专题12 发酵工程（3年汇编）（安徽专用）2024-2026年高考生物真题分类汇编

**基本信息** 聚焦发酵工程专题，汇编安徽近3年高考真题及模拟题，以工程菌改造、传统发酵等真实情境为载体，覆盖微生物培养与发酵应用核心考点。 **题型特征** |题型|题量|知识覆盖|命题特色| |----|----|----------|----------| |选择题|19题|微生物培养（灭菌、培养基筛选）、发酵工程应用（丁二醇生产、黄酒酿造）|结合科研实验（如石油降解菌分离）和传统工艺（酸笋发酵），考查操作规范与原理分析| |非选择题|2题|PCR扩增、发酵条件优化、工程菌筛选|以2024安徽真题丁二醇发酵为典型，强化“构建-调控-优化”工程思维，体现跨模块综合考查趋势|

专题12 发酵工程 考点1 微生物的培养和应用 1.【答案】B 考点2 发酵工程及其应用 1.【答案】（1）在 PCR 反应中，需要利用高温使 DNA 双链解旋，普通的 DNA聚合酶在高温下会变性失活，而 Tag DNA 聚合酶能够耐高温,在高温条件下依然具有活性     （2）在平板中添加氯霉素，再将在含氯霉素的培养基中生长的菌落利用影印法影印到添加四环素的培养基中，在含有四环素的培养基中不能正常生长的菌落由导入目的基因的菌株形成     （3）① 乳酸或有机酸    ② 9     （4）大肠杆菌进行细胞呼吸时会释放大量热量     （5）提取、分离、纯化      1.【答案】C 2.【答案】B 3.【答案】A 4.【答案】A 5.【答案】D 6.【答案】C 7.【答案】B 8.【答案】B 9.【答案】C 10.【答案】C 11.【答案】B 12.【答案】D 13.【答案】B 14.【答案】C 15.【答案】C 16.【答案】C 17.【答案】A 18.【答案】B 19.【答案】B 20.【答案】（1）EPO基因转录的mRNA     （2）① XhoI、SalI    ② 只有在引物P1、P2的5′端分别添加XhoI、SalI，①链3′端位于启动子端的表达载体才不会被受体菌中的XhoI、SalI破坏，EPO基因能表达     （3）① 2    ② CaCl2溶液     （4）①在含有氨苄青霉素的培养基上能生长的受体菌可能只有空载质粒；②携带了(反接)目的基因质粒，但又被受体菌中的XhoI、SalI将其从表达载体上切除(合理答案，答出1点即可)      试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题12 发酵工程 3年真题1年模拟 考点分类 安徽考情 命题规律 考点01 微生物的培养和应用 2026·安徽（1题） · 情境设置：以工程菌改造、产物合成等真实科研生产情境为载体，体现生物技术应用价值 · 考查重点：聚焦基因工程与发酵工程融合，考查菌株构建、代谢调控及产量优化等核心操作 · 命题趋势：趋向跨模块综合，强化"设计-构建-优化"完整工程思维，突出解决实际生产问题的能力考查 考点03 发酵工程及其应用 2024·安徽（1题） 考点1 微生物的培养和应用 1.（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） A. 固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B. 牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C. 物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D. 物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 【答案】B 【详解】 A、培养基需要采用湿热灭菌法进行灭菌，A错误； B、牛肉膏蛋白胨培养基中含有微生物生长所需的碳源、氮源（包括组氨酸在内的有机氮源）、磷酸盐和维生素等，属于完全培养基，因此牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌，B正确； C、已知基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落，据图示可知，基本培养基上只有滤纸片周围出现了少数的几个菌落a，其它部位的营养缺陷型菌体没有形成菌落，因此可推测低浓度的物质M具有诱变作用，可使营养缺陷型菌体突变为可自身合成组氨酸的突变体，该突变体可利用自身合成的组氨酸合成蛋白质，因此可形成菌落a，并非菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸，C错误； D、根据右图可知，含有高浓度M的滤纸片周围缺陷型菌体不能生长形成菌落，说明物质M有抑制作用，即使M有诱变作用，但由于基因突变的频率较低，因此抑菌圈边缘的菌落大多数仍为缺陷型菌体，不能在基本培养基上生长，D错误。 考点1 发酵工程及其应用 1.（2024·安徽·高考真题）丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域。兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。回答下列问题。 （1）扩增X基因时，PCR反应中需要使用Taq DNA聚合酶，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （2）使用BamH I和 SalI限制酶处理质粒和X基因，连接后转化大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上（如图）。在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 、 （3）研究表明，碳源和氮源的种类、浓度及其比例会影响微生物生长和发酵产物积累。如果培养基中碳源相对过多，容易使其氧化不彻底，形成较多的　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　，引起发酵液pH值下降。兴趣小组通过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g.L-1和15 g.L-1。在此基础上，设置不同浓度的木薯淀粉（90 g.L-1、100 g.L-1、110 g.L-1）和酵母粉（12 g.L-1、15g.L-1、18 g.L-1）筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置　　　　　　（填数字）组实验（重复组不计算在内）。 （4）大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （5）发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　，最终获得发酵产品。 