甘肃省高二年级生物学下学期阶段测试（人教版选择性必修三全部）

**基本信息** 高二生物学期末卷（100分/75分钟）以原创题为主，聚焦发酵工程、基因工程、细胞工程等生物技术模块，融合CRISPR-Cas9、PLA降解菌分离等科技前沿与实际应用情境，注重科学思维与探究实践能力考查。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|16题/48分|传统发酵（果酒果醋）、植物组织培养、基因工程工具酶|以混菌发酵、Vero细胞培养等真实场景设题，考查结构与功能观| |非选择题|5题/52分|PLA降解菌分离（探究题）、铁皮石斛组织培养、CRISPR插入位点检测|通过重组病毒构建、体细胞克隆食蟹猴等综合情境，突出科学探究与创新应用能力|

命题双向细目表 甘肃省高二年级生物学下学期阶段测试（人教版选择性必修三全部）命题双向细目表 题号 题型 教材章节 考查知识点 能力层级 认知维度 分值 难度系数 预估得分 实际得分 1 选择题 第1章 发酵工程 传统发酵技术（果酒、果醋、腐乳、泡菜） 理解 掌握 3 0.75 2.25 2 选择题 第1章 发酵工程 微生物发酵（混菌发酵、无菌操作、种间关系） 理解 掌握 3 0.7 2.1 3 选择题 第1章 发酵工程 发酵工程流程（黑曲霉生产柠檬酸） 理解 掌握 3 0.65 1.95 4 选择题 第2章 细胞工程 植物组织培养（脱分化、再分化、激素调控） 理解 掌握 3 0.7 2.1 5 选择题 第2章 细胞工程 单倍体育种（花药离体培养、秋水仙素处理）、植物体细胞杂交 理解 掌握 3 0.65 1.95 6 选择题 第2章 细胞工程 胚胎分割技术（囊胚、内细胞团、遗传一致性） 理解 掌握 3 0.7 2.1 7 选择题 第3章 基因工程 DNA粗提取与鉴定、PCR、电泳 理解 掌握 3 0.6 1.8 8 选择题 第2章 细胞工程 动物细胞培养（传代培养、CO₂培养箱） 理解 掌握 3 0.7 2.1 9 选择题 第3章 基因工程 基因工程（抗草甘膦水稻、T-DNA、农杆菌转化） 理解 掌握 3 0.65 1.95 10 选择题 第3章 基因工程 蛋白质工程（定点诱变、基因改造） 理解 掌握 3 0.6 1.8 11 选择题 第3章 基因工程 限制酶切割与电泳分析（片段长度、磷酸基团） 分析 运用 3 0.55 1.65 12 选择题 第4章 生物技术的安全性与伦理问题 生物武器（定义、特点、公约） 识记 了解 3 0.8 2.4 13 选择题 第1章 发酵工程 微生物营养缺陷型、微生物降解能力探究 分析 运用 3 0.55 1.65 14 选择题 第2章 细胞工程 单克隆抗体制备（B淋巴细胞、细胞融合、杂交瘤细胞筛选） 理解 掌握 3 0.65 1.95 15 选择题 第2章 细胞工程 胚胎工程（超数排卵、胚胎培养液、胚胎移植） 理解 掌握 3 0.6 1.8 16 选择题 第3章 基因工程 基因工程（融合基因、表达载体、转化、目的基因检测） 分析 运用 3 0.55 1.65 17 非选择题 第1章 发酵工程 微生物的分离与培养、培养基类型、微生物生长、发酵工程 综合 运用 14 0.6 8.4 18 非选择题 第2章 细胞工程 植物组织培养、单倍体育种 综合 掌握 10 0.65 6.5 19 非选择题 第2章 细胞工程 动物体细胞核移植、胚胎工程、胚胎分割 综合 运用 12 0.6 7.2 20 非选择题 第3章 基因工程 基因工程（限制酶、DNA连接酶、基因表达、病毒检测） 综合 运用 12 0.55 6.6 21 非选择题 第3章 基因工程 PCR技术、引物设计、电泳、基因编辑 综合 运用 12 0.5 6 合计 108 65.90 章节分值汇总分析 甘肃省高二年级生物学下学期阶段测试章节分值汇总分析 教材章节 题型 题量 总分值 第1章 发酵工程 选择题 5 15 第1章 发酵工程 非选择题 1 14 第1章 发酵工程 合计 6 29 第2章 细胞工程 选择题 6 18 第2章 细胞工程 非选择题 2 22 第2章 细胞工程 合计 8 40 第3章 基因工程 选择题 5 15 第3章 基因工程 非选择题 2 24 第3章 基因工程 合计 7 39 第4章 生物技术的安全性与伦理问题 选择题 1 3 第4章 生物技术的安全性与伦理问题 非选择题 0 0 第4章 生物技术的安全性与伦理问题 合计 1 3 全卷合计 21 100 $ 2025-2026学年第二学期第一次月考试卷 高二 生物学 满分：100分 考试时间：75分钟 1、 选择题（每题3分，共48分） 1.D A.果醋利用醋酸菌进行发酵，属于细菌，原核生物；腐乳主要利用毛霉进行发酵，属于真菌，真核生物。A错误； B.腐乳发酵过程中，起主要作用的是毛霉，B错误； C.不能反复冲洗：葡萄表面附着野生酵母菌，冲洗次数过多会洗掉菌种，影响发酵效率，C错误； D.果酒制作成果醋时，需要保证有氧环境，因为醋酸菌需要进行有氧呼吸；酵母菌最适生长温度为18~30℃，醋酸菌最适生长温度为30~35℃，需要调整温度，D正确。 2.A A.平板划线法可用于纯化菌落，分离目标菌，A正确； B.应对乳酸菌和酵母菌共同筛选，以获得最佳的生产酸乳饮料的菌种，B错误； C.乳酸菌和酵母菌会争夺培养基中的营养物质、生存空间，存在种间竞争，C错误； D.培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌，D错误。 3.D A.性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得。A正确； B.发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，该过程需要及时添加必须的营养成分，原因是延长菌体稳定期的时间，以得到更多的发酵产物。B正确； C.根据题目信息，已知酒精是酵母菌的代谢产物。如果发酵产品是代谢物，可根据产品的性质采取适当的提取分离和纯化措施来获得产品。C正确； D.发酵罐中搅拌的作用包括：使菌体与营养物质充分接触、加快氧气溶解、增强散热。D错误。 4.B A.植物组织培养过程中，愈伤组织形成后，通常先转移到生芽培养基，再转移到生根培养基。A错误。 B.诱导愈伤组织阶段需避光，分化阶段需要光照诱导叶绿素的合成。B正确。 C.生长素/细胞分裂素比值高利于生根；比值低利于生芽。C错误。 D. 同一植株体细胞经组织培养获得的所有再生苗可能发生基因突变、染色体变异，不一定完全相同。D错误。 5.D A.获取植物单倍体常用方法是花药（花粉）离体培养。去除植物细胞壁获取原生质体，需使用纤维素酶和果胶酶。A正确； B.秋水仙素的作用机理：作用于正在分裂的细胞，抑制纺锤体的形成，导致染色体不能移向两极，从而引起染色体数目加倍。B正确； C.原生质体融合的方法分物理法（电融合法、离心法）和化学法（聚乙二醇（PEG）融合法、高 Ca²⁺—高 pH 融合法等）。C正确； D.番茄是二倍体，马铃薯也是二倍体，两者体细胞杂交后，杂种植株的体细胞染色体组数为 2+ 2= 4个染色体组。有丝分裂后期：体细胞内含有 4 个染色体组，在有丝分裂后期着丝粒分裂，染色体数目加倍，染色体组数会变为8个。 6. C A.卵裂时期胚胎发育所需要的营养主要来源于卵母细胞的细胞质，A正确； B.胚胎分割是指采用机械的方法，将早期胚胎切割成二等份、四等份或八等份，经移植获得同卵双胎或多胎的技术，来自同一胚胎的后代，具有相同的遗传物质，可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一。B正确； C.