染,保证其气体需要,丙、丁过程中需松动培养瓶盖,将其置于含95%空气和5%CO2的混合气体的培养箱中培养,D错误。
备 用 习 题
2.人体骨髓中的造血干细胞在体内环境下能分裂、分化形成红细胞、白细胞和血小板。现代科学研究发现,在体外一定条件下培养造血干细胞,它可以分裂、分化形成神经细胞。下列有关叙述不正确的是( )
A. 三种血细胞的分化是基因选择性表达的结果
B. 只有造血干细胞具有控制神经细胞性状的基因
C. 只有离体培养的细胞才可能表现出全能性
D. 在生物体内细胞分化的过程一般是不可逆转的
√
备 用 习 题
[解析]细胞分化是基因选择性表达的结果,A正确;体细胞是受精卵经分裂、分化形成,含有的基因一般相同,细胞分化过程中基因并不发生改变,B错误;全能性的表达只有在离体环境下才可能实现,因为在生物体内细胞分化是不可逆转的过程,C、D正确。
备 用 习 题
3.在太空培养的干细胞呈现出优于地面的生长方式,在微重力环境中干细胞的体外培养更接近于胚胎内干细胞的增殖与分化。下列有关干细胞的说法错误的是( )
A.随着干细胞传代次数的增加,细胞全能性逐渐升高
B.多能干细胞分化的实质是基因的选择性表达,使细胞种类增多
C.自身体细胞诱导的干细胞在器官移植和再生上可有效避免免疫排斥反应
D.太空的微重力环境能为增强干细胞诱导分化效率提供新途径
√
备 用 习 题
[解析]随着干细胞传代次数的增加,细胞全能性逐渐降低,A错误;细胞分化的实质是基因的选择性表达,能增加细胞种类,B正确;自身体细胞诱导的干细胞在器官移植和再生上可有效避免免疫排斥反应,提高成功率,C正确;在太空培养的干细胞呈现出优于地面的生长方式,在太空微环境中干细胞的体外培养更接近于胚胎内干细胞的增殖与分化,因此太空的微重力环境能为增强干细胞诱导分化效率提供新途径,D正确。
备 用 习 题
4.诱导多能干细胞(iPS细胞)在形态、基因表达、分裂能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似。在实验室中获得iPS细胞的过程是将四种转录因子通过逆转录病毒导入小鼠的成纤维细胞,这些转录因子诱导这种细胞发生转化,产生iPS细胞。近期研究发现,iPS细胞也可来源于人自身的体细胞,这一研究成果为某些疾病的基础研究及其临床应用提供了一种新的途径。下列说法正确的是( )
备 用 习 题
A. iPS细胞是从早期胚胎中获取的
B. 转录因子诱导小鼠的成纤维细胞发生转化的过程中发生了脱分化
C. iPS细胞通过基因突变可分化成各种组织细胞
D. 能利用镰状细胞贫血患者自身体细胞培养的iPS细胞治疗自身该疾病
√
备 用 习 题
[解析] iPS细胞是诱导多能干细胞,由体细胞诱导而来,不是从早期胚胎中获取的,A错误;将成纤维细胞诱导为分化程度更低的iPS细胞,发生了脱分化,B正确;iPS细胞分化成各种组织细胞是基因选择性表达的结果,不是基因突变的结果,C错误;镰状细胞贫血患者自身体细胞发生基因突变,即使诱导出iPS细胞,致病基因还在,无法行使正常功能,D错误。
备 用 习 题
5.科学家将4种转录因子(影响基因转录的蛋白质)组合转入人的衰老的成纤维细胞,然后在干细胞培养基上培养,把它们重新诱导成干细胞,得到iPS细胞(诱导多能干细胞)。这一研究成果使人类“返老还童”成为一种可能。下列有关本实验及干细胞的描述,正确的是( )
A. 胚胎干细胞具有分化成机体所有组织、器官甚至个体的潜能,没有组织特异性
B. iPS细胞与植物组织培养过程中的愈伤组织一样具有全能性,能够发育成完整个体
C. 使用脐带血进行治疗,为避免免疫排斥反应,应该同时使用免疫抑制药物
D. 由于用iPS细胞治疗可以避免免疫排斥反应,所以用它进行治疗百益而无一害
√
备 用 习 题
[解析]胚胎干细胞具有分化成机体所有组织、器官甚至个体的潜能,不具有组织特异性,A正确;iPS细胞不能发育成一个完整的个体,B错误;脐带血移植属于自体移植,基本不会发生免疫排斥反应,不需要使用免疫抑制药物,C错误;由于iPS细胞具有活跃的分裂能力,若不受控制可能转化为癌细胞,所以用它进行治疗时可能存在安全风险,D错误。
备 用 习 题
6.某研究小组进行药物实验时,以动物肝细胞为材料,测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种,甲细胞为肝肿瘤细胞,乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题:
(1)在动物细胞培养时,通常在合成培养基中加入适量血清,其原因是 。
人们对细胞生长增殖所需的营养物质尚未全部研究清楚,血清含有适合动物细胞生长增殖的多种物质
[解析]由于人们对细胞生长增殖所需的营养物质尚未全部研究清楚,因此在使用合成培养基时,通常需要加入血清等一些天然成分,因为血清含有适合动物细胞生长增殖的多种物质。
备 用 习 题