【答案】（1）在 PCR 反应中，需要利用高温使 DNA 双链解旋，普通的 DNA聚合酶在高温下会变性失活，而 Tag DNA 聚合酶能够耐高温,在高温条件下依然具有活性     （2）在平板中添加氯霉素，再将在含氯霉素的培养基中生长的菌落利用影印法影印到添加四环素的培养基中，在含有四环素的培养基中不能正常生长的菌落由导入目的基因的菌株形成     （3）① 乳酸或有机酸    ② 9     （4）大肠杆菌进行细胞呼吸时会释放大量热量     （5）提取、分离、纯化      【分析】 PCR反应过程:变性→复性→延伸。变性:当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链，复性:温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，延伸:72℃左右时，Taq酶有最大活性，可使DNA新链由5'端向3'端延伸。 (1)小问详解： 在 PCR 反应中，变性的温度需要90℃以上，需要利用高温使 DNA 双链解旋，普通的 DNA聚合酶在高温下会变性失活，而 Tag DNA 聚合酶能够耐高温，在高温条件下依然具有活性，因此扩增X基因时，PCR反应中需要使用Taq DNA聚合酶。 (2)小问详解： 据图可知，使用BamH I和 Sal I限制酶处理质粒和X基因，四环素抗性基因被破坏，氯霉素抗性基因保留，因此能在氯霉素培养基上生存，不能在四环素培养基上生存的大肠杆菌即是含目的基因菌株，因此实验思路为：在平板中添加氯霉素，再将在含氯霉素的培养基中生长的菌落利用影印法影印到添加四环素的培养基中，在含有四环素的培养基中不能正常生长的菌落由导入目的基因的菌株形成。 (3)小问详解： 碳源是微生物生长所需的主要能量来源，而氮源则是构成细胞物质和合成蛋白质、核酸等生物大分子的基本原料。当培养基中碳源相对过多时，微生物可能会优先利用碳源进行能量代谢，而氮源的消耗相对较慢。这会导致碳源氧化不完全，形成较多的乳酸或有机酸。这些乳酸或有机酸会在溶液中解离，使发酵液的pH值下降。因为要筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，木薯淀粉浓度有3种，酵母粉浓度也有3种，因此理论上应设置3×3=9组实验。 (4)小问详解： 大肠杆菌进行细胞呼吸时会释放大量能量，绝大多数以热能形式释放，因此大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高。 (5)小问详解： 发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品分离、提纯等方面，因此发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经提取、分离、纯化，最终获得发酵产品。 …………………… 模拟题精选 1.（2026·安徽铜陵·一模）黄酒传统酿制中，先以蒸煮的小麦或麸皮扩大培养酒曲（含多种微生物，可产生淀粉酶），再将酒曲与蒸煮后的糯米、大米混合，然后加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨得成品。下列叙述错误的是（　　） A. 小麦、麸皮可为酒曲微生物提供碳源和氮源 B. 将糯米等蒸煮可杀死杂菌并使淀粉更易分解 C. 酒母发酵时需频繁开盖搅拌以提高发酵效率 D. 黄酒酿造过程中伴随有pH下降和气体产生 【答案】C 【详解】 A、小麦、麸皮中含有糖类和蛋白质等物质，可为酒曲微生物提供碳源和氮源，A正确； B、将糯米等蒸煮，高温可杀死杂菌，同时使淀粉糊化，更易被淀粉酶分解，B正确； C、酒母发酵利用的是酵母菌的无氧呼吸，产生酒精和二氧化碳，若频繁开盖搅拌，会进入氧气，抑制酵母菌的无氧呼吸，且可能引入杂菌，不能提高发酵效率，C错误； D、黄酒酿造过程中，酵母菌无氧呼吸产生二氧化碳，溶于发酵液形成碳酸，使溶液pH下降，同时有气体（二氧化碳）产生，D正确。 故选C。 2.（2026·安徽合肥·一模）为提高葡萄酒品质，某校师生利用如图所示技术流程，筛选出发酵速度快、具有较强酒精耐受力的优良酿酒酵母（无法利用赖氨酸），其能在WL培养基上形成奶油状略带绿色、球形的菌落。下列相关说法正确的是（　　） 注：YPD培养基和WL培养基是酵母菌培养常用培养基，其中WL培养基含有指示剂溴甲酚绿 A. III属于选择培养基，依据其上生长的菌落特征，可挑选出优良酵母菌种 B. 进行酒精耐受力检测时，需重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基 C. 从III中挑取菌种接种到IV上培养，若能生长，则可判定为优良酿酒酵母 D. I、II均为液体培养基，图中重复操作可提升酿酒酵母的酒精发酵能力 【答案】B 【详解】 A、WL培养基Ⅲ含有指示剂溴甲酚绿，且优良酿酒酵母能在其上形成奶油状略带绿色、球形的菌落，它属于鉴别培养基，而非选择培养基，A错误； B、进行酒精耐受力检测时，需要重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基，以此来筛选出酒精耐受力强的酵母菌，B正确； C、优良酿酒酵母无法利用赖氨酸，而培养基Ⅳ是以赖氨酸作为唯一氮源的培养基，因此优良酿酒酵母无法在Ⅳ上生长，C错误； D、YPD培养基Ⅰ一般为固体培养基，YPD培养基Ⅱ为液体培养基；重复操作是为了筛选出更符合要求的酵母菌，而不是直接提升其酒精发酵能力，D错误。 故选B。 3.（2026·安徽宿州·质量检测）与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量均明显提高。下列相关叙述正确的是（　　） A. 向发酵罐内接种前一般需要对纯化的优良单一菌种进行扩大培养 B. 发酵条件变化会影响微生物的生长繁殖，但不影响微生物的代谢途径 C. 发酵工程与传统发酵技术最大的区别是前者可利用微生物来进行发酵 D. 通过发酵工程可以获得大量的微生物菌体，从菌体中提取单细胞蛋白 【答案】A 【详解】 A、工业发酵罐的体积一般为几十到几百立方米，接入的菌种总体积需要几立方米到几十立方米。所以，向发酵罐内接种前一般需要对纯化的优良单一菌种进行扩大培养，以获得足够数量的菌体用于大规模发酵罐接种，该操作可提高发酵效率，A正确； B、发酵条件（如温度、pH、溶氧量等）变化，不仅会影响微生物的生长繁殖，也可能会影响微生物的代谢途径（如酵母菌在有氧时进行有氧呼吸，无氧时进行酒精发酵），B错误； C、传统发酵技术（如制作泡菜、果酒）利用天然存在的菌种，发酵工程通常会利用通过微生物培养技术获得的单一菌种，两者最大区别在于发酵工程采用纯种培养和人工控制发酵条件，实现工业化、标准化生产，C错误； D、单细胞蛋白指的是通过发酵获得的大量微生物菌体，无需“从菌体中提取”，D错误。 故选A。 4.（2026·安徽鞍山·一模）某生物兴趣小组为探究不同抗生素对大肠杆菌的抑制效果，进行了如下实验：将大肠杆菌菌液均匀涂布于LB固体培养基表面，然后在培养基上放置分别含有青霉素、链霉素和红霉素的滤纸片，培养24小时后观察抑菌圈大小。下列叙述错误的是（　　） A. 实验需设置无抗生素的滤纸片作为对照，以排除杂菌污染的干扰 B. 涂布菌液前需将涂布器在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后再使用 C. 若某滤纸片周围出现的抑菌圈越大，说明该抗生素的抑菌效果越好 D. 配制LB培养基时需添加琼脂、碳源、氮源、水和无机盐等，并调节pH后灭菌 【答案】A 【详解】 A、实验设置无抗生素的滤纸片作为对照，目的是排除滤纸片本身或溶剂对实验结果的影响，而非用于排除杂菌污染。杂菌污染需通过无菌操作技术（如培养基灭菌、无菌涂布等）控制，A错误； B、涂布器灼烧灭菌可杀灭残留微生物，冷却后使用避免高温杀死待涂布的大肠杆菌，B正确； C、抑菌圈直径越大，表明抗生素扩散能力强且对大肠杆菌的抑制效果越显著，这是滤纸片法评价抑菌效果的常用指标，C正确； D、LB培养基为固体培养基，需添加琼脂作为凝固剂；微生物生长需碳源、氮源、无机盐、水等基本营养；调节pH可维持适宜渗透压；灭菌（如高压蒸汽灭菌）是避免杂菌干扰的必要步骤，D正确。 故选A。 5.（2026·安徽滁州·一模）瘤胃是牛、羊等反刍动物的特殊器官，生活着多种厌氧微生物（含能分解尿素的菌株），研究人员从瘤胃中分离、鉴定尿素分解菌（如下图），以期进一步应用。家庭传统发酵、食品工业发酵等也依赖特定微生物的代谢活动。下列叙述正确的是（　　） A. 家庭制作酸奶时，常加入少量抗生素以避免杂菌污染 B. 腐乳制作过程中，豆腐中的蛋白质全部被分解为氨基酸 C. 啤酒的工业化生产过程中，酒精的产生和积累主要在后发酵阶段完成 D. 在甲、乙、丙、丁的培养基表面加入一层无菌石蜡有利于获得目的菌 【答案】D 【详解】 A、家庭制作酸奶时，加入抗生素会杀死发酵所需的乳酸菌，导致发酵失败，所以不能加抗生素，A错误； B、腐乳制作过程中，蛋白酶会将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，而不是全部分解为氨基酸，B错误； C、啤酒工业化生产时，酒精的产生和积累主要在主发酵阶段完成，后发酵阶段主要是风味物质的形成，C错误； D、在甲、乙、丙、丁的培养基表面加入一层无菌石蜡，可以营造无氧环境，有利于获得目的菌，D正确。 故选D。 6.（2026·安徽芜湖·一模）青霉素发酵是高耗氧过程，在发酵过程中总有头孢霉素产生。人们通过对青霉菌代谢途径的研究发现，在青霉素与头孢霉素的合成过程中，它们有一个共同的前体，这个前体经过两种不同酶的作用分别合成两种产物。下列相关叙述正确的是（       ） A. 青霉素属于抗生素，因此在青霉素生产过程中不会发生杂菌污染 B. 通过敲除控制前体合成的酶的基因，可以使青霉菌只产生一种产物 C. 将血红蛋白基因导入青霉菌是一种保证发酵过程中高效供氧的思路 D. 工业化生产之前无需进行青霉菌纯培养，可直接接种到发酵罐中发酵 【答案】C 【详解】 A、青霉素虽为抗生素，但其主要抑制细菌，且并不能抑制全部细菌，因此青霉素生产过程中也需严格无菌操作以防止杂菌污染，A错误； B、题意显示，在青霉素与头孢霉素的合成过程中，它们有一个共同的前体，这个前体经过两种不同酶的作用分别合成两种产物，因此，通过敲除控制其中一种酶（如催化合成头孢霉素的酶）的基因，可阻断该分支代谢途径，使前体仅用于合成青霉素，若敲除控制前体合成酶的基因，则不能得到青霉素，B错误。 C、血红蛋白基因表达产物可结合氧气，提高青霉菌对氧的利用率，可解决"高耗氧"问题，符合发酵工艺优化方向，C正确。 D、工业化生产前必须进行纯培养，确保菌种纯度和代谢活性，避免杂菌竞争影响产物产量与质量，D错误。 故选C。 7.（2026·安徽·一模）为治理被石油污染的土壤，研究人员欲分离能高效降解石油的细菌，实验流程如下图所示，关于该实验的叙述，正确的是（       ） ①采集土壤样品→②液体富集（石油为唯一碳源）→③梯度稀释→④涂布平板（石油为唯一碳源）→⑤30℃倒置培养→⑥检测石油残留量筛选目标菌 A. 步骤②和④用石油为唯一碳源，都能定向选择降解石油的微生物 B. 步骤③降低菌液浓度，其主要目的是便于分离和计数单菌落 C. 为筛选耐盐性强的石油降解菌，只需在步骤④的平板中加入高浓度氯化钠即可 D. 平板上菌落的大小、形状或颜色是判断其高效降解石油能力的可靠直观指标 【答案】B 【详解】 A、步骤②是富集培养降解石油的微生物，不是定向选择，步骤④（涂布平板）以石油为唯一碳源，属于选择培养基，A错误； B、步骤③梯度稀释可降低菌液浓度，使涂布平板后形成分散的单菌落，便于分离纯化目标菌并计数，B正确； C、筛选耐盐性强的石油降解菌需在富集（步骤②）和筛选（步骤④）阶段均加入高浓度氯化钠，仅步骤④添加无法确保前期富集的微生物具备耐盐特性，C错误； D．菌落大小、形状或颜色仅反映微生物形态学特征，与石油降解能力无直接关联，需通过步骤⑥检测石油残留量定量评估降解效率，D错误。 故选B。 8.（2026·安徽·一模）某醋厂生产的老醋因其乳酸含量高而独具风味，源于其采用独特的分层固体发酵法。如图1是分层固体发酵法示意图，图2为发酵过程中检测的醋酸杆菌密度。酒醅是经蒸煮糊化后的粮食原料拌入糖化剂（如曲粉）和酒曲，正在进行酒精发酵的固态物料。醋醅是含有酒精的液态或固态物料（通常由酒醅发酵后的酒液等）拌入疏松材料（如谷壳、麸皮）和醋酸菌种后，正在进行醋酸发酵的固态物料。下列说法错误的是（       ） A. 发酵过程中，发酵缸中下层醋醅有利于乳酸菌繁殖和发酵，积累乳酸 B. 发酵过程中，接种醋酸杆菌后，需封闭发酵缸置于18-30℃条件下培养 C. 据图2分析，A、B层颠倒后B层醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是氧气浓度 D. 发酵后期不同种类乳酸菌的种间竞争加剧，成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少 【答案】B 【详解】 A、乳酸菌是厌氧菌，发酵缸中下层氧气含量低，有利于乳酸菌繁殖和发酵，积累乳酸，A‌正确； B、醋酸杆菌是好氧细菌，在醋酸发酵阶段需要充足的氧气，所以接种醋酸杆菌后不能封闭发酵缸，且醋酸杆菌发酵的适宜温度是30 - 35℃，而不是18-30℃，B‌错误； C、醋酸杆菌是好氧菌，A、B层颠倒后，B层由下层变为上层，氧气浓度增加，所以B层醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是氧气浓度，C‌正确‌； D、发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化，加剧了不同种类乳酸菌的种间竞争，导致成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，D正确‌。 