精品解析：陕西渭南市韩城市2025-2026学年度第二学期期末检测试题 高二生物学

韩城市2025~2026学年度第二学期期末检测试题 高二生物学 注意事项： 1．本试题共8页，满分100分，答题时间75分钟。 2．答卷前，考生务必将自己的姓名和准考证号填写在答题卡上。 3．回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．考试结束后，监考员将答题卡按顺序收回，装袋整理；试题不回收。 一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 下列关于传统发酵食品制作的叙述，正确的是（　　） A. 制作酸奶时，牛奶巴氏消毒冷却后接种乳酸菌，先通气后密封发酵 B. 制作泡菜时，用水密封泡菜坛口，使气体只能从坛中排出而不能进入 C. 制作腐乳时，发酵过程中有多种微生物参与，其中起主要作用的是曲霉 D. 制作葡萄酒时，需对葡萄汁和发酵装置进行灭菌，以防止杂菌污染 2. 肉桂链霉菌是生产莫能菌素的重要细菌，莫能菌素具有显著的抗球虫和抗肿瘤活性。在实验室对该菌进行纯培养的过程中，下列说法错误的是（　　） A. 培养基经高压蒸汽灭菌冷却后再倒平板 B. 超净工作台、接种室、空气可以通过紫外线消毒 C. 平板划线法可用于微生物的分离、纯化和计数 D. 平板划线后培养微生物时要倒置培养以防止污染 3. 柠檬酸是一种应用广泛的食品酸度调节剂，工业生产柠檬酸常用薯干或玉米为原料，经米曲霉糖化预处理后再利用黑曲霉通过深层通气发酵生产。下列说法错误的是（　　） A. 选育出的高产黑曲霉经扩大培养后接种到发酵罐中 B. 米曲霉糖化的主要作用是对糖类进行氧化分解 C. 发酵过程中pH下降可抑制大部分细菌的生长 D. 适当通气、搅拌有利于溶解氧增加和柠檬酸积累 4. 在探究通气方式对餐厨垃圾分解转化的影响时，研究人员将添加了高效微生物菌剂的餐厨垃圾均分为两组，分别采用两种通气方式进行堆肥形成腐殖质，实验数据见下表。下列叙述错误的是（ ） 通气方式 达到50℃所需时间（h） 最高温度（℃） 高温持续时间（天） 间歇通气 42 68.6 7 连续通气 38 65.1 5 A. 餐厨垃圾中的有机物能为微生物提供碳源、氮源 B. 实验过程中应控制好餐厨垃圾的种类、微生物菌剂的种类等无关变量 C. 间歇通气组在停气期间会影响好氧菌的生长繁殖 D. 微生物对有机物分解的产热速率，连续通气组<间歇通气组 5. 丹霞梧桐是我国的珍稀濒危植物，野生种群数量极少，科研人员采用植物组织培养技术进行迁地保护。下列叙述正确的是（　　） A. 以茎尖作为外植体进行接种时应将其形态学上端插入培养基中 B. 培养基中添加的蔗糖既可以作为碳源，又可以调节渗透压 C. 茎尖分生组织可不经过脱分化而转变为胚状体 D. 试管苗发育成熟后，直接移栽至田间土壤即可 6. 甜叶菊是一种菊科多年生草本植物，其叶片产生的甜菊糖苷是重要的天然甜味剂，科研人员用下图所示方法提取甜菊糖苷。下列相关叙述正确的是（　　） 外植体愈伤组织单个细胞高产细胞群提取甜菊糖苷 A. 需用酒精和次氯酸钠溶液对外植体灭菌 B. 过程①②都需在光照条件下，促进叶绿素的形成 C. 培养过程②③需接种到固体培养基上培养 D. 过程①②③未体现甜叶菊细胞的全能性 7. 单倍体胚胎干细胞是拥有类似于正常干细胞分裂分化能力的细胞群，取自于孤雌或孤雄发育至囊胚的细胞。如图为获得单倍体胚胎干细胞的两种方式，下列说法正确的是（ ） A. 方式一中还可采用紫外线短时间照射或梯度离心法去除卵母细胞的细胞核 B. “扩增”时需将分选后的单倍体细胞置于含有95%空气和5%氧气的培养箱中 C. 单倍体胚胎干细胞通常不含等位基因，更有利于研究显性基因的功能 D. 图中的胚胎干细胞取自囊胚的内细胞团细胞，细胞中只含一条X染色体 8. 大熊猫是中国特有的珍稀物种，主要分布在四川、陕西和甘肃的部分山区，野生大熊猫的数量不足2000只。科学家为扩大培育，选择出生夭折的大熊猫与家兔巧妙构建出大熊猫—兔重构胚，实验及结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） 注：CB为细胞松弛素，Colc为秋水仙素，两者均为细胞骨架抑制剂，使用时用DMSO溶剂溶解。 A. 可用促性腺激素处理家兔，以获得大量处于MⅡ期的卵母细胞 B. Colc能够明显提高核移植成功率，其成功率高于对照组和其他实验组 C. 可用电刺激、Ca2+载体、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚 D. 重构胚的构建应用了体细胞核移植技术，其具有发育为完整个体的能力 9. 东北马鹿和天山马鹿杂交后代的鲜茸平均重量为3760g，比东北马鹿高50.4%。通过体外受精和胚胎移植技术，可提高后代繁殖率。下列相关叙述正确的是（　　） A. 体外受精前，需对采集到的精子和卵细胞进行获能处理 B. 受精卵发育至桑葚胚阶段，细胞数量和胚胎总体积均增加 C. 为确保受体与供体生理状态一致，需进行同期发情处理 D. 经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体均保持一致 10. 儒艮是一种珍稀的海洋哺乳动物。为提高人们对儒艮生存威胁的认识，每年的5月28日被定为世界儒艮日。下列用于提高儒艮种群繁殖能力或提高其种群数量的措施，错误的是（　　） A. 采用细胞融合技术将雌雄配子融合，培育儒艮 B. 采用动物体细胞核移植技术，获得克隆儒艮 C. 采用体外受精技术，提高儒艮的繁殖能力 D. 采用胚胎分割技术，增加儒艮胚胎的数量 11. 如图为鸡血细胞中DNA的粗提取和鉴定实验过程中的部分操作示意图。下列相关叙述错误的是（ ） A. 该实验的正确操作顺序为a→c→b→e→d B. 步骤b利用了DNA和某些蛋白质在酒精中的溶解度不同 C. 步骤e中“某溶液”为NaCl溶液，步骤d试管中会出现紫色 D. 为保证实验的顺利进行，鉴定试剂需现配现用 12. 将酵母菌的质粒连接上干扰素基因后再导入酵母菌细胞中，进行目的基因的检测和鉴定获得能产干扰素的基因工程菌。如图所示为有关DNA片段的扩增及电泳鉴定结果，①②③代表不同加样孔，下列叙述正确的是（　　） A. 为了获得更多DNA，可适当增加PCR的循环次数 B. ①和②的电泳鉴定结果的差异仅与DNA的含量有关 C. 电泳鉴定DNA时只要有条带，可以不加入标准DNA参照 D. ①含有目的DNA片段说明转基因工程菌培育成功，③失败 13. 玉米螟是我国玉米的主要害虫。研究人员通过基因工程育种将抗虫基因（cry1Ab13）和抗除草剂基因（Bar）一起转入玉米中，以提升其抗虫和抗除草剂的能力，过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. ②过程前需在cry1Ab13基因两端添加限制酶BamH Ⅰ的识别序列 B. 步骤②应将cry1Ab13基因插入表达载体的启动子1和终止子1之间 C. 可采用分子杂交技术定性检测cry1Ab13基因的转录产物 D. 通过观察玉米抗除草剂的能力判定转基因抗虫玉米是否培养成功 14. 进行性肌肉骨化症（FOP）是一种基因缺陷导致肌肉骨骼发育紊乱，出现异位骨化的系统性骨病。研究者将ACVR1基因与双歧杆菌的质粒拼接后导入双歧杆菌，在添加青霉素的选择培养基中进行培养，利用转基因双歧杆菌产生的胞外囊泡用于治疗模型鼠进行性肌肉骨化症。下列叙述不正确的是（　　） A. ACVR1基因可以通过人工合成和PCR获得 B. 选择培养基中添加青霉素是为了防止杂菌污染 C. 通过Ca2+转化法可以将重组质粒转入大肠杆菌 D. 基因工程的载体除了质粒，还可以是噬菌体或动植物病毒 15. 腈水合酶（N0）广泛应用于环境保护和医药原料生产等领域，但不耐高温。利用蛋白质工程技术在N0α和β亚基之间加入一段连接肽，可获得热稳定的融合型腈水合酶（N1）。下列有关叙述错误的是 A. 蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质（　　） B. N0与N1耐热性的差异与两者的空间结构有关 C. N0的改造思路与中心法则的信息流动方向是一致的 D. 根据N1的蛋白质推导出的对应基因序列不是唯一的 16. 生物技术的进步在给人类带来福祉的同时，会引起人们对它安全性的关注，也会与伦理道德发生碰撞，带来新的伦理困惑与挑战。下列观点正确的是（ ） A. 转基因生产的是自然界存在的物质，不需要进行安全检测 B. 设计试管婴儿能使后代更优秀，应该大力提倡使用该技术 C. 我国允许治疗性克隆，不需要对其作有效监管和严格审查 D. 生物武器危害大，我国反对生物武器及其技术和设备扩散 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17. 果醋富含多种有机酸、维生素等物质，具有较好的抗氧化等功效。研究者以柑橘为原料，选用沪酿1.01醋酸菌、AS1.41醋酸菌和许氏醋酸菌三种醋酸菌，通过一次发酵法和二次发酵法酿造出六种柑橘果醋，以此探究醋酸菌种类和发酵方式对柑橘果醋总酸含量的影响。两种发酵方式流程如下。请回答下列问题： 一次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→杀菌→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 二次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→调糖→酒精发酵→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 （1）二次发酵中，先进行酒精发酵，后进行醋酸发酵，其中醋酸发酵的原理是_____（写出反应简式）。 （2）酒精发酵阶段，先向发酵瓶中通入空气的目的是_____，检测酒精常使用的试剂是_____。制好果酒后进行醋酸发酵，除需要加入醋酸菌外还需要_____。 （3）研究者以柑橘为材料进行实验，分组如下表，结果如下图。 醋酸菌名称 发酵方式 样品编号 沪酿1.01 一次发酵 沪1 二次发酵 沪2 AS1.41 一次发酵 AS1 二次发酵 AS2 许氏醋酸菌 一次发酵 许氏1 二次发酵 许氏2 由图可知，三个品种的最终总酸含量_____，醋酸菌种类和发酵方式对发酵产酸的影响分别表现为_____。 18. 莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按如图1所示程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。请分析并回答问题： （1）图1的富集培养液中加入的是无氮培养液和过量莠去津，从用途分类，属于______培养基。若需要调节培养基pH，应在灭菌______（填“前”或“后”）进行。 （2）如图1所示，将获得的菌种接种到X培养基上，采用的接种方法是______。在X培养基上所形成的菌落中，______（填序号）不是目的菌的菌落，其利用的氮源可能是______。 （3）为研究目的菌的生长规律，可采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定Y培养基中该菌的数量，发现测得的数量前者大于后者，其原因是______。现取Y中一定量的样液，采用图2所示方法对目的菌进行计数，甲组中a培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是______。根据乙组结果可计算出样液中该菌的数目约是______个/mL。 19. 非洲狼尾草光合效率高，为培育高光合效率的水稻新品种，研究人员将粳稻与非洲狼尾草的原生质体融合并培育出杂种幼苗，如图1。研究人员同时开展了不同浓度的聚乙二醇（PEG）对原生质体融合率的影响实验（已知PEG浓度较高时对细胞具有毒害作用），实验结果如图2所示（异源融合率是指不同种的原生质体发生融合的概率）。回答下列问题： （1）图中过程①需要用______酶处理去除细胞壁以获得原生质体。诱导a与b融合的方法除用PEG处理外，还有______（答出1点），原生质体融合完成的标志是______。 （2）图中④将融合后的细胞接种到MS培养基中，可获得愈伤组织，愈伤组织具有______的特点。过程⑤表示再分化过程，其实质是______。 （3）科学家发现部分细胞无法形成愈伤组织，推测可能的原因：______（答出2点）。 （4）分析图2能够得出不同PEG浓度下同源融合率均______（填“大于”“小于”或“等于”）异源融合率。若想要进一步确定诱导粳稻与非洲狼尾草原生质体融合的最佳PEG浓度，实验思路是：______。 （5）已知非洲狼尾草正常体细胞内有m条染色体，粳稻正常体细胞内有n条染色体，通过上述过程培育成的“非洲狼尾草—粳稻”植物新品种，其体细胞有丝分裂后期最多可能有______条染色体。 20. 将人类抗体基因转入抗体基因缺陷的小鼠中，再用抗原免疫小鼠即可获得转基因动物全人源抗体。该技术避免了对每种抗体的单一人源化改造，使抗体制备成本降低，开发周期缩短。如图是利用转基因小鼠制备人源化抗新S蛋白单克隆抗体的简易流程图。请回答下列问题： （1）图中步骤②采用的方法是______法。 （2）图中a代表______，给转基因小鼠注射a的目的是______。 （3）过程⑤在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对______和______生长具有抑制作用。 （4）过程⑥需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和______。在大规模悬浮培养时，杂交瘤细胞增殖减慢甚至停止，原因可能是______（答出两点）。 （5）与传统先制备鼠源单抗再进行人源化改造的技术相比，本实验利用转基因小鼠直接获得全人源抗体。从临床应用角度分析，最大优势是______。 21. 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，如图1为其制备的基本方案，图2为各种限制酶的识别序列及切割位点。回答下列问题： 注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔； 注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达。 （1）图1中hCGβ基因转录的模板链是______链。利用PCR技术扩增hCGβ基因时，每次循环可分为变性、______、延伸三个步骤，其中变性的结果是______。 （2）图1所示hCGβ基因是人工合成的目的基因，在设计引物对其扩增时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其左右两端分别添加______限制酶的识别序列，图示hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是______。 （3）阶段Ⅱ大肠杆菌作为受体菌是利用了大肠杆菌______（至少答2点）的特点，从而实现重组DNA的扩增，然后在含有______的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进一步进行扩增。 （4）阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基______（填“需要”或“不需要”）添加组氨酸，可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，依据______原理进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 韩城市2025~2026学年度第二学期期末检测试题 高二生物学 注意事项： 1．本试题共8页，满分100分，答题时间75分钟。 2．答卷前，考生务必将自己的姓名和准考证号填写在答题卡上。 3．回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 4．考试结束后，监考员将答题卡按顺序收回，装袋整理；试题不回收。 一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 下列关于传统发酵食品制作的叙述，正确的是（　　） A. 制作酸奶时，牛奶巴氏消毒冷却后接种乳酸菌，先通气后密封发酵 B. 制作泡菜时，用水密封泡菜坛口，使气体只能从坛中排出而不能进入 C. 制作腐乳时，发酵过程中有多种微生物参与，其中起主要作用的是曲霉 D. 制作葡萄酒时，需对葡萄汁和发酵装置进行灭菌，以防止杂菌污染 【答案】B 【解析】 【详解】A、乳酸菌为严格厌氧型微生物，通气会抑制乳酸菌的生长繁殖，制作酸奶全程需要无氧环境，无需通气，A错误； B、制作泡菜依赖乳酸菌的无氧呼吸，水密封泡菜坛口，既可以让坛内发酵产生的多余气体排出，又能隔绝外界空气进入，保证坛内无氧环境，B正确； C、腐乳发酵过程中有多种微生物参与，其中起主要作用的是毛霉，不是曲霉，C错误； D、葡萄酒发酵所需的酵母菌来自葡萄皮表面的野生型酵母菌，若对葡萄汁灭菌会杀死菌种，仅需对发酵装置进行消毒即可，不需要对葡萄汁灭菌，D错误。 2. 肉桂链霉菌是生产莫能菌素的重要细菌，莫能菌素具有显著的抗球虫和抗肿瘤活性。在实验室对该菌进行纯培养的过程中，下列说法错误的是（　　） A. 培养基经高压蒸汽灭菌冷却后再倒平板 B. 超净工作台、接种室、空气可以通过紫外线消毒 C. 平板划线法可用于微生物的分离、纯化和计数 D. 平板划线后培养微生物时要倒置培养以防止污染 【答案】C 【解析】 【详解】A、培养基经高压蒸汽灭菌后，需冷却至约50℃再倒平板，可避免温度过高导致皿盖产生大量冷凝水、或破坏培养基中热敏性营养成分，A正确； B、紫外线可破坏微生物的核酸结构起到消毒作用，超净工作台、接种室、空气都可通过紫外线消毒，B正确； C、平板划线法可通过连续划线逐步稀释菌群，实现微生物的分离和纯化，但无法对微生物进行计数，微生物计数常用稀释涂布平板法，C错误； D、平板划线后倒置培养，可避免皿盖的冷凝水滴落污染培养基，同时也能减少培养基水分过快蒸发，D正确。 3. 柠檬酸是一种应用广泛的食品酸度调节剂，工业生产柠檬酸常用薯干或玉米为原料，经米曲霉糖化预处理后再利用黑曲霉通过深层通气发酵生产。下列说法错误的是（　　） A. 选育出的高产黑曲霉经扩大培养后接种到发酵罐中 B. 米曲霉糖化的主要作用是对糖类进行氧化分解 C. 发酵过程中pH下降可抑制大部分细菌的生长 D. 适当通气、搅拌有利于溶解氧增加和柠檬酸积累 【答案】B 【解析】 【详解】A、发酵生产时，选育出的高产黑曲霉先经扩大培养增加菌种数量，再接种到发酵罐，可缩短发酵周期、提高发酵效率，A正确； B、米曲霉糖化的主要作用是利用自身产生的淀粉酶，将原料中的淀粉等多糖水解为葡萄糖等可被黑曲霉利用的单糖，并非对糖类进行氧化分解，B错误； C、发酵过程中黑曲霉产生的柠檬酸会使发酵液pH下降，酸性环境可抑制大部分不耐酸的细菌生长，C正确； D、黑曲霉通过有氧代谢合成柠檬酸，适当通气、搅拌可增加发酵液溶解氧含量，促进黑曲霉有氧代谢，有利于柠檬酸积累，D正确。 4. 在探究通气方式对餐厨垃圾分解转化的影响时，研究人员将添加了高效微生物菌剂的餐厨垃圾均分为两组，分别采用两种通气方式进行堆肥形成腐殖质，实验数据见下表。下列叙述错误的是（ ） 通气方式 达到50℃所需时间（h） 最高温度（℃） 高温持续时间（天） 间歇通气 42 68.6 7 连续通气 38 65.1 5 A. 餐厨垃圾中的有机物能为微生物提供碳源、氮源 B. 实验过程中应控制好餐厨垃圾的种类、微生物菌剂的种类等无关变量 C. 间歇通气组在停气期间会影响好氧菌的生长繁殖 D. 微生物对有机物分解的产热速率，连续通气组<间歇通气组 【答案】D 【解析】 【分析】有氧呼吸的全过程，可以分为三个阶段：第一个阶段，一个分子的葡萄糖分解成两个分子的丙酮酸，在分解的过程中产生少量的氢(用[H]表示)，同时释放出少量的能量。这个阶段是在细胞质基质中进行的；第二个阶段，丙酮酸经过一系列的反应，分解成二氧化碳和氢，同时释放出少量的能量。这个阶段是在线粒体中进行的；第三个阶段，前两个阶段产生的氢，经过一系列的反应，与氧结合而形成水，同时释放出大量的能量。 【详解】A、餐厨垃圾中的有机物例如糖类、蛋白质等，能为微生物提供碳源、氮源，A正确； B、本实验的自变量是通气方式，餐厨垃圾的种类、微生物菌剂的种类等无关变量应相同且适宜，B正确； C、好氧菌的生长繁殖需要氧气的供应，因此间歇通气组在停气期间会影响好氧菌的生长繁殖，C正确； D、据表格所示，间歇通气达到50℃所需时间需要42h，而连续通气达到50℃所需时间仅需要38h，说明微生物对有机物分解的产热速率，连续通气组＞间歇通气组，D错误。 故选D。 5. 丹霞梧桐是我国的珍稀濒危植物，野生种群数量极少，科研人员采用植物组织培养技术进行迁地保护。下列叙述正确的是（　　） A. 以茎尖作为外植体进行接种时应将其形态学上端插入培养基中 B. 培养基中添加的蔗糖既可以作为碳源，又可以调节渗透压 C. 茎尖分生组织可不经过脱分化而转变为胚状体 D. 试管苗发育成熟后，直接移栽至田间土壤即可 【答案】B 【解析】 【详解】A、接种茎尖外植体时，需将形态学下端插入培养基，才能保证外植体正常吸收水分和营养，A错误； B、培养基中的蔗糖既能为植物细胞提供碳源和能量，又能调节渗透压以维持细胞形态稳定，B正确； C、茎尖分生组织作为外植体需要经过脱分化和再分化可转变为胚状体，C错误； D、试管苗长期在无菌培养基中生长，对外界环境适应能力弱，炼苗后需移栽至消毒的基质，逐步适应自然土壤，直接移栽成活率极低，D错误。 6. 甜叶菊是一种菊科多年生草本植物，其叶片产生的甜菊糖苷是重要的天然甜味剂，科研人员用下图所示方法提取甜菊糖苷。下列相关叙述正确的是（　　） 外植体愈伤组织单个细胞高产细胞群提取甜菊糖苷 A. 需用酒精和次氯酸钠溶液对外植体灭菌 B. 过程①②都需在光照条件下，促进叶绿素的形成 C. 培养过程②③需接种到固体培养基上培养 D. 过程①②③未体现甜叶菊细胞的全能性 【答案】D 【解析】 【详解】A、使用酒精和次氯酸钠是对外植体进行消毒，而非灭菌，灭菌会杀死外植体自身的活细胞，A错误； B、过程①是脱分化形成愈伤组织的过程，该过程不需要光照，光照会抑制愈伤组织的形成，B错误； C、过程②获得单个细胞、③培养获得高产细胞群需用液体培养基，便于细胞充分接触营养物质，利于细胞增殖，不需要接种到固体培养基上，C错误； D、细胞全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有发育成完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。过程①②③仅形成愈伤组织、单个细胞及高产细胞群，未发育为完整植株，因此未体现细胞的全能性，D正确。 7. 单倍体胚胎干细胞是拥有类似于正常干细胞分裂分化能力的细胞群，取自于孤雌或孤雄发育至囊胚的细胞。如图为获得单倍体胚胎干细胞的两种方式，下列说法正确的是（ ） A. 方式一中还可采用紫外线短时间照射或梯度离心法去除卵母细胞的细胞核 B. “扩增”时需将分选后的单倍体细胞置于含有95%空气和5%氧气的培养箱中 C. 单倍体胚胎干细胞通常不含等位基因，更有利于研究显性基因的功能 D. 图中的胚胎干细胞取自囊胚的内细胞团细胞，细胞中只含一条X染色体 【答案】A 【解析】 【分析】胚胎干细胞（简称ES细胞）存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。 【详解】A、目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法，A正确； B、“扩增”时需将分选后的单倍体细胞置于含有95%空气和5%二氧化碳的培养箱中，B错误； C、单倍体胚胎干细胞取自于孤雌或孤雄发育至囊胚的细胞，因此不含等位基因，更有利于研究隐性基因的功能，C错误； D、由于单倍体胚胎干细胞取自于孤雌或孤雄发育至囊胚的细胞，细胞中含一条X染色体或一条Y染色体，D错误。 故选A。 8. 大熊猫是中国特有的珍稀物种，主要分布在四川、陕西和甘肃的部分山区，野生大熊猫的数量不足2000只。科学家为扩大培育，选择出生夭折的大熊猫与家兔巧妙构建出大熊猫—兔重构胚，实验及结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） 注：CB为细胞松弛素，Colc为秋水仙素，两者均为细胞骨架抑制剂，使用时用DMSO溶剂溶解。 A. 可用促性腺激素处理家兔，以获得大量处于MⅡ期的卵母细胞 B. Colc能够明显提高核移植成功率，其成功率高于对照组和其他实验组 C. 可用电刺激、Ca2+载体、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚 D. 重构胚的构建应用了体细胞核移植技术，其具有发育为完整个体的能力 【答案】B 【解析】 【详解】A、实验过程中需要用外源促性腺激素处理家兔，使家兔超数排卵，以获得大量处于MⅡ期的卵母细胞，为核移植提供更多的实验材料，A正确； B、与DMSO组（对照组）相比较，Colc处理后，激活后发育为2细胞的个数有所减少，与CB组相比较，Colc处理后，激活后发育为2细胞的数量也有所减少，Colc并不能明显提高核移植成功率，B错误； C、重构胚可通过物理或化学方法（如电刺激、乙醇、Ca2+载体、蛋白酶合成抑制剂等）激活，使其完成细胞分裂和发育过程，C正确； D、在重构胚的构建过程中，应用了体细胞核移植技术，重构胚具有发育成完整个体的能力，D正确。 9. 东北马鹿和天山马鹿杂交后代的鲜茸平均重量为3760g，比东北马鹿高50.4%。通过体外受精和胚胎移植技术，可提高后代繁殖率。下列相关叙述正确的是（　　） A. 体外受精前，需对采集到的精子和卵细胞进行获能处理 B. 受精卵发育至桑葚胚阶段，细胞数量和胚胎总体积均增加 C. 为确保受体与供体生理状态一致，需进行同期发情处理 D. 经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体均保持一致 【答案】C 【解析】 【详解】A、体外受精前，仅需要对精子进行获能处理，卵细胞需培养至减数第二次分裂中期即可具备受精能力，无需获能处理，A错误； B、受精卵发育至桑葚胚阶段时，细胞通过有丝分裂使数量增加，但该阶段胚胎总体积基本不变甚至略有减小，并非增加，B错误； C、胚胎移植时对供体和受体进行同期发情处理，目的是使二者生理状态一致，为胚胎着床发育提供相同的生理环境，C正确； D、通过体外受精和胚胎移植产生的后代，遗传物质来自提供生殖细胞的供体双亲，受体仅提供胚胎发育的场所，不影响后代遗传特性，因此其遗传特性与受体无关，D错误。 10. 儒艮是一种珍稀的海洋哺乳动物。为提高人们对儒艮生存威胁的认识，每年的5月28日被定为世界儒艮日。下列用于提高儒艮种群繁殖能力或提高其种群数量的措施，错误的是（　　） A. 采用细胞融合技术将雌雄配子融合，培育儒艮 B. 采用动物体细胞核移植技术，获得克隆儒艮 C. 采用体外受精技术，提高儒艮的繁殖能力 D. 采用胚胎分割技术，增加儒艮胚胎的数量 【答案】A 【解析】 【详解】A、细胞融合技术是将两个或多个细胞融合成一个细胞，无法直接将雌雄配子融合培育新个体。雌雄配子的融合属于受精作用，不是细胞融合技术的应用范畴，A错误； B、动物体细胞核移植技术（克隆技术）可将体细胞核移入去核卵细胞，培育新个体，获得克隆儒艮，B正确； C、体外受精技术可克服自然受精障碍，提高受精成功率，有效提升繁殖能力，C正确； D、胚胎分割技术将早期胚胎分割成多份，经移植可发育为多个个体，能成倍增加胚胎利用率，D正确。 故选A。 11. 如图为鸡血细胞中DNA的粗提取和鉴定实验过程中的部分操作示意图。下列相关叙述错误的是（ ） A. 该实验的正确操作顺序为a→c→b→e→d B. 步骤b利用了DNA和某些蛋白质在酒精中的溶解度不同 C. 步骤e中“某溶液”为NaCl溶液，步骤d试管中会出现紫色 D. 为保证实验的顺利进行，鉴定试剂需现配现用 【答案】C 【解析】 【分析】DNA粗提取与鉴定的原理：（1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的；（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离；（3）.DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 【详解】A、图中正确步骤应为a（提取鸡血细胞中的DNA）→c（过滤获得DNA滤液）→b（析出DNA沉淀）→e（溶解絮状DNA）→d（二苯胺鉴定DNA），A正确； B、步骤b利用了DNA和某些蛋白质在酒精中的溶解度不同，提取DNA分子，B正确； C、DNA在2mol/L中的NaCl中溶解度最大，步骤e中“某溶液”为NaCI溶液，步骤d中DNA与二苯胺反应呈蓝色，C错误； D、步骤d中需向试管内加入二苯胺试剂，沸水浴加热情况下DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，鉴定试剂需现配现用，D正确。 故选C。 12. 将酵母菌的质粒连接上干扰素基因后再导入酵母菌细胞中，进行目的基因的检测和鉴定获得能产干扰素的基因工程菌。如图所示为有关DNA片段的扩增及电泳鉴定结果，①②③代表不同加样孔，下列叙述正确的是（　　） A. 为了获得更多DNA，可适当增加PCR的循环次数 B. ①和②的电泳鉴定结果的差异仅与DNA的含量有关 C. 电泳鉴定DNA时只要有条带，可以不加入标准DNA参照 D. ①含有目的DNA片段说明转基因工程菌培育成功，③失败 【答案】A 【解析】 【详解】A、PCR扩增DNA时，DNA数量随循环次数增加呈指数增长，适当增加循环次数可获得更多的DNA，A正确； B、观察，①和②的电泳鉴定结果差异主要不是 DNA 含量，而是DNA 片段的大小不同，B错误； C、电泳鉴定 DNA 时，标准DNA是非常重要的参照，它可以帮助判断目的 DNA 片段的大小，不能不加入，C错误； D、①含有目的DNA片段只能说明在PCR扩增或电泳鉴定这一步有目的DNA存在，但不能就此说明转基因工程菌培育成功，还需要进行其他检测，如目的基因的表达检测等；③失败也不能仅仅根据这一个电泳结果确定，D错误。 13. 玉米螟是我国玉米的主要害虫。研究人员通过基因工程育种将抗虫基因（cry1Ab13）和抗除草剂基因（Bar）一起转入玉米中，以提升其抗虫和抗除草剂的能力，过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. ②过程前需在cry1Ab13基因两端添加限制酶BamH Ⅰ的识别序列 B. 步骤②应将cry1Ab13基因插入表达载体的启动子1和终止子1之间 C. 可采用分子杂交技术定性检测cry1Ab13基因的转录产物 D. 通过观察玉米抗除草剂的能力判定转基因抗虫玉米是否培养成功 【答案】D 【解析】 【详解】A、②过程为构建重组表达载体，需要用同种限制酶切割目的基因和载体以获得相同黏性末端，图示载体的可用切割位点为限制酶BamH Ⅰ的识别位点，因此需要在cry1Ab13基因两端添加该酶的识别序列，才能完成切割和后续连接，A正确； B、启动子是RNA聚合酶识别结合启动转录的序列，终止子是终止转录的序列，目的基因必须插入启动子和终止子之间才能正常表达，因此cry1Ab13基因应插入启动子1和终止子1之间，B正确； C、cry1Ab13基因的转录产物是mRNA，可采用分子杂交技术，用标记的目的基因单链作为探针，与提取的总RNA杂交，定性检测是否存在对应的转录产物，C正确； D、抗除草剂是抗除草剂基因（Bar）表达的性状，转基因抗虫玉米培育成功的标志是抗虫基因成功表达，玉米具备抗虫特性，仅通过抗除草剂能力无法判定抗虫基因是否正常表达，D错误。 14. 进行性肌肉骨化症（FOP）是一种基因缺陷导致肌肉骨骼发育紊乱，出现异位骨化的系统性骨病。研究者将ACVR1基因与双歧杆菌的质粒拼接后导入双歧杆菌，在添加青霉素的选择培养基中进行培养，利用转基因双歧杆菌产生的胞外囊泡用于治疗模型鼠进行性肌肉骨化症。下列叙述不正确的是（　　） A. ACVR1基因可以通过人工合成和PCR获得 B. 选择培养基中添加青霉素是为了防止杂菌污染 C. 通过Ca2+转化法可以将重组质粒转入大肠杆菌 D. 基因工程的载体除了质粒，还可以是噬菌体或动植物病毒 【答案】B 【解析】 【详解】A、ACVR1基因可通过化学合成法（已知序列时）或PCR扩增（需模板）获得，A正确； B、选择培养基中添加青霉素的目的是筛选含有青霉素抗性基因的重组质粒的双歧杆菌，而非防止杂菌污染（污染控制依赖无菌操作），B错误； C、Ca2+转化法可使大肠杆菌处于感受态，便于吸收重组质粒，C正确； D、基因工程常用载体包括质粒、噬菌体衍生物和动植物病毒（如λ噬菌体、腺病毒），D正确。 故选B。 15. 腈水合酶（N0）广泛应用于环境保护和医药原料生产等领域，但不耐高温。利用蛋白质工程技术在N0α和β亚基之间加入一段连接肽，可获得热稳定的融合型腈水合酶（N1）。下列有关叙述错误的是 A. 蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质（　　） B. N0与N1耐热性的差异与两者的空间结构有关 C. N0的改造思路与中心法则的信息流动方向是一致的 D. 根据N1的蛋白质推导出的对应基因序列不是唯一的 【答案】C 【解析】 【详解】A、蛋白质工程可通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造自然界原本不存在的蛋白质，A正确； B、蛋白质的功能与其空间结构密切相关，N1是在N0的亚基间加入连接肽得到的，二者空间结构存在差异，因此耐热性差异与空间结构有关，B正确； C、蛋白质工程的改造思路是：预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列，该过程是中心法则（DNA→RNA→蛋白质）的逆推，与中心法则的信息流动方向相反，C错误； D、密码子具有简并性，同一种氨基酸可对应多种密码子，因此根据N1的氨基酸序列推导出的基因序列不是唯一的，D正确。 16. 生物技术的进步在给人类带来福祉的同时，会引起人们对它安全性的关注，也会与伦理道德发生碰撞，带来新的伦理困惑与挑战。下列观点正确的是（ ） A. 转基因生产的是自然界存在的物质，不需要进行安全检测 B. 设计试管婴儿能使后代更优秀，应该大力提倡使用该技术 C. 我国允许治疗性克隆，不需要对其作有效监管和严格审查 D. 生物武器危害大，我国反对生物武器及其技术和设备扩散 【答案】D 【解析】 【分析】1、转基因生物所转入的仅仅是有限的一种或几种基因，而转入的基因是否可能会对其他生物或环境造成危害，都要经过分析、实践，一旦发现有害后果，科学家就会停止实验。2、转基因食品绝大多数是安全的，人们从食物中获得可以被人体吸收的小分子物质，这些物质在不同生物体内多数是相同的；转基因食品中只是增加了少量对人类无害的基因，不会从根本上改变生物的性质，转基因技术可以按照人们的意愿定向改造生物的遗传性状，所以对于人类来说，有很大的好处。由于转基因技术还不是很成熟，需要特别注意控制其副作用。 【详解】A、转基因生产的是自然界存在的物质，但是也需要进行安全检测，A错误； B、我国不允许利用体外受精技术筛选早期胚胎性别，解决不孕夫妇的生殖问题，支持的是采用试管婴儿的技术，B错误。 C、我国允许治疗性克隆，需要对其作有效监管和严格审查，C错误； D、生物武器危害大，我国反对生物武器及其技术和设备扩散，D正确。 故选D。 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17. 果醋富含多种有机酸、维生素等物质，具有较好的抗氧化等功效。研究者以柑橘为原料，选用沪酿1.01醋酸菌、AS1.41醋酸菌和许氏醋酸菌三种醋酸菌，通过一次发酵法和二次发酵法酿造出六种柑橘果醋，以此探究醋酸菌种类和发酵方式对柑橘果醋总酸含量的影响。两种发酵方式流程如下。请回答下列问题： 一次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→杀菌→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 二次发酵：柑橘→去皮榨汁→过滤→调糖→酒精发酵→醋酸发酵→杀菌→陈酿→柑橘果醋 （1）二次发酵中，先进行酒精发酵，后进行醋酸发酵，其中醋酸发酵的原理是_____（写出反应简式）。 （2）酒精发酵阶段，先向发酵瓶中通入空气的目的是_____，检测酒精常使用的试剂是_____。制好果酒后进行醋酸发酵，除需要加入醋酸菌外还需要_____。 （3）研究者以柑橘为材料进行实验，分组如下表，结果如下图。 醋酸菌名称 发酵方式 样品编号 沪酿1.01 一次发酵 沪1 二次发酵 沪2 AS1.41 一次发酵 AS1 二次发酵 AS2 许氏醋酸菌 一次发酵 许氏1 二次发酵 许氏2 由图可知，三个品种的最终总酸含量_____，醋酸菌种类和发酵方式对发酵产酸的影响分别表现为_____。 【答案】（1）C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量 （2） ①. 使酵母菌大量增殖 ②. 酸性重铬酸钾溶液 ③. 通入无菌空气、提高温度 （3） ①. 无显著差异      ②. 沪酿1.01发酵产酸速度最快；二次发酵速度比一次发酵速度快      【解析】 【小问1详解】 酒精发酵后，醋酸菌在有氧条件下将乙醇转化为醋酸，C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量。 【小问2详解】 酵母菌是兼性厌氧菌，酒精发酵初期通入空气，可促进酵母菌有氧呼吸产生大量能量，供酵母菌大量增殖，获得足够菌种后再进行无氧发酵产酒精； 酸性条件下，酒精可使橙色的重铬酸钾变为灰绿色，因此用酸性重铬酸钾溶液检测酒精； 醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为30~35℃，因此果酒转为醋酸发酵时，除添加醋酸菌外，还需要通入无菌空气保证氧气供应，同时调节温度到醋酸菌的最适生长温度。 【小问3详解】 由图可知，三个品种的最终总酸含量无显著差异，醋酸菌种类和发酵方式对发酵产酸的影响分别表现为：沪酿1.01发酵产酸速度最快；二次发酵速度比一次发酵速度快。 18. 莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按如图1所示程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。请分析并回答问题： （1）图1的富集培养液中加入的是无氮培养液和过量莠去津，从用途分类，属于______培养基。若需要调节培养基pH，应在灭菌______（填“前”或“后”）进行。 （2）如图1所示，将获得的菌种接种到X培养基上，采用的接种方法是______。在X培养基上所形成的菌落中，______（填序号）不是目的菌的菌落，其利用的氮源可能是______。 （3）为研究目的菌的生长规律，可采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定Y培养基中该菌的数量，发现测得的数量前者大于后者，其原因是______。现取Y中一定量的样液，采用图2所示方法对目的菌进行计数，甲组中a培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是______。根据乙组结果可计算出样液中该菌的数目约是______个/mL。 【答案】（1） ①. 选择 ②. 前 （2） ①. 稀释涂布平板法 ②. ①③ ③. 空气中的氮气 （3） ①. 显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌，会将死菌、活菌一起统计；而稀释涂布菌落计数法只统计活菌，且多个细菌连在一起时只会形成一个菌落，统计结果偏小 ②. 稀释倍数不够，菌液浓度过高 ③. 1.4×108 【解析】 【小问1详解】 该培养基以莠去津作为唯一氮源，只允许能降解莠去津的目的菌生长，抑制其他菌，从用途上属于选择培养基。培养基制备流程为：计算→称量→溶化→调pH→灭菌→倒平板，因此调pH需要在灭菌前进行，避免灭菌后调pH引入杂菌。 【小问2详解】 由图1可知，将获得的菌种接种到X培养基上采用的接种方法是稀释涂布平板法。在X培养基上，因为目的菌能降解莠去津，而莠去津含氮，所以目的菌可利用莠去津作为氮源，在含过量莠去津的不透明培养基上形成透明圈，图中①③形成的菌落周围未出现透明圈，不是目的菌的菌落，其利用的氮源可能是空气中的氮气。 【小问3详解】 显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌，会将死菌、活菌一起统计；而稀释涂布菌落计数法只统计活菌，且多个细菌连在一起时只会形成一个菌落，统计结果偏小，因此显微镜直接计数法测得的数值更大。 a菌落连成一片，说明菌液中菌体浓度过高，最可能原因是稀释倍数不够，菌液浓度过高。 稀释倍数计算：5mL样液+45mL无菌水，稀释10倍；从锥形瓶到4号共经过4次每次10倍的梯度稀释，总稀释倍数为105。乙组三个平板平均菌落数为（275+285+280）/3=280，涂布体积为0.2mL，因此样液中菌浓度为：280÷0.2×105=1.4×108个/mL。 19. 非洲狼尾草光合效率高，为培育高光合效率的水稻新品种，研究人员将粳稻与非洲狼尾草的原生质体融合并培育出杂种幼苗，如图1。研究人员同时开展了不同浓度的聚乙二醇（PEG）对原生质体融合率的影响实验（已知PEG浓度较高时对细胞具有毒害作用），实验结果如图2所示（异源融合率是指不同种的原生质体发生融合的概率）。回答下列问题： （1）图中过程①需要用______酶处理去除细胞壁以获得原生质体。诱导a与b融合的方法除用PEG处理外，还有______（答出1点），原生质体融合完成的标志是______。 （2）图中④将融合后的细胞接种到MS培养基中，可获得愈伤组织，愈伤组织具有______的特点。过程⑤表示再分化过程，其实质是______。 （3）科学家发现部分细胞无法形成愈伤组织，推测可能的原因：______（答出2点）。 （4）分析图2能够得出不同PEG浓度下同源融合率均______（填“大于”“小于”或“等于”）异源融合率。若想要进一步确定诱导粳稻与非洲狼尾草原生质体融合的最佳PEG浓度，实验思路是：______。 （5）已知非洲狼尾草正常体细胞内有m条染色体，粳稻正常体细胞内有n条染色体，通过上述过程培育成的“非洲狼尾草—粳稻”植物新品种，其体细胞有丝分裂后期最多可能有______条染色体。 【答案】（1） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. 电融合法、离心法、高Ca2+-高pH融合法 ③. 再生出细胞壁 （2） ①. 高度液泡化、无定形状态 ②. 基因的选择性表达 （3）细胞结构被破坏 （4） ①. 大于 ②. 在PEG浓度为30%～40%范围内设置一系列浓度梯度，检测并比较不同PEG浓度下的原生质体融合率 （5）2（m+n） 【解析】 【小问1详解】 植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性，过程①需要用纤维素酶和果胶酶处理去除细胞壁以获得原生质体。诱导原生质体融合的方法除用PEG处理外，还有电融合法、离心法、高Ca2+-高pH融合法。原生质体融合完成的标志是再生出细胞壁。 【小问2详解】 愈伤组织是由高度液泡化、无定形状态的薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织。过程⑤再分化的实质是基因的选择性表达。 【小问3详解】 部分细胞无法形成愈伤组织，可能是因为细胞结构被破坏，或者细胞活性丧失等（合理即可）。 【小问4详解】 同源融合率=总融合率-异源融合率，根据图1柱状图分析，不同PEG浓度同源融合率均大于异源融合率。图中当PEG浓度为35%时异源融合率最高，若想要进一步确定诱导粳稻与非洲狼尾草原生质体融合的最佳PEG浓度，应在PEG浓度为30%～40%范围内设置一系列浓度梯度，检测并比较不同PEG浓度下的原生质体融合率，其中异源融合率最高的PEG浓度即为最适融合浓度。 【小问5详解】 已知非洲狼尾草正常体细胞内有m条染色体，粳稻正常体细胞内有n条染色体，融合后形成的杂种细胞培育成“非洲狼尾草一粳稻”植物新品种（m+n条染色体），其体细胞有丝分裂后期有2（m+n）条染色体。 20. 将人类抗体基因转入抗体基因缺陷的小鼠中，再用抗原免疫小鼠即可获得转基因动物全人源抗体。该技术避免了对每种抗体的单一人源化改造，使抗体制备成本降低，开发周期缩短。如图是利用转基因小鼠制备人源化抗新S蛋白单克隆抗体的简易流程图。请回答下列问题： （1）图中步骤②采用的方法是______法。 （2）图中a代表______，给转基因小鼠注射a的目的是______。 （3）过程⑤在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对______和______生长具有抑制作用。 （4）过程⑥需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和______。在大规模悬浮培养时，杂交瘤细胞增殖减慢甚至停止，原因可能是______（答出两点）。 （5）与传统先制备鼠源单抗再进行人源化改造的技术相比，本实验利用转基因小鼠直接获得全人源抗体。从临床应用角度分析，最大优势是______。 【答案】（1）显微注射 （2） ①. 新S蛋白 ②. 让小鼠产生能分泌抗S蛋白抗体的B淋巴细胞 （3） ①. 未融合的亲本细胞 ②. 融合的具有同种核的细胞 （4） ①. 抗体检测 ②. 营养物质缺乏、细胞代谢产物积累、pH降低等 （5）可以避免免疫排斥反应 【解析】 【小问1详解】 将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射法，图中步骤②是将人体抗S蛋白抗体基因导入小鼠受精卵，所以采用的方法是显微注射法。 【小问2详解】 图中a代表新S蛋白，将新S蛋白注射入转基因小鼠体内，可以让小鼠产生能分泌抗S蛋白抗体的B淋巴细胞。 【小问3详解】 在杂交瘤细胞筛选过程中，使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞生长具有抑制作用，这样可以筛选出杂交瘤细胞。 【小问4详解】 过程⑥需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，以获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。在大规模悬浮培养时，杂交瘤细胞增殖减慢甚至停止，原因可能是营养物质缺乏、细胞代谢产物积累、pH降低等。 【小问5详解】 与传统先制备鼠源单抗再进行人源化改造的技术相比，本实验利用转基因小鼠直接获得全人源抗体，从临床应用角度分析，最大优势是可以避免免疫排斥反应，因为鼠源单抗对人体来说是异物，可能会引起免疫排斥，而全人源抗体更适合人体应用。 21. 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，如图1为其制备的基本方案，图2为各种限制酶的识别序列及切割位点。回答下列问题： 注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔； 注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达。 （1）图1中hCGβ基因转录的模板链是______链。利用PCR技术扩增hCGβ基因时，每次循环可分为变性、______、延伸三个步骤，其中变性的结果是______。 （2）图1所示hCGβ基因是人工合成的目的基因，在设计引物对其扩增时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其左右两端分别添加______限制酶的识别序列，图示hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是______。 （3）阶段Ⅱ大肠杆菌作为受体菌是利用了大肠杆菌______（至少答2点）的特点，从而实现重组DNA的扩增，然后在含有______的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进一步进行扩增。 （4）阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基______（填“需要”或“不需要”）添加组氨酸，可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，依据______原理进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。 【答案】（1） ①. 乙 ②. 复性 ③. 双链DNA解聚为两条单链 （2） ①. Xho Ⅰ、Mun Ⅰ ②. 有利于hCGβ进入内质网加工 （3） ①. 繁殖快，易培养、遗传物质少 ②. 氨苄青霉素 （4） ①. 不需要 ②. 抗原和抗体特异性结合 【解析】 【小问1详解】 图中hCGβ基因的转录方向向右，转录时RNA沿5′→3′方向合成，模板链方向为3′→5′，图中乙链左端为3′、右端为5′，符合模板链方向，因此模板链是乙链；PCR反应中，每次循环可分为变性、复性、延伸三个步骤，其中变性是高温条件下双链DNA的氢键断裂，解聚为两条单链。 【小问2详解】 hCGβ基因是人工合成的目的基因，在设计引物对其扩增时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其两端添加限制酶识别序列，Sma Ⅰ会破坏目的基因，不能添加Sma Ⅰ识别序列；EcoR Ⅰ会破坏质粒上的氨苄青霉素抗性基因（标记基因），不能添加EcoR Ⅰ识别序列；Sal Ⅰ会破坏质粒上的组氨酸合成酶基因，不能添加Sal Ⅰ识别序列；Xma Ⅰ识别序列与Sma Ⅰ识别序列相同，会破坏目的基因，不能添加Xma Ⅰ识别序列。因此，在hCGβ基因两端应添加Xho Ⅰ、Mun Ⅰ限制酶识别序列。甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔，因此hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是有利于hCGβ进入内质网中加工，并分泌到细胞外。 【小问3详解】 选择大肠杆菌作为受体菌是利用大肠杆菌具有繁殖快，易培养、遗传物质少的特点，由于线性质粒上含有氨苄青霉素基因，因此导入环化质粒的大肠杆菌具有氨苄青霉素抗性，因此应在含有氨苄青霉素的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。 【小问4详解】 由于环状质粒中含有组氨酸合成酶基因，因此为筛选导入重组质粒的酵母菌，培养基中不需要再加入组氨酸，但需要加入无机盐和琼脂，形成固体培养基，以筛选目的菌体。检测目的基因是否表达出蛋白质，采用抗原-抗体杂交技术，原理是抗原和抗体特异性结合，若培养液及上清液中均能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因在酵母菌细胞中得到表达，并能分泌到细胞外。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $