高二生物下学期期末考试考前倒计时2天限时练（选必三综合）

**基本信息** 聚焦选必三核心概念对比辨析与高考真题限时训练，通过表格系统梳理易混概念逻辑，强化科学思维与探究实践能力。 **专项设计** |模块|题量/典例|题型特征|知识逻辑| |----|-----------|----------|----------| |消毒和灭菌等7组概念辨析|7组对比表格|概念对比辨析，突出定义、原理、适用范围差异|从概念内涵（强度、原理）到外延（应用、结果）构建逻辑链，强化结构与功能观| |限时练（选择+填空）|15选择+2填空（含多省高考真题）|情境化实验分析与原理应用，考查操作规范、结果判断|以真题为载体，整合微生物培养、细胞工程、基因工程等知识，体现科学探究与社会责任|

选必三要点辨析+限时练 第1部分 要点辨析 1、 消毒和灭菌的辨析 消毒 灭菌 强度 ，对处理对象活性损伤 ，可彻底灭活 微生物 处理结果 仅降低有害微生物数量，无法达到完全无菌状态，保留部分活性微生物 处理后 活微生物残留，达到完全无菌要求 适用范围 高温、需要保持生物活性的实验材料或操作环境 需要完全无菌的 、 等材料 常用方法 消毒、 消毒、 消毒 灭菌、 灭菌、 灭菌 2、 稀释涂布平板法和平板划线法的辨析 稀释涂布平板法 平板划线法 原理 梯度 菌液后，稀释度 时单个活菌可独立繁殖形成单 通过 逐步稀释分散聚集的菌种，最终得到单菌落 核心 需要对菌液进行梯度稀释，再用 均匀涂布到培养基表面 不需要梯度稀释，通过 连续划线分散菌种 主要用途 微生物 、统计样品中 仅用于微生物 ，不能用于 结果特点 菌落 分布在培养基表面，单菌落大多来自单个活菌 菌落集中在划线末端，分布 ，无法保证单菌落来自单个活菌 计数特点 计数结果 实际值，因为多个细胞连在一起时仅形成一个菌落 不能用于活菌计数 3、 植物组织培养和植物细胞培养的辨析 植物组织培养 植物细胞培养 原理 植物细胞的 仅依赖 培养对象 离体的植物器官、组织、细胞（ ） 细胞或植物悬浮细胞 结果 最终获得 最终获得大量 或细胞 应用 作物快速繁殖、作物 、培育转基因植物、生产人工种子 生产植物 代谢产物（药物、香料、色素等） 4、 植物细胞培养和动物细胞培养的辨析 植物细胞培养 动物细胞培养 原理 植物细胞 动物细胞 培养基 多为 培养基，以 为主要碳源，需添加植物激素调节生长，不需要添加血清、抗生素 多为 培养基，以 为主要碳源，需添加 等天然成分，添加 防止污染 培养条件 一般不需要控制二氧化碳浓度，对pH、渗透压要求适中 需要 的气体环境，二氧化碳用于 ，无菌要求更严格 生长特点 有细胞壁，多聚集生长，无贴壁生长、接触抑制特点，生长速度慢 无细胞壁，具有 、 的特点，培养一定代数后会衰老凋亡 5、 植物体细胞杂交技术和动物细胞杂交技术的辨析 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 原理 细胞膜的 、植物细胞的 细胞膜的 、细胞 融合前处理 需要用 酶和 酶去除细胞壁，获得原生质体 用 酶分散组织细胞，不需要去除细胞壁 融合方法 （离心、振动、电激）、 （PEG诱导、高Ca2+-高pH融合法） 物理法、化学法、生物法（ 诱导） 后续过程 融合后需要再生细胞壁，再通过植物组织培养获得 植株 融合后仅筛选 ，进行克隆化培养，不需要获得完整个体 培养目的 克服 ，获得杂种植株 获得杂交细胞，多用于制备单克隆抗体 最终产物 可育的 特定用途的 6、 植物组织培养和动物体细胞核移植技术的辨析 植物组织培养 动物体细胞核移植技术 原理 植物细胞具有 动物体细胞 ，卵细胞细胞质可支持全能性表达 操作对象 离体的植物 供体体细胞核、去核的 期卵母细胞 核心过程 外植体→脱分化→愈伤组织→再分化→胚状体/丛芽→完整植株 供核→核移植→重构胚→胚胎培养→胚胎移植→克隆动物 培养基特点 需要添加 诱导脱分化和再分化，蔗糖为主要碳源 需要添加动物 ，葡萄糖为主要碳源，不需要植物激素 个体获得方式 体外培养直接获得 需要 ，在代孕母体内发育获得新个体 7、 基因工程以及基因的复制过程涉及到的酶的辨析 限制性内切核酸酶 DNA连接酶 解旋酶 体内DNA聚合酶 耐高温的DNA聚合酶 过程 基因工程 基因工程 体内DNA复制 PCR技术 化学键 作用特点 识别 核苷酸序列，在 切割 连接两个DNA 断开氢键，解开DNA双链 常温下合成子链 热稳定性强，高温下合成子链 第二部分 限时练 一、选择题（每题2分，共30分） 1．（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） A．固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B．牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C．物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D．物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 2．（2025·海南·高考真题）山兰酒以海南山兰早稻米为原料  添加酒曲，经传统发酵酿造而成，发酵结束后快速冷却酒液并过滤，可获得风味独特的清澈酒体。米熟化的均匀度、发酵温度均会影响酒的品质。下列有关叙述错误的是（    ） A．酿造山兰酒所使用的酒曲为单一菌种 B．充分蒸熟山兰米有利于淀粉糖化，为酵母菌提供更多的原料 C．适宜的发酵温度有利于提高酶的活性，进而提高酒的产量 D．快速冷却有利于保留酒液中易挥发的风味物质 3．（2025·福建·高考真题）下列高中生物学实验的部分操作，正确的是（    ） 选项 实验名称 实验操作 A 探究抗生素对细菌的选择作用 涂菌前，需将抗生素均匀涂抹在培养基平板上 B 制作果酒和果醋 当葡萄酒制作完成后，需拧紧瓶盖，促进葡萄醋的发酵 C 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 稀释土壤样品时，每个梯度稀释时都需更换移液器枪头 D DNA片段的扩增及电泳鉴定 接通电源后，看到DNA条带迁移至凝胶边缘时，停止电泳 A．