故选B。 9.（2026·质检）白蚁是对木材具有严重破坏性的害虫，北美圆柏是天然抗白蚁的树木，其体内生活着一些内生菌，为研究这些内生菌是否与北美圆柏抗白蚁的能力有关，研究人员将培养过内生菌的培养液（发酵液）浓缩不同倍数后进行白蚁饲喂实验，结果如下表所示。随后研究者又将白蚁肠道中的纤维素分解菌均匀涂布于固体培养基表面，并在A处滴加发酵液进行抑菌实验，结果如图所示。下列相关叙述错误的是（       ） 样品 白蚁死亡率（%） 10d 14d 发酵液浓缩10倍 99.3 100.0 发酵液浓缩2倍 97.6 100.0 发酵液 91.1 98.6 对照 6.2 8.7 白蚁饲喂实验结果 A. 新鲜或腐败木材、叶片均可成为白蚁食物，因此白蚁属于生态系统中的消费者和分解者 B. 由白蚁饲喂实验结果可知，内生菌发酵液可通过提高白蚁种群的死亡率来控制其数量 C. 图中抑菌实验中，应在B处设置对照实验，其具体操作是在B处滴加等体积的无菌水 D. 推测北美圆柏抗白蚁的能力可能与内生菌抑制白蚁肠道中纤维素分解菌的生命活动有关 【答案】C 【详解】 A、新鲜或腐败木材、叶片均可成为白蚁食物，“新鲜”提示白蚁为消费者，“腐败”提示白蚁为分解者，A正确； B、根据白蚁饲喂实验结果，内生菌发酵液可提高白蚁种群死亡率，B正确； C、为了形成对照，应在B处滴加等量同种未培养过内生菌的培养液，以排除培养液可能造成的影响，C错误； D、A处出现明显的抑菌圈说明北美圆柏内生菌能产生抑制白蚁体内纤维素分解菌生长（繁殖）的物质，D正确。 故选C。 10.（2026·质检）下列关于微生物的实验及其操作的叙述正确的是（       ） A. “酵母菌的纯培养”实验中，培养基倒平板后还需要进行高压蒸汽灭菌 B. 实验中需要对平板进行标记时，应将标记信息写在皿盖上，不能写在皿底 C. 稀释涂布平板法可以用于分离微生物，也可以用来统计样品中活菌的数目 D. 平板划线法分离微生物时，接种环只需在第一次划线和最后一次划线时灭菌 【答案】C 【详解】 A、“酵母菌的纯培养”实验中，培养基要先灭菌再倒平板，A错误： B、实验中需要对平板进行标记时，应将标记信息写在皿底，如果写在盖上，盖子一旦盖错将无法辨别，所以规范的操作应该是写在皿底，B错误； C、稀释涂布平板法可以用于分离微生物，也可以用来统计样品中活菌的数目，C正确； D、平板划线法分离微生物时，接种环在每次划线后都需要灭菌，D错误。 故选C。 11.（2026·安徽巢湖·一模）下列有关发酵工程的说法正确的是（       ） A. 在发酵罐中接种菌种量越高，其K值越大 B. 啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成在主发酵阶段完成 C. 发酵工程中，发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌体干燥，并将菌体破碎后提取单细胞蛋白 D. 为了防止杂菌污染，发酵工程的中心环节是灭菌 【答案】B 【分析】 发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。发酵工程在医药、食品、农业、冶金、环境保护等许多领域都得到广泛应用。 【详解】 A、K值表示环境容纳量，发酵罐的K值与空间大小、营养物质多少有关，与接种量无关，A错误； B、啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成，主发酵结束后在低温、密闭环境下储存一段时间属于后发酵，B正确； C、用单细胞蛋白制成的微生物饲料，其中的单细胞蛋白是微生物菌体，并不是通过发酵工程从微生物细胞中提取获得，C错误； D、发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，D错误。 故选B。 12.（2026·安徽巢湖·一模）酸笋是我国南方地区一种非常受欢迎的食物，它具有独特的酸味和脆爽口感。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。下列叙述正确的是（       ） A. 竹笋经过高压蒸汽灭菌后接种乳酸菌进行发酵，获得的酸笋品质更高 B. 乳酸菌在线粒体中将葡萄糖分解产生的丙酮酸转化为乳酸和二氧化碳 C. 可利用平板划线法对发酵液中的乳酸菌数量进行检测 D. 发酵过程中乳酸积累使发酵液pH先降低后保持稳定 【答案】D 【分析】 原核细胞与真核细胞相比，最大的区别是原核细胞没有被核膜包被的细胞核，没有核膜、核仁和染色体，原核细胞只有核糖体一种细胞器。 【详解】 A、酸笋是自然发酵食品，若对竹笋进行高压蒸汽灭菌，会杀死竹笋上原有的对发酵有益的微生物，破坏了自然发酵的菌群平衡，无法形成酸笋独特风味，不能获得高品质酸笋，A错误； B、乳酸菌是原核生物，没有线粒体，其无氧呼吸在细胞质基质中进行，将葡萄糖分解为乳酸，不产生二氧化碳，B错误； C、平板划线法不能计数，检测微生物数量常用稀释涂布平板法或显微镜直接计数法，C错误； D、在酸笋发酵过程中，乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，使得发酵液的pH逐渐降低，当pH降低到一定程度时，会抑制乳酸菌的活性，使乳酸产生量不再增加，发酵液pH保持稳定，D正确。 故选D。 13.（2026·安徽合肥·一模）科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌 M 附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。 为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（　　）     A. 过程①使用了平板划线法接种真菌M， 该过程中接种环至少要灼烧4次 B. 若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确 C. 过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是选择培养 D. 真菌M 在培养基b 中培养时，培养基中应加入琼脂 【答案】B 【分析】 1、微生物常见的接种的方法： ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】 A、每次划线前均需灼烧接种环，根据图可知过程①使用了平板划线法接种真菌M共画线4次， 且该过程结束时还需要灼烧，所以该过程中接种环至少要灼烧5次，A错误； B、根据图示信息可知，甲、乙和丙组都是不同种类的细菌，若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明真菌M可能产生了抑制细菌生长的物质，B正确； C、过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是扩大培养，获得更多的纯培养物，C错误； D、真菌M 在培养基b中培养时，培养基b是液体培养基，不应加入琼脂，D错误。 故选B。 14.（2026·安徽芜湖·二模）苹果醋生产的基本工艺流程如下图所示，其中糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。下列叙述正确的是（       ） A. 糖化过程中，麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 B. 酒精发酵时，发酵液中酒精浓度越高越有利于后续醋酸发酵 C. 醋酸发酵时，应通入无菌空气并适当升温以保证醋酸菌的代谢 D. 苹果醋成品罐装前需对其进行灭菌处理，避免营养成分的流失 【答案】C 【详解】 A、糖化的目的是将淀粉转化为葡萄糖，麸曲中的曲霉可产生淀粉酶，催化淀粉水解为葡萄糖，不是对糖类进行氧化分解，A错误； B、酒精浓度过高会抑制醋酸菌的生长代谢，不利于后续醋酸发酵，B错误； C、醋酸菌是好氧型细菌，且醋酸菌的最适生长温度（30~35℃）高于酵母菌，因此醋酸发酵时通入无菌空气、适当升温可保证醋酸菌的正常代谢，C正确； D、苹果醋成品罐装前灭菌的目的是杀死杂菌、延长保存时间，灭菌不能避免营养成分流失，D错误。 15.（2026·安徽淮南·二模）随着人们对发酵原理的深入认识和微生物培养技术的逐步建立，人们可以通过发酵工程大规模生产各种发酵产品，造福于人类。选育优质菌种并优化培养条件，是发酵工程的关键环节。下列相关叙述，正确的是（　　） A. 灭菌后的培养基要调节至中性或弱碱性以利于培养细菌菌种 B. 用含纤维素粉的牛肉膏蛋白胨培养基可筛选出纤维素分解菌 C. 用无菌水模拟接种操作可以检验接种环节是否达到无菌要求 D. 通过发酵工程可以从菌种细胞中提取到大量优质单细胞蛋白 【答案】C 【详解】 A、调节培养基的pH要在灭菌之前，A错误； B、用只含纤维素粉充当碳源的培养基，才有可能筛选到纤维素分解菌，牛肉膏蛋白胨培养基中除纤维素还有其他碳源，B错误； C、接种环节要严格进行无菌操作，一般用适量无菌水代替菌种滴加在无菌培养基表面，在接种环境中模拟接种操作，将这种培养基和接种的平板一起培养，看是否会长出菌落，用来判断接种环境是否达到无菌要求，C正确； D、单细胞蛋白就是微生物菌体，无需从细胞中进行提取，D错误。 16.（2026·安徽合肥·二模）生存在极端恶劣的沙漠环境中的微生物具备特殊的抗逆能力，是生物工程、生物医药等领域的重要资源。为找出培养某沙漠土壤中极端微生物的最适碳源-氨基酸培养基组合，科研人员采集土壤后，以海藻糖-脯氨酸（TP）培养基为对照，通过更换TP培养基中不同的碳源（海藻糖等4种）和氨基酸（脯氨酸等20种）对土壤微生物进行分离培养，观察并统计菌落。下列操作正确的是（       ） A. 取样时应使用灭菌的铲子铲取表层土壤，装入无菌纸袋后密封 B. 菌落数量最多的平板，其接种溶液的稀释度即为最适稀释度 C. 除对照组外，理论上还需设置79个实验组进行稀释涂布培养 D. 培养过程中需控制好温度和时间，菌落出现后即可记录为结果 【答案】C 【详解】 A、土壤取样时应先铲去表层土壤，取表层以下的土壤，避免表层杂菌干扰或目标极端微生物含量过低影响实验结果，A错误； B、稀释涂布平板法统计菌落时，最适稀释度对应的是平板菌落数在30~300区间的稀释度，菌落数过多的平板易发生菌落重叠，计数误差极大，B错误； C、本实验中碳源共4种，氨基酸共20种，所有碳源-氨基酸组合总数为4×20=80种，除去对照组的1种海藻糖-脯氨酸培养基，理论上需额外设置79个实验组，C正确； D、培养后需等待菌落数目稳定后再进行记录，若菌落刚出现就记录，会因部分菌落未完全长出导致统计结果偏小，D错误。 17.（2026·安徽滁州·二模）利用柿子酿造柿子醋的工艺流程如图所示。下列叙述正确的是（       ） A. 加酶榨汁环节加入果胶酶，有利于提高柿子汁产量 B. 酒精发酵后必须对柿子酒进行灭菌，才可以进行乙酸发酵 C. 发酵过程中pH的变化仅由微生物代谢产生的CO2和乙酸引起 D. 发酵结束后，采用巴氏消毒法对柿子醋进行杀菌，可彻底杀灭醋中微生物 【答案】A 【详解】 A、果胶酶能分解细胞壁中的果胶，使细胞破碎更彻底，有利于提高柿子汁的出汁率和澄清度，A正确； B、酒精发酵后无需对柿子酒进行灭菌，因为柿子酒中的酒精和酸性环境能抑制大多数杂菌生长，可直接接种醋酸菌进行乙酸发酵，灭菌反而会杀死有益物质或影响后续发酵，B错误； C、发酵过程中pH 的变化除了微生物代谢产生的CO₂和乙酸外，还可能由原料中的有机酸、微生物代谢的其他酸性物质（如乳酸）等引起，C错误； D、巴氏消毒法只能杀灭大部分微生物，无法彻底杀灭醋中的芽孢等耐高温微生物，D错误。 18.（2026·安徽淮北·二模）生物学实验是研究生命现象和获取证据的重要途径。下列叙述正确的是（       ） A. 在检测蛋白质的实验中，用不加双缩脲试剂的待测组织样液作为对照组 B. 在提取的DNA溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后观察颜色变化以鉴定DNA C. 用35S标记的T2噬菌体侵染未标记的大肠杆菌，只有部分子代病毒带有35S D. 在观察洋葱根尖细胞有丝分裂实验中，理想视野中能看到一个细胞的连续分裂 【答案】B 【详解】 A、检测蛋白质实验的核心是验证蛋白质与双缩脲试剂的紫色反应，对照组应设置为添加双缩脲试剂的标准蛋白质溶液（阳性对照）或添加双缩脲试剂的蒸馏水（阴性对照），不加双缩脲试剂的待测样液无法排除样液本身颜色、试剂颜色等无关变量干扰，不能作为有效对照，A错误； B、DNA鉴定的原理为沸水浴条件下DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色，因此向提取的DNA溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后观察颜色变化可完成DNA鉴定，B正确； C、35S标记的是T2噬菌体的蛋白质外壳，噬菌体侵染大肠杆菌时蛋白质外壳留在细菌细胞外，子代噬菌体的蛋白质外壳均以大肠杆菌内的未标记氨基酸为原料合成，因此子代病毒均不带有35S，C错误； D、观察洋葱根尖细胞有丝分裂实验中，解离步骤会使用解离液杀死细胞，细胞将固定在所处的分裂时期，因此无法观察到一个细胞的连续分裂过程，D错误。 19.（2026·安徽马鞍山·二模）某谷氨酸发酵工厂遭遇专性噬菌体污染，技术人员采用双层平板法测定该噬菌体浓度：先在无菌培养皿中倒入含2%琼脂的培养基凝固成底层平板，再将含1%琼脂的培养基与敏感指示菌、待测噬菌体稀释悬液混匀后铺成上层平板（见下图）。恒温培养后，可根据噬菌斑数目计算原液中噬菌体数量。下列叙述正确的是（　　） A. 该实验中选用的敏感指示菌为大肠杆菌 B. 上下层培养基营养成分应保持一致 C. 