囊胚滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘的一部分，不能形成完整个体，无全能性。C错误； D.胚胎发育早期，细胞数量不断增加，但胚胎的总体积并不增加 7.D A.在一定温度下（沸水浴加热），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。A正确； B. PCR反应中，引物与模板链的3'端结合后延伸。B正确； C. 体积分数为95%的遇冷的酒精溶液作用:抑制核酸水解酶的活性，防止DNA被降解。低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。C正确； D. DNA本身在紫外灯下不可见，需用核酸染料（如溴代乙锭）染色后才能在紫外灯下观察。 8.A A.传代比越大，分瓶越多，细胞密度降低，达到汇合所需时间越长，A正确； B.胰蛋白酶处理时间过长会损伤细胞。B错误； C.连续培养仅说明细胞增殖，未体现分化成完整个体的全能性。C错误； D.动物细胞培养的条件之一是需要有适宜的气体环境，95%的空气和5%的二氧化碳混合气体。D错误。 9.A A.SmaⅠ的酶切位点位于抗生素抗性基因（标记基因）上，若用SmaⅠ切割质粒，会破坏标记基因，导致后续无法通过抗生素筛选出含重组质粒的农杆菌。因此构建表达载体时不能使用SmaⅠ，应选择不破坏标记基因、且位于T-DNA区域内的限制酶（如BamHⅠ）。A错误； B.农杆菌转化法的原理是Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，因此目的基因必须插入T-DNA片段内。B正确； C.将重组质粒导入原核生物（如农杆菌）时，常用Ca²⁺处理细胞，使其处于能吸收周围环境中DNA分子的感受态，便于转化。C正确； D.农杆菌天然状态下主要感染双子叶植物和裸子植物，通过技术改良（如添加酚类物质诱导），现已成功用于水稻、玉米等单子叶植物的转基因操作。 10.A A.蛋白质工程的基本流程是从预期蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，再推测对应的氨基酸序列，最终改造基因。A正确； B.蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的，必须通过改造或合成基因来实现对蛋白质的改造。B正确； C.直接对蛋白质分子进行氨基酸的替换或删除，属于对蛋白质的直接修饰，其改变无法传递给后代，不能稳定遗传；蛋白质工程的核心是改造基因，不是直接改造蛋白质。C错误； D.改造后的溶菌酶基因整合到受体细胞的染色体DNA上后，该性状可随细胞分裂传递给后代，属于可遗传的变异。D正确。 11.D A.BamH I有2个酶切位点，线性DNA被切成3个片段；Hind III有2个酶切位点，线性DNA同样被切成3个片段。因此泳道①和②的条带数均为3。A错误； B.DNA基本骨架由磷酸基团和脱氧核糖交替连接，磷酸基团在水中会电离带上负电荷，因此DNA分子也显负电，电泳时向正极移动。B错误； C.DNA片段越小（短），迁移速率越快；片段越大（长），迁移速率越慢。C错误； D.两种酶同时切割时，线性DNA上共有4个酶切位点，切割后会产生5个片段，因此电泳后得到5种产物。D正确。 12.C A.生物武器的范畴包括致病菌、病毒、生化毒剂以及基因重组致病菌，历史上的生物武器使用曾造成过严重后果。A正确； B.第二次世界大战期间，部分国家曾在战争中使用过生物武器，造成了大量伤亡。B正确； C.即使是经过基因改造的新型致病菌，其表面依然存在能被人体免疫系统识别的抗原物质，人体依然会启动免疫反应。C错误； D.生物武器的传播途径包括直接接触、空气传播、食物/水源传播以及污染生活必需品等，传播方式多样且隐蔽。D正确。 13.ABC A正确：本实验为探究两种菌株降解塑料的能力，因此实验所用培养基中塑料为唯一碳源。 B正确：由题意可知，要观察两种透明圈的大小来比较降解能力，因此，所用培养基应为固体培养基，需要添加琼脂。 C正确：在含碳的培养基Ⅰ中，A菌的透明圈（+++）大于B菌（++），说明A菌降解塑料的能力更强。 D错误：培养基Ⅱ中不含塑料（碳源），B菌在其中无透明圈，说明它不能在没有碳的环境中生长。碳源和氮源是两种物质，所以无法得出此结论。 14.A A错误：已免疫小鼠体内的B淋巴细胞中，只有针对新冠病毒抗原分化形成的浆细胞才能分泌目标抗体; B正确：动物细胞融合的常用方法包括PEG融合法、电融合法和灭活病毒（如仙台病毒）诱导法，且操作需在无菌条件下进行。 C正确：杂交瘤细胞兼具骨髓瘤细胞无限增殖和B淋巴细胞分泌抗体的特点（不指特异性抗体），因此筛选后可同时具备两种能力。 D正确：抗体阳性检测利用抗原与抗体的特异性结合原理，通过抗原-抗体杂交技术筛选出分泌目标抗体的细胞。 15.AC A错误：应注射促性腺激素，可以诱发供体母牛卵巢排出比自然情况下更多的卵子，实现超数排卵，一次获得多枚卵母细胞； B正确：胚胎培养液除无机盐（维持渗透压、离子平衡、细胞正常形态）、有机盐（提供碳源、氮源、部分离子）外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及血清等天然成分，为胚胎发育提供所需的生长调节物质； C错误：胚胎并非全程处于游离状态，早期胚胎在子宫内处于游离状态，但当胚胎着床后，就不再游离了； D正确：受体母畜需经过同期发情处理，使其与供体母畜的生理状态保持一致，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境，提高胚胎移植的成功率。 16.BCD A正确：该研究的目标是让酵母合成番茄红素，因此人工构建的  MFα-CrtI  融合基因就是研究中需要导入受体细胞的目的基因。 B错误：将基因表达载体导入酵母（真核细胞）时，通常需要用钙离子处理细胞使其处于感受态，直接导入难以完成转化。 C错误：检测到番茄红素的含量提高，说明目的基因已经成功表达并合成了目标产物，研究目标达成。 D错误：PCR检测到MFα-CrtI 基因，只能说明目的基因已导入受体细胞，不能证明其成功转录和翻译合成了番茄红素。证明番茄红素合成成功需要检测其表达产物。 2、 非选择题（共52分） 17.(1) 液体；聚乳酸（PLA）；筛选出能利用PLA的降解菌，抑制杂菌生长；平板划线法、稀释涂布平板法；平板划线法 (2) 等量无菌培养液（或缓冲液）；S形；PLA2 (3) 配置高盐、高pH培养基；杂菌在高盐浓度、高pH下难以生长繁殖，但该菌株可持续发酵；氧气浓度 18.(1) D (2) a；离体；a；基因的选择性表达 (3) 生长素和细胞分裂素；生长素 (4) 秋水仙素（或低温诱导染色体数目加倍） 19.(1) 减数第二次分裂中（MⅡ中）；诱导体细胞与去核卵母细胞融合 (2) 对卵母细胞和细胞质的影响越小；降低组蛋白的甲基化水平；提高组蛋白的乙酰化水平； (3) 食蟹猴与人的亲缘关系更近；克隆猴的遗传背景相同，实验组与对照组的比较更有说服力 （4）分割份数越多，技术难度会越大，每一份移植后恢复和发育的难度会越大，移植成功率会降低 20.(1)原核生物自身的DNA分子不含有该限制酶的识别序列，或其DNA分子已被甲基化修饰，限制酶无法识别切割；既可以连接双链DNA互补的黏性末端，又可以连接双链DNA分子的平末端但连接后者的效率相对较低；识别DNA分子中特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开 (2)等量的野生型PRRSV；A组细胞可观察到红色荧光，且能检测到荧光素酶的活性，B组无荧光，荧光素酶无活性 (3)插入的标记基因不影响重组病毒的增殖能力 21.