A B．B C．C D．D 4．（2026·浙江·高考真题）利用转基因技术将口蹄疫病毒衣壳蛋白P1的基因导入水稻愈伤组织，获得了多个稳定表达P1的转基因水稻株系。转基因水稻的P1激活小鼠免疫反应的能力与大肠杆菌生产的P1相当，且给小鼠饲喂转基因水稻的P1也能激活免疫反应。下列叙述正确的是（　　） A．将愈伤组织进行脱分化和再分化，获得转基因水稻植株 B．不同株系转基因水稻P1蛋白的基因表达水平相同 C．转基因水稻与大肠杆菌生产的P1蛋白分子量相等 D．转基因水稻P1蛋白具备制成口服疫苗的潜力 5．（2025·福建·高考真题）质粒P含有2个EcoRⅠ、1个SacⅠ和1个BamHⅠ的限制酶切割位点。已知BamHⅠ位点位于2个EcoRⅠ位点的正中间，用上述3种酶切割该质粒，酶切产物的凝胶电泳结果如图，其中泳道①条带是未酶切的质粒P，泳道②③④条带为3种单酶切产物，泳道⑤⑥⑦条带为双酶切产物。下列叙述正确的是（    ） A．DNA分子在该凝胶的迁移方向是从电源正极到负极 B．可确认泳道②③条带分别是SacⅠ和EcoRⅠ的单酶切产物 C．泳道⑤条带是SacⅠ和EcoRⅠ的双酶切产物 D．泳道①②说明未酶切质粒的碱基数小于酶切后质粒的碱基数 6．（2025·福建·高考真题）紫杉醇是红豆杉的代谢产物，会干扰纺锤体的正常功能。科研人员利用农杆菌将紫杉醇合成的相关基因导入烟草中，实现了紫杉醇前体物质的合成。下列叙述错误的是（    ） A．农杆菌转化前应先使用Ca2+处理烟草细胞 B．紫杉醇合成的相关基因会整合到烟草染色体DNA上 C．紫杉醇因干扰肿瘤细胞的有丝分裂而具有抗癌作用 D．该技术的突破有利于红豆杉天然资源的保护 7．（2025·全国卷·高考真题）琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1～4的电泳结果如图所示（“+”“-”分别代表电泳槽的阳极和阴极）。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲只有限制酶R的一个酶切位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是（    ） A．配制琼脂糖凝胶时需选用适当的缓冲溶液 B．该实验条件下甲、乙两种DNA分子均带负电荷 C．甲、乙两种DNA分子所含碱基对的数量可能不同 D．据图推测样品3可能是甲被酶R完全酶切后的产物 8．（2026·安徽·高考真题）动物体细胞核移植技术在畜牧业、医药卫生等领域有着广泛的应用前景。下列叙述错误的是（　　） A．若卵母细胞去核不完全，可能会导致重构胚细胞中染色体数目改变 B．胚胎移植前，需要对核移植获得的重构胚进行遗传筛查和性别鉴定 C．胚胎移植前，需要对受体进行处理，使其生理状态适合胚胎发育 D．克隆动物的核遗传物质与供体相同，但性状与供体不完全相同 9．（2026·浙江·高考真题）β-淀粉样蛋白（Aβ）的异常聚集是阿尔茨海默症的致病因素之一。研究者拟利用小鼠作为实验动物，通过细胞融合技术制备抗Aβ的单克隆抗体以用于该病的研究。下列叙述错误的是（　　） A．产生抗Aβ抗体的B细胞来自于用Aβ抗原免疫的小鼠 B．杂交瘤细胞来自于小鼠B细胞与骨髓瘤细胞的融合 C．杂交瘤细胞产生的抗体即为抗Aβ的单克隆抗体 D．抗Aβ的单克隆抗体可辅助该病的特异性诊断 10．（2025·广西·高考真题）科学家利用携带猪源细胞表面蛋白基因（GT）的NDV病毒靶向感染人体内癌细胞，从而强烈激活免疫系统，起到了较好的肿瘤治疗效果。下列有关说法正确的是（　　） A．培养体外实验使用的癌细胞时，通常需添加血清 B．感染NDV-GT的癌细胞会被巨噬细胞特异性吞噬 C．经NDV-GT方法治愈的患者，体内不存在能识别GT蛋白的免疫细胞 D．人体正常细胞若被感染并表达了GT，不会被免疫系统识别为“非己”成分 11．（2025·贵州·高考真题）下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是（　　） A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B．W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得 C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 12．（2025·重庆·高考真题）为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙（种群数量多）进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是（    ） A．克隆动物的核基因组来源于甲、乙 B．体外受精需用获能的精子与MI期的卵母细胞受精 C．囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体 D．滋养层可影响内细胞团的发育 13．（2025·江苏·高考真题）梅花鹿和马鹿杂交后代生命力强、茸质好，但自然杂交很难完成，人工授精能解决此难题。胚胎工程技术的应用，可提高繁殖率，增加鹿场经济效益。下列相关叙述合理的是（    ） A．采集的精液无需固定、稀释，即可用血细胞计数板检测精子密度 B．人工授精时，采集的精液经获能处理后才能输入雌性生殖道 C．超数排卵处理时，常用含促性腺激素的促排卵剂 D．母体子宫对胚胎的免疫耐受性低下是胚胎移植的生理学基础 14．（2023·浙江·高考真题）以哺乳动物为研究对象的生物技术已获得了长足的进步。对生物技术应用于人类，在安全与伦理方面有不同的观点，下列叙述正确的是（    ） A．试管婴儿技术应全面禁止 B．治疗性克隆不需要监控和审查 C．生殖性克隆不存在伦理道德方面的风险 D．我国不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验 15．（2021·北京·高考真题）社会上流传着一些与生物有关的说法，有些有一定的科学依据，有些违反生物学原理。以下说法中有科学依据的是（　　） A．长时间炖煮会破坏食物中的一些维生素 B．转基因抗虫棉能杀死害虫就一定对人有毒 C．消毒液能杀菌，可用来清除人体内新冠病毒 D．如果孩子的血型和父母都不一样，肯定不是亲生的 二、填空题（除标注外每空2分，共30分） 16．（2026·浙江·高考真题）农杆菌能侵染真菌，介导真菌细胞的转基因。3-磷酸甘油脱氢酶是假丝酵母中甘油合成代谢途径的关键酶，将3-磷酸甘油脱氢酶基因（Gpd）构建到表达载体上，如图1所示。通过农杆菌介导法，转化假丝酵母野生型菌株，获得转Gpd的重组菌株。野生型菌株与某重组菌株分别进行发酵实验，生产甘油的结果如图2所示。 注：ZeoR是腐草霉素抗性基因，KanR是卡那霉素抗性基因 回答下列问题： (1)表达载体导入农杆菌细胞：用溶液处理农杆菌，制备________，再用电击法将表达载体导入农杆菌细胞，经筛选获得阳性克隆。为验证阳性克隆是否为转化成功的农杆菌，从繁殖后的菌株细胞中提取质粒，经________限制酶酶切后电泳，若出现4条DNA条带，则表明转化成功。 (2)假丝酵母重组菌株的获得：在________中的酒精灯火焰旁，取野生型假丝酵母菌种，采用________方法接种在固体培养基上培养，适时挑选________再接种到液体培养基进行培养。取适量的假丝酵母与农杆菌进行共培养一段时间后，杀灭农杆菌，然后在含有________的选择培养基中筛选，最终获得重组菌株。 (3)重组菌株生产甘油能力的分析：根据图2可知，与野生型菌株相比，该重组菌株用于发酵生产甘油的2个优点是________。若某生长正常的重组菌株发酵液中甘油的含量显著低于野生型菌株，从引起变异的因素分析，可能的原因有：在培养过程中重组菌株发生了突变，或________，导致甘油合成代谢受阻。 17．（2025·广西·高考真题）CAR-T是指通过基因工程技术表达CAR基因的T细胞。CAR-T能更好地识别肿瘤细胞表面特定抗原，在肿瘤治疗中疗效显著。构建CAR-T过程见图，回答下列问题： (1)构建含CAR基因的重组质粒，选用的限制酶组合是______。 (2)将连接产物导入Ca2+处理后的大肠杆菌，使用添加氨苄青霉素的固体培养基培养。使用固体培养基的原因是______。 (3)将获得的重组质粒导入T细胞并成功表达后，为了研究CAR-T识别肿瘤细胞的特异性及抗肿瘤效果，除了有CAR-T与肿瘤细胞共同培养的实验组，还需设置的对照组有______，肿瘤细胞凋亡率的检测指标有______（至少写出2点）。 (4)研究发现，肿瘤细胞高表达的PD-L1与CAR-T表达的PD-1结合会启动免疫抑制。为了阻断免疫抑制，可采取的策略有抑制PD-1与PD-L1的结合以及______。同时，肿瘤周围组织过于致密会使CAR-T难以接触肿瘤细胞，也会影响疗效。可通过设计减弱原有PD-1启动的抑制通路和降解肿瘤胞外基质的途径解决上述两个问题。已知溶解酶可以降解细胞外基质，多种酶同时作用可提高降解效率；与PD-1连接的生物开关，在该PD-1与PD-L1结合后会被打开，释放P因子激活P启动子。依据上述特性构建新的重组质粒并使其在T细胞中表达。该新的重组质粒部分结构见图，其中①是______，②是______，③是______，④是______。 学科网（北京）股份有限公司 $ 选必三要点辨析+限时练 第1部分 要点辨析 1、 消毒和灭菌的辨析 消毒 灭菌 强度 温和，对处理对象活性损伤小 强烈，可彻底灭活所有微生物 处理结果 仅降低有害微生物数量，无法达到完全无菌状态，保留部分活性微生物 处理后无活微生物残留，达到完全无菌要求 适用范围 不耐高温、需要保持生物活性的实验材料或操作环境 需要完全无菌的实验器具、培养基等材料 常用方法 酒精消毒、巴氏消毒、紫外线消毒 高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌 2、 稀释涂布平板法和平板划线法的辨析 稀释涂布平板法 平板划线法 原理 梯度稀释菌液后，稀释度足够高时单个活菌可独立繁殖形成单菌落 通过连续划线逐步稀释分散聚集的菌种，最终得到单菌落 核心 需要对菌液进行梯度稀释，再用涂布器均匀涂布到培养基表面 不需要梯度稀释，通过接种环连续划线分散菌种 主要用途 微生物分离纯化、统计样品中活菌数量 仅用于微生物分离纯化，不能用于活菌计数 结果特点 菌落均匀分布在培养基表面，单菌落大多来自单个活菌 菌落集中在划线末端，分布不均匀，无法保证单菌落来自单个活菌 计数特点 计数结果低于实际值，因为多个细胞连在一起时仅形成一个菌落 不能用于活菌计数 3、 植物组织培养和植物细胞培养的辨析 植物组织培养 植物细胞培养 原理 植物细胞的全能性 仅依赖细胞增殖 培养对象 离体的植物器官、组织、细胞（外植体） 愈伤组织细胞或植物悬浮细胞 结果 最终获得完整的植株 最终获得大量植物细胞或细胞代谢产物 应用 作物快速繁殖、作物脱毒、培育转基因植物、生产人工种子 生产植物次生代谢产物（药物、香料、色素等） 4、 植物细胞培养和动物细胞培养的辨析 植物细胞培养 动物细胞培养 原理 植物细胞增殖 动物细胞增殖 培养基 多为固体/半固体培养基，以蔗糖为主要碳源，需添加植物激素调节生长，不需要添加血清、抗生素 多为液体培养基，以葡萄糖为主要碳源，需添加血清等天然成分，添加抗生素防止污染 培养条件 一般不需要控制二氧化碳浓度，对pH、渗透压要求适中 需要95%空气+5%二氧化碳的气体环境，二氧化碳用于维持培养液pH，无菌要求更严格 生长特点 有细胞壁，多聚集生长，无贴壁生长、接触抑制特点，生长速度慢 无细胞壁，具有贴壁生长、接触抑制的特点，培养一定代数后会衰老凋亡 5、 植物体细胞杂交技术和动物细胞杂交技术的辨析 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 原理 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 融合前处理 需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体 用胰蛋白酶分散组织细胞，不需要去除细胞壁 融合方法 物理法（离心、振动、电激）、化学法（PEG诱导、高Ca2+-高pH融合法） 物理法、化学法、生物法（灭活病毒诱导） 后续过程 融合后需要再生细胞壁，再通过植物组织培养获得杂种植株 融合后仅筛选杂交细胞，进行克隆化培养，不需要获得完整个体 培养目的 克服远缘杂交不亲和，获得杂种植株 获得杂交细胞，多用于制备单克隆抗体 最终产物 可育的杂种植株 特定用途的杂交细胞系 6、 植物组织培养和动物体细胞核移植技术的辨析 植物组织培养 动物体细胞核移植技术 原理 植物细胞具有全能性 动物体细胞核具有全能性，卵细胞细胞质可支持全能性表达 操作对象 离体的植物外植体 供体体细胞核、去核的MⅡ期卵母细胞 核心过程 外植体→脱分化→愈伤组织→再分化→胚状体/丛芽→完整植株 供核→核移植→重构胚→胚胎培养→胚胎移植→克隆动物 培养基特点 需要添加植物激素诱导脱分化和再分化，蔗糖为主要碳源 需要添加动物血清，葡萄糖为主要碳源，不需要植物激素 个体获得方式 体外培养直接获得完整新个体 需要胚胎移植，在代孕母体内发育获得新个体 7、 基因工程以及基因的复制过程涉及到的酶的辨析 限制性内切核酸酶 DNA连接酶 解旋酶 体内DNA聚合酶 耐高温的DNA聚合酶 过程 基因工程 基因工程 体内DNA复制 PCR技术 化学键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对之间的氢键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 作用特点 识别特定核苷酸序列，在特定位点切割 连接两个DNA片段 断开氢键，解开DNA双链 常温下合成子链 热稳定性强，高温下合成子链 第二部分 限时练 一、选择题（每题2分，共30分） 1．（2026·安徽·高考真题）某种营养缺陷型细菌在完全培养基上能生长，但在基本培养基上需添加组氨酸才能生长。将等量的营养缺陷型菌株涂布到两种培养基上（基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落），再分别放入含低浓度和高浓度物质M的滤纸片，培养一段时间后菌落的生长情况如图。下列叙述正确的是（　　） A．固体培养基配制后需要采用干热灭菌法进行灭菌 B．牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌 C．物质M有诱变作用，菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸 D．物质M有抑制作用，抑菌圈边缘的菌落多数能在基本培养基上生长 【答案】B 【详解】A、培养基需要采用湿热灭菌法进行灭菌，A错误； B、牛肉膏蛋白胨培养基中含有微生物生长所需的碳源、氮源（包括组氨酸在内的有机氮源）、磷酸盐和维生素等，属于完全培养基，因此牛肉膏蛋白胨培养基能用于培养该营养缺陷型细菌，B正确； C、已知基本培养基中添加了少量组氨酸供细菌繁殖，但不足以形成菌落，据图示可知，基本培养基上只有滤纸片周围出现了少数的几个菌落a，其它部位的营养缺陷型菌体没有形成菌落，因此可推测低浓度的物质M具有诱变作用，可使营养缺陷型菌体突变为可自身合成组氨酸的突变体，该突变体可利用自身合成的组氨酸合成蛋白质，因此可形成菌落a，并非菌落a中细菌合成蛋白质时不需要组氨酸，C错误； D、根据右图可知，含有高浓度M的滤纸片周围缺陷型菌体不能生长形成菌落，说明物质M有抑制作用，即使M有诱变作用，但由于基因突变的频率较低，因此抑菌圈边缘的菌落大多数仍为缺陷型菌体，不能在基本培养基上生长，D错误。 2．（2025·海南·高考真题）山兰酒以海南山兰早稻米为原料  添加酒曲，经传统发酵酿造而成，发酵结束后快速冷却酒液并过滤，可获得风味独特的清澈酒体。米熟化的均匀度、发酵温度均会影响酒的品质。下列有关叙述错误的是（    ） A．酿造山兰酒所使用的酒曲为单一菌种 B．充分蒸熟山兰米有利于淀粉糖化，为酵母菌提供更多的原料 C．适宜的发酵温度有利于提高酶的活性，进而提高酒的产量 D．快速冷却有利于保留酒液中易挥发的风味物质 【答案】A 【详解】A、酒曲在传统发酵中通常含有多种微生物，如霉菌（如根霉、曲霉）负责淀粉糖化，酵母菌负责酒精发酵，并非单一菌种，A错误； B、充分蒸熟山兰米可使淀粉糊化，便于酶（如淀粉酶）将其分解为葡萄糖等还原糖，为酵母菌发酵提供更多底物，B正确； C、发酵过程中，酶的活性受温度影响，适宜温度能提高酶促反应速率，促进酵母菌的酒精发酵，从而提高酒的产量，C正确； D、快速冷却可降低温度，减少酒液中易挥发的风味物质（如酯类）的损失，有助于保留独特风味，D正确。 故选A。 3．（2025·福建·高考真题）下列高中生物学实验的部分操作，正确的是（    ） 选项 实验名称 实验操作 A 探究抗生素对细菌的选择作用 涂菌前，需将抗生素均匀涂抹在培养基平板上 B 制作果酒和果醋 当葡萄酒制作完成后，需拧紧瓶盖，促进葡萄醋的发酵 C 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 稀释土壤样品时，每个梯度稀释时都需更换移液器枪头 D DNA片段的扩增及电泳鉴定 接通电源后，看到DNA条带迁移至凝胶边缘时，停止电泳 A．A B．B C．C D．D 【答案】C 【详解】A、抗生素不能涂抹在培养基上，而是将含有少量细菌的培养液均匀涂抹在培养基上，将培养皿分成4个区域，在3个区域放含有抗生素的纸片，在另外一个区域放不含抗生素的纸片，A错误； B、制作果醋需在有氧条件下进行，拧紧瓶盖会抑制醋酸菌（需氧型）的发酵，B错误； C、稀释涂布平板法中，更换枪头可避免不同浓度菌液交叉污染，确保稀释梯度准确，C正确； D、DNA电泳应通过指示剂（如溴酚蓝）判断停止时间，若DNA迁移至凝胶边缘可能已流失，D错误。 故选C。 4．（2026·浙江·高考真题）利用转基因技术将口蹄疫病毒衣壳蛋白P1的基因导入水稻愈伤组织，获得了多个稳定表达P1的转基因水稻株系。转基因水稻的P1激活小鼠免疫反应的能力与大肠杆菌生产的P1相当，且给小鼠饲喂转基因水稻的P1也能激活免疫反应。下列叙述正确的是（　　） A．将愈伤组织进行脱分化和再分化，获得转基因水稻植株 B．不同株系转基因水稻P1蛋白的基因表达水平相同 C．转基因水稻与大肠杆菌生产的P1蛋白分子量相等 D．转基因水稻P1蛋白具备制成口服疫苗的潜力 【答案】D 【详解】A、水稻愈伤组织是已经完成脱分化的产物，要获得转基因水稻植株，只需对愈伤组织进行再分化（不需要再次脱分化）。植物组织培养的流程是：外植体→脱分化→愈伤组织→再分化→完整植株，A错误； B、转基因过程中，外源基因（P1基因）插入水稻染色体的位置是随机的（位置效应），不同株系的基因表达水平通常存在差异，B错误； C、水稻是真核生物，其细胞内的内质网和高尔基体可对表达的P1蛋白进行糖基化等修饰；而大肠杆菌是原核生物，缺乏这些细胞器，无法对蛋白质进行类似修饰。因此两者生产的P1蛋白分子量可能不同，C错误； D、题目明确指出“给小鼠饲喂转基因水稻的P1也能激活免疫反应”，说明口服P1蛋白可被小鼠免疫系统识别并引发免疫应答，具备制成口服疫苗的潜力，D正确。 故选D。 5．（2025·福建·高考真题）质粒P含有2个EcoRⅠ、1个SacⅠ和1个BamHⅠ的限制酶切割位点。已知BamHⅠ位点位于2个EcoRⅠ位点的正中间，用上述3种酶切割该质粒，酶切产物的凝胶电泳结果如图，其中泳道①条带是未酶切的质粒P，泳道②③④条带为3种单酶切产物，泳道⑤⑥⑦条带为双酶切产物。下列叙述正确的是（    ） A．DNA分子在该凝胶的迁移方向是从电源正极到负极 B．可确认泳道②③条带分别是SacⅠ和EcoRⅠ的单酶切产物 C．泳道⑤条带是SacⅠ和EcoRⅠ的双酶切产物 D．泳道①②说明未酶切质粒的碱基数小于酶切后质粒的碱基数 【答案】C 【详解】A、因为DNA分子带负电，在凝胶中会向电源正极迁移，所以其迁移方向是从电源负极到正极，并非从电源正极到负极，A错误； B、P质粒有两个EcoRI限制酶的切割位点，单酶切后的产物最小，电泳时迁移速度较快，可推知③条带可能是EcoR Ⅰ的单酶切产物（单酶切产生2个片段大小相同），泳道②条带和泳道④条带位置一致，无法区分泳道②条带是SacI还是BamHI的单酶切产物，B错误； C、EcoR I有2个酶切位点，单酶切会产生2个片段，Sac I有1个酶切位点，单酶切会产生1个线性片段。Sac I和EcoR I双酶切，会产生3个片段，观察电泳图谱，泳道⑤有3个条带，可推测泳道⑤为Sac I和EcoR I酶切产物，C正确； D、酶切只是将质粒的环状结构切开，变成线性等结构，碱基总数不会改变，D错误。 故选C。 6．（2025·福建·高考真题）紫杉醇是红豆杉的代谢产物，会干扰纺锤体的正常功能。科研人员利用农杆菌将紫杉醇合成的相关基因导入烟草中，实现了紫杉醇前体物质的合成。下列叙述错误的是（    ） A．农杆菌转化前应先使用Ca2+处理烟草细胞 B．紫杉醇合成的相关基因会整合到烟草染色体DNA上 C．紫杉醇因干扰肿瘤细胞的有丝分裂而具有抗癌作用 D．该技术的突破有利于红豆杉天然资源的保护 【答案】A 【详解】A、转化是指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。农杆菌转化前，需要将含目的基因的重组Ti质粒转入农杆菌中，此时应先使用Ca2+处理农杆菌细胞，使农杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA分子的生理状态，A错误； B、农杆菌的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA中，因此紫杉醇合成的相关基因会随T-DNA整合到烟草染色体DNA上，B正确； C、紫杉醇会干扰纺锤体的正常功能，通过抑制纺锤体的形成，阻碍肿瘤细胞的有丝分裂，从而发挥抗癌作用，C正确； D、利用转基因技术生产紫杉醇前体，可减少对天然红豆杉的依赖，有利于保护其资源，D正确。 故选A。 7．（2025·全国卷·高考真题）琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1～4的电泳结果如图所示（“+”“-”分别代表电泳槽的阳极和阴极）。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲只有限制酶R的一个酶切位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是（    ） A．配制琼脂糖凝胶时需选用适当的缓冲溶液 B．该实验条件下甲、乙两种DNA分子均带负电荷 C．甲、乙两种DNA分子所含碱基对的数量可能不同 D．据图推测样品3可能是甲被酶R完全酶切后的产物 【答案】D 【分析】限制酶酶切其基本原理是利用限制酶对DNA上特定序列的识别，来确定切割位点并实现切割，从而获得所需的特定序列。 【详解】A、配制琼脂糖凝胶时选用适当缓冲溶液，可维持电泳过程中体系的pH稳定，保证核酸分子正常泳动，A正确； B、电泳时，样品向+极移动，说明在该实验条件下甲、乙两种 DNA 分子均带负电荷，符合核酸分子在电泳中的带电特性，B正确； C、电泳中，DNA分子的迁移速率与分子大小、电荷的多少等多种因素有关。甲、乙电泳条带位置虽然相同，但影响DNA分子的迁移速率的因素很多，所以碱基对的数量可能不同，C正确； D、甲只有限制酶R的一个酶切位点，若被酶R完全酶切，只会得到2种DNA片段（2个条带），这两个条带的碱基数量比甲要少，电泳跑的距离要比甲更远，所以据图推测样品4才是甲被酶R完全酶切后的产物，D 错误。 故选D。 8．（2026·安徽·高考真题）动物体细胞核移植技术在畜牧业、医药卫生等领域有着广泛的应用前景。下列叙述错误的是（　　） A．若卵母细胞去核不完全，可能会导致重构胚细胞中染色体数目改变 B．胚胎移植前，需要对核移植获得的重构胚进行遗传筛查和性别鉴定 C．胚胎移植前，需要对受体进行处理，使其生理状态适合胚胎发育 D．克隆动物的核遗传物质与供体相同，但性状与供体不完全相同 【答案】B 【详解】A、在动物体细胞核移植中，细胞核内染色体来自供体细胞，若卵母细胞去核不完全，残留的卵母细胞核（含染色体）会与供体细胞核融合，因此可能导致重构胚细胞中染色体数目改变，A正确； B、在动物体细胞核移植中，重构胚的遗传物质主要来自供体细胞，而供体细胞来源于已知性别的个体，因此重构胚的性别是确定的，即无需对重构胚进行性别鉴定，B错误； C、在胚胎移植前，通常需要对受体进行同期发情处理，使其生殖器官的生理状态与移植胚胎的发育阶段同步，从而为胚胎提供适宜的着床和发育环境，C正确； D、克隆动物的核DNA全部来自供体细胞，因此核遗传物质与供体相同，但细胞质遗传物质来自卵细胞，而生物的性状是由核遗传物质、细胞质遗传物质以及环境因素共同决定的，因此克隆动物的性状与供体不完全相同，D正确。 9．（2026·浙江·高考真题）β-淀粉样蛋白（Aβ）的异常聚集是阿尔茨海默症的致病因素之一。研究者拟利用小鼠作为实验动物，通过细胞融合技术制备抗Aβ的单克隆抗体以用于该病的研究。下列叙述错误的是（　　） A．产生抗Aβ抗体的B细胞来自于用Aβ抗原免疫的小鼠 B．杂交瘤细胞来自于小鼠B细胞与骨髓瘤细胞的融合 C．杂交瘤细胞产生的抗体即为抗Aβ的单克隆抗体 D．抗Aβ的单克隆抗体可辅助该病的特异性诊断 【答案】C 【详解】A、制备单克隆抗体时，需用特定抗原（Aβ）免疫小鼠，刺激其B淋巴细胞分化为浆细胞并产生相应抗体，故产生抗Aβ抗体的B细胞确实来源于Aβ抗原免疫的小鼠，A正确； B、杂交瘤细胞由免疫后小鼠的B淋巴细胞（能产生特定抗体）与骨髓瘤细胞（具有无限增殖能力）通过细胞融合技术形成，B正确； C、杂交瘤细胞是多种融合细胞的混合物，其中仅部分细胞能产生抗Aβ抗体。需经特异性抗体检测和克隆化培养筛选后，才能获得稳定分泌抗Aβ单克隆抗体的杂交瘤细胞系，故未筛选前的杂交瘤细胞产生的抗体不一定是目标单克隆抗体，C错误； D、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，抗Aβ的单克隆抗体可特异性结合Aβ蛋白，用于阿尔茨海默症的病理检测或辅助诊断，D正确。 故选C。 10．（2025·广西·高考真题）科学家利用携带猪源细胞表面蛋白基因（GT）的NDV病毒靶向感染人体内癌细胞，从而强烈激活免疫系统，起到了较好的肿瘤治疗效果。下列有关说法正确的是（　　） A．培养体外实验使用的癌细胞时，通常需添加血清 B．感染NDV-GT的癌细胞会被巨噬细胞特异性吞噬 C．经NDV-GT方法治愈的患者，体内不存在能识别GT蛋白的免疫细胞 D．人体正常细胞若被感染并表达了GT，不会被免疫系统识别为“非己”成分 【答案】A 【详解】A、动物细胞培养时，培养基中需添加血清等天然成分以提供细胞生长所需的营养物质和生长因子，因此培养体外实验使用的癌细胞通常需要添加血清，A正确； B、巨噬细胞的吞噬作用属于非特异性免疫，不具有特异性，即使癌细胞被NDV-GT感染，其吞噬过程仍为非特异性，B错误； C、NDV-GT治疗会激活免疫系统产生记忆细胞，这些细胞能够长期识别GT蛋白，因此治愈后患者体内仍存在识别GT蛋白的免疫细胞，C错误； D、若正常细胞被感染并表达GT蛋白（异源蛋白），会被免疫系统识别为抗原，从而引发免疫反应，D错误。 故选A。 11．（2025·贵州·高考真题）下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是（　　） A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B．W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得 C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 【答案】D 【详解】A、PML蛋白单克隆抗体的制备过程，应用PML蛋白作为抗原间隔多次免疫小鼠，目的是获得更多的能产生PML蛋白抗体的B淋巴细胞，A错误； B、W细胞是先用PML蛋白免疫而获得相应的B淋巴细胞，后通过筛选提取能产生单一抗体的B淋巴细胞，B错误； C、根据题意可知步骤1是诱导W细胞与骨髓瘤细胞融合，步骤2是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，C错误； D、根据电泳结果可知应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体，因为孔2中的细胞能特异性产生PML蛋白的抗体,，D正确。 故选D。 12．（2025·重庆·高考真题）为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙（种群数量多）进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是（    ） A．克隆动物的核基因组来源于甲、乙 B．体外受精需用获能的精子与MI期的卵母细胞受精 C．囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体 D．滋养层可影响内细胞团的发育 【答案】D 【详解】A、克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误； B、体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，而不是MI期，B错误； C、囊胚①的内细胞团可发育为个体，滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，C错误； D、滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的分化等，D正确。 故选D。 13．（2025·江苏·高考真题）梅花鹿和马鹿杂交后代生命力强、茸质好，但自然杂交很难完成，人工授精能解决此难题。胚胎工程技术的应用，可提高繁殖率，增加鹿场经济效益。下列相关叙述合理的是（    ） A．采集的精液无需固定、稀释，即可用血细胞计数板检测精子密度 B．人工授精时，采集的精液经获能处理后才能输入雌性生殖道 C．