上层培养基琼脂浓度越低越利于计数 D. 对生产空间的灭菌即可彻底杜绝噬菌体污染 【答案】B 【详解】 A、该实验中选用的敏感指示菌为谷氨酸棒状杆菌，A错误； B、上层培养基需要支持指示菌生长，同时让噬菌体侵染、裂解细菌形成噬菌斑；底层培养基作为支撑层，也需要提供相同的营养，保证指示菌在整个平板上正常生长，才能形成清晰的噬菌斑。因此上下层营养成分必须一致，这样才能保证敏感指示菌在上下层培养基中都能正常生长，B正确； C、上层培养基琼脂浓度过低会导致上层平板不能凝固，无法形成稳定的平板用于计数，并非浓度越低越利于计数，C错误； D、对生产空间灭菌不能彻底杜绝噬菌体污染，因为噬菌体分布广泛，且可能存在于空气、设备等多种环境中，灭菌后仍可能有噬菌体残留，D错误。 20.（2026·安徽淮南·二模）促红细胞生成素(EPO)是一种由肾脏和肝脏分泌的激素样物质，能够促进红细胞生成，用于治疗多种类型的贫血，包括肾性贫血、肿瘤相关性贫血等疾病。科学家拟用某质粒构建EPO基因表达载体，将其转入含有限制酶Xho Ⅰ和限制酶Sal Ⅰ的受体细菌，结合发酵工程来生产人类EPO，质粒上限制酶的酶切位点及这两种限制酶的识别序列如图所示。回答下列问题： （1）一般在肾脏或肝脏细胞中获取　　　　　　　　　　　，再以其为模板合成不带内含子的EPO基因充当目的基因，并进行PCR扩增。 （2）基因表达时，3′端在启动子端的单链为转录模板，已知EPO基因的模板链是①链，为了能在所用受体菌中稳定存在并表达，应该在引物P1、P2的5′端分别添加　　　　　　　　　　　酶的识别序列，原因是　　　　　　　　　　　。 （3）经限制酶处理后的质粒和目的基因，在DNA连接酶的作用下，只带有一个目的基因的重组质粒有　　　　　　　　　　　种类型，将这种重组质粒转入受体菌，一般要先用　　　　　　　　　　　处理这些受体菌。 （4）从质粒上所带抗性基因角度分析，在含有氨苄青霉素的培养基上能够生长的受体菌不一定能合成EPO，理由是　　　　　　　　　　　。 【答案】（1）EPO基因转录的mRNA     （2）① XhoI、SalI    ② 只有在引物P1、P2的5′端分别添加XhoI、SalI，①链3′端位于启动子端的表达载体才不会被受体菌中的XhoI、SalI破坏，EPO基因能表达     （3）① 2    ② CaCl2溶液     （4）①在含有氨苄青霉素的培养基上能生长的受体菌可能只有空载质粒；②携带了(反接)目的基因质粒，但又被受体菌中的XhoI、SalI将其从表达载体上切除(合理答案，答出1点即可)      (1)小问详解： EPO基因在肾脏和肝脏细胞中表达，要获得不带内含子的EPO基因，可以在肾脏和肝脏细胞中获取其转录出的mRNA，再进行逆转录。 (2)小问详解： 题中所给限制酶为两种同尾酶，且受体菌中存在XhoⅠ和SalⅠ，已知EPO基因的模板链是①链，且3'端在启动子端的单链为转录模板，为保证目的基因能正确转录，且构建后的载体不会被受体菌中的XhoⅠ和SalⅠ破坏，所以只有在引物P1、P2的5′端分别添加XhoⅠ和SalⅠ酶的识别序列，这样保证连接后①链3′端位于启动子端的表达载体不会被受体菌中的XhoⅠ和SalⅠ破坏，EPO基因能表达。 (3)小问详解： 由于题中所给限制酶为两种同尾酶，经限制酶处理后的质粒和目的基因，在DNA连接酶的作用下，只带有一个目的基因的重组质粒有正接和反接两种类型，将这种重组质粒转入受体菌，一般用感受态细胞法，即要先用CaCl2溶液处理这些受体菌，让其能吸收周围环境中的DNA。 (4)小问详解： 在含有氨苄青霉素的培养基上能生长的受体菌可能只有空载质粒，空载质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，能在含氨苄青霉素的培养基上生长，但没有目的基因，所以不能合成EPO；也可能携带了(反接)目的基因质粒，会被受体菌中的XhoⅠ、SalⅠ将EPO基因从表达载体上切除，从而无法表达。 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题12 发酵工程 3年真题1年模拟 考点分类 安徽考情 命题规律 考点01 微生物的培养和应用 2026·安徽（1题） · 情境设置：以工程菌改造、产物合成等真实科研生产情境为载体，体现生物技术应用价值 · 考查重点：聚焦基因工程与发酵工程融合，考查菌株构建、代谢调控及产量优化等核心操作 · 命题趋势：趋向跨模块综合，强化"设计-构建-优化"完整工程思维，突出解决实际生产问题的能力考查 考点03 发酵工程及其应用 2024·安徽（1题） 考点1 微生物的培养和应用 1.（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） A. 固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B. 牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C. 物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D. 物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 考点1 发酵工程及其应用 1.（2024·安徽·高考真题）丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域。兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。回答下列问题。 （1）扩增X基因时，PCR反应中需要使用Taq DNA聚合酶，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （2）使用BamH I和 SalI限制酶处理质粒和X基因，连接后转化大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上（如图）。在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 、 （3）研究表明，碳源和氮源的种类、浓度及其比例会影响微生物生长和发酵产物积累。如果培养基中碳源相对过多，容易使其氧化不彻底，形成较多的　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　，引起发酵液pH值下降。兴趣小组通过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g.L-1和15 g.L-1。在此基础上，设置不同浓度的木薯淀粉（90 g.L-1、100 g.L-1、110 g.L-1）和酵母粉（12 g.L-1、15g.L-1、18 g.L-1）筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置　　　　　　（填数字）组实验（重复组不计算在内）。 （4）大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 （5）发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　，最终获得发酵产品。 …………………… 1.（2026·安徽铜陵·一模）黄酒传统酿制中，先以蒸煮的小麦或麸皮扩大培养酒曲（含多种微生物，可产生淀粉酶），再将酒曲与蒸煮后的糯米、大米混合，然后加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨得成品。下列叙述错误的是（　　） A. 小麦、麸皮可为酒曲微生物提供碳源和氮源 B. 将糯米等蒸煮可杀死杂菌并使淀粉更易分解 C. 酒母发酵时需频繁开盖搅拌以提高发酵效率 D. 黄酒酿造过程中伴随有pH下降和气体产生 2.（2026·安徽合肥·一模）为提高葡萄酒品质，某校师生利用如图所示技术流程，筛选出发酵速度快、具有较强酒精耐受力的优良酿酒酵母（无法利用赖氨酸），其能在WL培养基上形成奶油状略带绿色、球形的菌落。下列相关说法正确的是（　　） 注：YPD培养基和WL培养基是酵母菌培养常用培养基，其中WL培养基含有指示剂溴甲酚绿 A. III属于选择培养基，依据其上生长的菌落特征，可挑选出优良酵母菌种 B. 进行酒精耐受力检测时，需重新制备添加不同浓度酒精的YPD培养基 C. 从III中挑取菌种接种到IV上培养，若能生长，则可判定为优良酿酒酵母 D. I、II均为液体培养基，图中重复操作可提升酿酒酵母的酒精发酵能力 3.（2026·安徽宿州·质量检测）与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量均明显提高。下列相关叙述正确的是（　　） A. 向发酵罐内接种前一般需要对纯化的优良单一菌种进行扩大培养 B. 发酵条件变化会影响微生物的生长繁殖，但不影响微生物的代谢途径 C. 发酵工程与传统发酵技术最大的区别是前者可利用微生物来进行发酵 D. 通过发酵工程可以获得大量的微生物菌体，从菌体中提取单细胞蛋白 4.（2026·安徽鞍山·一模）某生物兴趣小组为探究不同抗生素对大肠杆菌的抑制效果，进行了如下实验：将大肠杆菌菌液均匀涂布于LB固体培养基表面，然后在培养基上放置分别含有青霉素、链霉素和红霉素的滤纸片，培养24小时后观察抑菌圈大小。下列叙述错误的是（　　） A. 实验需设置无抗生素的滤纸片作为对照，以排除杂菌污染的干扰 B. 涂布菌液前需将涂布器在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后再使用 C. 若某滤纸片周围出现的抑菌圈越大，说明该抗生素的抑菌效果越好 D. 配制LB培养基时需添加琼脂、碳源、氮源、水和无机盐等，并调节pH后灭菌 5.（2026·安徽滁州·一模）瘤胃是牛、羊等反刍动物的特殊器官，生活着多种厌氧微生物（含能分解尿素的菌株），研究人员从瘤胃中分离、鉴定尿素分解菌（如下图），以期进一步应用。家庭传统发酵、食品工业发酵等也依赖特定微生物的代谢活动。下列叙述正确的是（　　） A. 家庭制作酸奶时，常加入少量抗生素以避免杂菌污染 B. 腐乳制作过程中，豆腐中的蛋白质全部被分解为氨基酸 C. 啤酒的工业化生产过程中，酒精的产生和积累主要在后发酵阶段完成 D. 在甲、乙、丙、丁的培养基表面加入一层无菌石蜡有利于获得目的菌 6.（2026·安徽芜湖·一模）青霉素发酵是高耗氧过程，在发酵过程中总有头孢霉素产生。人们通过对青霉菌代谢途径的研究发现，在青霉素与头孢霉素的合成过程中，它们有一个共同的前体，这个前体经过两种不同酶的作用分别合成两种产物。下列相关叙述正确的是（       ） A. 青霉素属于抗生素，因此在青霉素生产过程中不会发生杂菌污染 B. 通过敲除控制前体合成的酶的基因，可以使青霉菌只产生一种产物 C. 将血红蛋白基因导入青霉菌是一种保证发酵过程中高效供氧的思路 D. 工业化生产之前无需进行青霉菌纯培养，可直接接种到发酵罐中发酵 7.（2026·安徽·一模）为治理被石油污染的土壤，研究人员欲分离能高效降解石油的细菌，实验流程如下图所示，关于该实验的叙述，正确的是（       ） ①采集土壤样品→②液体富集（石油为唯一碳源）→③梯度稀释→④涂布平板（石油为唯一碳源）→⑤30℃倒置培养→⑥检测石油残留量筛选目标菌 A. 步骤②和④用石油为唯一碳源，都能定向选择降解石油的微生物 B. 步骤③降低菌液浓度，其主要目的是便于分离和计数单菌落 C. 为筛选耐盐性强的石油降解菌，只需在步骤④的平板中加入高浓度氯化钠即可 D. 平板上菌落的大小、形状或颜色是判断其高效降解石油能力的可靠直观指标 8.（2026·安徽·一模）某醋厂生产的老醋因其乳酸含量高而独具风味，源于其采用独特的分层固体发酵法。如图1是分层固体发酵法示意图，图2为发酵过程中检测的醋酸杆菌密度。酒醅是经蒸煮糊化后的粮食原料拌入糖化剂（如曲粉）和酒曲，正在进行酒精发酵的固态物料。醋醅是含有酒精的液态或固态物料（通常由酒醅发酵后的酒液等）拌入疏松材料（如谷壳、麸皮）和醋酸菌种后，正在进行醋酸发酵的固态物料。下列说法错误的是（       ） A. 发酵过程中，发酵缸中下层醋醅有利于乳酸菌繁殖和发酵，积累乳酸 B. 发酵过程中，接种醋酸杆菌后，需封闭发酵缸置于18-30℃条件下培养 C. 据图2分析，A、B层颠倒后B层醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是氧气浓度 D. 发酵后期不同种类乳酸菌的种间竞争加剧，成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少 9.（2026·质检）白蚁是对木材具有严重破坏性的害虫，北美圆柏是天然抗白蚁的树木，其体内生活着一些内生菌，为研究这些内生菌是否与北美圆柏抗白蚁的能力有关，研究人员将培养过内生菌的培养液（发酵液）浓缩不同倍数后进行白蚁饲喂实验，结果如下表所示。随后研究者又将白蚁肠道中的纤维素分解菌均匀涂布于固体培养基表面，并在A处滴加发酵液进行抑菌实验，结果如图所示。下列相关叙述错误的是（       ） 样品 白蚁死亡率（%） 10d 14d 发酵液浓缩10倍 99.3 100.0 发酵液浓缩2倍 97.6 100.0 发酵液 91.1 98.6 对照 6.2 8.7 白蚁饲喂实验结果 A. 新鲜或腐败木材、叶片均可成为白蚁食物，因此白蚁属于生态系统中的消费者和分解者 B. 由白蚁饲喂实验结果可知，内生菌发酵液可通过提高白蚁种群的死亡率来控制其数量 C. 图中抑菌实验中，应在B处设置对照实验，其具体操作是在B处滴加等体积的无菌水 D. 推测北美圆柏抗白蚁的能力可能与内生菌抑制白蚁肠道中纤维素分解菌的生命活动有关 10.（2026·质检）下列关于微生物的实验及其操作的叙述正确的是（       ） A. “酵母菌的纯培养”实验中，培养基倒平板后还需要进行高压蒸汽灭菌 B. 