2025-2026学年 高二生物下学期期末自编模拟卷（人教版选三模块）

**基本信息** 2025-2026学年高二生物下学期期末自编模拟卷（人教版选三模块），以基因工程、细胞工程、微生物发酵为核心，通过单克隆抗体制备（21题）、果酒果醋制作（22题）等真实情境综合题，考查科学思维与探究实践能力，适配期末模块复习需求。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单选题|15/30|发酵技术（1题）、灭菌操作（2题）、基因工程工具（3题）|结合实验操作（5题划线分离），强化结构与功能观| |不定项|5/15|双向启动子载体构建（16题）、限制酶作用（17题）|设置图表分析（19题桑葚玫瑰酒数据），考查批判性思维| |非选择题|5/55|单克隆抗体制备流程（21题）、陈醋酿造工艺（23题）|整合实验设计（25题抑菌菌筛选），体现技术应用与社会责任|

2025-2026学年 高二生物下学期期末自编模拟卷（人教版选三模块） 1、 单选题（共15小题，每小题2分，共30分） 1．苹果营养丰富，其深加工产品苹果酒和苹果醋具有独特风味，生产流程包括酒精发酵和醋酸发酵。下列叙述正确的是(      ) A.酒精发酵的终产物均可直接被醋酸菌利用 B.酒精发酵需定期排气，醋酸发酵需持续通气 C.酒精发酵完成后需要升高温度杀死酵母菌从而进行醋酸发酵 D.利用酒精进行醋酸发酵，发酵液面会出现气泡 2．下列关于实验操作中消毒灭菌说法错误的是(      ) A.对实验需要的实验材料、器具和培养基均采用高压蒸汽灭菌 B.划线分离需对接种环进行多次灼烧灭菌，各次灭菌目的并不完全相同 C.实验结束后，将实验产生的废弃物进行灭菌处理 D.灭菌较消毒更为彻底，可杀死包括芽孢和孢子在内的所有微生物 3．作为基因工程的运输工具载体，必须具备的条件及理由对应叙述正确的是(      ) A.基因工程中目的基因的运输工具只能是质粒 B.具有某些标记基因，以便目的基因能够准确定位与其结合 C.只有一个限制酶切割位点，便于目的基因的插入 D.能够在宿主细胞中稳定保存并大量复制，以便提供大量的目的基因 4．下列有关细胞工程技术的原理及目的的叙述，错误的是(      ) 选项 技术名称 原理 目的 A 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性及植物细胞的全能性 获得杂种植物 B 植物组织培养 植物细胞的全能性 获得植物个体或细胞产品 C 动物细胞培养 细胞增殖 获得动物个体或细胞产品 D 动物细胞核移植 动物细胞细胞核的全能性 获得克隆动物 A.A B.B C.C D.D 5．为纯化菌种，在培养基上划线接种尿素分解菌，培养结果如图所示。下列叙述错误的是(      ) A.培养基中的尿素为唯一氮源 B.接种时接种环只蘸取一次菌液 C.接种过程中接种环需要灼烧3次 D.I区细菌数量较多，一般从Ⅲ区挑取单菌落 6．下列关于基因工程工具的说法不正确的是(      ) A.DNA连接酶与限制酶均受温度、pH等因素的影响 B.DNA连接酶对所连接的DNA两端的碱基序列有专一性要求 C.运载体能将外源基因导入受体细胞并使其在受体细胞中稳定遗传并表达 D.在基因工程操作中，被用作运载体的质粒一般都是经过人工改造的 7．如图1为果酒、果醋制作装置，图2为果酒发酵中酵母菌种群数量、葡萄糖浓度和乙醇浓度的变化曲线。下列叙述正确的是(      ) A.制作果酒的整个过程中，夹子①②均关闭，制作果醋时，夹子①②均打开 B.制作果酒时应将图1装置放在18～30℃环境中，制作果醋时应将温度提高至30～35℃ C.图2曲线a～b段，瓶内有大量二氧化碳和水产生，导致瓶内气压增大 D.随着发酵时间的推进，葡萄糖含量降低，乙醇的产生速率先上升后趋于稳定 8．下列关于DNA重组技术基本工具的说法，正确的是(      ) A.DNA连接酶与DNA聚合酶作用的底物相同 B.原核生物中的限制性内切核酸酶对自身DNA无损害作用 C.限制性内切核酸酶切割DNA后一定能产生黏性末端 D.DNA重组技术的基本工具有三种：限制酶、DNA聚合酶、载体 9．下列关于DNA连接酶的说法，正确的是(      ) A.都能连接黏性末端和平末端 B.作用于DNA的氢键 C.DNA连接酶和DNA聚合酶作用的部位相同 D.都是从原核生物中分离出来的 10．在动物细胞培养的过程中，贴壁的细胞不一定都能增殖并形成克隆(单个细胞繁殖形成的细胞群体)，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞，这一特点可用于测定动物细胞的增殖能力。大致流程如图，相关叙述正确的是(      ) A.出现接触抑制后，细胞克隆停止增殖 B.克隆细胞与接种的细胞的遗传信息一定相同 C.需采用固体培养基培养才能形成细胞克隆 D.胰蛋白酶可使细胞分散成单层利于计数 11．