高二期末必刷60题（期末复习专项训练）高二生物下学期苏教版

**基本信息** 聚焦高二生物核心实验模块，以微生物培养、细胞工程、基因工程为逻辑主线，通过60道典型题构建"原理理解-实验分析-技术应用"的三阶训练体系，强化生命观念与科学思维。 **专项设计** |模块|题量/典例|题型特征|知识逻辑| |----|-----------|----------|----------| |微生物培养与发酵工程|20题（如1/51题）|以培养基配方、发酵条件分析为主|从营养需求→培养技术→工业发酵，体现结构与功能观| |细胞工程|18题（如10/53题）|突出原生质体融合、组织培养流程|遵循"去壁→融合→脱分化→再分化"技术链，渗透物质与能量观| |基因工程及应用|16题（如24/58题）|聚焦限制酶选择、PCR扩增等操作|围绕"目的基因获取→载体构建→检测鉴定"逻辑链，培养科学探究能力| |综合实验探究|6题（如55/60题）|跨模块实验设计与结果分析|整合多技术手段解决实际问题，强化态度责任与创新思维|

高二期末必刷60题 一、单选题 1．高二某班生物学兴趣小组开展了微生物培养探究实验。他们在配制培养大肠杆菌的培养基时，加入了蛋白胨等成分；配制培养酵母菌的培养基时，加入了麦芽汁等成分。下列相关叙述错误的是（    ） A．大肠杆菌和酵母菌生长对pH的需求不同，灭菌后需要将培养基调至适宜的pH B．蛋白胨能为大肠杆菌提供碳源、氮源，麦芽汁也能为酵母菌提供碳源、氮源 C．大肠杆菌和酵母菌需要的营养成分不同，可能是因为细胞中酶的种类存在差异 D．若需要比较不同微生物形成的菌落差异，配制培养基时还需添加适量的琼脂 2．当某单一营养缺陷型菌株所需的营养大类确定后，就要确定其生长所需的特殊营养物质。首先对特殊营养物质进行编组，如表是对15种特殊营养物质进行的编组，编组完成后，将沾有组合特殊营养物质的滤纸片放在涂有试验菌甲、乙、丙的培养基上，培养并观察其生长情况，三种试验菌的生长谱如图所示。据图分析，下列叙述错误的是（　　） 组别 组合特殊营养物质 A 1 2 3 4 5 B 2 6 7 8 9 C 3 7 10 11 12 D 4 8 11 13 14 E 5 9 12 14 15 A．实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基 B．试验菌甲、乙自身分别不能合成特殊营养物质13、2 C．若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现两个生长圈 D．试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，产生了抑菌圈 3．下列关于生物技术实践中一些化学试剂使用的叙述，不正确的是（    ） A．可用酸性重铬酸钾检测果汁发酵后酒精的生成情况 B．可用酚红指示剂来检测培养基中尿素的分解情况 C．可用刚果红来检测培养基中纤维素的分解情况 D．可用醋酸洋红来检测培养基中花药的发育情况 4．某同学设计了以木质素为唯一碳源的甲培养基，以及添加了水溶蓝（一种能被漆酶催化分解的蓝色染料）的乙培养基，用以分离土壤中高效降解木质素的菌株。下列相关叙述错误的是（　　） A．甲培养基属于选择培养基，乙培养基可用于鉴定菌株的降解能力 B．在乙培养基上，能高效降解木质素的菌落周围会出现蓝色环带 C．分离纯化菌种时，接种工具和操作过程均需进行严格的灭菌处理 D．筛选出的菌株还需进行发酵实验以确定其降解木质素的实际效能 5．大豆异黄酮是腐乳毛坯发酵产生的次生代谢物，其合成由异黄酮合酶基因调控，具有降血压、缓解更年期综合征等功效，被称为“植物雌激素”。下列叙述错误的是（    ） A．家庭制作腐乳时，需多种微生物参与，起主要作用的是毛霉 B．基因可以通过控制酶的合成，间接控制大豆异黄酮的合成 C．在腐乳制作的过程中，有机物的种类和含量都在不断减少 D．大豆异黄酮的产生需要在一定的环境和时间条件下才能进行 6．如图是老陈醋的传统生产流程，下列相关叙述错误的是（    ） A．蒸熟高粱的目的是杀灭杂菌，同时使淀粉糊化，便于后续糖化 B．大曲中含有酵母菌、霉菌等多种微生物，可完成糖化和酒精发酵过程 C．过滤步骤可去除发酵液中的固体杂质，提升老陈醋的澄清度与口感 D．果醋发酵时，用重铬酸钾测定乙酸含量变化时，溶液灰绿色逐日加深 7．我国科学家利用液态厌氧发酵，高效产出乙醇和乙醇梭菌蛋白。下列错误的是（　　） A．进行该发酵工程的中心环节前需取乙醇梭菌菌种扩大培养 B．乙醇和乙醇梭菌单细胞蛋白都属于乙醇梭菌的次生代谢物 C．通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，可以降低生态足迹 D．发酵完成后，可通过过滤、沉淀等方法获得单细胞蛋白 8．产朊假丝酵母菌可利用淀粉水解液、制糖废液等廉价原料发酵生产单细胞蛋白，作为优质微生物饲料。下列叙述正确的有（　　） ①发酵前需对产朊假丝酵母进行菌种选育，以获得能高效利用糖类、菌体蛋白合成能力强的菌株 ②发酵培养基中除碳源外，还需添加氮源、无机盐和生长因子等 ③可通过连续培养的方式，不断补充新鲜原料、排出代谢废物，提高单细胞蛋白的生产效率 ④培养基中淀粉水解液的浓度不宜过高，否则会导致酵母菌细胞失水 ⑤发酵过程中pH会逐渐降低，应定期添加酸液以维持稳定的酸性环境 ⑥采用过滤、沉淀等方法分离产朊假丝酵母菌，干燥后即可获得单细胞蛋白产品 A．3项 B．4项 C．5项 D．6项 9．实验小组从患者胃组织中提取干细胞，在特殊培养条件下诱导其发育成模拟真实胃功能的类器官，培育出全球首个全功能的“迷你胃”。下列有关培育胃组织干细胞的叙述，错误的是（　　） A．用胃组织干细胞培育“迷你胃”的原理是细胞增殖和细胞核的全能性 B．应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中培养干细胞 C．在体外培养细胞时，必须保证环境是无菌、无毒的 D．动物细胞培养基中通常需加入血清、血浆等天然成分 10．研究人员用甘蓝型油菜（体细胞染色体数为38）与菘蓝（体细胞染色体数为14）进行体细胞杂交，培育出只含1条菘蓝染色体且抗病毒的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系，过程如图。减数分裂时，无法联会的染色体会随机移向细胞一极。下列说法正确的是（　　） A．可用电融合法或PEG诱导原生质体融合，并在低渗溶液中培养 B．杂种细胞经脱分化后形成杂种植株，体现了植物细胞具有全能性 C．BC1的染色体组成为PPQQR，其配子中染色体的数量为19-26条 D．从BC2中获得的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系均具有抗病毒特性 11．2025年，我国科研团队在《自然·生物技术》发表科研成果：通过优化铁皮石斛原生质体融合技术，成功获得兼具高产多糖和耐盐特性的杂种细胞。杂种细胞经液体培养基悬浮培养后，通过脱分化、再分化等过程最终发育成再生植株。下列叙述错误的是（　　） A．原生质体融合前需用酶解法去除细胞壁，为原生质体融合排除阻碍 B．悬浮培养时需定期更换培养基，以防止代谢产物积累抑制细胞生长 C．杂种细胞的脱分化阶段通常需在光照条件下进行，以诱导愈伤组织形成 D．再生植株需先移栽到已消毒的蛭石或珍珠岩等环境中炼苗，以提高移栽成活率 12．蝴蝶兰形成种子少且困难，不易进行常规繁殖，组织培养成为蝴蝶兰高效繁殖的重要手段（过程如下图）。下列叙述正确的是（　　） A．图中过程需经历愈伤组织阶段 B．生产兰花还可用体细胞胚发生途径 C．野生兰花花梗需灭菌后用无菌水冲洗 D．生根培养基配方可为LB培养基+0.1mg/LNAA 13．兰州百合栽培过程中易受病毒侵染，造成品质退化。某研究小组尝试通过组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如下图。下列叙述正确的是（　　） A．百合分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，因此可以获得脱毒苗 B．①为脱分化过程，1号培养基中的愈伤组织是定形的薄壁组织团块 C．3号培养基中的细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值大于1 D．细胞产物的工厂化生产需要利用以上三种培养基培养植物细胞 14．黄酮属于酚类化合物，是多种中药材的主要活性成分，图为两条生产黄酮的技术路径。下列叙述不正确的是（    ） A．黄酮由植物代谢过程中产生，属于次生代谢物 B．外植体需依次使用酒精和次氯酸钠溶液进行消毒处理 C．实施路径二时可将X分散为单个细胞或细胞团进行培养 D．①②③④过程所需培养基质中均需加入蔗糖等能源物质 15．紫草宁具有抗菌、消炎和抗肿瘤等活性，是世界上首例药用植物细胞工程产品，生产流程如下图所示，下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用酒精和次氯酸钠溶液对外植体进行消毒 B．诱导愈伤组织形成时通常需加入生长素和细胞分裂素 C．紫草宁是紫草的次生代谢产物，并不是紫草生长所必需的 D．外植体形成愈伤组织的过程不涉及基因的选择性表达 16．人参作为名贵中药材，其主要活性成分为人参皂苷。科研人员利用植物体细胞杂交技术构建“快速生长+高产人参皂苷”的研究方案如下。下列分析错误的是（    ） A．过程①为脱分化，不需要给予光照，与原细胞相比，愈伤组织的全能性更高 B．过程⑥的原理是植物细胞的全能性，用光学显微镜分析其染色体组成可以鉴定其是否为杂种植株 C．选择愈伤组织筛选高产细胞是因为其一直处于不断增殖状态，容易受到培养条件和诱变因素的影响 D．过程③中常采用灭活的病毒或聚乙二醇（PEG）诱导原生质体融合 17．猫疱疹病毒1型（FHV-1）具有包膜结构，包膜上的gB蛋白在病毒附着和入侵过程中发挥关键作用。研究人员针对gB蛋白制备了单克隆抗体，并利用间接ELⅠSA法检测其数量，基本原理如下图。下列相关叙述正确的是（　　） A．FHV-1的包膜和gB蛋白主要来源于病毒自身编码合成 B．上述测定过程中，酶标二抗直接与gB蛋白特异性结合 C．清洗的作用是去除未起作用的抗体与底物，以降低干扰 D．酶催化底物发生显色反应，颜色越深表示一抗数量越少 18．下列关于动物细胞工程的说法，不正确的有几项（    ） ①通过PEG融合法、电融合法等方法可以诱导两个动物细胞融合为一个细胞 ②动物细胞和癌细胞在培养过程中均会出现细胞贴壁和接触抑制的现象 ③灭活破坏了病毒的抗原结构，但保留其感染能力，可用于诱导动物细胞融合 ④体细胞核移植技术可以应用于模型动物的培养，研究疾病的致病机制 ⑤培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 ⑥培养悬浮生长的细胞时，培养瓶中的细胞需定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖 A．2项 B．3项 C．4项 D．5项 19．如图为牛的克隆过程示意图，下列叙述正确的是（　　） A．图示过程体现了乙牛体细胞的全能性 B．步骤③的目的是激活重构胚细胞分化 C．步骤①培养甲牛体细胞时需用胰蛋白酶分散细胞 D．胚胎移植后，重构胚的遗传物质发生稳定性差异 20．科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞），iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是（    ） A．体外培养小鼠成纤维细胞和iPS细胞时，定期更换培养液可以清除细胞的代谢物 B．选取的小鼠成纤维组织需经胃蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液 C．iPS细胞用于疾病治疗时存在分化为肿瘤细胞的风险 D．若iPS细胞取自病人，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应 21．我国科学家利用猕猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”，研究流程如下图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．猕猴睾丸中的精原细胞属于胚胎干细胞，没有发生分化 B．序号②处的细胞将来可发育形成胎儿的各种组织 C．胚胎干细胞培养时，需要放置在无菌且充满CO2的恒温培养箱中进行 D．上图所示过程为无性繁殖，“猴胚胎”的主要遗传特性与代孕受体无关 22．基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达）阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠，实验过程如图所示。有关叙述正确的是（     ） A．基因甲基化是通过抑制基因的翻译过程从而抑制基因的表达 B．体外培养卵母细胞时，为防止污染，需将培养皿置于二氧化碳培养箱中进行培养 C．“孤雌小鼠”的诞生全程无精子参与，其基因型与供体雌鼠基因型不一定相同 D．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展完成着床 23．在胚胎工程研究中，受精卵培养至囊胚后分三组处理：甲组直接移植：乙组体外暴露于生长因子液后移植：丙组在信号分子抑制剂中孵育后移植。结果甲组和乙组部分胚胎成功着床（胚胎和母体建立物质交换）并发育，丙组全部着床失败。下列叙述正确的是（　　） A．甲组结果说明胚胎着床不依赖于外界信号分子，完全自主 B．若乙组着床率高于甲组，可能因生长因子诱导基因突变增强适应性 C．丙组无法着床，表明信号通路正常激活是胚胎与子宫妊娠关系的前提 D．着床仅取决于受体子宫状态，三组差异均由受体个体差异导致 24．研究人员将PCR扩增得到的毒物诱导型启动子S（箭头表示转录方向）插入图中载体P区，构建表达载体，转入大肠杆菌，获得能够检测水中毒物的大肠杆菌。下列叙述正确的是（　　） A．引物I、II的5′应分别添加BamHI、XhoI的识别序列 B．启动子位于基因首端，是DNA聚合酶识别和结合的位点 C．可通过转基因大肠杆菌的荧光情况判断水中毒物情况 D．在添加氨苄青霉素的培养基上存活的菌株即为所需菌株 25．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（　　） A．以猪成熟红细胞为材料，加入蒸馏水涨破细胞后可提取到大量DNA B．DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度较高，在此浓度下可去除不溶于该浓度NaCl溶液的杂质 C．以洋葱为材料，将其切碎加研磨液研磨、过滤后，滤液放置4℃冰箱中静置几分钟后，DNA存在于沉淀物中 D．DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后溶液逐渐由无色变成蓝色 26．染色体的某一片段位置颠倒称为倒位。某患者的X染色体的S片段（远大于3000碱基对）发生了倒位，为检测其父母和姐姐的S片段是否发生了倒位，在图1的F1、F2、R1、R2中选择引物对X染色体DNA进行PCR扩增（只能扩增小于3000碱基对的片段），经电泳后，结果如图2所示。下列叙述错误的是（　　） A．患者母亲性染色体组成为X+X− B．患者为男性的概率是1 C．患者的姐姐不患病 D．患者的姐姐PCR扩增结果与母亲完全相同的概率为1 27．科研人员利用含氨苄青霉素抗性基因（AmpR）和四环素抗性基因（TetR）的质粒构建基因表达载体，质粒上各限制酶的酶切位点如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．用ScaI酶切质粒，会同时破坏两个标记基因的结构 B．用SalI酶切后构建的重组质粒，可在含氨苄青霉素的培养基中筛选出导入质粒的菌落 C．该质粒上的两个标记基因，均只含有一个限制酶的酶切位点 D．用PvuI酶切后，质粒的两个标记基因均会失去原有的生物学功能 28．2025年3月，窦科峰院士团队在《自然》期刊上发表论文，报告了世界首例利用转基因猪肝脏移植到脑死亡人体的成功案例。下列叙述错误的是（     ） A．培育转基因克隆猪用于器官移植，需评估其对生态环境和人体健康的生物安全性 B．鉴定转基因克隆猪是否培育成功，应从分子水平和个体生物学水平进行综合检测 C．对提供肝源的猪进行基因工程改造时，可直接操作其分裂旺盛的体细胞 D．敲除猪引发免疫排斥反应的关键基因是该技术成功的关键之一 29．下列关于生物技术的安全性和伦理问题的说法，正确的是（　　） A．试管婴儿技术和设计试管婴儿的区别之一为是否进行特定基因的检测 B．将玉米的淀粉基因与目的基因一起转入植物中，可防止转基因花粉的传播 C．大田种植转基因抗虫棉时会间隔种植少量非转基因棉花供棉铃虫取食，目的是维持棉田物种多样性 D．转基因食品中的目的基因会进入人体细胞，与人体DNA发生基因重组 30．一类称做“分子伴侣”的蛋白质可识别正在合成或折叠的多肽，并帮助这些多肽折叠、组装或转运，其本身不参与组成最终产物并可循环发挥作用。下列叙述正确的是（    ） A．“分子伴侣”对靶蛋白结构有高度的专一性 B．“分子伴侣”浸泡酒精中不会改变其生物活性 C．“分子伴侣”的空间结构一旦发生改变，则不可逆转 D．“分子伴侣”加工的直链八肽化合物中至少含有9个氧原子 二、多选题 31．图甲为实验室果酒、果醋制作的发酵装置，图乙为发酵过程中葡萄糖的物质转化路径。下列相关叙述正确的是（    ） A．利用该装置制作果酒时，应全程关闭阀a和阀b，营造严格的无氧发酵环境 B．图乙中过程①在有氧、无氧条件下均能发生，过程②仅在无氧条件下进行 C．制作果醋时，需持续打开阀b通入无菌空气，同时将发酵温度控制在30~35℃ D．图乙中过程③和过程④均有 CO₂生成，催化两个过程的菌种均为原核生物 32．抗生素是海水养殖中常用的有机抗菌药物，残留的抗生素会产生很多危害。研究人员欲从海水中筛选能高效降解不同抗生素的细菌，设计如下流程。下列相关叙述正确的是（　　） A．X培养基的作用是对采集到的微生物进行扩大培养 B．组别1、2、3的培养基应以不同种类的抗生素作为唯一碳源 C．不同组别的Z培养基上有可能分离出同种细菌 D．图示流程、器材以及培养基也能直接用于筛选降解抗生素的真菌 33．工业上常利用黑曲霉通过深层通气发酵生产柠檬酸，其发酵流程如图所示。下列分析正确的是（　　） A．种子培养基为固体培养基，可用于对黑曲霉进行扩大培养 B．发酵培养基和种子培养基加入到发酵罐前需经过严格灭菌处理 C．深层通气能够增加发酵罐内的溶氧量，有利于柠檬酸的积累 D．发酵结束之后，可以根据柠檬酸的性质采取适当的措施进行提取分离 34．老五甑（蒸馏酒用的锅）酿造法主要特点是混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒。将发酵后的四甑酒醅分层出窖，按一定比例加入新粮，分成五甑后依次蒸酒。蒸酒后一甑糟丢弃，另四甑料重新放回窖池发酵。糟醅配料时需润料、拌匀并堆积；蒸酒出甑后的粮糟需加水、摊凉、撒曲；粮糟入窖后需踩窖，以压紧发酵材料并封窖；窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌的载体，主要位于窖池底部和四壁，是生产浓香型白酒的基础。下列叙述正确的是（　　） A．该工艺可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累 B．窖泥的作用主要是提供酿酒微生物和以淀粉酶、蛋白酶为主的各种糖化酶类 C．摊凉可防止酵母等微生物死亡，踩窖可抑制好氧菌繁殖 D．可采用抽样检测法对窖池底部和四壁的窖泥微生物进行计数 35．甜叶菊是一种菊科多年生草本植物，其叶片产生的甜菊糖苷是重要的天然甜味剂。研究表明，甜菊糖苷在植物体内具有抵御植食动物和病原菌的作用。生产上常用植物组织培养技术进行规模化繁殖。其过程如图所示，下列相关叙述错误的是（    ） 外植体愈伤组织甜叶菊植株提取甜菊糖苷 A．①过程中一般不需要光照，②过程中生长素与细胞分裂素的比值低有利于芽的生成 B．在组织培养过程中，用射线等诱变因素处理细胞，可诱发基因突变和基因重组，为育种提供丰富材料 C．甜菊糖苷属于次生代谢产物，在植物整个生命周期的所有组织中持续合成 D．可用植物细胞培养生产甜菊糖苷，将外植体培养至愈伤组织阶段即可大量产生 36．下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述错误的是（　　） A．提取小鼠脾中的骨髓瘤细胞后与W细胞融合 B．提取B淋巴细胞后用PML蛋白免疫获得W细胞 C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 37．组蛋白乙酰化水平异常是制约异种体细胞核移植（iSCNT）效率的关键因素，下表为组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Sc）对iSCNT胚胎发育效率的影响结果。下列相关叙述错误的是（　　） 组别 克隆胚胎数 卵裂率（%） 4-细胞期率（%） 8-细胞期率（%） 对照组 95 9.47±1.70 6.32±1.07 5.26±0.85 Sc处理组 91 23.08±2.94 18.68±3.25 9.89±1.95 A．