实验中需要对平板进行标记时，应将标记信息写在皿盖上，不能写在皿底 C. 稀释涂布平板法可以用于分离微生物，也可以用来统计样品中活菌的数目 D. 平板划线法分离微生物时，接种环只需在第一次划线和最后一次划线时灭菌 11.（2026·安徽巢湖·一模）下列有关发酵工程的说法正确的是（       ） A. 在发酵罐中接种菌种量越高，其K值越大 B. 啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成在主发酵阶段完成 C. 发酵工程中，发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌体干燥，并将菌体破碎后提取单细胞蛋白 D. 为了防止杂菌污染，发酵工程的中心环节是灭菌 12.（2026·安徽巢湖·一模）酸笋是我国南方地区一种非常受欢迎的食物，它具有独特的酸味和脆爽口感。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。下列叙述正确的是（       ） A. 竹笋经过高压蒸汽灭菌后接种乳酸菌进行发酵，获得的酸笋品质更高 B. 乳酸菌在线粒体中将葡萄糖分解产生的丙酮酸转化为乳酸和二氧化碳 C. 可利用平板划线法对发酵液中的乳酸菌数量进行检测 D. 发酵过程中乳酸积累使发酵液pH先降低后保持稳定 13.（2026·安徽合肥·一模）科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌 M 附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。 为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（　　）     A. 过程①使用了平板划线法接种真菌M， 该过程中接种环至少要灼烧4次 B. 若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确 C. 过程②应取平板a 中的单菌落置于培养基 b 中，其主要目的是选择培养 D. 真菌M 在培养基b 中培养时，培养基中应加入琼脂 14.（2026·安徽芜湖·二模）苹果醋生产的基本工艺流程如下图所示，其中糖化是将淀粉转化为葡萄糖的过程。下列叙述正确的是（       ） A. 糖化过程中，麸曲中曲霉的主要作用是对糖类进行氧化分解 B. 酒精发酵时，发酵液中酒精浓度越高越有利于后续醋酸发酵 C. 醋酸发酵时，应通入无菌空气并适当升温以保证醋酸菌的代谢 D. 苹果醋成品罐装前需对其进行灭菌处理，避免营养成分的流失 15.（2026·安徽淮南·二模）随着人们对发酵原理的深入认识和微生物培养技术的逐步建立，人们可以通过发酵工程大规模生产各种发酵产品，造福于人类。选育优质菌种并优化培养条件，是发酵工程的关键环节。下列相关叙述，正确的是（　　） A. 灭菌后的培养基要调节至中性或弱碱性以利于培养细菌菌种 B. 用含纤维素粉的牛肉膏蛋白胨培养基可筛选出纤维素分解菌 C. 用无菌水模拟接种操作可以检验接种环节是否达到无菌要求 D. 通过发酵工程可以从菌种细胞中提取到大量优质单细胞蛋白 16.（2026·安徽合肥·二模）生存在极端恶劣的沙漠环境中的微生物具备特殊的抗逆能力，是生物工程、生物医药等领域的重要资源。为找出培养某沙漠土壤中极端微生物的最适碳源-氨基酸培养基组合，科研人员采集土壤后，以海藻糖-脯氨酸（TP）培养基为对照，通过更换TP培养基中不同的碳源（海藻糖等4种）和氨基酸（脯氨酸等20种）对土壤微生物进行分离培养，观察并统计菌落。下列操作正确的是（       ） A. 取样时应使用灭菌的铲子铲取表层土壤，装入无菌纸袋后密封 B. 菌落数量最多的平板，其接种溶液的稀释度即为最适稀释度 C. 除对照组外，理论上还需设置79个实验组进行稀释涂布培养 D. 培养过程中需控制好温度和时间，菌落出现后即可记录为结果 17.（2026·安徽滁州·二模）利用柿子酿造柿子醋的工艺流程如图所示。下列叙述正确的是（       ） A. 加酶榨汁环节加入果胶酶，有利于提高柿子汁产量 B. 酒精发酵后必须对柿子酒进行灭菌，才可以进行乙酸发酵 C. 发酵过程中pH的变化仅由微生物代谢产生的CO2和乙酸引起 D. 发酵结束后，采用巴氏消毒法对柿子醋进行杀菌，可彻底杀灭醋中微生物 18.（2026·安徽淮北·二模）生物学实验是研究生命现象和获取证据的重要途径。下列叙述正确的是（       ） A. 在检测蛋白质的实验中，用不加双缩脲试剂的待测组织样液作为对照组 B. 在提取的DNA溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后观察颜色变化以鉴定DNA C. 用35S标记的T2噬菌体侵染未标记的大肠杆菌，只有部分子代病毒带有35S D. 在观察洋葱根尖细胞有丝分裂实验中，理想视野中能看到一个细胞的连续分裂 19.（2026·安徽马鞍山·二模）某谷氨酸发酵工厂遭遇专性噬菌体污染，技术人员采用双层平板法测定该噬菌体浓度：先在无菌培养皿中倒入含2%琼脂的培养基凝固成底层平板，再将含1%琼脂的培养基与敏感指示菌、待测噬菌体稀释悬液混匀后铺成上层平板（见下图）。恒温培养后，可根据噬菌斑数目计算原液中噬菌体数量。下列叙述正确的是（　　） A. 该实验中选用的敏感指示菌为大肠杆菌 B. 上下层培养基营养成分应保持一致 C. 上层培养基琼脂浓度越低越利于计数 D. 对生产空间的灭菌即可彻底杜绝噬菌体污染 20.（2026·安徽淮南·二模）促红细胞生成素(EPO)是一种由肾脏和肝脏分泌的激素样物质，能够促进红细胞生成，用于治疗多种类型的贫血，包括肾性贫血、肿瘤相关性贫血等疾病。科学家拟用某质粒构建EPO基因表达载体，将其转入含有限制酶Xho Ⅰ和限制酶Sal Ⅰ的受体细菌，结合发酵工程来生产人类EPO，质粒上限制酶的酶切位点及这两种限制酶的识别序列如图所示。回答下列问题： （1）一般在肾脏或肝脏细胞中获取　　　　　　　　　　　，再以其为模板合成不带内含子的EPO基因充当目的基因，并进行PCR扩增。 （2）基因表达时，3′端在启动子端的单链为转录模板，已知EPO基因的模板链是①链，为了能在所用受体菌中稳定存在并表达，应该在引物P1、P2的5′端分别添加　　　　　　　　　　　酶的识别序列，原因是　　　　　　　　　　　。 （3）经限制酶处理后的质粒和目的基因，在DNA连接酶的作用下，只带有一个目的基因的重组质粒有　　　　　　　　　　　种类型，将这种重组质粒转入受体菌，一般要先用　　　　　　　　　　　处理这些受体菌。 （4）从质粒上所带抗性基因角度分析，在含有氨苄青霉素的培养基上能够生长的受体菌不一定能合成EPO，理由是　　　　　　　　　　　。 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $