2025-2026学年下学期高二生物期末综合测评卷（浙科版专用）

**基本信息** 高二期末生物综合测评卷，聚焦现代生物科技，通过杨梅酿酒酵母筛选、鱼露发酵、单克隆抗体制备等真实科研情境，考查实验操作与科学思维。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|20/40|灭菌技术、微生物筛选、植物组织培养等基础实验|结合实验操作辨析，如湿热灭菌适用范围、刚果红筛选原理| |非选择题|5/60|发酵工程、细胞工程、基因工程等综合应用|以科研流程图为载体，如21题梯度稀释与菌落计数，25题双酶切载体构建，强调数据分析与科学探究|

2025-2026学年下学期高二期末综合测评卷 生物学 分值：100 分 时间：75 分钟 一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是 符合题目要求的。 1.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ） A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C.为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 2.研究人员从土壤中分离出分解纤维素的细菌，用含有刚果红的培养基培养纤维素分解菌时，筛选到了几株有透明降解圈的菌落，如图所示。下列说法正确的是（ ） A.筛选时要将灭菌后的土壤样液接种于以纤维素为唯一碳源的平板上 B.图示培养基应倒置培养以免水分蒸发形成的水滴污染培养基 C.菌落①②③都能分解纤维素且②的分解能力最强 D.可采用平板划线法或稀释涂布平板法对微生物进行纯化和计数 3.图1为果酒、果醋制作装置，图2为果酒发酵中酵母菌种群数量、葡萄糖浓度和乙醇浓度的变化曲线。下列叙述正确的是（ ） A.制作果酒过程中，夹子①②均关闭；制作果醋时，无论糖源是否充足，夹子①②均需打开 B.c点后酵母菌种群数量下降的原因是乙醇含量过高、葡萄糖含量降低以及pH下降 C.图2曲线a~b段，瓶内有大量二氧化碳和水产生，导致瓶内气压增大 D.随着发酵时间的推进，葡萄糖含量降低，乙醇的产生速率先上升后趋于稳定 4.苹果是我国北方地区常见的水果，为对其进行深加工，某厂进行了苹果酒和苹果醋的研制，其基本工艺流程如图所示。下列说法错误的是（ ） A.甲罐中的微生物所需的最适温度高于乙罐中微生物的最适温度 B.甲罐顶上管道弯曲及加水的目的是防止空气、杂菌进入，以及排气减压等 C.乙罐加入的含菌培养液中微生物的代谢类型为异养需氧型 D.甲、乙罐的发酵开始时间不同，甲罐的发酵时间早于乙罐 5.尿素是一种重要的农业氮肥，但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某课题小组从土壤中分离能够分解尿素的细菌并进行计数，过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A.①~⑤的操作称为梯度稀释，②~⑤应各加10mL无菌水 B.接种的培养基应以尿素为唯一氮源，该培养基属于鉴别培养基 C.图示所用培养基需先用干热灭菌法进行灭菌后，再调节pH D.若接种的三个平板平均菌落数为62个，则1g土样中约有菌落6.2×108个 6.植物组织培养的过程如图所示，其中①②表示过程。下列分析正确的是（ ） A.该过程中使用的培养基可以不灭菌 B.①过程中不存在基因的选择性表达，②过程中存在 C.完成②过程所需的关键激素是生长素和细胞分裂素 D.经植物组织培养技术培养出的脱毒植株可以抗病毒 7.某科研团队为培育“枸杞—沙棘抗逆杂交品种”（枸杞耐寒性一般但果实营养价值高，沙棘耐盐耐旱但果实小），开展了植物体细胞杂交研究，流程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A.①中使用的酶为纤维素酶和果胶酶，处理细胞时需注意控制温度 B.②中PEG的作用是打破原生质体膜的表面张力，促进膜融合 C.③中培养基可帮助排除未融合的原生质体及同种融合的原生质体 D.④中生长素比例高促进芽分化，该过程需避光以避免影响分化方向 8.科研人员将奶山羊的离体组织剪成1mm3组织块，均分为ABC三组，分别用表中的三种方法消化后，分离出细胞并测定其细胞密度和细胞活率（具有生理活性的细胞所占的比例）；将细胞悬液调至相同密度后，在适宜条件下培养并检测细胞增殖能力。相关检测结果如图所示，下列分析正确的是（ ） 组别（酶消化法） 酶消化处理 A（胰酶消化法） 胰蛋白酶，30 min B（两步酶消化法） 胶原蛋白酶IV，30 min→培养基清洗5 min→胰蛋白酶，15 min C（两步混合酶消化法） 胶原蛋白酶IV+透明质酸酶Ⅱ，30min→培养基清洗5min→胰蛋白酶+DNA酶I，15min A.消化之后的操作是离心后弃上清→加入培养基→滤除组织残留→加入培养基 B.向培养基中添加的动物血清和抗生素等物质，能为细胞的生长提供必需的营养 C.A组处理效果较差，原因可能是胰蛋白酶破坏了细胞膜蛋白，细胞的损伤较大 D.两步酶消化法兼顾效果及操作简便性，所得细胞在传代培养中遗传稳定性最高 9.某科研团队通过孤雌生殖技术、核移植技术获得幼猪的过程如图所示。下列说法错误的是（ ） A.孤雌生殖克隆猪与核移植克隆猪相比，缺少父方染色体，基因减少一半 B.可用促性腺激素处理良种母猪，使其超数排卵 C.获得孤雌生殖猪的过程说明次级卵母细胞具有全能性 D.核移植中的“去核”是指去除卵母细胞中的纺锤体—染色体复合物 10.研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是（ ） A.步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞 B.经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖 C.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交 D.步骤⑥和植物组织培养均需使用二氧化碳培养箱进行大规模培养 11.通过胚胎工程可以大大缩短优良品种动物的繁殖周期，如图是培育优质奶牛的过程。下列叙述正确的是（ ） A.过程①将新鲜采集到的精子和卵母细胞直接放在培养液中完成体外受精 B.通过过程③④获得多个胚胎属于有性繁殖的一种方式 C.过程③采取胚胎分割技术可同时获得多个遗传物质相同的个体 D.在胚胎移植前，需对胚胎进行检查以确定其是否发育至原肠胚阶段 12.如图表示利用核移植技术获得患者自体胚胎干细胞用于治疗某些疾病的过程，下列叙述错误的是（ ） A.从卵巢中获取的卵母细胞去掉细胞核后即可用于核移植操作 B.囊胚的内细胞团细胞具有发育的全能性，能分化成胎儿的各种组织细胞 C.培养胚胎干细胞时需通入CO2以调节培养基的pH D.用该方法获得的胚胎干细胞治疗疾病可避免发生免疫排斥反应 13.下图为科研人员培育良种秦川牛的过程示意图，下列叙述正确的是（ ） A.对供体母牛注射促性腺激素，可使其超数排卵，获得大量卵原细胞 B.采集的精子需在获能液中培养获能，才能与处于减数第一次分裂中期的卵母细胞受精 C.胚胎移植前，需对受体母牛进行同期发情处理，以保证其生殖器官的生理状态适宜 D.为获得遗传性状相同的后代，可对原肠胚时期的胚胎进行均等分割 14.基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的Sac Ⅱ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（ ） 注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。 A.含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色 B.重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段 C.用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向 D.用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段 15.为了能够便于被限制酶切割，科研人员将限制酶的识别序列添加在了改造后的基因两侧。如图表示三种限制酶在改造后的β淀粉酶基因和pLN23质粒载体上的酶切位点。有关说法不正确的是（ ） A.为了保证目的基因和质粒能够正确连接，切割含有β-淀粉酶基因的DNA片段应当选择的限制酶是EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ B.PCR扩增目的基因时要先将温度上升到90℃以上，使DNA变性 C.有时为满足应用需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活目的基因的表达 D.终止子使转录在所需要的地方停下来，是一段有特殊序列结构的DNA片段 16.关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列相关叙述不正确的是（ ） A.PCR仪实质上就是一台能自动调控温度的仪器，但在使用时需根据扩增的DNA片段以及引物的情况人工设定合适的温度 B.待指示剂前沿迁移到达凝胶加样孔边缘时需停止电泳以防DNA跑出凝胶 C.为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水等在使用前都必须进行高压蒸汽灭菌处理 D.电泳时，电泳缓冲液以没过凝胶1mm为宜 17.下列关于蛋白质工程应用的叙述，不正确的是（ ） A.蛋白质工程实施中最大的难题是需要清楚蛋白质的高级结构 B.蛋白质工程可以改变蛋白质的活性，实质上是通过改造或合成基因来实现的 C.将人的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞内，使大肠杆菌产生人的胰岛素的技术属于蛋白质工程 D.蛋白质工程可以将干扰素分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，在一定条件下延长保存时间 18.生物反应器是模拟生物体的功能，在体外或体内通过生化反应或生物自身的代谢获得目标产物的装置系统、细胞、组织、器官等。由此发展了动物乳腺生物反应器、动物膀胱生物反应器等。下列说法错误的是（ ） A.膀胱生物反应器优于乳腺生物反应器的方面包括不受性别、发育时期等的限制 B.制备动物乳腺生物反应器时，需将目标产物的基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起 C.为使目的基因能够在膀胱上皮细胞中特异性表达，在构建基因表达载体时需选择膀胱上皮细胞蛋白基因的启动子 D.将目的基因导入动物细胞常用体细胞作受体细胞，采用显微注射技术进行操作 19.下列有关“设计试管婴儿”的说法，错误的是（ ） A.不合适的胚胎的处理问题是“设计试管婴儿”所引发的主要问题之一 B.利用“设计试管婴儿”技术可以排查某些遗传病，以保证生出健康的孩子 C.“设计试管婴儿”必须得到政府的审批，而“试管婴儿”则不需要，这是因为前者技术复杂有一定的危险性，而后者技术上已经很成熟 D.将“设计试管婴儿”技术滥用于设计婴儿性别也是该技术引发争议的原因之一 20.在基因工程中，为防止转基因花粉的传播导致基因污染，采取的下列措施中不合理的是（ ） A.将外源目的基因导入植物的叶绿体基因组中 B.培育雄性不育的作物品种作为目的基因的受体 C.提前或延迟转基因作物种植时间，以避开周围作物的花期 D.转基因作物的种植区域周围种植大量杂草，以吸收转基因花粉 二、非选择题：本大题共 5 小题，共 60分 21.（13分）杨梅具有很高的营养价值，其鲜果也是酿酒的良好材料。发酵型果酒品质取决于所选择的酵母性能。科研人员为挖掘某杨梅主产区的酵母资源，筛选出酒精转化率高、酒精耐受性强的优质杨梅酿酒酵母，进行的研究如图所示。请回答下列问题： （1）图1中过程②③④⑤所用培养基为适于酵母菌生长的YPD培养基，其成分包括1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖等，其中能提供氮源的有______________________；与过程②所用培养基相比，过程③所用培养基中还添加了_____________________。 （2）过程③梯度稀释时，先分别向A、B、C三支试管中加入_______mL无菌水，再依次加入酵母菌培养液或稀释液1mL，摇匀。取多种稀释倍数的酵母菌培养液0.1 mL分别接种到多个平板上，这样做的目的是________________________________________________________；科研人员在105稀释倍数下操作得到的结果：涂布4个平板，统计的菌落数分别是152、161、179、188，则1 mL酵母菌培养液中含有的酵母菌数量约为_____________个。 （3）过程④中，用接种环在固体培养基的表面连续划线的目的是___________________________________________________，每次划线前都要对接种环进行灼烧的目的是___________________________________________。图1中接种环灼烧的总次数应为________次。划线后将培养皿______________________，放入恒温培养箱中培养。 （4）分离获得的酵母菌还需要经过多级筛选才能获得理想菌株。科研人员利用DY5、RY1、JW14三种菌株，发酵制作杨梅酒，并进行酒精耐受性检测，结果如表及图2所示，三种菌株中，最适于杨梅果酒发酵的是__________，理由有__________________________________________________________________________________。 菌株名称 酒精度/% 总糖/(g·L-1) 总酸/ (g·L-1) DY5 7.0 34.23 12.045 RY1 9.0 15.01 12.675 JW14 6.5 33.64 12.099 注：杨梅汁总糖为78.80g·L-1，总酸为10.737g·L-1。 22.（11分）鱼露，又称鱼酱油，是一种广东、福建等地常见的调味品，能够延续至今，与其独特的风味密不可分。采用小鱼虾为原料，经腌渍、发酵、熬炼后得到汁液，色泽呈琥珀色，味道带有咸味和鲜味。其制作流程如下： 请回答下列问题： （1）为了缩短发酵时间，人们常在发酵容器中加入一些米曲霉等，利用它们所分泌的_____________将原料（鱼）中的蛋白质、脂肪充分分解，经一系列的生化反应，形成鱼露特有的风味。 （2）研究人员想筛选产耐盐性蛋白酶的微生物作为发酵剂，以缩短鱼露发酵周期，取传统虾酱1g接种于液体培养基中进行摇瓶培养，然后进行稀释并取菌液通过____________法接种到含脱脂乳粉的固体培养基表面获得单菌落。通过观察菌落的__________________________________________________（写出两点即可）等特征进行初筛，再检测并分离得到产蛋白酶的菌株。 （3）研究人员将分离得到的3株产蛋白酶的菌株在最适pH和温度条件下培养，分别在NaCl质量浓度为0.3g/100mL、6g/100mL、9g/100mL、12g/100ml、15g/100mL时，测定NaCl对蛋白酶活力的影响（如图1）。结果表明在NaCl质量浓度为时____________，蛋白酶的活力最低，但当NaCl质量浓度为1~6g/100mL时，蛋白酶仍有较高的活力，因此该蛋白酶在一定程度上具有耐盐性。 （4）为了研究混合发酵剂提高鱼露品质的效果，研究人员以加入8%海盐和3%混合发酵剂（3种菌种比例为1:1:1）的组别为A组（实验组），以_________________的组别为B组（对照组），在相同且适宜条件下分别进行鱼露发酵，每隔5天测定鱼露的AAN（氨基酸态氮—鲜味的主要成分）和TVB-N（总挥发性盐基氮—膻臭味）的质量浓度，结果如图2所示，该结果表明_________________________________________________________。 23.（10分）紫罗兰（2n=14）花色丰富、抗虫性强、种子油富含亚麻酸。为了让油菜（2n=38）具有紫罗兰的诸多优良性状，科研工作者进行了如图1所示实验，分析回答下列问题： （1）用酶解法制备原生质体时，需先用较_________（填“高”或“低”）渗透压的溶液处理植物细胞，使细胞处于微弱的_____________状态，然后用酶去除细胞壁，获得原生质体。 （2）筛选出所需的杂种细胞后，还要采用_________________技术才能获得杂种植株，该过程需要在培养基中加入一定浓度的_________________________（填写相关植物激素的名称），使其脱分化形成愈伤组织，继而再分化，并生长发育成完整植株。 （3）运用传统有性杂交方法不能得到紫罗兰—油菜的杂种后代，原因是_____________________________________________________________________。 （4）科研工作者分别用4种浓度的PEG对两种原生质体进行了融合试验，结果如图2所示： 注：a.两个原生质体融合在一起称为二源融合；多于两个原生质体融合在一起称为多源融合；b.紫罗兰—油菜是由一个紫罗兰原生质体和一个油菜原生质体融合后培养产生的。 该实验的自变量是______，根据实验结果，为提高紫罗兰—油菜的成功率，应选用的最佳PEG浓度为_____%。 24.（13分）CD20是B淋巴细胞的特异性膜蛋白之一，研究者设计如下图1所示的技术流程制备抗CD20的单克隆抗体。请回答下列问题： （1）步骤A从小鼠的脾中取出部分组织，用__________酶处理，制成细胞悬液，然后将其置于CO2培养箱中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞。骨髓瘤细胞培养过程中，细胞生长_______（填“会”或“不会”）出现接触抑制现象。 （2）步骤B的融合操作后，体系中出现多种类型细胞的原因是______________________________________________________。 （3）步骤C为用特定的选择培养基筛选，得到的细胞具有_____________________的特点。步骤D为在96孔板上进行_____________________，经多次筛选，就可获得足够数量的能产生抗CD20蛋白的杂交瘤细胞。 （4）抗体由恒定区段和可变区段两部分构成，其中可变区段决定抗体的特异性。利用小鼠制备的单克隆抗体，在应用于肿瘤的临床免疫治疗前，需对该抗体进行人源化改造，即将该抗体的___________区段替换成人的相应区段，这样处理的目的是_____________________________________________________________。 （5）IL-10是一种免疫抑制因子。研究者研究了抗CD20单抗和IL-10联合治疗对四组糖尿病鼠的自身免疫反应及胰岛B细胞再生作用的影响，结果如图2、图3所示。该结果表明___________________________________________________。 25.（13分）某实验室需构建含增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因的表达载体用于科学研究。相关资料如下： Ⅰ.双链DNA的每一条链有两个末端，分别是5'端和3'端，从左到右的5'—3'DNA链是编码链，从左到右的3'—5'DNA链是模板链。 Ⅱ.增强型绿色荧光蛋白（eGFP）在自然光下显示绿色，已知该基因的DNA编码序列如下：5'ATGGTGAGC……AAGTAA3'。 Ⅲ.质粒载体中含有EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、Xba Ⅰ和Not Ⅰ等酶的酶切位点（这些酶各自的识别序列不同），如下图所示。 回答下列问题： （1）增强型绿色荧光蛋白基因转录的mRNA碱基序列为_____________________________。 （2）通过PCR方法获得eGFP目的片段，首先需要设计_____（填“一对”或“一个”）引物，在体外选择性扩增eGFP目的片段。PCR反应中使用的酶是_____________。PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、_________三步，其中复性的结果是_____________________。如果循环n次，则共需要消耗引物_____个。PCR的产物常采用_____________来鉴定。 （3）eGFP的PCR产物两端分别含有BamH I和Not I的酶切位点，构建重组表达载体时，用这两种酶酶切PCR产物和质粒载体。与单一酶酶切相比，该实验采用的双酶切方法的优点是_____________________________________________（答一点即可）。 （4）将所构建的表达载体转入大肠杆菌，涂布含有卡那霉素的平板，若表达载体构建成功，可观察到多个_____单菌落。 答案及解析 1.答案：D 解析：A.动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行，A错误； B.动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养不能加入抗生素，B错误； C.一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误； D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确。 故选D。 2.答案：B 解析：土壤稀释液样品不能灭菌，灭菌会杀死土壤中的微生物，A错误；微生物培养时应将培养基倒置，以免水分蒸发形成的水珠滴落在培养基上造成杂菌污染，B正确；菌落①②③周围都有降解圈，说明都能分解纤维素，①的降解圈直径与菌落直径的比值最大，分解纤维素的能力最强，C错误；平板划线法无法用于对微生物进行计数，D错误。 3.答案：B 解析：果酒和果醋制作过程中充气口和排气口状态及原因分析如下，可知A错误。 果酒制作 果醋制作 充气口、排气口状态 充气口（夹子①）先打开再关闭，排气口（夹子②）每隔一段时间打开一次 充气口（夹子①）和排气口（夹子②）都要打开 充气口、排气口状态 酵母菌先在有氧环境下大量繁殖，再在无氧环境下发酵产生酒精，该过程中不断产生CO2 醋酸菌在有氧环境下发酵产生乙酸，在糖源、氧气充足时会不断产生CO2 图2曲线a~b段，酵母菌进行有氧呼吸并大量繁殖（未产生乙醇，即没有进行无氧呼吸），该过程O2消耗量=CO2产生量，瓶内的气压基本不变，C错误。图中乙醇的浓度先上升后趋于稳定，但乙醇的产生速率（即斜率）逐渐降低，D错误。 4.答案：A 解析： 甲罐 乙罐 发酵类型 果醋发酵 果醋发酵 菌种 酵母菌（异养兼性厌氧型） 醋酸菌（异养需氧型） 发酵温度 18~30℃ 30~35℃ 根据以上分析，A错误，C正确。甲罐中果酒发酵需要在无氧环境中进行，罐顶弯管加水可防止空气、杂菌进入；发酵过程产生了CO2，需排气减压，B正确。该装置中，果醋发酵是在果酒发酵的基础上进行的，甲罐的发酵时间早于乙罐，D正确。 5.答案：D 解析：①~⑤的操作称为梯度稀释，②~⑤应各加9mL无菌水稀释10倍，A错误；该培养基应以尿素为唯一氮源，属于选择培养基，B错误；图示所用培养基需先调节pH，再用湿热灭菌法（如高压蒸汽灭菌法）进行灭菌，C错误；据图可知，对菌液共稀释了106倍，取0.1mL接种，若接种的三个平板平均菌落数为62个，则1g土样中约有菌落62÷0.1×106=6.2×108个，D正确。 6.答案：C 解析：A、该过程中使用的培养基需要灭菌，否则影响外植体的分裂和生长，A错误； B、①过程是脱分化过程，②过程是再分化过程，脱分化和再分化过程中都存在基因的选择性表达，B错误； C、②过程是再分化过程，植物组织培养的再分化所需关键激素是细胞分裂素和生长素，且二者用量的比值不同，分化的结果也不同，C正确； D、经植物组织培养技术培养出的脱毒植株自身无病毒或带少量病毒，但是不能抗病毒，D错误。 故选C。 7.答案：D 解析：植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，需用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁。酶的活性受温度影响，故需注意控制温度，A正确。PEG是常用的诱导植物原生质体融合的化学诱导剂，其作用是打破膜表面张力，促进膜融合，B正确。用PEG诱导融合后，体系中存在未融合枸杞原生质体、未融合沙棘原生质体、枸杞—枸杞同种融合原生质体、沙棘—沙棘同种融合原生质体、枸杞—沙棘杂种原生质体五种类型，需通过选择培养基筛选，仅保留枸杞—沙棘杂种原生质体，C正确。再分化阶段，激素比例决定分化方向——生长素与细胞分裂素比值高时有利于根的分化，比值低时有利于芽的分化，且该过程需要光照，而脱分化过程需避光，D错误。 8.答案：C 解析：动物细胞培养。消化之后的操作是：滤除组织残留→加入培养基→离心后弃上清液→加入培养基，A错误；动物血清能为细胞生长提供营养，抗生素的作用是避免杂菌污染，B错误；从图中可以看出，A组细胞培养后细胞密度、细胞活率、细胞增殖能力都低于其他两组，可能是胰蛋白酶破坏了细胞膜蛋白，对细胞的损伤较大，C正确；根据实验结果无法判断两步酶消化法所得细胞在传代培养中遗传稳定性最高，D错误。 9.答案：A 解析：孤雌生殖克隆猪与核移植克隆猪相比，缺少父方染色体，基因并没有减少一半，A错误；可用促性腺激素处理良种母猪，使其超数排卵，B正确；获得孤雌生殖猪的过程说明次级卵母细胞具有全能性，C正确；核移植中的“去核”是指去除卵母细胞中纺锤体一染色体复合物，D正确。 10.答案：A 解析：A.步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞；步骤⑤向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A正确； B.经步骤②诱导后融合的细胞只有杂交瘤细胞才能既能分泌TREM2抗体又可无限增殖，B错误； C.步骤三是特定培养基筛选杂交瘤细胞，步骤4是抗原抗体杂交，C错误； D.动物细胞培养过程中二氧化碳用于调节培养液的pH值，而植物组织培养的过程中不需要二氧化碳培养箱，D错误。 故选A。 11.答案：C 解析：采集到的精子要经过获能处理才具有受精能力，采集到的卵母细胞要培养到MⅡ期才具有受精能力，A错误；胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的一种方式，B错误；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此采取胚胎分割技术可同时获得多个遗传物质相同的个体，C正确；胚胎移植时需选用桑葚胚或囊胚阶段的胚胎，D错误。 12.答案：A 解析：从卵巢中获取的卵母细胞一般需要培养到MⅡ期，才能用于核移植操作，A错误；囊胚时期，聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织，表明囊胚的内细胞团细胞具有发育的全能性，B正确；在进行动物细胞培养时，需将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH，C正确；用该方法获得的胚胎干细胞诱导分化出的细胞或器官属于自体细胞或器官，移植后可避免发生免疫排斥反应，D正确。 13.答案：C 解析：A、对供体母牛注射促性腺激素，使其超数排卵，获得大量卵母细胞，而非卵原细胞，A错误； B、采集的精子需获能处理，才能与处于减数第二次分裂中期的卵母细胞完成受精，B错误； C、胚胎移植前对受体母牛同期发情处理，使供、受体生殖器官生理状态一致，保证胚胎移植后正常发育，C正确； D、胚胎分割应选择桑椹胚或囊胚时期的胚胎，原肠胚细胞分化程度高，分割后难以发育成新个体，D错误。 故选C。 14.答案：D 解析：A、CDS片段插入载体P的SacⅡ位点，会破坏LacZ基因，β-半乳糖苷酶无法合成，X-gal不能被分解，菌落为白色，A正确； B、载体P长度为2.6kb，插入CDS片段后重组载体总长度约9.4kb，PstⅠ在载体上有单一酶切位点，充分酶切后可得到9.4kb的线性DNA片段，B正确； C、EcoR Ⅰ与Pst Ⅰ在重组载体上的位置固定，酶切后片段长度可判断CDS片段的连接方向，C正确； D、Sac Ⅱ是目的基因插入位点，EcoR Ⅰ与Sac Ⅱ酶切重组载体，不一定得到2个长度的DNA片段，D错误。 故选D。 15.答案：C 解析：质粒上只含EcoR Ⅰ和Sau3A Ⅰ两种限制酶的识别位点，但限制酶Sau3AⅠ会破坏目的基因，结合题图可知BamH Ⅰ与Sau3A Ⅰ切割产生的末端相同，所以可用限制酶BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ切割含有β-淀粉酶基因的DNA片段，以保证目的基因和质粒的正确连接，A正确。PCR时先将温度上升到90℃以上，以使DNA变性，B正确。有时为满足应用需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达，C错误。终止子是一段有特殊序列结构的DNA片段，使转录在所需要的地方停下来，D正确。 16.答案：B 解析：DNA电泳指示剂的作用主要是用来指示何时停止电泳，即待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘（不是凝胶加样孔边缘）时，停止电泳，以防止样品流失到缓冲液中，B错误。 17.答案：C 解析：蛋白质发挥功能依赖其高级结构，而蛋白质的高级结构十分复杂。科学家要设计出更加符合人类需要的蛋白质，还需要不断地攻坚克难，A正确。基因决定蛋白质，因此蛋白质工程可以改变蛋白质的活性，实质上是通过改造或合成基因来实现的，B正确。将人的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞内，使大肠杆菌产生人的胰岛素的技术属于基因工程，C错误。蛋白质工程是通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质或制造一种新的蛋白质，半胱氨酸之间易形成新的二硫键，故蛋白质工程可以将干扰素分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，从而使其在一定条件下延长保存时间，D正确。 18.答案：D 解析：A、雌性动物发育到一定阶段才能产生乳汁，乳腺生物反应器往往受动物生长发育的阶段和性别的限制，而膀胱生物反应器不受性别和年龄的限制，A正确； B、构建乳腺生物反应器时，需将药用蛋白基因和乳腺蛋白基因的启动子等重组在一起，以保证药用蛋白基因能在乳腺中正常表达，B正确； C、启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，它含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列，重组表达载体中含有膀胱中特异表达基因的启动子，以便于特异性表达基因的转录与翻译，C正确； D、动物受精卵全能性最高，应用显微注射技术将表达载体导入受精卵来获得转基因动物，D错误。 19.答案：C 解析：“设计试管婴儿”必须获得政府部门的相关批准证书，以防该技术的滥用，“试管婴儿”同样也需要得到政府的审批，C错误。 20.答案：D 解析：绿体基因组属于细胞质遗传，花粉中几乎不含细胞质基因，将外源目的基因导入植物的叶绿体基因组中，可防止转基因花粉传播造成基因污染，A项正确；培育雄性不育的作物品种作为目的基因的受体，由于雄性不育，不会产生花粉，从而避免转基因花粉传播，B项正确；提前或延迟转基因作物种植时间，避开和周围作物的花期，可使转基因作物的花粉无法传播到周围作物上，减少基因污染，C项正确；转基因作物的种植区域周围种植大量杂草，杂草无法有效吸收转基因花粉，而且杂草可能会和转基因作物杂交，导致基因扩散，不能防止基因污染，D项错误。 21.答案：（1）酵母膏、蛋白胨；琼脂 （2）9；获得菌落数量合适的平板，并排除偶然因素造成的误差；1.7×108 （3）将聚集的菌种逐步稀释分散获得单菌落；杀死接种环上的微生物；6；倒置 （4）RY1；酒精转化率高、酒精耐受力强 解析：（1）酵母膏和蛋白胨营养丰富，含有糖、有机氮、维生素等，所以酵母膏和蛋白胨可以为酵母菌提供碳源、氮源、维生素等。过程②用的是液体培养基，过程③使用的是固体培养基，所以过程③的培养基比过程②的培养基多了琼脂。 （2）获得纯净的微生物培养物的关键是无菌技术，因此梯度稀释时应使用无菌水，先分别向A、B、C三支试管中加入9 mL无菌水，再依次加入酵母菌培养液或稀释液1 mL，摇匀。取多种稀释倍数的酵母菌培养液0.1mL分别接种到多个平板上，这样做的目的是获得菌落数量合适的平板，并排除偶然因素造成的误差。根据科研人员统计的数据进行计算，1 mL酵母菌培养液中含有的酵母菌数量约为(152+161+179+188)÷4÷0.1×105=1.7×108（个）。 （3）接种时，利用平板划线法可将聚集的菌种逐步稀释分散获得单菌落，需要用接种环在固体培养基的表面多次连续划线；每次划线前和全部划线结束后都要对接种环进行灼烧，以杀死接种环上的微生物。图中过程④共进行5次划线，所以需要对接种环进行灼烧的次数为6次。为避免冷凝水滴落到培养基上，也避免培养基表面水分蒸发过快，划线后应将培养皿倒置，放入恒温培养箱中培养。 （4）由题表可知，经RY1发酵的杨梅酒酒精度最高，总糖最少，酒精转化率高，由图2可知，RY1对酒精的耐受力最强，所以最适于杨梅果酒发酵的是RY1。 22.答案：（1）蛋白酶、脂肪酶 （2）涂布平板（稀释涂布平板）；形状、大小、颜色、隆起程度（写出两点即可） （3）15g/100mL （4）加入8%海盐和（等量）无菌水；该混合发酵剂能够提高低盐鱼露的氨基酸态氮含量并降低总挥发性盐基氨含量（或该混合发酵剂能够提高低盐鱼露的鲜味并降低低盐鱼露的膻臭味） 解析：（1）蛋白酶可将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪分解为甘油和脂肪酸。 （2）取传统虾酱1g接种于液体培养基中进行摇瓶培养，然后进行稀释并取菌液通过（稀释）涂布平板法接种到含脱脂乳粉的固体培养基表面获得单菌落。一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，菌落特征包括形状、大小和颜色等，可通过观察菌落特征对微生物进行初筛，再检测并分离得到目的菌株。 （3）由图1可知，在NaCl质量浓度为15g/100mL时，蛋白酶的活力最低。 （4）对问题进行分析。 第一步：分析变量定课题 结合文字和图片分析，可知实验的自变量是有无混合发酵剂，因变量是AAN和TVB-N的含量，实验课题是研究混合发酵剂提高鱼露品质的效果，鱼露的品质通过AAN和TVB-N的含量进行评价 第二步：分析对照 分析图2可知，两条曲线相互对照，两种柱形图相互对照，其中A组加入8%海盐和3%混合发酵剂（实验组），B组加入8%海盐和等量无菌水（对照组） 第三步：分析结果和结论 与B组相比，A组发酵后AAN的质量浓度较高、TVB-N的质量浓度较低，即混合发酵剂可以提高低盐鱼露的氨基酸态氨含量并降低总挥发性盐基氨含量（或该混合发酵剂能够提高低盐鱼露的鲜味并降低低盐鱼露的膻臭味） 23.答案：（1）高；质壁分离 （2）植物组织培养；生长素和细胞分裂素 （3）紫罗兰、油菜是两个不同的物种，两者之间存在生殖隔离 （4）PEG浓度；30 解析：（1）用酶解法制备原生质体时，需先用较高渗透压的溶液处理植物细胞，使细胞失水，处于微弱的质壁分离状态，然后用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体。 （2）通过植物组织培养技术，将筛选出的杂种细胞培养为杂种植株，该过程需要在培养基中加入一定浓度的生长素和细胞分裂素，使其脱分化形成愈伤组织，继而再分化，并生长发育成完整植株。 （3）由于紫罗兰、油菜是两个不同的物种，两者之间存在生殖隔离，所以运用传统有性杂交方法不能得到紫罗兰—油菜的杂种后代。 （4）根据柱形图中的横坐标可知，该实验的自变量是PEG浓度；根据实验结果可知，PEG浓度为30%时，二源融合率较高，且多源融合率很低，因此为提高紫罗兰—油菜的成功率，应选用的最佳PEG浓度为30%。 24.答案：（1）胰蛋白（或胶原蛋白）；不会 （2）细胞融合是随机的，且融合率不到100% （3）既能迅速大量繁殖，又能产生抗体；克隆化培养和抗体检测 （4）恒定；降低人对利用小鼠制备的单克隆抗体的免疫排斥反应 （5）抗CD20单抗+IL-10联合治疗可减弱糖尿病鼠的自身免疫反应，也可促进胰岛B细胞的再生，且作用强于单独治疗 解析：（1）在制备抗CD20蛋白的单克隆抗体时，取出的小鼠脾组织要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，可使组织分散成单个细胞，制成细胞悬液；由于骨髓瘤细胞具有无限增殖的特性，其细胞生长不会出现接触抑制现象。 （4）根据题意可知，抗体由恒定区段和可变区段两部分构成，其中可变区段决定抗体的特异性，不能进行替换，否则会影响抗体与抗原的特异性结合。利用小鼠制备的单克隆抗体用于人体时，人体免疫系统会将其识别为外来物质产生免疫排斥反应，将恒定区段人源化改造，可降低人体对该抗体的免疫排斥反应，使该抗体更好地发挥作用。 （5）据题图2、3结果进行分析： 25.答案：（1）5'AUGGUGAGC……AAGUAA3' （2）一对；Taq酶/热稳定DNA聚合酶；延伸；引物通过碱基互补配对与单链DNA结合；2n+1-2；琼脂糖凝胶电泳 （3）保证目的基因和质粒的正向连接（即防止目的基因和质粒反向连接），同时也可避免目的基因和质粒的自身环化 （4）绿色荧光 解析：（1）增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的编码序列如下：5'ATGGTGAGC……AAGTAA3'，则模板序列（3'—5'DNA链）应为与之互补的另一条DNA链，故转录的mRNA碱基序列为5'AUGGUGAGC……AAGUAA3'。 （2）通过PCR方法获得eGFP目的片段，需要两种引物与两条互补，因此首先需要设计一对引物。利用PCR扩增DNA片段需要Taq酶（热稳定DNA聚合酶）。PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、延伸三步，其中复性的结果是引物通过碱基互补配对与单链DNA结合。扩增循环n次，得到2n个DNA分子，总单链数为2×2n即2n+1条，只有最初的两条母链不需要引物，因此共需要2n+1-2个引物，PCR产物常采用琼脂糖凝胶电泳实验进行鉴定。 （3）与单一酶酶切相比，采用的双酶切方法，可以形成不同的黏性末端，可以保证目的基因和质粒的正向连接（即防止目的基因和质粒反向连接），同时也可避免目的基因和质粒的自身环化。 （4）将所构建的表达载体转入大肠杆菌，涂布含有卡那霉素的平板，若表达载体构建成功，能表达出抗卡那霉素的物质和绿色荧光，含有重组质粒的大肠杆菌能在该培养基上生存，因此可观察到多个含有绿色荧光的大肠杆菌单菌落。 学科网（北京）股份有限公司 $