体细胞核移植中的“去核”就是将卵母细胞的细胞核去除 B．体细胞与去核卵母细胞融合时膜上蛋白质和脂质分子重新排布 C．提高组蛋白去乙酰化水平能提高胚胎发育效率 D．Sc对iSCNT胚胎发育效率的影响程度随发育进程的推进而增强 38．将能杀灭玉米螟的苏云金杆菌（甲）和能杀灭蚊子的灭蚊球孢菌（乙）作为亲本菌株，进行原生质体融合育种，以得到既能杀蚊又能杀螟的融合菌株。下图为部分育种过程，下列叙述错误的有（　　） A．育种过程中加入的酶可能是纤维素酶和果胶酶 B．为维持原生质体稳定性，整个融合过程需使用等渗或略高渗溶液 C．原生质体融合过程依赖于生物膜的流动性，常用灭活的仙台病毒诱导 D．融合菌株的遗传物质是甲、乙菌株遗传物质的简单相加，属于多倍体 39．我国在胚胎移植与异种器官移植领域取得重要突破，2025年3月成功将基因编辑猪肾脏移植至终末期肾病患者体内，其核心流程为：①从猪耳提取体细胞→②基因编辑→③构建胚胎→④移植至代孕母猪体内→培育出供体。下列相关叙述错误的有（　　） A．步骤①体细胞培养时通常添加维生素以防止微生物污染 B．步骤②的目的之一是消除猪细胞表面引发人免疫排斥的关键抗原 C．步骤③需向重组细胞中添加促性腺激素以激活其发育 D．步骤④应对代孕母体进行超数排卵和同期发情处理 40．下列有关生物技术与工程的叙述，错误的是（    ） A．涂布平板操作时，应待涂布器冷却后蘸取菌液在平板上涂布 B．单克隆抗体制备时，经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞均能产生所需抗体 C．胚胎工程中常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志 D．诱导植物原生质体和动物细胞融合时，都可使用PEG或灭活的病毒 41．植物组织培养技术常用于兰花种苗的规模化繁殖，大大降低了兰花的市场价格，普通百姓也能购买观赏。下列相关说法正确的是（　　） A．同一培养基诱导兰花愈伤组织生芽、生根，该过程为再分化 B．培养基中添加的蔗糖既能提供营养物质又能调节渗透压 C．植物组织培养过程中，使用的培养基均属于固体培养基 D．获得的试管苗应先移植到经消毒后的蛭石环境中 42．重叠延伸PCR技术可通过设计带有互补末端的引物，实现不同DNA片段的无缝拼接与长片段基因扩增，无需限制酶切割和DNA连接酶连接，在基因工程领域应用广泛。下图为利用该技术拼接并扩增融合基因AD的流程，下列相关叙述正确的是（    ） A．PCR1与PCR2的扩增过程中，需加入解旋酶和耐高温的DNA 聚合酶催化反应 B．产物AB 与CD可通过末端互补序列配对结合，其3'端可互为引物完成链的延伸 C．引物b与引物c的互补序列越长，该技术拼接DNA片段的特异性就越低 D．过程②获得的融合基因AD，可加入引物a和引物d进行PCR扩增以富集目标产物 43．大肠杆菌的培养分为生长期和稳定期两个阶段，其胞内莽草酸代谢途径如图甲。由于野生型大肠杆菌胞内酶A活性弱，且莽草酸会被快速转化为细胞生长必需物，细胞中无法大量积累莽草酸。为保证大肠杆菌生长期正常生长且稳定期大量积累莽草酸，研究者敲除野生型大肠杆菌某个相关内源酶基因，并导入图乙两种质粒，调控代谢途径中关键酶在不同阶段的合成与分解速率。下列说法错误的是（　　） 注：M、N为酶A或酶B基因；启动子Pgeo仅在生长期开启转录；基因X编码的阻遏蛋白可阻遏启动子PX开启转录；带SsrA短肽的蛋白质可被大肠杆菌逐渐降解。 A．敲除的内源酶基因是酶B基因 B．质粒①中的M表示酶A基因 C．改造后的菌株在生长期可正常合成细胞生长必需物 D．改造后的菌株胞内阻遏蛋白X的含量进入稳定期后不再变化 44．某质粒结构、TaPPR13基因编辑区域和限制酶识别序列及切割位点如图所示。研究人员以限制酶SalⅠ和XhoⅠ、DNA连接酶为操作工具，构建含TaPPR13基因的重组质粒。基因与质粒以相同限制酶切割位点进行连接的为正连接质粒，以不同限制酶切割位点进行连接的为反连接质粒。下列叙述正确的是（    ） A．正连接质粒能被限制酶SalⅠ和XhoⅠ切断 B．反连接质粒能被限制酶SalⅠ和XhoⅠ切断 C．正连接质粒能被限制酶NocⅠ和MonⅠ切断 D．反连接质粒能被限制酶NocⅠ和MonⅠ切断 45．染色体的某一片段位置颠倒称为倒位。某男性患者X染色体的S片段（远大于3000碱基对）发生了倒位，为检测其父母和姐姐的S片段是否发生了倒位，在图1的F1、F2、R1、R2中选择引物对X染色体DNA进行PCR扩增（只能扩增小于3000碱基对的片段），经电泳后，结果如图2所示。下列叙述正确的是（　　） A．正常X染色体DNA以F1、R2进行PCR无法得到产物 B．患者父亲性染色体组成为X+Y，母亲性染色体组成为X+X- C．患者姐姐的X染色体DNA以F1、R1进行PCR可能无产物 D．患者F1、F2扩增后的电泳结果无条带是因为S片段太长 46．抗体由4条肽链构成，结构分为可变区（V区）和恒定区（C区，是抗体分子中相对较为保守的区域，在不同物种间的差异较大），与抗原特异性结合的区域为CDR区，位于Ⅴ区中。单克隆抗体在疾病诊断和病原体鉴定中发挥重要作用，但鼠源的单抗容易在人体内引发人抗鼠抗体反应（HAMA），从而削弱其治疗的有效性。科学家对鼠源杂交抗体进行改造，生产出效果更好的鼠—人嵌合抗体，主要流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．鼠—人嵌合抗体至少含有4个游离氨基，其抗体特异性由肽链的C区决定 B．鼠源单抗易引发人体免疫排斥反应与其可变区有关 C．构建鼠—人嵌合抗体表达载体时需限制酶和DNA聚合酶 D．鼠—人嵌合抗体的研制过程属于蛋白质工程，图中转染细胞的方法可能是显微注射法 47．β-葡萄糖苷酶（BglB）是工业生产中降解纤维素的关键酶，研究人员利用基因工程技术，将编码BglB的基因转移到了大肠杆菌细胞中并使之表达。图1表示BglII、BamHI两种限制酶的识别序列和酶切位点，质粒和目的基因上的限制酶酶切位点如图2、3所示。将重组质粒转入某种大肠杆菌，该细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养。下列叙述错误的是（    ） 注：leu2 基因是控制合成亮氨酸的基因，KanR是卡那霉素抗性基因 A．图1中BglII与BamHI的识别序列不同，酶切后形成的黏性末端也不同 B．用BglII和BamHI酶切后的质粒与目的基因可用E.coli DNA连接酶“缝合” C．使用BglII处理重组质粒，可以得到长度为3300bp的链状DNA片段 D．用含亮氨酸和卡那霉素的培养基可以成功筛选出含有重组质粒的大肠杆菌 48．下列有关基因工程的叙述，错误的是（　　） A．引物长度越长、CG含量越高，PCR时需设定的复性温度越低 B．通过反转录法获得的目的基因中不含启动子、终止子序列 C．可通过诱变育种获得含有 Bt抗虫蛋白(来自苏云金杆菌)的玉米品种 D．可在载体中人工构建诱导型启动子，以激活目的基因的表达 49．肾小管上皮细胞部分生理过程如图甲所示，其中cAMP是由ATP在酶的催化下形成的，在调节细胞代谢方面发挥重要作用；该细胞的细胞膜局部亚显微结构如图乙所示，其中1～5为运输方式。下列相关叙述正确的是（    ） A．据图推测cAMP增多可能改变了某些酶的活性从而促进了水通道蛋白的合成 B．肾小管上皮细胞吸水的方式有图乙中的2和3两种 C．图乙中的5可表示肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的过程 D．图乙中的1和5两种运输方式都会受O2浓度的影响 50．图1为某种绿色植物叶片的气孔结构示意图、所示箭头为水分流动的总方向，中间两个呈肾形的细胞称为保卫细胞，其细胞壁近气孔侧更厚是调节气孔开闭的结构基础。研究人员将该叶片放在内部温度为15℃的密闭容器中，研究光照强度与光合作用速率的关系，下列有关叙述错误的是（    ） A．图1水分开始向箭头方向流动时，叶肉细胞C5含量将减少 B．图1所示过程中保卫细胞的吸水能力逐渐减弱 C．据图2分析，在1klx光照条件下，该叶片8小时光合作用产生O2量为179．2mL D．图1水分流动箭头方向发生改变时，图2中B点向右移动 三、解答题 51．卡拉胶是一种大分子聚合物硫酸多糖，溶解性较差，可被卡拉胶酶降解。降解产物具有多种生物活性，如抗炎、抗凝血等，在食品、医药等领域具有广阔的应用前景。科研人员利用腐烂的角叉菜为材料，筛选了高产卡拉胶酶的菌株，过程如下图。 (1)筛选高产卡拉胶酶菌株的培养基按物理性质是_____培养基，为检测该培养基灭菌是否彻底，应采用的检测方法是将______（填“未接种”或“接种”）的培养基放在恒温培养箱中培养，检验是否有菌落产生。 (2)培养基中的卡拉胶被卡拉胶酶降解，在菌落周围会形成______。根据上图中初筛的结果判断，欲进一步纯化培养菌株时，应挑取培养基a中的菌落_______（填字母）。 (3)结合上图分析，科研人员采用了_______法对产卡拉胶酶菌株进行了初筛。从试管⑤中分别取0.2 mL稀释液，涂布在三个上述培养基上，培养72小时后，三个培养基上的菌落数分别为：56、59、62，推测腐烂角叉菜液中菌株数为_______个/L。利用上述方法进行微生物分离计数时，通常需要用到的实验用具有_____（填下图中相应的序号）。 52．异亮氨酸是一种必需氨基酸，具有多种生理作用和功效。广泛用于医药、食品和饲料等领域。发酵法是目前生产异亮氨酸的最主要的方法。科研人员欲从土壤中筛选能产生异亮氨酸的菌株，进行如图所示的实验，回答下列问题： (1)发酵工程一般包括菌种的选育、___________、培养基的配制、灭菌、接种、发酵产品的分离、提纯等方面。其中___________是发酵工程的中心环节，要随时取样检测培养基中的微生物数目、产物浓度等，以了解发酵进度。研究人员先从发酵罐内取10mL发酵液，进行如下操作，则可以推测发酵液中每毫升含菌数为___________个。 (2)实验中的培养基需要进行___________灭菌，待培养基冷却到50℃左右时，进行倒平板，培养基凝固后需___________，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，以免造成污染。⑤过程的接种方法是___________。过程⑥中菌种可以接种到试管的斜面固体培养基上，在合适的条件下培养一段时间，然后置于___________(填温度)冰箱中保存。 (3)研究人员为初步筛选高产的异亮氨酸菌株，将待测菌种接种到含有异亮氨酸缺陷型指示菌的平板上，培养后观察待测菌种周围指示菌的生长圈，结果如图：初步筛选时配置的固体培养基中应该不含___________；图中待测菌种___________(填“字母”)产异亮氨酸的能力最强。 53．利用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”杂种植株，实验过程如图所示，但是该杂种植株并非是想象中的地上长番茄，地下结马铃薯的“超级作物”。 (1)材料中所用到的植物体细胞杂交技术应用了植物原生质体融合和植物组织培养技术，人工诱导原生质体融合常用的化学方法，除PEG融合法外，还有________，植物组织培养技术的原理是________。 (2)图中①步骤所示用________酶除去植物细胞的细胞壁，分离出有活力的原生质体。后续要促进杂种细胞分裂生长，培养基中应有________和________两类关键激素。 (3)由杂种细胞培育成试管苗，需要经过细胞的④________和⑤________过程。 (4)利用马铃薯和番茄的________得到单倍体植株，然后取单倍体植株的细胞进行体细胞杂交，再用________处理之后也可得到可育的“番茄—马铃薯”杂种植株。 54．Ⅰ、下图表示科学家通过植物细胞工程，培育“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的过程。根据所学知识完成下列问题： Ⅱ、银杏的次生代谢产物，如银杏黄酮（具有抑制癌细胞增殖，扩张冠脉血管、增加冠脉血液流量和解除痉挛的作用）、银杏内酯（具有促进脑血微循环、抑菌抗炎的作用）等，一般从叶片中取得，但传统栽植方法周期长、成本高、受环境影响大，无法很好满足市场需求。因而利用组织培养技术，从获得的细胞中提取，具有一定的研究意义与应用前景。请回答下列相关问题： 外植体愈伤组织试管苗植株 (1)人工诱导原生质体融合的方法基本可分为两大类-物理法和化学法，其中化学法包括_____和_____。 (2)“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的体细胞内含_____条染色体，属于_____倍体植株。 (3)研究表明，选择银杏叶片比选择胚作为外植体材料成功率更低，原因可能是诱导叶片脱分化形成_____的难度较大。因此，往往选择细胞生长分裂旺盛的部位作为外植体，但外植体也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞虽细胞分裂较旺盛，但在_____时次氯酸钠等药品渗透也较快，在后续用_____多次冲洗也不易清除，导致细胞易失活甚至破裂。 (4)为获得银杏的次生代谢产物，_____（“需要”或“不需要”）走完上述流程图的全过程。 (5)此外，研究表明，用通气较为不良的介质封口，如塑料膜或玻璃纸，可以提升黄酮和内酯的产量，可能原因是_____。 55．紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的新型牧草，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图：（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的功能） (1)在制备两种植物原生质体时，先将两种细胞分别置于0.5-0.6mol/L的甘露醇溶液中，从而有利于用________去除细胞壁，分别获得两种植物的原生质体。 (2)①过程获得的只有异源融合体才能存活和具有再生能力，请推测原因是________。 (3)步骤②为________，经过步骤②、③到形成再生植株，体现的主要原理是________。 (4)谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质，科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量，想通过制备相应的单克隆抗体进行检测，部分流程如下图： 图中注射的特定抗原是________。经过a步骤，细胞两两融合的产物有_______种。在步骤b的基础上经过步骤c________和抗体检测筛选得到符合要求的杂交瘤细胞。 (5)百脉根花的提取液可用于生产护肤品，为研究百脉根花提取液对受损皮肤的修复效果，需要一批遗传性状基本一致的实验小鼠，研究人员从________（填“同一”或“不同”）小鼠个体中取出体细胞核进行体细胞核移植，形成的多个胚胎再通过_______技术，以进一步增加胚胎的数量，最后移植到经过处理________的受体雌鼠中获得实验小鼠。 56．甲状旁腺激素（PTH）是一种含有84个氨基酸的多肽，是调节钙磷代谢的主要激素之一、 临床上PTH被作为低钙血症等疾病的重要诊断指标。拟制备抗PTH单克隆抗体（单抗），并建立定量检测PTH的方法。 (1)人工合成PTH肽链7～25氨基酸组成的多肽（A肽）和39～84氨基酸组成的多肽（B肽），分别用A肽、B肽多次免疫小鼠。 ①取小鼠脾脏中的B细胞与骨髓瘤细胞混合培养，用动物细胞融合特有的_____法促进二者融合，并用特定的选择培养基进行筛选。对获得的杂交瘤细胞进行_____和_____，经多次筛选获得能稳定分泌抗PTH单抗的两种细胞株。细胞培养过程中需要定期更换培养液，目的是_____（答一点）。培养过程的气体环境为_____的混合气体。 ②将两种杂交瘤细胞株分别注射到小鼠腹腔内，一段时间后分离获得抗PTH的两种单抗，分别是对应A肽的A1，对应B肽的B1。 (2)研究人员将A1、B1用于定量检测PTH，思路为：将B1固定在固相载体上作为捕获抗体，用酶标记A1，酶可将无色底物转化成棕色产物，从而建立定量检测PTH的方法（如下图）。 ①据图分析，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中PTH的关系是捕获抗体和酶标抗体特异性结合于PTH的_____（“相同”或“不同”）位点。 ②若要定量检测PTH，在图中所示步骤的基础上还需_____。（多选） A．测定已知浓度梯度的PTH对应的棕色产物产量 B．测定已知浓度梯度的底物对应的棕色产物产量 C．加入底物后的相同时间内测定棕色产物产量 D．在不添加PTH的条件下测定棕色产物产量排除无关变量干扰 (3)研究表明，人体内除全长PTH外，还存在PTH的7～84氨基酸肽段，它与全长PTH的生物学功能完全相反。为更准确地检测血中全长PTH的含量，其改进思路为_____。 (4)利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体，鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除（称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应）。如图为抗体结构示意图，通过制备人鼠嵌合抗体可以减弱HAMA反应。制备过程中需将编码抗体_____（填编号）的基因片段进行拼接，最终表达出嵌合抗体。 57．为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物（ADC）来对乳腺癌患者进行治疗，过程如图1所示。 (1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自______________细胞。 (2)步骤①的原理是_________，与诱导植物原生质体融合的不同的处理方法是用______。 (3)步骤②的筛选方法是___________。体外培养杂交瘤细胞的气体环境是________。由于人们对细胞所需营养物质尚未全部研究清楚，体外培养杂交瘤细胞时，培养液中除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的___________。 (4)研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。 ①ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为________能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于_______原理。 ②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于______，可导致癌细胞凋亡。 58．番茄生长过程中经常遭受低温冷害，冷害容易造成落花落果、果实畸形，降低品质和经济效益。研究表明水孔蛋白参与植物的低温适应过程。为培育抗冻转基因番茄，研究人员将天山雪莲水孔蛋白S基因转入番茄植株。回答下列问题： (1)根据已知的S基因核苷酸序列设计P1、P2两种引物（见图1），已知P1、P2分别携带BamHⅠ和SalⅠ两种限制酶的识别序列（均为含6个核苷酸的回文序列），根据引物P1的碱基序列分析，BamHⅠ的识别序列为5´-_________3´；引物P2与模板链结合后，引物的_________（填“3´”或“5´”）端不能与模板链完全配对。 P1：5´-TGCGGATCCCAAACCCTAACCTCACTCC-3´ P2：5´-TCGGTCGACAGCAAGTGCAGCTCCAATG-3´ 图1 (2)采用PCR方法扩增目的基因，扩增出的DNA片段可用_________电泳进行检测，当DNA分子的构象相同时，在同一次电泳中，DNA的迁移速率主要与_________有关。 (3)将目的基因插入Ti质粒，再将重组质粒导入农杆菌，利用农杆菌侵染番茄愈伤组织，培育获得再生苗。提取再生苗的核DNA和mRNA进行PCR鉴定，图2为其中6个株系的鉴定结果： 根据鉴定结果，株系_________可作为备选株系，进行后续实验，判断依据是_________。 (4)现获得了S基因成功表达的株系A，若要研究S基因成功表达是否提高了转基因番茄的耐低温能力，应如何进行后续实验？写出实验思路：_________。 59．玉米的籽粒状态决定了籽粒的发芽能力，干瘪的籽粒无发芽能力。研究人员利用农杆菌转化法将含抗除草剂基因的T-DNA随机整合到玉米的染色体基因组上，获得了两株籽粒干瘪的纯合突变体甲、乙。Ti质粒的部分信息如图1，抗除草剂基因的信息如图2，限制酶的识别序列及切割位点如表所示。 限制酶 BamH I Bcl I Sau3A I Hind Ⅲ 识别序列及切割位点 5'-GGA↓TCC-3' 5'-TG↓ATCA-3' 5'-GA↓TC-3' 5'-AA↓GCTT-3' (1)PCR扩增抗除草剂基因时，图2中的引物1需要添加限制酶_____的识别序列，另一个引物的部分序列需与抗除草剂基因_____（填“a链”或“b链”）相应部分的序列相同。 (2)PCR过程中将反应体系的温度调节到72℃左右的目的是_____。若PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____（填序号）。 ①降低变性温度②降低复性温度③升高复性温度④重新设计引物 (3)将PCR产物和Ti质粒重组后，导入农杆菌，然后侵染玉米细胞，在含潮霉素的固体培养基上_____（填“能”或“不能”）筛选出转基因玉米细胞，其原因是_____。 (4)为进一步确定突变体甲、乙是不是T-DNA插入玉米基因组中的同一基因产生的，提取玉米基因组DNA，经酶切后产生含有T-DNA的基因组片段（图3）。首先将图3的片段_____，才能利用引物P1和P2成功扩增未知序列。PCR扩增出未知序列后，进行了一系列操作，其中可以判断出2条片段的未知序列是否属于同一个基因的操作为_____（填“琼脂糖凝胶电泳”或“测序和序列比对”）。 60．镉离子（Cd2+）是一种在环境中广泛存在的、易在体内蓄积的有毒重金属离子，对生态系统和人类健康构成严重威胁，因此Cd2+的检测就尤为重要。科研人员构建可对Cd2+响应的大肠杆菌传感器，其原理和构建过程分别如图1、图2所示。已知CadR基因与启动子a相连，czcR3可启动下游基因的表达，P1、P2、P3均为引物。回答下列问题： (1)据图1分析，CadR基因的表达是否受Cd2+的诱导？________（填“是”或“否”），判断依据是________。 (2)据图2分析，应选用限制酶________切割目的基因，以实现质粒与目的基因的高效重组。重组后利用PCR技术扩增GFP基因时，应选择引物P1和________。已知GFP基因转录得到的RNA中缺乏起始密码子AUG，为了保证GFP基因能被限制酶识别且能正常表达，应该在引物P1的5′端增加的碱基序列为5′-_______-3′。 (3)为筛选出导入重组质粒并且成功表达目的基因的目标菌，可以将转化后的大肠杆菌接种到含有________的培养基上，观察菌落是否有绿色荧光出现。 第1页 共4页 ◎ 第2页 共4页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二期末必刷60题 一、单选题 1．A 2．C 3．D 4．B 5．C 6．D 7．B 8．C 9．A 10．C 11．C 12．B 13．A 14．D 15．D 16．D 17．C 18．B 19．C 20．B 21．D 22．C 23．C 24．C 25．B 26．D 27．B 28．C 29．A 30．D 二、多选题 31．BC 32．ABC 33．CD 34．ACD 35．BCD 36．ABC 37．ACD 38．ACD 39．ACD 40．ABD 41．BD 42．BD 43．BD 44．AD 45．ABC 46．ABC 47．ACD 48．ACD 49．ABD 50．ABD 三、解答题 51．【答案】(1) 固体 未接种 (2) 透明圈 C (3) 稀释涂布平板 2.95×1012 ①③④ 52．【答案】(1) 扩大培养 发酵罐发酵 1.7×109 (2) 高压蒸汽 倒置 稀释涂布平板法(或平板划线法) 4℃ (3) 异亮氨酸 A 53．【答案】(1) 高Ca2+-高pH融合法 植物细胞的全能性 (2) 纤维素酶和果胶酶 生长素 细胞分裂素 (3) 脱分化 再分化 (4) 花药/雄配子 秋水仙素 54．【答案】(1) PEG融合法 高Ca2+-高pH融合法 (2) 38 四 (3) 愈伤组织 消毒 无菌水 (4)不需要 (5)低氧胁迫细胞诱导产生次生代谢物 55．【答案】(1)纤维素酶和果胶酶 (2)异源融合体因代谢互补可恢复生长并获得再生能力（或答异源融合体具有完整的有氧呼吸过程，能存活和具有再生能力） (3) 脱分化 植物细胞的全能性 (4) 谷蛋白 3 克隆化培养 (5) 同一 胚胎分割 同期发情 56．【答案】(1) 灭活病毒诱导 克隆化培养 抗体检测 清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，同时提供营养物质，防止分裂受阻 95%空气和5%二氧化碳 (2) 不同 ACD (3)制备针对PTH1～6氨基酸组成的多肽的单抗为酶标抗体或者捕获抗体 (4)①④ 57．【答案】(1)人的乳腺癌/乳腺癌 (2) 细胞膜的流动性 灭活的病毒 (3) 选择培养基筛选 95%的空气和5%的CO2 动物血清/血清 (4) 单克隆抗体 抗原-抗体杂交 细胞核 58．【答案】(1) GGATCC 5´ (2) 琼脂糖凝胶 DNA分子的大小 (3) 1和4 株系1和4中有目的基因和相应的mRNA (4)将生理状况相似的转基因番茄A和非转基因番茄在相同的低温条件下进行培养，观察两种番茄的生长情况（答案合理即可） 59．【答案】(1) BamH I a链 (2) 合成新的DNA子链（或延伸；或使4种脱氧核苷酸在耐高温DNA聚合酶的作用下连接到DNA子链上） ②④ (3) 不能 潮霉素抗性基因不在T-DNA 的序列中，无法随T-DNA整合到玉米细胞的染色体上并实现表达 (4) 环化 测序和序列比对 60．(1) 否 无论是否有Cd2+存在，CadR基因都会表达出相应的蛋白质 (2) EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ P2 GAATTCATG (3)四环素和Cd2+ 第1页 共4页 ◎ 第2页 共4页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二期末必刷60题 一、单选题 1．高二某班生物学兴趣小组开展了微生物培养探究实验。他们在配制培养大肠杆菌的培养基时，加入了蛋白胨等成分；配制培养酵母菌的培养基时，加入了麦芽汁等成分。下列相关叙述错误的是（    ） A．大肠杆菌和酵母菌生长对pH的需求不同，灭菌后需要将培养基调至适宜的pH B．蛋白胨能为大肠杆菌提供碳源、氮源，麦芽汁也能为酵母菌提供碳源、氮源 C．大肠杆菌和酵母菌需要的营养成分不同，可能是因为细胞中酶的种类存在差异 D．若需要比较不同微生物形成的菌落差异，配制培养基时还需添加适量的琼脂 【答案】A 【详解】A、调节培养基pH应在灭菌操作前完成，若灭菌后再调节pH会引入外来杂菌，造成培养基污染，A错误； B、蛋白胨含有糖类、有机氮等物质，可为大肠杆菌提供碳源、氮源，麦芽汁含有糖类、氨基酸等成分，也能为酵母菌提供碳源、氮源，B正确； C、酶具有专一性，不同微生物细胞内酶的种类存在差异，可利用的营养物质种类不同，因此二者需要的营养成分存在差异，C正确； D、菌落是微生物在固体培养基表面生长形成的肉眼可见的子细胞群体，观察菌落需使用固体培养基，琼脂是常用的凝固剂，因此配制培养基时需添加琼脂，D正确。 2．当某单一营养缺陷型菌株所需的营养大类确定后，就要确定其生长所需的特殊营养物质。首先对特殊营养物质进行编组，如表是对15种特殊营养物质进行的编组，编组完成后，将沾有组合特殊营养物质的滤纸片放在涂有试验菌甲、乙、丙的培养基上，培养并观察其生长情况，三种试验菌的生长谱如图所示。据图分析，下列叙述错误的是（　　） 组别 组合特殊营养物质 A 1 2 3 4 5 B 2 6 7 8 9 C 3 7 10 11 12 D 4 8 11 13 14 E 5 9 12 14 15 A．实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基 B．试验菌甲、乙自身分别不能合成特殊营养物质13、2 C．若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现两个生长圈 D．试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，产生了抑菌圈 【答案】C 【详解】A、本实验要确定某单一营养缺陷型菌株所需的特殊营养物质，该菌在不含特殊营养物质的基本培养基上不能生存，加入特殊营养物质才能生存，因此实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基，A正确； B、与其他组（A、B、C、E组）相比，D组含有特殊营养物质13，试验菌甲在D上能生存，在其他组上不能生存，因此推测试验菌甲不能合成特殊营养物质13；同理，A和B组共同含有的特殊营养物质是2，试验菌乙在A组和B组上能生存，在其他组上不能生存，说明试验菌乙不能合成特殊营养物质2，B正确； C、与其他组相比，A组含有特殊营养物质1，据此推测试验菌丙不能合成特殊营养物质1，这三种菌都能合成10和11，因此无论营养物质中是否缺乏该营养，都能生存，若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现5个生长圈，C错误； D、试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，抑制了滤纸片周围的菌种的生长，因此产生了抑菌圈，D正确。 3．下列关于生物技术实践中一些化学试剂使用的叙述，不正确的是（    ） A．可用酸性重铬酸钾检测果汁发酵后酒精的生成情况 B．可用酚红指示剂来检测培养基中尿素的分解情况 C．可用刚果红来检测培养基中纤维素的分解情况 D．可用醋酸洋红来检测培养基中花药的发育情况 【答案】D 【详解】A、酸性重铬酸钾与酒精在酸性条件下反应呈灰绿色，用于检测酒精生成，A正确； B、酚红指示剂在尿素被分解为氨（pH升高）时变红，用于检测尿素分解，B正确； C、刚果红与纤维素形成红色复合物，纤维素分解后出现透明圈，用于检测纤维素分解，C正确； D、醋酸洋红为碱性染料，用于细胞核（染色体）染色，而花药发育需观察细胞形态变化，并非通过染色检测，D错误。 故选D。 4．某同学设计了以木质素为唯一碳源的甲培养基，以及添加了水溶蓝（一种能被漆酶催化分解的蓝色染料）的乙培养基，用以分离土壤中高效降解木质素的菌株。下列相关叙述错误的是（　　） A．甲培养基属于选择培养基，乙培养基可用于鉴定菌株的降解能力 B．在乙培养基上，能高效降解木质素的菌落周围会出现蓝色环带 C．分离纯化菌种时，接种工具和操作过程均需进行严格的灭菌处理 D．筛选出的菌株还需进行发酵实验以确定其降解木质素的实际效能 【答案】B 【详解】A、甲培养基以木质素为唯一碳源，仅允许能利用木质素的微生物生长，属于选择培养基；乙培养基添加水溶蓝（漆酶底物），能通过变色反应鉴定菌株的漆酶活性及木质素降解能力，属于鉴定培养基，A正确； B、水溶蓝能被漆酶催化分解而褪色。高效降解木质素的菌株通常分泌漆酶，其在乙培养基上生长时，菌落周围的水溶蓝被分解，应形成无色或褪色环带，而非蓝色环带，B错误； C、分离纯化菌种时，接种环、涂布器等工具需灼烧灭菌，操作过程需在无菌环境（如超净工作台）中进行，以防止杂菌污染，C正确； D、初步筛选的菌株需通过液体发酵实验，测定其对木质素的实际降解率或相关酶活，以评估其应用潜力。实验室筛选后需进行扩大培养和效能测定，D正确。 5．大豆异黄酮是腐乳毛坯发酵产生的次生代谢物，其合成由异黄酮合酶基因调控，具有降血压、缓解更年期综合征等功效，被称为“植物雌激素”。下列叙述错误的是（    ） A．家庭制作腐乳时，需多种微生物参与，起主要作用的是毛霉 B．基因可以通过控制酶的合成，间接控制大豆异黄酮的合成 C．在腐乳制作的过程中，有机物的种类和含量都在不断减少 D．大豆异黄酮的产生需要在一定的环境和时间条件下才能进行 【答案】C 【详解】A、家庭制作腐乳过程中有毛霉、酵母菌、曲霉等多种微生物参与，其中起主要作用的是毛霉，毛霉分泌的蛋白酶、脂肪酶可分解豆腐中的大分子有机物，A正确； B、由题干可知，大豆异黄酮的合成由异黄酮合酶基因调控，即基因通过控制异黄酮合酶的合成控制代谢过程，间接控制大豆异黄酮的合成，B正确； C、腐乳制作过程中，微生物呼吸消耗有机物，因此有机物总量减少，但大分子有机物会被分解为多肽、氨基酸、甘油、脂肪酸等多种小分子有机物，有机物种类增加，C错误； D、大豆异黄酮是发酵产生的次生代谢物，次生代谢物需要微生物生长到特定阶段，且在适宜的温度、pH等环境条件下才能合成，D正确。 6．如图是老陈醋的传统生产流程，下列相关叙述错误的是（    ） A．蒸熟高粱的目的是杀灭杂菌，同时使淀粉糊化，便于后续糖化 B．大曲中含有酵母菌、霉菌等多种微生物，可完成糖化和酒精发酵过程 C．过滤步骤可去除发酵液中的固体杂质，提升老陈醋的澄清度与口感 D．果醋发酵时，用重铬酸钾测定乙酸含量变化时，溶液灰绿色逐日加深 【答案】D 【详解】A、蒸熟高粱的目的是杀灭杂菌，同时使淀粉糊化，便于后续糖化，有利于后续过程的进行，A正确； B、大曲中含有酵母菌、霉菌等多种微生物，可完成糖化和酒精发酵过程，其中霉菌可完成糖化过程，而酵母菌是酒精发酵的主要菌种，B正确； C、过滤可以去除发酵液中的不溶性固体杂质，提高老陈醋的澄清度，改善口感，C正确； D、果酒发酵时，用酸性的重铬酸钾测定酒精含量变化时，溶液灰绿色逐日加深，D错误。 7．我国科学家利用液态厌氧发酵，高效产出乙醇和乙醇梭菌蛋白。下列错误的是（　　） A．进行该发酵工程的中心环节前需取乙醇梭菌菌种扩大培养 B．乙醇和乙醇梭菌单细胞蛋白都属于乙醇梭菌的次生代谢物 C．通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，可以降低生态足迹 D．发酵完成后，可通过过滤、沉淀等方法获得单细胞蛋白 【答案】B 【详解】A、发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，在进行该环节前，需要对乙醇梭菌菌种进行扩大培养，以获得足量纯种菌种用于接种，A正确； B、乙醇是乙醇梭菌的次生代谢物，但乙醇梭菌单细胞蛋白是菌体本身，不属于次生代谢物， B错误； C、该工艺以工业尾气为原料生产清洁能源乙醇，提高了资源利用率，可减少化石能源消耗、降低废弃物排放，因此可以降低生态足迹，C正确； D、单细胞蛋白是微生物菌体，发酵完成后，可通过过滤、沉淀等方法从发酵液中分离获得，D正确。 8．产朊假丝酵母菌可利用淀粉水解液、制糖废液等廉价原料发酵生产单细胞蛋白，作为优质微生物饲料。下列叙述正确的有（　　） ①发酵前需对产朊假丝酵母进行菌种选育，以获得能高效利用糖类、菌体蛋白合成能力强的菌株 ②发酵培养基中除碳源外，还需添加氮源、无机盐和生长因子等 ③可通过连续培养的方式，不断补充新鲜原料、排出代谢废物，提高单细胞蛋白的生产效率 ④培养基中淀粉水解液的浓度不宜过高，否则会导致酵母菌细胞失水 ⑤发酵过程中pH会逐渐降低，应定期添加酸液以维持稳定的酸性环境 ⑥采用过滤、沉淀等方法分离产朊假丝酵母菌，干燥后即可获得单细胞蛋白产品 A．3项 B．4项 C．5项 D．6项 【答案】C 【详解】①发酵工程的首要环节是菌种选育，生产单细胞蛋白（菌体蛋白）的目标下，选育高效利用糖类、蛋白合成能力强的菌株可提升产量，叙述正确； ②微生物生长需要碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等营养物质，因此培养基除碳源外还需添加氮源、无机盐、生长因子等，叙述正确； ③连续培养可及时补充新鲜原料、排出代谢废物，延长菌体生长的稳定期，有效提高单细胞蛋白的生产效率，叙述正确； ④淀粉水解液浓度过高会导致外界渗透压远高于酵母菌细胞内渗透压，引发细胞失水甚至死亡，因此浓度不宜过高，叙述正确； ⑤发酵过程中酵母菌产生的CO₂、有机酸会使pH逐渐降低，维持pH稳定需添加碱性物质中和，添加酸液会进一步降低pH，叙述错误； ⑥单细胞蛋白即微生物菌体，可通过过滤、沉淀分离产朊假丝酵母菌，干燥后即可得到单细胞蛋白饲料产品，叙述正确。 综上，正确的叙述共5项，C符合题意。 9．实验小组从患者胃组织中提取干细胞，在特殊培养条件下诱导其发育成模拟真实胃功能的类器官，培育出全球首个全功能的“迷你胃”。下列有关培育胃组织干细胞的叙述，错误的是（　　） A．用胃组织干细胞培育“迷你胃”的原理是细胞增殖和细胞核的全能性 B．应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中培养干细胞 C．在体外培养细胞时，必须保证环境是无菌、无毒的 D．动物细胞培养基中通常需加入血清、血浆等天然成分 【答案】A 【详解】A、细胞全能性的定义是已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能，用胃组织干细胞培育“迷你胃”仅得到胃器官，未发育为完整个体，该过程利用的是细胞增殖和细胞分化，未体现细胞核的全能性，A错误； B、动物细胞培养的标准气体环境就是95%的空气（为细胞有氧呼吸提供氧气）和5%的CO2（维持培养液的pH稳定），B正确； C、体外培养动物细胞时，必须保证无菌、无毒的环境，否则杂菌、有毒物质会导致细胞代谢异常甚至死亡，C正确； D、目前人类尚未完全明确动物细胞所需的全部营养物质，因此动物细胞培养基中通常需加入血清、血浆等天然成分，补充未知的必需营养，D正确。 10．研究人员用甘蓝型油菜（体细胞染色体数为38）与菘蓝（体细胞染色体数为14）进行体细胞杂交，培育出只含1条菘蓝染色体且抗病毒的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系，过程如图。减数分裂时，无法联会的染色体会随机移向细胞一极。下列说法正确的是（　　） A．可用电融合法或PEG诱导原生质体融合，并在低渗溶液中培养 B．杂种细胞经脱分化后形成杂种植株，体现了植物细胞具有全能性 C．BC1的染色体组成为PPQQR，其配子中染色体的数量为19-26条 D．从BC2中获得的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系均具有抗病毒特性 【答案】C 【详解】A、诱导原生质体融合的方法有电融合法、PEG融合法等，但原生质体在低渗溶液中会吸水涨破，所以不能在低渗溶液中培养，A错误；    B、杂种细胞经脱分化形成愈伤组织，再经再分化形成杂种植株，才体现植物细胞具有全能性，而不是仅脱分化，B错误；    C、甘蓝型油菜体细胞染色体数为38，染色体组成为PPQQ，菘蓝体细胞染色体数为14，染色体组成为RR，所以杂种细胞染色体组成为PPQQRR，杂种植株与甘蓝型油菜PPQQ杂交，得到的BC1染色体组成为PPQQR，BC1在产生配子时，菘蓝的染色体（R 中的染色体）可能全部丢失，也可能有1-7条进入配子（菘蓝有7对染色体），甘蓝型油菜产生的配子染色体组成为 PQ，含有 19 条染色体，故BC1配子中染色体的数量为19-26条，C正确；    D、从BC2中获得的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系是随机获得的，不是所有都具有抗病毒特性，D错误。 11．2025年，我国科研团队在《自然·生物技术》发表科研成果：通过优化铁皮石斛原生质体融合技术，成功获得兼具高产多糖和耐盐特性的杂种细胞。杂种细胞经液体培养基悬浮培养后，通过脱分化、再分化等过程最终发育成再生植株。下列叙述错误的是（　　） A．原生质体融合前需用酶解法去除细胞壁，为原生质体融合排除阻碍 B．悬浮培养时需定期更换培养基，以防止代谢产物积累抑制细胞生长 C．杂种细胞的脱分化阶段通常需在光照条件下进行，以诱导愈伤组织形成 D．再生植株需先移栽到已消毒的蛭石或珍珠岩等环境中炼苗，以提高移栽成活率 【答案】C 【详解】A、植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，原生质体融合前用纤维素酶和果胶酶进行酶解去壁，可排除细胞壁对原生质体融合的阻碍，A正确； B、悬浮培养过程中细胞代谢会产生有害代谢产物，积累后会抑制细胞生长，定期更换培养基可清除代谢废物、补充营养，保障细胞正常生长，B正确； C、杂种细胞脱分化形成愈伤组织的阶段通常需要避光处理，光照易诱导细胞发生分化，不利于愈伤组织的形成，C错误； D、植物组织培养得到的再生植株适应外界环境的能力弱，先移栽到消毒的蛭石或珍珠岩等环境炼苗，可使其逐步适应自然环境，提高移栽成活率，D正确。 12．蝴蝶兰形成种子少且困难，不易进行常规繁殖，组织培养成为蝴蝶兰高效繁殖的重要手段（过程如下图）。下列叙述正确的是（　　） A．图中过程需经历愈伤组织阶段 B．生产兰花还可用体细胞胚发生途径 C．野生兰花花梗需灭菌后用无菌水冲洗 D．生根培养基配方可为LB培养基+0.1mg/LNAA 【答案】B 【详解】A、图示过程以带芽花梗为外植体直接诱导形成丛芽，可通过诱导芽的分生组织增殖直接获得丛芽，不需要经历脱分化形成愈伤组织的阶段，A错误； B、植物组织培养生产植株有两种常见途径，除图示的器官发生途径外，还可采用体细胞胚发生途径，诱导形成体细胞胚后直接发育为完整个体，B正确； C、灭菌会彻底杀死所有微生物，同时也会杀死作为外植体的野生兰花花梗的活细胞，因此外植体仅需进行消毒处理，C错误； D、LB培养基是培养细菌等微生物的培养基，植物组织培养的生根培养基应以MS培养基为基础添加适宜浓度的生长素类似物，D错误。 13．兰州百合栽培过程中易受病毒侵染，造成品质退化。某研究小组尝试通过组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如下图。下列叙述正确的是（　　） A．百合分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，因此可以获得脱毒苗 B．①为脱分化过程，1号培养基中的愈伤组织是定形的薄壁组织团块 C．3号培养基中的细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值大于1 D．细胞产物的工厂化生产需要利用以上三种培养基培养植物细胞 【答案】A 【详解】A、植物分生区细胞分裂速度快，病毒极少甚至无病毒，因此选取分生区组织进行组织培养可获得脱毒苗，A正确； B、①为脱分化过程，形成的愈伤组织是无定形状态、排列疏松的薄壁组织团块，不具有定形特点，B错误； C、植物组织培养中，细胞分裂素与生长素浓度比值小于1时有利于根的分化，3号培养基需要诱导根的形成，因此该比值小于1，C错误； D、细胞产物的工厂化生产仅需要培养到愈伤组织阶段，只需要1号培养基即可，无需利用2、3号培养基，D错误。 14．黄酮属于酚类化合物，是多种中药材的主要活性成分，图为两条生产黄酮的技术路径。下列叙述不正确的是（    ） A．黄酮由植物代谢过程中产生，属于次生代谢物 B．外植体需依次使用酒精和次氯酸钠溶液进行消毒处理 C．实施路径二时可将X分散为单个细胞或细胞团进行培养 D．①②③④过程所需培养基质中均需加入蔗糖等能源物质 【答案】D 【详解】A、黄酮属于酚类化合物，是植物代谢产生的、并非植物生长发育必需的次生代谢物，是中药材的活性成分，A正确； B、植物组织培养时对外植体消毒，通常依次使用体积分数70%左右的酒精和次氯酸钠溶液处理，最后用无菌水冲洗残留消毒剂，B正确； C、路径二为细胞培养生产黄酮，X是外植体脱分化形成的愈伤组织，可将其分散为单个细胞或小细胞团进行悬浮培养，通过细胞增殖获得大量细胞后提取黄酮，C正确； D、③过程是脱毒苗培育为完整植株，脱毒苗已经分化出芽、含有叶绿体，可通过光合作用合成有机物，若移栽到室外基质中培养，培养基质不需要额外添加蔗糖等能源物质，因此并非四个过程的培养基质都需要加入蔗糖，D错误。 15．紫草宁具有抗菌、消炎和抗肿瘤等活性，是世界上首例药用植物细胞工程产品，生产流程如下图所示，下列相关叙述错误的是（　　） A．可使用酒精和次氯酸钠溶液对外植体进行消毒 B．诱导愈伤组织形成时通常需加入生长素和细胞分裂素 C．紫草宁是紫草的次生代谢产物，并不是紫草生长所必需的 D．外植体形成愈伤组织的过程不涉及基因的选择性表达 【答案】D 【详解】A、植物组织培养过程中，可先后使用酒精和次氯酸钠溶液对外植体进行表面消毒，杀灭外植体表面携带的微生物，A正确； B、诱导外植体脱分化形成愈伤组织时，培养基中通常需要添加生长素和细胞分裂素，调控细胞的分裂和脱分化过程，B正确； C、紫草宁属于紫草的次生代谢产物，这类物质不是植物生长、发育所必需的物质，C正确； D、外植体形成愈伤组织的过程是脱分化，该过程中细胞的形态、功能发生改变，本质依然是基因的选择性表达，D错误。 16．人参作为名贵中药材，其主要活性成分为人参皂苷。科研人员利用植物体细胞杂交技术构建“快速生长+高产人参皂苷”的研究方案如下。下列分析错误的是（    ） A．过程①为脱分化，不需要给予光照，与原细胞相比，愈伤组织的全能性更高 B．过程⑥的原理是植物细胞的全能性，用光学显微镜分析其染色体组成可以鉴定其是否为杂种植株 C．选择愈伤组织筛选高产细胞是因为其一直处于不断增殖状态，容易受到培养条件和诱变因素的影响 D．过程③中常采用灭活的病毒或聚乙二醇（PEG）诱导原生质体融合 【答案】D 【详解】A、过程①是脱分化形成愈伤组织的过程，脱分化阶段不需要光照；愈伤组织分化程度远低于原细胞，全能性更高，A正确； B、过程⑥是愈伤组织再分化形成杂种植株，原理是植物细胞的全能性；杂种植株的染色体组成是两种亲本细胞的染色体组合，可通过光学显微镜观察染色体的数目、形态鉴定是否为杂种植株，B正确； C、愈伤组织持续进行有丝分裂，增殖旺盛，细胞分裂时DNA复制易受培养条件、诱变因素影响发生变异，因此适合用于筛选高产突变细胞，C正确； D、诱导植物原生质体融合的方法包括聚乙二醇（PEG）诱导、电融合等，灭活的病毒是诱导动物细胞融合的特有方法，不能用于植物原生质体融合，D错误。 17．猫疱疹病毒1型（FHV-1）具有包膜结构，包膜上的gB蛋白在病毒附着和入侵过程中发挥关键作用。研究人员针对gB蛋白制备了单克隆抗体，并利用间接ELⅠSA法检测其数量，基本原理如下图。下列相关叙述正确的是（　　） A．FHV-1的包膜和gB蛋白主要来源于病毒自身编码合成 B．上述测定过程中，酶标二抗直接与gB蛋白特异性结合 C．清洗的作用是去除未起作用的抗体与底物，以降低干扰 D．酶催化底物发生显色反应，颜色越深表示一抗数量越少 【答案】C 【详解】A、FHV-1是有包膜的动物病毒，其包膜主要来源于宿主细胞的细胞膜，gB蛋白由病毒基因编码合成，A错误； B、酶标二抗是针对一抗的抗体，仅能与一抗特异性结合，不能直接结合gB蛋白（抗原），B错误； C、实验过程中清洗的作用是去除未结合的游离一抗、未结合的酶标二抗以及未反应的底物，避免这些物质干扰显色结果，降低实验误差，C正确； D、酶催化底物发生显色反应，颜色越深说明结合的酶标二抗数量越多，对应的与抗原结合的一抗数量越多，D错误。 18．下列关于动物细胞工程的说法，不正确的有几项（    ） ①通过PEG融合法、电融合法等方法可以诱导两个动物细胞融合为一个细胞 ②动物细胞和癌细胞在培养过程中均会出现细胞贴壁和接触抑制的现象 ③灭活破坏了病毒的抗原结构，但保留其感染能力，可用于诱导动物细胞融合 ④体细胞核移植技术可以应用于模型动物的培养，研究疾病的致病机制 ⑤培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 ⑥培养悬浮生长的细胞时，培养瓶中的细胞需定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖 A．2项 B．3项 C．4项 D．5项 【答案】B 【详解】①诱导动物细胞融合的常用方法包括PEG融合法（化学法）、电融合法（物理法）、灭活病毒诱导法（生物法），①正确； ②正常动物细胞培养时会出现细胞贴壁、接触抑制的现象，而癌细胞遗传物质发生改变，可无限增殖，不存在接触抑制，②错误； ③灭活病毒诱导动物细胞融合的原理是，灭活处理破坏了病毒的感染能力，保留其抗原结构（融合活性），题干表述相反，③错误； ④体细胞核移植技术可培育出遗传背景一致的模型动物，用于研究疾病的致病机制，④正确； ⑤动物细胞培养的培养液需要含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养物质，还需添加动物血清等天然成分以补充未知营养，⑤正确； ⑥只有贴壁生长的细胞需要定期用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离后分瓶培养，悬浮生长的细胞可直接通过离心收集后分瓶，无需胰蛋白酶处理，⑥错误。 综上所述，①④⑤正确，②③⑥错误，即错误的叙述有3项。B正确，ACD错误。 19．如图为牛的克隆过程示意图，下列叙述正确的是（　　） A．图示过程体现了乙牛体细胞的全能性 B．步骤③的目的是激活重构胚细胞分化 C．步骤①培养甲牛体细胞时需用胰蛋白酶分散细胞 D．胚胎移植后，重构胚的遗传物质发生稳定性差异 【答案】C 【详解】A、分析题图可知，甲牛提供了细胞核，最后培育出了克隆动物，所以该过程体现了甲牛体细胞核的全能性，A错误； B、步骤③的目的是激活重构胚，使其完成细胞分裂和分化进程，B错误； C、体细胞培养时，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织块，使细胞分散为单个细胞，便于贴壁生长和传代培养，C正确； D、胚胎移植后，重构胚发生细胞分裂和分化，其遗传物质通常不发生改变，D错误。 20．科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞），iPS细胞增殖分化后可形成多种组织细胞，用于多种疾病的治疗。如图为该技术的实验示意图，下列有关说法错误的是（    ） A．体外培养小鼠成纤维细胞和iPS细胞时，定期更换培养液可以清除细胞的代谢物 B．选取的小鼠成纤维组织需经胃蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液 C．iPS细胞用于疾病治疗时存在分化为肿瘤细胞的风险 D．若iPS细胞取自病人，经诱导并移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应 【答案】B 【详解】A、体外培养细胞时，定期更换培养液可以清除细胞代谢物、补充营养物质，防止代谢产物积累对细胞造成毒害，A正确； B、选取的小鼠成纤维组织需经胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理成单个细胞后制成细胞悬液，由于动物细胞培养的适宜为，胃蛋白酶在此环境中没有活性，B错误； C、iPS 细胞具有较强的增殖能力，若分化失控，可能会形成肿瘤细胞，因此用于疾病治疗时存在风险，C正确； D、若 iPS 细胞取自病人自身，其表面的组织相容性抗原与病人一致，移植回病人体内后理论上可以避免免疫排斥反应，D正确。 21．我国科学家利用猕猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”，研究流程如下图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．猕猴睾丸中的精原细胞属于胚胎干细胞，没有发生分化 B．序号②处的细胞将来可发育形成胎儿的各种组织 C．胚胎干细胞培养时，需要放置在无菌且充满CO2的恒温培养箱中进行 D．上图所示过程为无性繁殖，“猴胚胎”的主要遗传特性与代孕受体无关 【答案】D 【详解】A、胚胎干细胞存在于早期胚胎，猕猴睾丸中的精原细胞不属于胚胎干细胞，A错误； B、序号②处的细胞为滋养层细胞，发育成胎膜和胎盘，胚胎分割时是对内细胞团进行均等切割，B错误； C、动物细胞培养和早期胚胎培养需要在95%空气和5%二氧化碳的环境中培养，C错误； D、上图所示过程没有经过精子和卵细胞的结合，所以属于无性繁殖，人工“猴胚胎”的遗传特性与提供胚胎干细胞的供体基本一致，与代孕受体无关，代孕受体提供营养，D正确。 22．基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达）阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠，实验过程如图所示。有关叙述正确的是（     ） A．基因甲基化是通过抑制基因的翻译过程从而抑制基因的表达 B．