酵母菌的纯培养包括配制培养基、灭菌、倒平板、接种、分离和培养等步骤，图示为其中一个操作。下列叙述不合理的是(      ) A.配制的培养基调节pH后再进行灭菌 B.图示操作属于倒平板，在酒精灯火焰旁进行 C.进行该操作时用拇指和食指完全打开皿盖 D.接种后的平板需倒置放入恒温培养箱中培养 12．在治疗大面积烧伤时，通常采用烧伤病人的健康皮肤进行体外培养并移植。下列有关叙述错误的是(      ) A.培养时可添加适量的抗生素，以避免污染 B.实验在体外培养细胞时，需要对培养液和用具进行灭菌处理 C.进行培养时所需的O2和CO2的作用是维持培养环境的pH D.实验中贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖 13．为宣传“正确佩戴口罩可以降低呼吸道传染病传播风险”，某校生物兴趣小组同学进行了佩戴口罩在说话、咳嗽时传播微生物数量的检测实验。实验中将牛肉膏蛋白胨培养基置于自己口前方50cm处，然后对着培养基方向说话1min或咳嗽2次，再进行微生物培养和观察。相关叙述错误的是(      ) A.实验中牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基，要进行严格灭菌处理 B.实验中还应该设置“不戴口罩直接说话或咳嗽”进行对照实验 C.可以根据菌落数大致推测出活菌数，而菌落数往往大于活菌数 D.培养结束后可根据菌落的形状、大小、色泽等特征确定微生物种类 14．下表为常用的限制性内切核酸酶(限制酶)及其识别序列和切割位点，由此推断，下列说法错误的是(      ) 限制酶名称 识别序列和切割位点 限制酶名称 识别序列和切割位点 BamHⅠ -G↓GATCC- KpnⅠ -GGTAC↓C- EcoRⅠ -C↓AATTC- Sau3AⅠ -↓GATC- HindⅡ -GTY↓RAC- SmaⅠ -CCC↓GGG- 注：Y为C或T，R为A或G。 A.HindⅡ、SmaⅠ两种限制酶切割后形成平末端 B.Sau3AⅠ限制酶的切割位点在识别序列的外部 C.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 D.BamHⅠ和Sau3AⅠ两种限制酶切割后形成相同的黏性末端 15．由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物是微生物应用的前提。下图是微生物纯培养过程中接种操作的示意图，图B中的冷却区是第四区划线后直接划线冷却的区域。相关叙述正确的是(      ) A.图示培养基中添加的凝固剂容易被微生物分解 B.冷却区未培养出菌落表明前四区划线操作无误 C.以图A划线区域5的菌落计数来估算菌种数量 D.接种后，未划线区域长出菌落提示有杂菌污染 二、不定项（共5小题，每小题3分，共15分） 16．双向启动子可同时结合两个RNA聚合酶来驱动下游基因的表达，降低了基因工程的成本与复杂性， 研究人员利用双向启动子构建了下图所示表达载体，下列叙述错误的是(      ) A.为正确连入目的基因，可在其两端添加能产生相同黏性末端的不同限制酶的识别序列 B.表达载体中的GUS基因和LUC基因进行转录时，会使用DNA的不同单链作为模板 C.壮观霉素抗性基因可用于鉴定目的基因是否插入受体细胞染色体上 D.可通过观察是否出现荧光和蓝色物质检测双向启动子作用效果 17．限制酶a和b的识别序列与切割位点如图所示。下列叙述错误的是(      ) A.a酶、b酶均能切割氢键和磷酸二酯键 B.能被a酶识别并切割的序列也能被b酶切割 C.相同DNA分子被a酶切割的概率一般高于b酶 D.基因工程中用两种酶切割质粒就能防止其自身环化 18．以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫小鼠(2n=40)，融合免疫小鼠的脾细胞及骨髓瘤细胞(2n=62-68)，筛选杂交瘤细胞，制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(mAb)，相关检测结果如图A、B所示。有关说法错误的是(      ) A.重组大肠杆菌RecQ解旋酶可刺激相应B淋巴细胞增殖分化 B.单克隆抗体的制备过程中需要进行2次筛选和2次抗原检测 C.杂交瘤细胞在融合的过程中可能会发生染色体数目的丢失 D.该mAb能特异性与RecQ解旋酶结合，在稀释度为1/1600时对RecQ解旋酶与DNA的结合抑制最大 19．桑葚玫瑰酒既融合了桑葚和玫瑰的果香、花香，又使其营养价值和功能活性增加，极大地满足人们的需求。图1为制作桑葚玫瑰酒的装置图；图2为不同桑葚汁与玫瑰质量比对花色苷含量、酒精度和感官评分(感官评分越高，品质越好)的影响。下列相关叙述正确的是(      ) A.桑葚玫瑰酒发酵所用菌种的代谢类型与醋酸菌相同 B.图1中排气口连接长而弯曲的胶管可避免其他微生物进入装置 C.由图2可知，桑葚汁与玫瑰质量比对酒精度影响不大 D.花色苷含量随桑葚汁与玫瑰质量比的增大而降低，质量比为4：1时酒的感官评分最高 20．中国传统白酒多以泥窖为发酵基础，素有“千年老窖万年糟”“以窖养糟，以糟养泥”之说。多年利用的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物。下列叙述正确的是(      ) A.传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的 B.窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，使酿造过程不易污染杂菌 C.从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时，需在CO2或N2环境中进行 D.从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物 三、非选择题：本题共5小题，共55分 21．手足口病是由肠道病毒引起的传染病，其中以肠道病毒71型（EV71）最为常见。科研人员用小鼠进行实验，利用细胞工程方法以该病毒核衣壳蛋白为抗原来制备能够中和EV71感染的单克隆抗体。这些抗体能够特异性地识别和结合到EV71的表面，阻止它进入宿主细胞，从而阻止感染的发生。制备流程如下图所示，回答下列问题： （1）将EV71核衣壳蛋白注射到小鼠体内，然后从小鼠______________（器官）中分离的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，之后在______________培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞才能生长。 （2）将杂交瘤细胞用细胞培养液进行______________，然后接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过______________。并将多孔的细胞培养板置于含有95%空气和5%CO2的______________中进行培养。吸取细胞培养液中的______________（填“上清液”或“沉淀细胞”）并进行______________检测，获得既能产生特异性抗体，又能无限增殖的杂交瘤细胞。 （3）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过______________或小鼠腹腔内扩大培养，就能长久地得到针对EV71的大量单克隆抗体，但提取时会含少量杂质，可采用______________方法纯化。其中体外培养时需注意控制如______________等外界条件（写出2点）。 （4）杂交瘤细胞与普通动物体细胞在培养瓶中生长特点的区别为后者具有贴壁生长和______________的特点，因此后者进一步培养时，需要定期用______________等消化处理。 （5）我国科研团队研制出全球首个以尿液中的抗原为靶标的戊肝诊断试剂盒，该成果属于单克隆抗体在临床上的应用。下列叙述正确的是________________（多选）。 A.该试剂盒的研制过程应用了动物细胞培养、细胞核移植技术 B.该试剂盒的检测原理为抗原-抗体杂交 C.该试剂盒检测前的采样不会对受检者造成创伤 D.该试剂盒能用于其他类型病毒性肝炎的检测 22．黑枸杞具有治疗心热病及心脏病，降低胆固醇、使大脑神经兴奋、增强免疫功能等效果，回答下列有关利用黑枸杞制作果酒和果醋的问题： (1)制备黑枸杞果酒和果醋所用的菌种分别是_________________________，它们的细胞在结构方面的主要区___________________________________。 (2)将黑枸杞榨汁后装瓶时，不能装满，要留出1/3的空间，目的是：____________________________________________________________________。 对果汁并没有进行灭菌处理，但随着果酒发酵的进行，其他微生物含量变少，原因是__________________________________________________________。 (3)图1装置的排出口胶管长而弯曲的作用是________________。 (4)图2中由酒精发酵转为醋酸发酵时，应调整的发酵条件包括：__________________________________________________(至少回答2点)。 23．陈醋是我国发明的传统调味品之一，酿制及食用已有3000多年历史。陈醋生产工艺流程如下图所示。 (1)在糖化阶段添加____________________酶制剂需要控制反应温度，这是因为________________________________________________________________。 (2)在酒精发酵阶段需添加酵母菌，在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。 先通气的目的是____________________________。技术员定时抽取发酵液，向发酵液中滴加酸性重铬酸钾溶液，以是否呈现______________色来判断是否有酒精产生，若要使检验的结果更有说服力，应该____________________________。 (3)利用醋酸菌获得醋酸的条件有两种情况，一是在______________________时，将糖分解成醋酸；二是在糖源不充足时，也可以利用酒精生成醋酸。 (4)研究表明，在陈醋的酿造过程中，起主导作用的是醋酸菌，而乳酸菌也存在于醋醅中，其代谢产生的乳酸含量的高低是影响陈醋风味的重要因素。成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是：发酵后期_____________________(至少写二种)等环境因素的变化，________________________________，淘汰了部分乳酸菌种类。 24．如下图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程，请回答下列问题： (1)为了一次获得多个细胞A，需向供体内注射________________，不注射性激素的原因是________________。 (2)将优良公牛的精子收集后放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是________________。 (3)①指的是________________。进行胚胎分割时，应选择发育到________________时期的胚胎进行操作，在对上图的胚胎进行分割时，应注意_________________。 (4)移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是________________。 (5)胚胎分割技术的优势是________________________________。 25．苹果树腐烂病由真菌感染引起，为了开发生物防治该病的途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌，实验流程如下图。 (1)配制培养基时，培养基的灭菌应该在调pH______(填“之前”或“之后”)，培养基灭菌的常用方法是_____________________。 (2)图中①过程取5g土壤加入______mL无菌水中，②③过程用____________法获得芽孢杆菌单菌落，若10-1、10-2悬液对应平板上菌苔完全覆盖培养基，10-3、10-4、10-5对应平板平均菌落数分别为589、112、12个，则取样土壤中芽孢杆菌总数约____________个。 (3)目的菌筛选时，应取直径为5mm的苹果腐烂病菌菌落移置于______(填“A”或“B”)处，将芽孢杆菌接种______(填“A”或“B”)处。 (4)检测各抗菌株发酵滤液的抑菌效果进行进一步筛选，尝试用于苹果树腐烂病防治。与化学防治相比，该方法的优势是_____________________________。 参考答案 1．答案：B 解析：A.酒精发酵的终产物包括酒精、二氧化碳等，其中二氧化碳无法被醋酸菌代谢利用，并非所有终产物都可直接被醋酸菌利用，A错误； B.酒精发酵过程中酵母菌无氧呼吸会产生二氧化碳，需定期排气避免发酵装置胀裂；醋酸菌为好氧细菌，生命活动需要氧气参与，因此醋酸发酵需持续通气保证氧气供应，B正确； C.酒精发酵完成后仅需将温度升高至醋酸菌适宜的30~35℃即可，不需要专门杀死酵母菌，醋酸发酵的有氧、较高温度条件会自然抑制酵母菌的代谢活性，不会干扰醋酸发酵，C错误； D.利用酒精进行醋酸发酵时，反应过程无气体生成，因此发酵液面不会出现气泡，D错误。 2．答案：A 解析：A.高压蒸汽灭菌仅适用于耐高温、耐高压的物品，不耐高温的实验材料（如植物外植体）、遇热易分解的培养基成分（如尿素）均不能采用高压蒸汽灭菌，并非所有实验材料、器具和培养基都适用该方法，A错误； B.划线分离操作中，接种环第一次灼烧是为了杀灭环上原有杂菌，避免污染培养物；每次划线结束后灼烧是为了杀死环上残留的菌种，保证下一次划线的菌种仅来自上一次划线的末端，实现菌种稀释；实验结束后灼烧是为了避免残留菌种污染环境、感染操作者，各次灭菌目的并不完全相同，B正确； C.实验产生的废弃物可能携带致病性微生物或实验用菌种，灭菌处理后再丢弃可防止污染环境，C正确； D.消毒仅能杀死物体表面或内部的部分微生物，不能杀灭芽孢和孢子；灭菌可杀死包括芽孢、孢子在内的所有微生物，因此灭菌较消毒更为彻底，D正确。 3．答案：D 解析：A.