(2)在两种细胞生长过程中,当乙细胞铺满瓶壁时,其生长 。药物实验需要大量细胞,两种细胞频繁传代,相同时间内,甲细胞比乙细胞可以传代的次数更 。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液,需用 处理。
产生接触抑制
多
[解析]乙细胞铺满瓶壁时,其生长会产生接触抑制。肿瘤细胞具有无限增殖能力,细胞周期短,相同培养时间内,甲细胞的数量多于乙细胞,因此传代次数更多。用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液,需用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理。
胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)
备 用 习 题
(3)已知癌细胞的X基因表达过量与肝肿瘤的发生密切相关。要探究一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响,可将甲细胞分为A、B两组,A组细胞培养液中加入 ,B组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水。经培养后,从A、B两组收集等量细胞,通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的 或 合成水平的差异,确定药物Y的药效。
含Y的无菌生理盐水
蛋白质
[解析]本实验自变量为是否添加抗肿瘤药物Y,根据单一变量原则,A组需要加入含Y的无菌生理盐水;可通过检测X基因转录形成的mRNA和翻译形成的蛋白质的水平来确定Y的药效。
mRNA
备 用 习 题
练习册
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题每题2分,共26分]
知识点一 动物细胞培养的条件
1.一般来说,动物细胞体外培养需要满足以下条件( )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血清 ④温度与动物
体温相近 ⑤需要,不需要
A.①②③④⑤ B.①②③④ C.①③④⑤ D.①②④⑤
√
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[解析] 动物细胞培养需要无毒和无菌的环境,①②正确;用于动物
细胞培养的合成培养基含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素等,还
需加入血清等天然物质,③正确;动物细胞培养需要适宜的温度和
,其中温度要与动物体温相近,以维持动物细胞正常的生命活动,
④正确;动物细胞培养需要一定的气体环境,通常在含有 空气
和的混合气体的培养箱中培养,其中 能维持培养
液的 ,⑤错误,故选B。
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2.动物细胞培养中需要经常更换培养基,下列相关叙述错误的是
( )
A.贴壁生长的正常细胞一段时间后会出现接触抑制现象,即只能形
成单细胞层,而不能重叠
B.若培养瓶中加入的培养基较少,会出现营养供给不足的现象
C.活细胞产生的一些代谢产物对细胞自身有毒害作用,需要定时更
换培养基加以清除
D.细胞长到一定阶段,换成促分化培养基,诱导产生各种组织、器
官或系统
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[解析] 贴壁生长的正常细胞一段时间后会出现接触抑制现象,即只
能形成单细胞层,而不能重叠,A正确;若培养瓶中加入的培养基较
少,会出现营养供给不足的现象,B正确;活细胞产生的一些代谢产
物对细胞自身有毒害作用,需要定时更换培养基加以清除,C正确;
动物细胞培养的结果是形成大量细胞或细胞产物,D错误。
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3.[2025·河北邢台高二月考]某实验室从小鼠身上取出部分皮肤进
行皮肤细胞培养,为了确保实验成功,需要严格控制实验条件。下
列关于实验的叙述正确的是( )
A.需要使用胰蛋白酶、果胶酶处理小鼠皮肤,使皮肤分散为单个细胞
B.将皮肤细胞培养在含有血清、氨基酸、无机盐等的固体培养基中
C.培养过程中发生接触抑制现象时,需要对细胞进行分瓶培养
D.细胞培养过程中,需要保持培养箱中含有和
√
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[解析] 酶具有专一性,将动物组织分散成单个细胞,需要使用胰蛋
白酶或胶原蛋白酶处理小鼠皮肤,不能用果胶酶,A错误;将皮肤细
胞培养在含有血清、氨基酸、无机盐等的液体培养基中,同时需要
给予适宜的外界环境条件,B错误;培养过程中发生接触抑制现象时,
需要用胰蛋白酶处理获得单细胞悬液,而后对细胞进行分瓶培养,C