(1) CRISPR片段的已知的碱基序列；①④；Taq DNA聚合酶活性较高；31a (2) GATTA (3) C (4) 琼脂糖凝胶电泳   学科网（北京）股份有限公司 $ 2025-2026学年第二学期期末考试卷 高二 生物学 满分：100分 考试时间：75分钟 1、 选择题（共16题，每小题3分，共48分） 1.（原创）传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主。利用传统发酵技术制作的食品有果酒、果醋、腐乳、泡菜等。它们是我国传统饮食文化的重要组成部分。下列说法正确的是（ ） A. 主要利用原核生物发酵的是果醋和腐乳 B. 腐乳发酵时，起主要作用的微生物是曲霉 C. 制作葡萄酒时，应在去除枝梗之后对葡萄进行反复冲洗 D. 果酒制作成果醋时，需要通入无菌空气，且调整发酵温度 2.（原创）混菌发酵法是利用两种或多种微生物的协同作用，提高产物的产量或质量。在利用乳酸菌与酵母菌混合发酵制作酸乳饮料的过程中，研究人员发现，酵母菌产生的某些小分子物质能促进乳酸菌的生长，而乳酸菌产生的酸性环境有利于酵母菌代谢。下列说法正确的是（ ） A. 使用平板划线法可以从混合体系中分离纯化出目标乳酸菌菌种 B. 只需单独筛选乳酸菌即可，酵母菌可以随机选取 C. 乳酸菌与酵母菌之间只存在互利共生关系 D. 由于是混菌发酵，因此无需进行严格的无菌操作 3.（原创）某生物能源公司利用酿酒酵母通过发酵工程大规模生产燃料乙醇（酒精，酵母菌的代谢产物）。下图表示该发酵工程的基本生产流程。下列关于该生产过程的叙述，错误的是（ ） A. 生产燃料乙醇所用的酿酒酵母菌种，可来源于自然界分离，也可通过诱变育种或基因工程育种获得 B. 发酵罐内发酵是酒精生产的中心环节，该过程需要及时添加必须的营养成分 C. 发酵结束后的产物需要采取适当的提取分离和纯化措施来获得产品 D. 在发酵罐中安装搅拌装置，其作用是将菌体与发酵液混合均匀，加快氧气溶解以及避免散热 4.（原创）由于人类活动导致野生甘草资源枯竭，研究人员利用植物组织培养技术进行快速繁殖。下列说法正确的是（　） A. 植物组织培养过程中，愈伤组织形成后需立即转移至生根培养基 B. 诱导愈伤组织阶段需要持续黑暗条件，而分化阶段需光照 C. 提高培养基中生长素/细胞分裂素的比值，有利于诱导生芽 D. 同一植株体细胞经组织培养获得的所有再生苗基因型一定相同 5.（原创）下图表示利用优质二倍体番茄（A）和耐盐二倍体马铃薯（B）培育新型耐盐番茄—马铃薯杂种植株的主要流程。（注：番茄为二倍体，染色体组数表示为 2n；马铃薯为二倍体，染色体组数表示为 2m）下列相关叙述错误的是（ ） A. 过程①中，获取番茄单倍体常采用花药离体培养技术，过程③获取马铃薯原生质体需要利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。 B. 过程②使用秋水仙素处理番茄单倍体幼苗，其作用原理是抑制纺锤体形成，从而获得染色体加倍的纯合子。 C. 过程④常用的物理方法包括电融合法、离心法，化学方法包括聚乙二醇融合法 D. 若该杂种植株的某细胞正处于有丝分裂后期，则该细胞内含有 4 个染色体组。 6.（原创）下列关于哺乳动物早期胚胎发育及胚胎分割的叙述，错误的是（ ） A. 卵裂过程所需要的营养主要来源于卵母细胞的细胞质 B. 胚胎分割属于无性繁殖的范畴 C. 囊胚的滋养层细胞具有发育全能性 D. 胚胎发育早期，胚胎数量不断增加，胚胎总体积不变 7.（原创）下列关于DNA粗提取与鉴定、PCR及琼脂糖凝胶电泳实验的叙述，错误的是（　） A. DNA与二苯胺试剂混合会置于沸水加热会呈现蓝色 B. PCR反应中，引物与模板链的3'端结合后延伸 C. 为了抑制核酸水解酶的活性，防止DNA被降解，在析出DNA时需要使用体积分数为95%的遇冷的酒精溶液 D. 琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子在紫外灯下直接可见 8.（原创）Vero细胞是一种贴壁依赖性的非洲绿猴肾细胞系，常用于疫苗生产。当细胞在培养瓶中生长至汇合（相互接触）时，需要进行传代培养，分瓶比例称为传代比。下列叙述正确的是（ ） A. 传代比越大，细胞在传代后铺满瓶底所需的时间越长 B. 传代时用胰蛋白酶处理时间越长，细胞分散效果越好，对细胞损伤越小 C. Vero细胞的连续传代培养过程体现了动物细胞的全能性 D. 培养Vero细胞时，通常需要提供 95%空气和 5% O₂的气体环境 9.（原创）下图为利用转基因技术获取抗虫基因（Bt） 转基因棉花的过程图。下列说法错误的是（ ） A. 构建基因表达载体的过程中要用到限制酶SmaⅠ，才能保证目的基因随T-DNA转移到植物细胞 B. 目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内，以保证目的基因能整合到植物细胞的染色体DNA上 C. 将重组Ti质粒导入农杆菌时，一般先用Ca²⁺处理农杆菌，使其处于感受态，便于吸收周围环境中的DNA分子 D. 农杆菌转化法原本主要感染双子叶植物和裸子植物，通过技术改良，也可用于水稻、玉米等单子叶植物的转化 10.（原创）溶菌酶能够破坏细菌细胞壁，在食品防腐、医疗抗菌领域应用广泛。天然溶菌酶稳定性差，限制了其工业应用。科研人员通过蛋白质工程改造溶菌酶，以提高其热稳定性和催化效率。下列叙述错误的是（ ） A. 改造溶菌酶应从预期的溶菌酶功能出发，设计预期的蛋白质结构 B. 改造溶菌酶的过程需要以基因工程为基础，对编码溶菌酶的基因进行修饰或合成 C. 直接通过氨基酸的替换、删除来改造溶菌酶分子，即可获得稳定遗传的改良性状 D. 改造后的溶菌酶基因整合到受体细胞后，其提高热稳定性的性状能够遗传给后代 11.（原创）用 BamH I 和 Hind III 两种限制酶分别处理同一线性DNA片段（酶切位点均能切开），酶切位点及电泳结果示意图如下。下列说法正确的是（ ） A. 图2中泳道①一定是用Hind III处理得到的酶切产物 B. 电泳过程中，DNA分子向负极移动 C. DNA片段长度越小，在琼脂糖凝胶中移动速率越慢 D. 用BamH I和Hind III同时处理该DNA，电泳后可得到5种产物 12.（原创）下列关于生物武器的叙述，错误的是（ ） A. 生物武器的种类包括致病菌、病毒、生化毒剂等，曾对人类造成过严重伤害 B. 二战期间，部分国家曾在战争中使用过生物武器，造成了大量人员伤亡 C. 人体免疫系统无法识别并清除经过基因改造的新型致病菌，因此不会产生任何免疫反应 D. 生物武器的传播途径多样，可通过空气、食物、水源及生活必需品等多种方式扩散 13.（原创）某同学获得A、B两种可降解塑料的细菌，为探究两种菌株降解塑料的能力及生理功能，设计如下实验，分别在培养基Ⅰ和Ⅱ的甲、乙位置接种A菌、B菌，结果见下表（“+”表示有透明圈，“+”越多透明圈越大；“-”表示无透明圈）。下列叙述正确的是（ ） （注：培养基I、II主要区别为是否添加了塑料。培养基I添加了塑料，培养基II未添加） 菌株 透明圈大小 培养基Ⅰ 培养基Ⅱ A +++ ++ B ++ - A. 实验所用培养基中塑料为唯一碳源 B. 培养基Ⅰ和Ⅱ都需要添加琼脂制成固体培养基，便于观察透明圈 C. A菌降解塑料的能力强于B菌 D. B菌在氮源贫瘠的环境中可以正常生长繁殖 14.（原创）下图表示利用小鼠制备抗新冠病毒单克隆抗体的过程，以下叙述错误的是（ ） A. 从小鼠体内获取的所有B淋巴细胞，都能分泌抗新冠病毒的特异性抗体 B. 细胞融合过程可采用PEG融合法、电融合法或灭活仙台病毒诱导法，全程需无菌操作 C. 第一次筛选获得的杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能分泌抗体 D. 抗体阳性检测可采用抗原-抗体杂交技术，筛选出能分泌目标抗体的杂交瘤细胞 15.（原创）和牛以肉质细嫩、雪花纹丰富的特点广受市场欢迎，科研人员计划通过胚胎工程技术实现其快速扩繁。下列叙述错误的是（ ） A. 可通过对供体母牛注射性腺激素，实现超数排卵，一次获得多枚卵母细胞 B. 胚胎培养液中除了无机盐、有机盐外，还需添加维生素、激素、血清等物质 C. 胚胎在发育的全过程中始终处于游离状态 D. 受体母畜需选择健康、繁殖性能良好且经过同期发情处理的个体 16.（原创）番茄红素具有强抗氧化性，天然番茄中含量较低。研究人员拟通过基因工程改造酵母，提高其番茄红素产量：首先将番茄的番茄红素合成关键基因CrtI 与酵母的信号肽基因 MFα 融合，得到MFα-CrtI融合基因，再构建表达载体并导入酵母。下列叙述错误的是（ ） A.  MFα-CrtI 融合基因是该研究中的目的基因 B. 将构建好的基因表达载体直接导入酵母，即可完成转化 C. 在酵母培养液中检测到番茄红素，说明该研究已成功实现目标 D. 通过PCR检测酵母基因组中的  MFα-CrtI  基因，可证明番茄红素合成成功 二、非选择题（共5小题，共52分） 17.（原创）（探究题）（14分）近年来，研究人员在从环境中分离聚乳酸（PLA）降解菌方面取得了积极成果，为可降解塑料的生物处理提供了新思路。回答下列问题： (1) 现欲从厨余垃圾堆肥中分离能够高效降解PLA的微生物菌株，研究思路如下： 堆肥样品 → 扩大培养 → 选择培养 → 划线纯化。选择培养步骤中，为达到扩大培养的目的，所使用的培养基应为______培养基；同时应加入______作为唯一碳源，目的是__________。微生物的纯化方法包括__________，图中所用的纯化方法是__________。 (2) 某研究团队分离出两种PLA降解菌（PLA1和PLA2），将其分别接种在含PLA薄膜的培养液中培养，对照组的培养基应加入__________；实验组两种细菌种群数量变化呈______形增长。根据PLA失重率变化曲线判断，分解PLA能力较强的是______细菌。 (3) 聚羟基烷酸酯（PHA）是由某些细菌合成的胞内聚酯，被称为“绿色塑料”。某工程菌能在高盐、碱性环境中生长，研究人员设计了无需灭菌的发酵系统，该系统无需灭菌的关键设置是__________，原因是__________。工厂扩大培养时，在适宜营养、温度、pH条件下，发现发酵液中菌株增殖和PHA产量均未达预期，并产生了少量乙醇，说明__________可能是高密度培养的限制因素。 18.（原创）（10分）铁皮石斛是一种名贵的药用植物，野生种群因过度采挖濒临枯竭，通过植物组织培养技术实现快速繁育，是保护野生资源和规模化生产的重要途径。下图为铁皮石斛的组织培养流程，请回答下列问题： (1)为保持铁皮石斛的优良性状并实现快速繁育，下列材料最适合用于植物组织培养的是（ ） A. 花粉粒 B. 成熟叶肉细胞 C. 茎表皮细胞 D. 茎尖分生区细胞 (2)图中过程____（填字母）证明高度分化的植物细胞可被诱导恢复为未分化状态，实现该过程的前提条件是培育的组织或细胞处于____状态。其中过程____（填字母）一般不需要光照；通过过程b形成胚状体的根本原因是____。 (3)调控过程b和过程c细胞分裂与分化的关键性激素是____；其中，____（激素）比例偏高时，更有利于诱导生根。 (4) 若使用该植株的花粉进行单倍体育种，需对过程c得到的幼苗进行____处理，才能获得可育植株。 19.（原创）（12分）食蟹猴是与人类亲缘关系较近的非人灵长类动物，常被用作医学研究模型。我国科学家通过优化体细胞克隆技术，实现了食蟹猴的高效培育，其中快速去核、注核技术的突破，大幅提高了重构胚的成活率。下图为体细胞克隆食蟹猴的培育流程，请回答下列问题： (1) 研究人员需将采集的卵母细胞培养到____期，才能进行去核操作；在将胎猴的体细胞注入去核卵母细胞前，用灭活的仙台病毒对体细胞进行短暂处理，目的是____。 (2) 去核与注核操作都要求用时越短越好，原因是____；向重构胚中注入Kdm4d的mRNA、并用TSA处理，这两种物质发挥的作用分别是____、____。 (3) 在研究人类疾病致病机制、研发新药时，常选用食蟹猴作为模型而非小鼠，原因是____；在分组对照实验中，使用克隆猴比自然繁殖的猴效果更佳，理由是____。 （4）胚胎分割并非分割份数越多越好，原因是____________。 20.（原创）（12分）猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是导致生猪疫病的重要病原体，科研人员在PRRSV的ORF5基因中间插入荧光素酶基因（Fluc基因）和红色荧光蛋白基因（mCherry基因），构建了融合基因并获得重组病毒（PRRSV-Fluc-mCherry），为快速检测病毒感染和研究致病机制提供了工具。回答下列问题： (1)构建上述融合基因，需要借助的工具酶是限制酶和DNA连接酶。限制酶主要来源于原核生物，不能切割原核生物自身DNA分子的原因是________________________；DNA连接酶中，T4 DNA连接酶的特点是________________________；图中Hind Ⅲ和BamH Ⅰ两种限制酶的作用是________________________。 (2) 为验证重组病毒基因是否成功表达，科研人员将猪肺泡巨噬细胞（PAMs）培养一段时间后，平均分成A、B两组，其中A组接种重组病毒，B组接种________________________。支持“重组病毒基因成功表达”的实验结果为________________________。 (3)同时，科研人员分别测定了A、B两组的病毒数量变化，发现两者无显著差异，该结果表明________________________。因此，该重组病毒体系的构建可为后续研究PRRSV的致病机制及药物治疗奠定基础。 21.（原创）（12分）CRISPR-Cas9系统可将外源DNA片段定点插入受体细胞的染色体中。研究者将被编辑细胞的DNA片段连接成环，以此为模板，利用PCR技术扩增出插入位点两侧的未知序列，以确定插入片段的具体位置。已知插入片段（CRISPR片段）的部分序列如下，Hind Ⅲ酶的识别序列为 5' A↓AGCTT 3' 。回答下列问题： 图2：CRISPR片段已知序列（部分）： a链：5'-GATTACTAGGCCATAG……ATGTAGAGCTAGAC-3'  b链：3'-CTAATGATCCGGTATC……TACATCTCGATCTG-5'  (1) 扩增插入位点两侧的未知序列时，需要先根据________序列设计两种特异性引物。利用图中的引物________组合可扩增出两侧的未知序列。PCR反应中，“延伸”温度设定为72℃，原因是该温度下________。若初始CRISPR片段数量为a个，上游引物数:下游引物数=1:50，进行5轮循环后上游引物耗尽，则上游引物的数量为________条。 (2) 若只使用一种引物，通过PCR制备与CRISPR片段的b链相同的单链作为探针，所选引物的5'→3'前5个碱基序列为________。 (3) 对PCR产物测序，下列序列中（虚线省略部分序列），可能正确的是（ ） A.  5'-TCGACCACG……ATGTCGA-3'  B.  5'-AAATTCCATG……CTGAATT-3'  C.  5'-GCAAGCTGCGT……TCGGGAA-3'  D.  5'-TTGATACGC……CGAGTAC-3'  (4) PCR扩增产物可用________技术进行分离和鉴定。 学科网（北京）股份有限公司 $