基因工程中目的基因的运输工具即运载体，常见类型有质粒、噬菌体、动植物病毒等，并非只能是质粒，A错误； B.运载体上标记基因的作用是筛选出成功导入目的基因的受体细胞，目的基因与运载体结合依赖的是同种限制酶切割产生的相同黏性末端和DNA连接酶的作用，与标记基因无关，B错误； C.运载体需要具有一个或多个限制酶切割位点，便于适应不同限制酶切割的目的基因完成插入，并非只能有一个限制酶切割位点，C错误； D.运载体需要能在宿主细胞中稳定保存并大量复制，其携带的目的基因会随运载体同步复制，从而获得大量的目的基因，D正确。 4．答案：C 解析：A、植物体细胞杂交过程包含原生质体融合和植物组织培养，原生质体融合依赖细胞膜的流动性，组织培养依赖植物细胞的全能性，最终目的是获得杂种植物，A正确； B、植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，既可以培育完整的植物个体，也可以培养细胞获取细胞代谢产物，B正确； C、动物细胞培养的原理是细胞增殖，动物细胞分化程度高，全能性受到限制，无法培养获得完整动物个体，只能获得细胞或细胞产物，C错误； D、动物细胞核移植技术的原理是动物细胞核的全能性，将体细胞核移入去核卵母细胞中，可培育出克隆动物，D正确。 故选C。 5．答案：C 解析：A、本实验目的是纯化尿素分解菌，因此培养基需要以尿素作为唯一氮源，起到选择作用，抑制不能利用尿素的微生物生长，A正确； B、平板划线法接种时，接种环只需要蘸取一次菌液，后续划线依靠环上残留的菌逐步稀释菌种，B正确； C、平板划线操作中，划线前灼烧接种环（杀灭杂菌）、每次划线后灼烧接种环（杀死残留菌种，避免菌种浓度过高）、实验结束后灼烧接种环（防止菌种污染环境和操作者）。图中有三个划线区域，总共需要灼烧接种环4次，并非3次，C错误； D、I区为第一次划线区域，菌种浓度最高，细菌数量多；随着划线次数增加，菌种不断稀释，Ⅲ区菌种浓度最低，容易得到单菌落，因此一般从Ⅲ区挑取单菌落，D正确。 故选C。 6．答案：B 解析：A、DNA连接酶和限制酶的化学本质均为蛋白质，酶的活性受温度、pH等外界环境因素影响，A正确； B、DNA连接酶的作用是连接DNA片段，对两端的碱基序列没有专一性要求，只要末端可以互补配对即可连接，B错误； C、运载体的功能是携带外源基因进入受体细胞，并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、复制和表达，C正确； D、天然质粒往往存在缺陷，基因工程中使用的质粒运载体，一般都经过人工改造，添加标记基因、多克隆位点等结构，D正确。 故选B。 7．答案：B 解析：A、制作果酒前期需要打开夹子①通入空气，让酵母菌有氧呼吸大量繁殖，后期关闭夹子①②进行无氧发酵；制作果醋时醋酸菌为好氧菌，需要持续通入空气，夹子①②均打开，A错误； B、酵母菌发酵的适宜温度为18~30℃，醋酸菌发酵的适宜温度为30~35℃，因此果酒、果醋制作需设置对应温度，B正确； C、图2曲线a~b段酵母菌主要进行有氧呼吸，有氧呼吸产物为二氧化碳和水，此阶段酵母菌大量增殖，有氧呼吸释放大量二氧化碳，使瓶内气压增大，但该阶段并非单纯因为产物积累导致气压变化，且果酒发酵后期以无氧呼吸为主，C错误； D、随着发酵进行，葡萄糖浓度持续降低，营养物质不足、酒精积累都会抑制酵母菌代谢，乙醇的产生速率先上升，随后逐渐下降，并非趋于稳定，D错误。 故选B。 8．答案：B 解析：A、DNA连接酶的底物是DNA片段，DNA聚合酶的底物是脱氧核苷酸，二者作用底物不同，A错误； B、原核生物内的限制性内切核酸酶可以切割外来入侵的DNA，自身DNA经过修饰保护，不会被自身限制酶切割，对自身DNA无损害作用，B正确； C、限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生平末端，并非一定产生黏性末端，C错误； D、DNA重组技术的基本工具为限制酶、DNA连接酶、载体，DNA聚合酶不属于基因工程工具，D错误。 故选B。 9．答案：C 解析：A、DNA连接酶分为E・coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，E・coliDNA连接酶只能连接黏性末端，T4DNA连接酶可以连接黏性末端和平末端，并非所有DNA连接酶都能连接两种末端，A错误； B、DNA连接酶的作用位点是磷酸二酯键，氢键依靠碱基互补配对自动形成，不需要酶催化，B错误； C、DNA连接酶和DNA聚合酶的作用部位均为磷酸二酯键，作用部位相同；二者功能不同，DNA连接酶连接DNA片段，DNA聚合酶连接脱氧核苷酸，C正确； D、E・coliDNA连接酶从大肠杆菌（原核生物）中分离，T4DNA连接酶从T4噬菌体（病毒）中分离，并非都来自原核生物，D错误。 故选C。 10．