正确;进行细胞培养时培养箱中要含有空气和 ,D错误。
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知识点二 动物细胞培养的过程
4.[2025·江苏盐城高二月考]下列关于动物细胞培养的叙述正确的
是( )
A.动物细胞培养与植物组织培养依据的原理都是细胞的全能性
B.动物细胞培养时,定期更换培养液的目的是防止杂菌污染
C.体外培养的大多数细胞能够悬浮在培养液中生长
D.在进行传代培养时,悬浮培养的细胞一般采用离心法收集
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[解析] 植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性,而动物细胞
培养的原理是细胞的增殖,A错误;动物细胞培养时定期更换培养液
的主要目的是清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危
害,而不是防止杂菌污染,B错误;体外培养的大多数细胞需要贴附
于某些基质表面才能生长增殖,C错误;进行传代培养时,悬浮培养
的细胞处于游离状态,因而可用离心法收集,D正确。
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5.[2025·河北沧州高二期中]下图为动物细胞培养过程的示意图。
下列叙述正确的是( )
A.步骤 通常需要用果胶酶和纤维素酶对动物组织进行处理
B.进行动物细胞培养时应通入适量的 以维持细胞呼吸
C.步骤③是原代培养,培养基中通常需要加入血清等天然成分
D.动物细胞培养过程中,细胞均贴附在培养瓶的瓶壁上生长
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[解析] 步骤 通常需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对动物组织进
行处理,A错误;进行动物细胞培养时气体条件为 空气和
,其中是为了维持培养液的 ,B错误;原代培养是
指动物组织经处理后的初次培养,步骤③是原代培养,培养基中通
常需要加入血清等天然成分,C正确;有些细胞如骨髓瘤细胞不会贴
壁生长,D错误。
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6.[2025·湖北武汉高二月考]我国野生梅花鹿数量极为稀少,是国
家Ⅰ级重点保护野生动物。为保存野生梅花鹿的遗传资源,研究人员
以耳缘组织为材料,成功培养了原代梅花鹿细胞,并建立了成纤维
细胞系(具备分化成各种细胞的潜力),同时对其进行了冻存保存
(过程如图所示)。下列叙述错误的是( )
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A.鹿成纤维细胞系细胞类似于干细胞,具有分裂和分化的能力
B.鹿成纤维细胞系冻存时细胞代谢被抑制,细胞中酶的活性较弱
C.步骤①中常用胰蛋白酶处理,细胞悬液出现贴壁后还需用胰蛋白
酶处理
D.在原代培养过程中,培养环境需要不断通入无菌,不需要
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[解析] 成纤维细胞系具备分化成各
种细胞的潜力,类似于干细胞,具
有分裂和分化的能力,A正确;低温会抑制酶活性,因此鹿成纤维细胞
系冻存时细胞代谢被抑制,细胞中酶的活性较弱,B正确;步骤①中常
用胰蛋白酶处理使动物组织碎块分散成单个细胞,细胞悬液出现贴壁后
还需用胰蛋白酶处理分散成单个细胞,制成细胞悬液,再转入培养液中
进行传代培养,C正确;细胞培养所需气体主要有和, 是细胞
代谢所必需的,的主要作用是维持培养液的 ,所以在原代培养过
程中,要将培养瓶置于含有的空气和的 的混合气体的培养箱
中进行培养,D错误。
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7. 细胞系(细胞系是指从同一原代细胞中连续培养得到的一系列
细胞)来源于非洲绿猴肾上皮细胞,具有无限分裂和贴壁生长的特性。
将新型冠状病毒接种到细胞后,经 细胞培养、新型冠状病
毒灭活及提纯,可制成新型冠状病毒灭活疫苗。下列叙述错误的是
( )
A. 细胞可作为新型冠状病毒大量繁殖的“培养基”
B.恒温培养箱中的浓度维持在左右,以维持培养液的
C.分瓶前需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的 细胞
D.每传代1次,培养瓶中的 细胞分裂1次
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[解析] 病毒必须寄生在活细胞内,因此 细胞可作为新型冠状病
毒大量繁殖的“培养基”,A正确;动物细胞培养常在含有 空气和
的的混合气体的恒温培养箱中进行, 的主要作用是维持