超数排卵处理时，常用含促性腺激素的促排卵剂 D．母体子宫对胚胎的免疫耐受性低下是胚胎移植的生理学基础 【答案】C 【分析】体外受精主要操作步骤：（1）卵母细胞的采集和培养:方法一:对小型动物一般用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。方法二:对大型动物是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精（或从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞)。（2）精子的采集和获能:在体外受精前，要对精子进行获能处理。采集方法:假阴道法、手握法和电刺激法等。获能方法:培养法和化学法。（3）受精:获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。。 【详解】A、采集的精子需要经过稀释和固定处理，否则活动精子会影响计数准确性，且血细胞计数板通常用于已固定的细胞，A错误； B、人工授精时，精子在雌性生殖道内自然获能，无需提前体外处理，B错误； C、超数排卵通过注射促性腺激素（如FSH和LH）促进卵泡发育和排卵，C正确； D、胚胎移植的生理学基础是母体子宫对胚胎的免疫耐受性高，不会发生免疫排斥，而非耐受低下，D错误。 故选C。 14．（2023·浙江·高考真题）以哺乳动物为研究对象的生物技术已获得了长足的进步。对生物技术应用于人类，在安全与伦理方面有不同的观点，下列叙述正确的是（    ） A．试管婴儿技术应全面禁止 B．治疗性克隆不需要监控和审查 C．生殖性克隆不存在伦理道德方面的风险 D．我国不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验 【答案】D 【分析】生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。两者有着本质的区别。 【详解】A、我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验，但治疗性克隆可在有效监控和严格审查下实施，A错误； B、我国政府同样重视治疗性克隆所涉及的伦理问题，主张对治疗性克隆进行有效监控和严格审查，B错误； C、生殖性克隆人冲击了现有的一些有关婚姻、家庭和两性关系的伦理道德观念，C错误； D、我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验，D正确。 故选D。 15．（2021·北京·高考真题）社会上流传着一些与生物有关的说法，有些有一定的科学依据，有些违反生物学原理。以下说法中有科学依据的是（　　） A．长时间炖煮会破坏食物中的一些维生素 B．转基因抗虫棉能杀死害虫就一定对人有毒 C．消毒液能杀菌，可用来清除人体内新冠病毒 D．如果孩子的血型和父母都不一样，肯定不是亲生的 【答案】A 【分析】血型分为四种，即A，B，AB，O。血型是指红细胞上所含的抗原不同而言，红细胞上只含A抗原的称A型，含有B抗原的称B型，既有A抗原又有B抗原的称为AB型，既没有A抗原也没有B抗原的称为O型。ABO血型受ABO三种基因控制，A基因控制A抗原产生，B基因控制B抗原产生，O基因控制不产生A和B两种抗原，而基因都是成对存在，控制ABO血型的基因可有六种不同组合，即AA，AO，BB，BO，AB，OO，而每个人只有其中一对。 【详解】A、维生素会受到高温破坏，加热、光照、长时间储存等都会造成维生素的流失和分解，A正确； B、转基因抗虫棉对非靶标生物无毒性，B错误； C、消毒液只能杀死表面的病毒细菌，但无法清除体内的病毒，C错误； D、如果孩子的血型和父母都不一样，也可能是亲生的，如A型血和B型血的父母也可以生出O型血的孩子，D错误。 故选A。 二、填空题（除标注外每空2分，共30分） 16．（2026·浙江·高考真题）农杆菌能侵染真菌，介导真菌细胞的转基因。3-磷酸甘油脱氢酶是假丝酵母中甘油合成代谢途径的关键酶，将3-磷酸甘油脱氢酶基因（Gpd）构建到表达载体上，如图1所示。通过农杆菌介导法，转化假丝酵母野生型菌株，获得转Gpd的重组菌株。野生型菌株与某重组菌株分别进行发酵实验，生产甘油的结果如图2所示。 注：ZeoR是腐草霉素抗性基因，KanR是卡那霉素抗性基因 回答下列问题： (1)表达载体导入农杆菌细胞：用溶液处理农杆菌，制备________，再用电击法将表达载体导入农杆菌细胞，经筛选获得阳性克隆。为验证阳性克隆是否为转化成功的农杆菌，从繁殖后的菌株细胞中提取质粒，经________限制酶酶切后电泳，若出现4条DNA条带，则表明转化成功。 (2)假丝酵母重组菌株的获得：在________中的酒精灯火焰旁，取野生型假丝酵母菌种，采用________方法接种在固体培养基上培养，适时挑选________再接种到液体培养基进行培养。取适量的假丝酵母与农杆菌进行共培养一段时间后，杀灭农杆菌，然后在含有________的选择培养基中筛选，最终获得重组菌株。 (3)重组菌株生产甘油能力的分析：根据图2可知，与野生型菌株相比，该重组菌株用于发酵生产甘油的2个优点是________。若某生长正常的重组菌株发酵液中甘油的含量显著低于野生型菌株，从引起变异的因素分析，可能的原因有：在培养过程中重组菌株发生了突变，或________，导致甘油合成代谢受阻。 【答案】(1) 感受态细胞/可导入外源DNA分子的农杆菌 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ (2) 超净工作台/无菌实验室/灭菌的操作台 （平板）划线法/稀释涂布平板法 单菌落 腐草霉素 (3) 提高发酵液中甘油的含量；缩短发酵时间 T-DNA的插入导致重组菌株发生了变异 【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 【详解】（1）用CaCl₂溶液处理农杆菌，目的是制备感受态细胞（可导入外源DNA分子的农杆菌）。感受态细胞是指处于能吸收周围环境中DNA分子状态的细胞，这种处理会使农杆菌细胞膜通透性增加，便于外源表达载体的导入。 从图1可知，质粒上有两个Hind Ⅲ酶切位点和两个EcoR Ⅰ酶切位点。 用这两种酶同时酶切，会将质粒切成4个大小不同的片段，电泳后就会出现4条 DNA 条带，以此证明农杆菌成功导入了重组质粒。 （2）为了营造一个无菌环境，避免杂菌污染实验材料，微生物接种应在超净工作台（或无菌实验室或灭菌的操作台）的酒精灯火焰旁进行。平板划线法和稀释涂布平板法是常用的微生物接种方法，这两种方法都可以将菌种分散，最终获得单菌落。单菌落是由单个细胞繁殖而来的，能保证后续培养的菌株遗传背景一致。质粒的 T-DNA区域带有腐草霉素抗性基因（Zeoᴿ）。当农杆菌将T-DNA 整合到假丝酵母基因组后，只有成功导入该基因的重组酵母才能在含有腐草霉素的选择培养基上存活，从而筛选出重组菌株。 （3）从图2的曲线对比可以看出：重组菌株的发酵液中甘油峰值明显高于野生型菌株；重组菌株的甘油含量上升速度更快，能在更短时间内达到产量高峰。若重组菌株甘油含量显著低于野生型，除了基因突变外，还可能是T-DNA 插入导致重组菌株发生了变异，破坏了假丝酵母自身甘油合成关键基因的功能。 17．（2025·广西·高考真题）CAR-T是指通过基因工程技术表达CAR基因的T细胞。CAR-T能更好地识别肿瘤细胞表面特定抗原，在肿瘤治疗中疗效显著。构建CAR-T过程见图，回答下列问题： (1)构建含CAR基因的重组质粒，选用的限制酶组合是______。 (2)将连接产物导入Ca2+处理后的大肠杆菌，使用添加氨苄青霉素的固体培养基培养。使用固体培养基的原因是______。 (3)将获得的重组质粒导入T细胞并成功表达后，为了研究CAR-T识别肿瘤细胞的特异性及抗肿瘤效果，除了有CAR-T与肿瘤细胞共同培养的实验组，还需设置的对照组有______，肿瘤细胞凋亡率的检测指标有______（至少写出2点）。 (4)研究发现，肿瘤细胞高表达的PD-L1与CAR-T表达的PD-1结合会启动免疫抑制。为了阻断免疫抑制，可采取的策略有抑制PD-1与PD-L1的结合以及______。同时，肿瘤周围组织过于致密会使CAR-T难以接触肿瘤细胞，也会影响疗效。可通过设计减弱原有PD-1启动的抑制通路和降解肿瘤胞外基质的途径解决上述两个问题。已知溶解酶可以降解细胞外基质，多种酶同时作用可提高降解效率；与PD-1连接的生物开关，在该PD-1与PD-L1结合后会被打开，释放P因子激活P启动子。依据上述特性构建新的重组质粒并使其在T细胞中表达。该新的重组质粒部分结构见图，其中①是______，②是______，③是______，④是______。 【答案】(1)EcoR Ⅰ、Not Ⅰ (2)便于含有质粒的大肠杆菌形成单菌落 (3) 肿瘤细胞单独培养、不含CAR基因的T细胞（正常T细胞）与肿瘤细胞共同培养 肿瘤细胞的体积、肿瘤细胞死亡数和存活数等 (4) 减少CAR-T细胞表面PD-1的表达 CAR序列（1分） 终止子（1分） 溶解酶1基因序列 溶解酶2基因序列 【分析】1、基因工程的工具：①限制酶，能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；②DNA连接酶，连接两个核苷酸之间的磷酸二酯键；③运载体，质粒是最常用的运载体，除此之外，还有λ噬菌体衍生物、动植物病毒。 2、基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有利用PCR技术扩增和人工合成等。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和花粉管通道法等；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。 （4）目的基因的检测与鉴定： 分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。 个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 【详解】（1）构建含CAR基因的重组质粒，为了避免质粒和目的基因自连、目的基因反向插入，常采用双酶切法；目的基因CAR基因需要插入质粒的启动子和终止子区域，而限制酶Cla Ⅰ和Hind Ⅲ位于启动子和终止子区域之外，且CAR基因片段中间含有BamH Ⅰ识别序列，故应该选用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ分别切割CAR基因和质粒。 （2）固体培养基通常是在液体培养基中添加一定量的凝固剂制成的。在固体培养基上，人们可以清楚地观察到在培养基表面由单个细胞生长繁殖成的菌落，质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，将连接产物导入Ca2+处理后的大肠杆菌，使用添加氨苄青霉素的固体培养基培养的目的是便于含有质粒的大肠杆菌形成单菌落，方便后续筛选出重组质粒。 （3）研究目的是探究CAR-T识别肿瘤细胞的特异性及抗肿瘤效果，自变量为是否含有CAR基因的T细胞，而因变量抗肿瘤效果，即肿瘤细胞凋亡率的检测指标为肿瘤细胞的体积、肿瘤细胞死亡数和存活数等；实验组为CAR-T与肿瘤细胞共同培养，对照组为肿瘤细胞单独培养、不含CAR基因的T细胞（正常T细胞）与肿瘤细胞共同培养。 （4）肿瘤细胞高表达的PD-L1与CAR-T表达的PD-1结合会启动免疫抑制，为了阻断免疫抑制，可采取的策略有抑制PD-1与PD-L1的结合，使用PD-1抗体、PD-L1抗体分别与PD-1、PD-L1的结合，或减少CAR-T细胞表面PD-1的表达；根据题干信息：与PD-1连接的生物开关，在该PD-1与PD-L1结合后会被打开，释放P因子激活P启动子，且需要减弱原有PD-1启动的抑制通路，表达CAR基因的T细胞能更好地识别肿瘤细胞表面特定抗原，可知新的重组质粒中①是CAR序列；溶解酶可以降解细胞外基质，多种酶同时作用可提高降解效率，且P启动子是双向启动子，可知②是终止子，③是溶解酶1基因序列，④是溶解酶2基因序列。 学科网（北京）股份有限公司 $