答案：A 解析：A、动物细胞培养存在接触抑制现象，当贴壁生长的细胞相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，因此细胞克隆会停止增殖，A正确； B、细胞增殖过程中可能发生基因突变，因此克隆细胞和接种细胞的遗传信息不一定完全相同，B错误； C、动物细胞克隆培养使用液体培养基，固体培养基多用于微生物培养，动物细胞依靠贴壁生长形成克隆，C错误； D、胰蛋白酶的作用是将贴壁的细胞从培养瓶壁上分离下来，同时使细胞分散成单个细胞，便于细胞计数，细胞分散成单层是细胞自然贴壁生长的结果，并非胰蛋白酶直接作用，D错误。 故选A。 11．答案：C 解析：A、配制微生物培养基的常规流程为：计算→称量→溶解→调节pH→灭菌→倒平板，必须先调pH再灭菌，若灭菌后调pH会再次引入杂菌，A正确； B、图示操作为倒平板，为避免空气中杂菌落入培养基，该操作必须在酒精灯火焰旁的无菌区域内进行，B正确； C、倒平板操作时，不能用拇指和食指完全打开皿盖，应将皿盖打开一条缝隙即可，完全打开会大幅增加杂菌污染的概率，C错误； D、接种后的平板需要倒置放入恒温培养箱培养，一方面可以防止培养过程中皿盖上的冷凝水滴落到培养基表面造成杂菌污染，另一方面能保证菌落正常生长，D正确。 故选C。 12．答案：C 解析：A、体外培养皮肤细胞时，添加适量抗生素可以抑制杂菌生长，避免培养体系被污染，A正确； B、培养液、培养用具都含有微生物，为防止污染，必须进行严格的灭菌处理，B正确； C、动物细胞培养的气体环境为95%空气加5%二氧化碳，95%空气为细胞呼吸提供氧气，5%二氧化碳的作用是维持培养液的pH，并非氧气和二氧化碳共同维持pH，C错误； D、动物细胞培养具有接触抑制特征，贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，D正确。 故选C。 13．答案：C 解析：A、该实验需要观察菌落形态和统计菌落数量，因此必须使用固体培养基；培养基含有营养物质，容易滋生杂菌，需要进行严格灭菌处理，A正确； B、本实验目的是探究佩戴口罩对微生物传播的影响，自变量为是否佩戴口罩，因此需要设置“不戴口罩直接说话或咳嗽”的空白对照实验，B正确； C、统计菌落数推算活菌数时，当两个或多个活菌连在一起时，平板上只会形成一个菌落，因此统计得到的菌落数往往小于实际活菌数，C错误； D、不同微生物形成的菌落，在形状、大小、隆起程度、色泽、边缘特征等方面存在差异，可依据菌落特征初步判断微生物的种类，D正确。 故选C。 14．答案：C 解析：A、HindⅡ、SmaⅠ的切割位点位于识别序列中轴线处，切割后产生平末端，A正确； B、Sau3AⅠ的识别序列为GATC，切割位点在识别序列第一个碱基前方，即切割位点在识别序列外部，B正确； C、表格中HindⅡ的识别序列为GTYRAC，Y可代表C或T，R可代表A或G，说明一种限制酶可以识别多种核苷酸序列，并非只能识别一种，C错误； D、BamHⅠ识别序列为GGATCC，切割后露出GATC黏性末端；Sau3AⅠ切割后也露出GATC黏性末端，二者切割后产生相同黏性末端，D正确。 故选C。 15．答案：D 解析：A、微生物纯培养常用凝固剂为琼脂，琼脂化学性质稳定，不易被微生物分解，可长期维持固体培养基形态，A错误； B、冷却区为第四区划线后直接划线区域，无微生物接种，未培养出菌落是正常现象，不能证明前四区划线无误（若前四区污染，仍会出现菌落），B错误； C、平板划线法的目的是获得单菌落，不能用于菌落计数（计数用稀释涂布平板法）；图A划线区域5为最后划线区域，菌落数最少，无法估算菌种数量，C错误； D、接种时仅在划线区域接种菌种，未划线区域长出菌落，说明培养基或操作过程混入杂菌，存在杂菌污染，D正确。故选D 16．答案：AC 17．答案：ABD 解析：A、限制酶的作用位点是DNA分子中的磷酸二酯键，氢键依靠碱基之间的作用力维系，限制酶不能切割氢键，A错误。 B、a酶的识别序列为GATC，b酶的识别序列为GGATCC；b酶的识别序列包含a酶的识别序列，因此能被a酶切割的序列，不一定能被b酶切割，B错误。 C、限制酶识别的碱基序列越短，在DNA分子中出现的概率越高。a酶识别4个碱基，b酶识别6个碱基，因此相同DNA分子被a酶切割的概率高于b酶，C正确。 D、只用两种限制酶切割质粒，若两种酶切割后产生相同的黏性末端，质粒依然可以发生自身环化；只有两种酶切割产生不同末端时，才能有效防止自身环化，D错误。 故选ABD。 18．答案：BD 解析：A、重组大肠杆菌RecQ解旋酶作为抗原，可刺激免疫小鼠的B淋巴细胞增殖分化为浆细胞和记忆细胞，因此A正确； B、单克隆抗体的制备过程中需要进行2次筛选（第一次筛选杂交瘤细胞，第二次筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞）和多次抗体检测，而非仅2次抗原检测，因此B错误； C、杂交瘤细胞在融合过程中，染色体可能丢失，导致染色体数目减少，因此C正确； D、"稀释度为1/1600时对RecQ解旋酶与DNA的结合抑制最大"表述不准确，或图示显示其他稀释度抑制最大，因此D错误。 故选BD。 19．答案：BCD 解析：A、桑葚玫瑰酒发酵所用菌种是酵母菌，酵母菌的代谢类型是异养兼性厌氧型；醋酸菌的代谢类型是异养需氧型，二者不同，因此A错误； B、图1中排气口连接长而弯曲的胶管，可以形成水封，避免其他微生物进入装置，同时排出CO2，因此B正确； C、分析图2，随着桑葚汁与玫瑰质量比的变化，酒精度基本保持在10%左右，变化不大，说明桑葚汁与玫瑰质量比对酒精度影响不大，因此C正确； D、分析图2，花色苷含量随桑葚汁与玫瑰质量比的增大而降低，质量比为4：1时感官评分最高（约85分），因此D正确。 故选BCD。 20．答案：ABD 解析：A、传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的。传统白酒为固态多菌种发酵，酿酒酵母为主，多种微生物协同，A正确； B、窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，使酿造过程不易污染杂菌。老窖微生物群落稳定，抑制杂菌，B正确； C、从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时，需在CO2或N2环境中进行。扩大培养需有氧环境使酵母菌繁殖，C错误； D、从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物。酒糟富含淀粉，可分离产淀粉酶微生物，D正确。 故选ABD。 21．答案：（1）脾脏；选择/HAT/ （2）稀释；1个；CO2培养箱；上清液；抗体阳性/抗体 （3）体外培养；过滤/层析/离心/离子交换/萃取；PH、温度、溶解氧 （4）接触抑制；胰蛋白酶/胶原蛋白酶 （5）BC 解析：（1）将EV71核衣壳蛋白注射到小鼠体内，然后从小鼠脾脏中分离的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，之后在选择培养基中培养，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞才能生长。 （2）对杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个并将多孔的细胞培养板置于含有95%空气和5%CO2的CO2培养箱中进行培养。吸取细胞培养液中的上清液，然后利用抗原—抗体特异性结合原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 （3）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过体外培养或小鼠腹腔内扩大培养，就能长久地得到针对EV71的大量单克隆抗体，但提取时会含少量杂质，可采用过滤/层析/离心/离子交换/萃取等方法纯化。其中体外培养时需注意控制如PH、温度、溶解氧等外界条件。 （4）杂交瘤细胞与普通动物体细胞在培养瓶中生长特点的区别为后者具有贴壁生长和接触抑制的特点，因此后者进一步培养时，需要定期用胰蛋白酶/胶原蛋白酶等消化处理。 （5）A、该试剂盒的研制过程应用了动物细胞培养，没有细胞核移植技术，A错误； B、以尿液中的抗原为靶标，该试剂盒的检测原理为抗原-抗体杂交，B正确； C、以尿液中的抗原为靶标，该试剂盒检测前的采样不会对受检者造成创伤，C正确； D、抗体具有专一性，该试剂盒不能用于其他类型病毒性肝炎的检测，D错误。 故选BC。 22．答案(1)酵母菌和醋酸菌；有无以核膜为界限的细胞核 (2)为酵母菌有氧呼吸提供氧气；防止发酵液溢出；发酵形成的缺氧和酸性环境不利于其他微生物生长 (3)防止空气中的杂菌进入发酵瓶 (4)由无氧条件改为有氧条件；将温度升高至30～35℃。 解析：(1)果酒发酵菌种是酵母菌，果醋发酵菌种是醋酸菌；酵母菌是真核生物，有以核膜为界限的细胞核，醋酸菌是原核生物，无核膜包被的细胞核。 (2)榨汁装瓶留1/3空间，目的：为酵母菌初期有氧呼吸提供氧气，促进繁殖、防止发酵液膨胀溢出；果酒发酵环境缺氧、呈酸性，抑制其他微生物生长，因此杂菌数量减少。 (3)排气口胶管长而弯曲，可防止空气中的杂菌进入发酵瓶，避免污染。 (4)酒精发酵转为醋酸发酵，需调整：由无氧改为有氧（通入无菌空气）、温度升高至30~35℃。 23．答案：(1)淀粉；酶在最适温度条件下催化能力最强 (2)让酵母菌进行有氧呼吸，有利于酵母的繁殖，有利于密闭时获得更多的酒精产物；灰绿；设计对照(实验) (3)氧气和糖源都充足 (4)氧气、营养物质、pH；加剧了不同种乳酸菌之间的种间竞争(或竞争) 解析：(1)淀粉糖化是利用淀粉酶将大分子淀粉逐步水解为葡萄糖，因此糖化阶段需要添加淀粉酶（α-淀粉酶+糖化酶）；酶的催化活性受温度影响，每种酶存在最适温度，在最适温度条件下酶的空间结构稳定，酶促反应速率最高、催化能力最强，温度偏高或偏低都会降低酶活性，因此糖化过程需要精准控制反应温度。 (2)酵母菌是兼性厌氧菌，先通气培养时，培养液内氧气充足，酵母菌进行有氧呼吸，有氧呼吸释放大量能量，可快速满足酵母菌增殖所需能量，大量扩增酵母菌菌体数量，后续密闭无氧环境下，充足的菌体才能高效进行无氧呼吸产生更多酒精；酸性重铬酸钾与酒精在酸性条件下发生特征显色反应，由橙色变为灰绿色，因此通过颜色变化判断酒精生成；单一实验结果说服力不足，需要设置空白对照实验：取用未接种酵母菌的等量发酵培养液，在相同条件培养，滴加酸性重铬酸钾，排除原料等无关变量干扰，保证实验结果由酵母菌无氧呼吸产生酒精引起。 (3)醋酸菌为好氧微生物，产醋酸分两条代谢路径：第一条是氧气、糖源都充足时，醋酸菌直接利用葡萄糖等糖类底物，全程有氧呼吸将糖彻底氧化分解生成醋酸；第二条是糖源匮乏、氧气充足条件下，醋酸菌先把乙醇氧化为乙醛，再将乙醛氧化生成醋酸。 (4)醋醅发酵后期，随醋酸菌代谢持续进行，体系内氧气被大量消耗、营养物质（糖类等有机物）不断减少，同时醋酸、乳酸等酸性代谢产物积累，使发酵液pH持续下降；氧气含量下降、营养短缺、pH降低多重环境变化加剧不同乳酸菌之间的种间竞争，耐受能力弱的乳酸菌无法适应恶劣环境被淘汰，最终成熟醋醅内乳酸菌种类显著下降。 24．答案：(1)促性腺激素；导致促性腺激素分泌减少，性腺退化 (2)诱导精子获能 (3)内细胞团；桑葚胚或囊胚；将内细胞团均等分割 (4)受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应 (5)可以促进优良动物品种的繁殖，产生遗传性状相同的后代 解析：(1)超数排卵处理向雌性供体注射促性腺激素，促性腺激素作用于性腺，促进卵泡大量发育、一次性排出多枚卵母细胞；性激素存在负反馈调节，外源注射性激素会通过体液反馈抑制垂体分泌促性腺激素，导致内源促性腺激素含量下降、卵巢性腺萎缩，无法实现超数排卵，因此不能使用性激素。区分促性腺激素（促排卵）、性激素（负反馈抑制性腺发育）生理作用差异。 (2)哺乳动物新鲜精子必须经过获能处理，肝素溶液是体外获能常用诱导剂，目的是去除精子表面抑制受精的去能因子，使精子具备完成顶体反应、与卵细胞融合受精的生理能力，未获能精子无法识别透明带，不能完成体外受精。 (3)①是囊胚内部的内细胞团；胚胎分割优选桑椹胚、囊胚时期胚胎，桑椹胚阶段细胞尚未分化、全能性高，囊胚分化为内细胞团和滋养层；囊胚分割关键操作：均等分割内细胞团，若分割不均，内细胞团少的胚胎因胚胎干细胞不足，后续发育受阻甚至夭折，滋养层分割不影响胚胎发育。 (4)受体母牛生理状态经同期发情处理和供体一致，哺乳动物母体免疫系统对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，是胚胎移植后胚胎顺利着床存活的生理学基础。 (5)胚胎分割属于无性繁殖，后代基因型完全一致，优势：快速繁育优良纯种个体，短时间成倍扩大良种数量，大幅度提升优良品种繁殖效率，节省良种繁育周期，是良种快速扩繁的重要胚胎工程技术。 25．答案：(1)之后；高压蒸汽灭菌法 (2)45；稀释涂布平板；5.6×107 (3)A；B (4)降低环境污染；减少化学试剂的残留；对其他动物扰动小等 解析：(1)配制培养基时，要先调配培养基pH，灭菌操作放在调pH之后；高温灭菌过程会改变培养基酸碱度，灭菌后再调pH容易引入外源杂菌，破坏无菌条件。微生物固体培养基通用灭菌方式为高压蒸汽灭菌法，标准灭菌条件为121℃、100kPa压强下灭菌15～30min，该灭菌方式能够有效杀灭包括细菌芽孢、真菌孢子在内的全部微生物。 (2)5g土壤样品添加45mL无菌水，混合后总体积50mL，配制成稀释倍数为10-1的土壤菌悬液；步骤②梯度稀释、③涂布分离单菌落采用稀释涂布平板法。微生物计数规范：仅选择单菌落数在30～300之间的稀释梯度平板统计，本题10-3菌落数589（＞300，菌落重叠无法计数）、10-4菌落112（符合计数区间）、10-5菌落12（＜30，统计误差大舍去）。单块平板涂布体积0.1mL，每毫升10-4原液活菌数=112÷0.1=1120个；原10-1菌悬液每毫升活菌=1120×104=1.12×107个/mL；原5g土壤总体积50mL，总活菌=1.12×107×5=5.6×107个。 (3)抑菌实验操作逻辑：在A点位放置已培养好的苹果腐烂病菌菌落，在B位置接种待测芽孢杆菌菌株。芽孢杆菌生长过程分泌抑菌活性物质，在培养基中向外扩散，抑制A处腐烂病菌生长，依据抑菌圈大小判定菌株抑菌能力强弱。 (4)相较于化学农药防治，利用芽孢杆菌发酵产物开展生物防治的优点：①微生物天然代谢产物易被环境降解，不会造成农药残留，减轻土壤、水体环境污染；②靶向抑制致病真菌，对人畜、田间有益生物毒害程度极低，生态友好；③长期使用不易诱导病原菌产生抗药性，病害防控时效更长。 学科网（北京）股份有限公司 $