培养液的 ,B正确;胰蛋白酶可使组织细胞分散,因此分瓶前需
要用胰蛋白酶处理贴壁生长的 细胞,以进行传代培养,C正确;
当细胞发生接触抑制时需要进行传代培养,每传代1次,培养瓶中的
细胞分裂不止1次,D错误。
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8.[2025·安徽安庆高二期末]体外培养的细胞,其生命期限并非是无
限的。大多数细胞生长繁殖一段时间后,将自行停止生长。下图表示
人体成纤维细胞在培养液中连续培养时的数量变化曲线,下列叙述正
确的是( )
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A.一般用胃蛋白酶处理新鲜组织以获取单个细胞
进行培养
B.原代培养的细胞,其性状与体内相应细胞相似,
可用于药物检测实验
C.传代期的细胞少数贴壁生长、多数悬浮在培养
液中生长增殖
D.在细胞连续培养过程中,贴壁细胞表面相互接
触时细胞仍能分裂增殖
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[解析] 新鲜的动物组织需用胰蛋白酶或胶原蛋白
酶处理,将组织分散成单个细胞,A错误; 原代
培养的人体成纤维细胞为二倍体核型,其性状与
体内相应细胞相似,可用于药物检测实验,B正确;
传代期的细胞少数悬浮在培养液中生长增殖,多
数贴壁生长,C错误;连续培养过程中,当细胞表面相互接触时细胞通
常会停止分裂增殖,因此需要分瓶培养,D错误。
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知识点三 干细胞培养及其应用
9.干细胞的培养成功是动物细胞培养领域的重大成就之一,下列相关
叙述正确的是( )
A.胚胎干细胞具有全能性,存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种
组织和器官中
B.造血干细胞具有分化潜能,能分化为任何类型的体细胞
C.精原干细胞具有自我更新能力,体外培养时无须添加天然成分
D.神经干细胞具有组织特异性,在治疗帕金森病、阿尔茨海默病等
方面有重要应用价值
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[解析] 胚胎干细胞是从早期胚胎中分离提取的细胞,骨髓和脐带血
中存在的是成体干细胞,A错误;造血干细胞具有分化潜能,可以分
化为各种血细胞,而不是分化为任何类型的体细胞,B错误;精原干
细胞具有自我更新能力,体外培养时需要添加血清等天然成分,C错
误;神经干细胞具有组织特异性,可以分化为相应的神经细胞,在
治疗帕金森病、阿尔茨海默病等方面有重要应用价值,D正确。
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10.将处理后的胚胎干细胞移植到因胰岛受损而患糖尿病的小白鼠体
内后,该鼠血糖浓度趋于正常。上述事实说明( )
A.该过程中胚胎干细胞的遗传物质发生了改变
B.移植的细胞中所有基因都得到表达
C.移植的细胞具有无限增殖的能力
D.干细胞经处理后进行了定向分化
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[解析] 题述过程中胚胎干细胞的遗传物质没有发生改变,A不符合
题意;移植的细胞发生了基因的选择性表达,并不是所有基因都得
到表达,B不符合题意;该过程只能说明胚胎干细胞能分化成相应的
组织细胞,不能说明其具有无限增殖的能力,C不符合题意;该鼠移
植了处理过的胚胎干细胞后,血糖浓度趋于正常,说明胚胎干细胞
定向分化形成了胰岛B细胞,胰岛B细胞分泌胰岛素参与调节血糖平
衡,D符合题意。
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11.牙齿再生术的难点在于牙髓再生和牙周组织再生。研究人员经历
多年努力,从患者脱落的乳牙中获取牙髓干细胞,经过体外培养,
将形成的干细胞聚合体植入患者牙髓腔里,使得牙齿神经、血管再
生,完全恢复牙齿原有功能。针对以上技术,下列叙述正确的是
( )
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A.此技术的原理与植物组织培养的原理相同
B.此技术需要适宜的温度和
C.牙髓干细胞与胚胎干细胞一样都可以分化为成年动物体内任何一
种类型的细胞,甚至产生个体
D.对于牙髓干细胞的培养过程需要经历原代培养,用胰蛋白酶处理
后再用离心法收集悬液中的细胞进行传代培养
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[解析] 此技术属于动物细胞培养,原理是细胞增殖,而植物组织培
养的原理是植物细胞的全能性,两者不同,A错误;此技术即动物细
胞培养需要适宜的温度和 ,B错误;牙
髓干细胞具有组织特异性,不能分化为成年动物体内任何一种类型
的细胞,C错误;牙髓干细胞(贴壁生长)的培养过程需要经历原代培
养,用胰蛋白酶处理后再用离心法收集悬液中的细胞进行传代培养,
D正确。
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12.我国科学家成功将大熊猫皮肤成纤维细胞重编程为诱导多能干细
胞。这些大熊猫 不仅能在体外培养条件下稳定增殖传代,
还能在体内和体外条件下分化产生三个胚层及各种不同类型的细胞,
展现出很好的发育潜能。下列叙述错误的是( )
A.将大熊猫成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞的过程相当于脱分
化过程
B.胚胎干细胞主要来源于早期胚胎,具有发育成完整个体的潜能
C.大熊猫皮肤成纤维细胞被诱导为 的过程体现了细胞的全能性
D.利用诱导多能干细胞治疗疾病,理论上可避免发生免疫排斥反应
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[解析] 脱分化是指已分化的细胞失去特有的结构和功能,恢复到未
分化状态的过程。将大熊猫成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞,
使其从已分化的状态转变为具有多向分化潜能的细胞,此过程相当
于脱分化,A正确。胚胎干细胞存在于早期胚胎中,具有分化为成年
动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和
器官甚至个体的潜能,B正确。细胞全能性是指细胞经分裂和分化后,
仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。大熊猫皮
肤成纤维细胞被诱导为 ,并没有发育成完整的个体和分化成其
他各种细胞,所以不能体现细胞的全能性,C错误。利用诱导多能干
细胞治疗疾病,由于是自身细胞诱导形成的,理论上可避免发生免
疫排斥反应,D正确。
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13.[2025·辽宁沈阳高二月考]我国科学家首次利用化学重编程多能
干细胞 分化而来的胰岛细胞自体移植到一名1型糖尿病
患者体内,具体流程如图所示。下列分析错误的是( )
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A.从患者体内抽取的脂肪组织可用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理成
单个细胞
B.在诱导形成 的过程中,需精确控制培养基的成分
C. 能够被诱导成胰岛细胞依赖于细胞的全能性
D.该技术的成功有利于患者摆脱对外源胰岛素的依赖
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[解析] 脂肪组织要经过胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,分散成单个细
胞,A正确;在诱导形成 的过程中,需精确控制培养基的成分,
B正确; 能够被诱导成胰岛细胞属于细胞分化,依赖于基因的
选择性表达,C错误;该技术将分化产生的胰岛细胞移植回患者体内,
使其能正常分泌胰岛素,因此有利于患者摆脱对外源胰岛素的依赖,
D正确。
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14.(10分)[2024·福建南平高二月考]科研人员研究了不同“层次”血
清对细胞增殖的影响,请回答下列问题:
科研人员将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置
一段时间。取三根刻度吸管,将血清从上到下轻轻吸取均等的三份,分
别装入消毒后的瓶中,标记为上、中、下,再分别从三个瓶中吸取等量
的血清置于另一小瓶中,混合均匀备用。分别取等量的不同“层次”的
血清和混合血清加入新配制的动物细胞培养液中,再接种小鼠上皮细
胞接种细胞密度为个/,在适宜条件下培养 后,进行计
数,结果如下表。
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组别 上 中 下 混
细胞数/(个·mL )
(1)(1分)细胞培养过程中, 的主要作用是________________。
维持培养液的
[解析] 动物细胞培养需要一定的气体环境,即空气 ,其中
的主要作用是维持培养液的 。
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(2)(4分)培养液中加入动物血清的作用是________________________
_________________。在吸取血清的过程中,要严格禁止振动和摇晃,
目的是_______________________。
提供细胞生存和增殖所必
需的生长调节因子
防止不同“层次”血清混合
[解析] 培养液中加入动物血清的作用是提供细胞生存和增殖所必需
的生长调节因子。本实验的目的是研究不同“层次”血清对细胞增殖
的影响,因此在吸取血清的过程中,要严格禁止振动和摇晃,以防止不同
“层次”血清混合。
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(3)(1分)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如图所示的操作,统计出
来的数据比实际值偏________。
大或小
[解析] 用血细胞计数板计数细胞时,应该先盖上盖玻片,然后滴加细胞
悬液,若先滴加细胞悬液,后盖上盖玻片,盖玻片悬浮,统计的计数室的
液体量增大,则统计出来的数据比实际值偏大,若滴加细胞悬液过程
中产生了气泡,则数据偏小。
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(4)(2分)从表中结果可以看出,不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不
同。造成这种结果的主要原因是_______________________________。
不同“层次”血清中的营养成分不同
[解析] 从表中结果可以看出,不同“层次”血清对细胞增殖的影响不同。
造成这种结果的主要原因是不同“层次”血清中营养成分不同。
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(5)(2分)根据实验结果,在动物细胞培养过程中,正确使用血清的方法
是________________________________。
将血清充分混匀后再加入培养液中
[解析] 根据实验结果,在动物细胞培养过程中,正确使用血清的方法是
将血清充分混匀后再加入培养液中。
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15.(11分)[2024·天津耀华中学
高二期末]胚胎干细胞从胚胎
中获取,但这涉及伦理问题,因而
限制了它在医学上的应用。科学家通过体外诱导成纤维细胞, 获得了类
似于胚胎干细胞的一种细胞,称为诱导多能干细胞 (简称 细胞)。因为
诱导过程无须破坏胚胎,而且细胞可来源于病人自身的体细胞,所以
细胞的应用前景优于胚胎干细胞。科学家将小鼠多能干细胞的4种基因
、、和 ,同时导入已分化的小鼠成纤维细胞中,
结果后者被诱导成为多能干细胞,此类细胞能分裂并产生皮肤细胞、神
经细胞以及可以搏动的心肌细胞等。请分析回答下列问题:
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(1)(2分)按照发育状态,人体干细胞可以分为____________________
_____两大类。
胚胎干细胞、成体干
细胞
[解析] 按照发育状态,人体干细胞可以分为成体干细胞和胚胎干细
胞两大类。
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(2)(4分)④过程表示细胞发生了分化,原因是D、和 细胞中的
_______________(填2种化合物名称)种类不完全相同。过程④为
细胞提供的条件不同,分化得到的细胞不同,可知细胞分化是________
_________的结果。若 细胞来源于病人自身体细胞的诱导,再将其
分化出的细胞移入患者体内的优势是____________________。
、蛋白质
基因选
择性表达
避免了免疫排斥反应
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[解析] ④表示细胞分化过程,细胞分化是由于基因的选择性表达,
导致转录出的 和翻译出的蛋白质不完全相同。细胞分化是基
因选择性表达的结果。若 细胞来源于病人自身体细胞的诱导,再将
其分化出的细胞移入患者体内,由于自体细胞主要组织相容性抗原相
同,故可以避免发生免疫排斥反应。
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(3)(5分)艾弗里在证明 是遗传物质的实验中,通过分别向不同实
验组加入各类酶来确认“转化因子”的化学本质,利用了自变量控制
的______原理。参考此方法,如果要了解、、
和基因在诱导 细胞时,每个基因作用的相对大小,该如何进
行实验?请你给出实验设计的思路。 __________________________
___________________________________________________________
___________________________________________________________
________________________________________________ 。
减法
依次去掉1个基因,将其他3
个基因导入小鼠成纤维细胞中,通过与导入4个基因的小鼠成纤维细
胞的诱导情况进行比较,来推测缺失的基因对诱导 细胞的影响,
进而判断每个基因作用的相对大小(其他合理答案亦可)
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[解析] 艾弗里通过加入酶水解某类特
定的物质来确认“转化因子”的化学本
质,利用了减法原理。若用减法原理
探究、、和基因在诱导 细胞时,每个基因
作用的相对大小,实验设计思路为在导入基因时,依次去掉某个特定的
基因,只导入其他3个基因到小鼠成纤维细胞中,通过与导入4个基因的
小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较,来推测缺失的基因对诱导 细
胞的影响,进而判断每个基因作用的相对大小。
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预习梳理 夯基础
一、动物细胞工程
1.动物细胞融合 动物细胞核移植 2.动物细胞培养
二、动物细胞培养
1.单个细胞 生长和增殖 2.(1)糖类 血清 无机盐 液体培养基
培养液 (2)灭菌 无菌 细胞代谢物积累 (3)<m></m> <m>
</m> (4)<m></m> <m></m> 细胞代谢所必需 维持培养液的<m></m> 松盖
培养瓶 <m></m>空气和</m> CO2培养箱 3.(2)相互接触 停止
(3)经处理 (4)离心法 胰蛋白酶 (5)细胞增殖
答 案 速 查
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三、干细胞培养及其应用
2.(1)早期胚胎 细胞 所有组织和器官甚至个体 (2)成体组织或器
官 造血干细胞 神经干细胞 精原干细胞 组织特异 细胞或组
织 完整个体 (3)伦理 免疫排斥
3.(1)造血 神经 诱导多能 (2)再生医学
预习检测 判正误
(1)× (2)× (3)× (4)× (5)× (6)√ (7)√ (8)× (9)×
答 案 速 查
任务活动 提素养
任务一 动物细胞培养
(1)胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞密度过大 接触抑制 离心 胰蛋
白酶 传代培养 (2)细胞增殖 有丝分裂 (3)<m></m>培养箱 细
胞 (1)蛋白质 不能 多数动物细胞培养的适宜<m></m>为<m></m>,在
此条件下,胃蛋白酶失去活性 (2)原代培养 传代培养 (3)血清
中含有细胞所需而人们尚未完全研究清楚的营养物质 (4)脱分化和
再分化 (5)细胞分裂能力强,易于培养 细胞分化程度低,增殖能
力强,更易于培养
答 案 速 查
反馈评价
例1 C 例2 D
任务二 干细胞的种类及作用
(1)增殖和分化 (2)<m></m>细胞含有本物种生长发育所需的全套基因
未体现 (3)<m></m>细胞诱导过程无须破坏胚胎,可避免伦理问题,而
且<m></m>细胞可来源于病人自身的体细胞,理论上可避免免疫排斥反
应 (4)[提示]本题为开放性问题,答案合理即可,如存在导致肿
瘤发生的风险等。
答 案 速 查
反馈评价
例3 B 例4 C
备用习题
1.A 2.B 3.A 4.B 5.A 6. (1) 人们对细胞生长增殖所需的营养物
质尚未全部研究清楚,血清含有适合动物细胞生长增殖的多种物质
(2) 产生接触抑制 多 胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)(3) 含Y的无菌生理盐水
mRNA 蛋白质
答 案 速 查
练习册
知识点一 动物细胞培养的条件
1.B 2.D 3.C
知识点二 动物细胞培养的过程
4.D 5.C 6.D 7.D 8.B
知识点三 干细胞培养及其应用
9.D 10.D 11.D 12.C 13.C
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综合应用练
14.(1)维持培养液的<m></m> (2)提供细胞生存和增殖所必需的生长调节
因子 防止不同“层次”血清混合 (3)大或小 (4)不同“层次”血清
中的营养成分不同 (5)将血清充分混匀后再加入培养液中
15.(1)胚胎干细胞、成体干细胞 (2)<m></m>、蛋白质 基因选择性
表达 避免了免疫排斥反应 (3)减法 依次去掉1个基因,将其他3
个基因导入小鼠成纤维细胞中,通过与导入4个基因的小鼠成纤维细
胞的诱导情况进行比较,来推测缺失的基因对诱导<m></m>细胞的影响,
进而判断每个基因作用的相对大小(其他合理答案亦可)
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