体外培养卵母细胞时，为防止污染，需将培养皿置于二氧化碳培养箱中进行培养 C．“孤雌小鼠”的诞生全程无精子参与，其基因型与供体雌鼠基因型不一定相同 D．移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展完成着床 【答案】C 【详解】A、基因甲基化属于表观遗传修饰，作用于DNA水平，通过抑制基因的转录过程抑制基因表达，并非抑制翻译，A错误； B、体外培养卵母细胞时，二氧化碳培养箱的作用是维持培养液的pH稳定，防止污染需要通过无菌操作、添加抗生素等措施实现，B错误； C、该“孤雌小鼠”由极体和修饰后的次级卵母细胞融合发育而来，全程无精子参与；若供体雌鼠为杂合子，减数分裂过程中等位基因分离，融合后得到的个体为纯合子，基因型与供体不同，若供体为纯合子则基因型可能与供体相同，因此其基因型与供体雌鼠基因型不一定相同，C正确； D、囊胚进一步扩大，会导致囊胚外层的透明带破裂，胚胎从透明带中伸展出来完成孵化，而非滋养层破裂，D错误。 23．在胚胎工程研究中，受精卵培养至囊胚后分三组处理：甲组直接移植：乙组体外暴露于生长因子液后移植：丙组在信号分子抑制剂中孵育后移植。结果甲组和乙组部分胚胎成功着床（胚胎和母体建立物质交换）并发育，丙组全部着床失败。下列叙述正确的是（　　） A．甲组结果说明胚胎着床不依赖于外界信号分子，完全自主 B．若乙组着床率高于甲组，可能因生长因子诱导基因突变增强适应性 C．丙组无法着床，表明信号通路正常激活是胚胎与子宫妊娠关系的前提 D．着床仅取决于受体子宫状态，三组差异均由受体个体差异导致 【答案】C 【详解】A、甲组直接移植到母体后，胚胎仍可获得母体提供的信号分子，胚胎着床不是完全自主过程，A错误； B、本实验中生长因子是作为信号分子调节胚胎生理活动，不是诱导基因突变增强适应性；基因突变具有低频性，不可能是乙组着床率更高的原因，B错误； C、丙组用信号分子抑制剂处理后，全部着床失败，说明信号通路正常激活，是胚胎和母体建立妊娠关系（着床）的前提，C正确； D、本实验三组的差异来自对胚胎的不同处理，且着床依赖胚胎和受体子宫双方的状态，不是仅由受体决定，D错误。 24．研究人员将PCR扩增得到的毒物诱导型启动子S（箭头表示转录方向）插入图中载体P区，构建表达载体，转入大肠杆菌，获得能够检测水中毒物的大肠杆菌。下列叙述正确的是（　　） A．引物I、II的5′应分别添加BamHI、XhoI的识别序列 B．启动子位于基因首端，是DNA聚合酶识别和结合的位点 C．可通过转基因大肠杆菌的荧光情况判断水中毒物情况 D．在添加氨苄青霉素的培养基上存活的菌株即为所需菌株 【答案】C 【详解】A、启动子S的转录方向为引物I→引物II，插入载体后需要启动下游绿色荧光蛋白基因的转录，因此插入后启动子的转录方向需要朝向绿色荧光蛋白基因。按A添加酶切位点会导致启动子方向相反，无法驱动目的基因表达，因此引物末端的酶切位点序列添加错误，A错误； B、启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，不是DNA聚合酶，B错误； C、S是毒物诱导型启动子，只有水中存在毒物时，S才会启动，驱动下游绿色荧光蛋白基因表达，因此可通过大肠杆菌的荧光情况（有无、强度）判断水中毒物的情况，C正确； D、氨苄青霉素抗性基因完整存在于载体上，即使是未插入启动子S的空载体，也能让大肠杆菌在氨苄青霉素培养基上存活，因此存活的菌株不一定是所需的重组菌株，D错误。 25．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（　　） A．以猪成熟红细胞为材料，加入蒸馏水涨破细胞后可提取到大量DNA B．DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度较高，在此浓度下可去除不溶于该浓度NaCl溶液的杂质 C．以洋葱为材料，将其切碎加研磨液研磨、过滤后，滤液放置4℃冰箱中静置几分钟后，DNA存在于沉淀物中 D．DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后溶液逐渐由无色变成蓝色 【答案】B 【详解】A、猪是哺乳动物，其成熟红细胞无细胞核和众多细胞器，几乎不含DNA，无法提取到大量DNA，A错误； B、DNA在2mol/L NaCl溶液中溶解度较高，部分杂质不溶于该浓度的NaCl溶液，可通过过滤去除此类不溶杂质，B正确； C、洋葱研磨过滤后DNA溶解在滤液中，4℃静置时沉淀物为不溶性杂质，DNA仍存在于滤液中，C错误； D、DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色需要沸水浴加热的条件，仅混匀不会发生显色反应，D错误。 26．染色体的某一片段位置颠倒称为倒位。某患者的X染色体的S片段（远大于3000碱基对）发生了倒位，为检测其父母和姐姐的S片段是否发生了倒位，在图1的F1、F2、R1、R2中选择引物对X染色体DNA进行PCR扩增（只能扩增小于3000碱基对的片段），经电泳后，结果如图2所示。下列叙述错误的是（　　） A．患者母亲性染色体组成为X+X− B．患者为男性的概率是1 C．患者的姐姐不患病 D．患者的姐姐PCR扩增结果与母亲完全相同的概率为1 【答案】D 【详解】A、父亲仅能扩增出正常X染色体（X+）对应的产物（F1F2、R1R2），无法扩增倒位X（X−）对应的产物（F1R1、F2R2），说明父亲基因型为X+Y，仅含正常X。母亲四种引物组合都能扩增出产物，说明母亲同时含X+和X−，基因型为X+X−，A正确； B、患者仅能扩增出X−对应的产物，无法扩增X+对应的产物，说明患者仅含X−；父亲只能给患者遗传X+或Y，若患者获得X+就会出现X+对应的条带，与结果矛盾，因此患者获得父亲的Y染色体，基因型为X−Y，一定是男性，B正确； C、患者的姐姐是女性，必然获得父亲的X+（父亲只有X+），因此姐姐基因型为1/2X+X+、1/2X+X−：无论是X+X+还是X+X−，都含有正常X+，因此姐姐一定不患病，C正确； D、患者的姐姐只有基因型为X+X−时，PCR扩增结果才和母亲（X+X−）完全相同，该概率为1/2，D错误。 27．科研人员利用含氨苄青霉素抗性基因（AmpR）和四环素抗性基因（TetR）的质粒构建基因表达载体，质粒上各限制酶的酶切位点如图所示。下列相关叙述正确的是（    ） A．用ScaI酶切质粒，会同时破坏两个标记基因的结构 B．用SalI酶切后构建的重组质粒，可在含氨苄青霉素的培养基中筛选出导入质粒的菌落 C．该质粒上的两个标记基因，均只含有一个限制酶的酶切位点 D．用PvuI酶切后，质粒的两个标记基因均会失去原有的生物学功能 【答案】B 【详解】A、ScaⅠ的酶切位点仅位于Ampᴿ内部，只会破坏氨苄青霉素抗性基因，不会破坏四环素抗性基因，A错误； B、SalI的酶切位点位于Tetᴿ内部，用SalI酶切构建重组质粒时，Tetᴿ因插入目的基因被破坏，而Ampᴿ结构完整未受影响，因此导入质粒（包括空质粒和重组质粒）的菌落均可在含氨苄青霉素的培养基中生长，可通过该培养基筛选出导入质粒的菌落，B正确； C、该质粒中Ampᴿ含有PvuⅠ和ScaⅠ两个酶切位点，Tetᴿ含有HindⅢ、SphⅠ和SalⅠ三个酶切位点，并非均只含一个酶切位点，C错误； D、PvuⅠ的酶切位点仅位于Ampᴿ内部，只会使氨苄青霉素抗性基因失活，四环素抗性基因仍保持原有功能，D错误。 28．2025年3月，窦科峰院士团队在《自然》期刊上发表论文，报告了世界首例利用转基因猪肝脏移植到脑死亡人体的成功案例。下列叙述错误的是（     ） A．培育转基因克隆猪用于器官移植，需评估其对生态环境和人体健康的生物安全性 B．鉴定转基因克隆猪是否培育成功，应从分子水平和个体生物学水平进行综合检测 C．对提供肝源的猪进行基因工程改造时，可直接操作其分裂旺盛的体细胞 D．敲除猪引发免疫排斥反应的关键基因是该技术成功的关键之一 【答案】C 【详解】A、转基因克隆猪属于转基因生物，存在基因扩散、携带潜在病原体等风险，因此培育时需评估其对生态环境和人体健康的生物安全性，A正确； B、鉴定转基因克隆猪是否培育成功，分子水平可检测目的基因是否整合、是否转录翻译出对应产物，个体生物学水平可检测是否具备预期性状，B正确； C、动物体细胞的全能性受到严格限制，直接对体细胞进行基因改造无法培育出完整个体，动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞，C错误； D、异种器官移植的主要障碍是免疫排斥反应，敲除猪引发免疫排斥的关键基因可降低受体的排斥反应，是该技术成功的关键之一，D正确。 29．下列关于生物技术的安全性和伦理问题的说法，正确的是（　　） A．试管婴儿技术和设计试管婴儿的区别之一为是否进行特定基因的检测 B．将玉米的淀粉基因与目的基因一起转入植物中，可防止转基因花粉的传播 C．大田种植转基因抗虫棉时会间隔种植少量非转基因棉花供棉铃虫取食，目的是维持棉田物种多样性 D．转基因食品中的目的基因会进入人体细胞，与人体DNA发生基因重组 【答案】A 【详解】A、试管婴儿技术用于辅助不孕不育家庭生育，无需进行特定基因检测；设计试管婴儿通常为满足治疗疾病等需求，会在胚胎移植前进行特定基因的检测，A正确； B、α-淀粉酶基因可破坏花粉中淀粉的储存，导致花粉不育，从而防止转基因植物通过花粉传播外源基因，故可将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，可防止转基因花粉的传播，B错误； C、大田种植转基因抗虫棉时间隔种植非转基因棉花，目的是降低棉铃虫抗性基因频率的上升速度，延缓高抗药性棉铃虫群体的出现，C错误； D、转基因食品中的目的基因本质为DNA，进入人体消化道后会被消化酶分解为小分子核苷酸，无法以完整基因的形式进入人体细胞，也不会和人体DNA发生基因重组，D错误。 30．一类称做“分子伴侣”的蛋白质可识别正在合成或折叠的多肽，并帮助这些多肽折叠、组装或转运，其本身不参与组成最终产物并可循环发挥作用。下列叙述正确的是（    ） A．“分子伴侣”对靶蛋白结构有高度的专一性 B．“分子伴侣”浸泡酒精中不会改变其生物活性 C．“分子伴侣”的空间结构一旦发生改变，则不可逆转 D．“分子伴侣”加工的直链八肽化合物中至少含有9个氧原子 【答案】D 【详解】A、“分子伴侣”可识别并帮助多种不同的正在合成或折叠的多肽完成折叠，对靶蛋白没有高度的专一性，A错误； B、“分子伴侣”的本质是蛋白质，酒精会使蛋白质的空间结构被破坏发生变性，丧失生物活性，B错误； C、“分子伴侣”可循环发挥作用，说明其发挥功能过程中发生的空间结构改变是可逆转的，C错误； D、每一个氨基酸至少含有一个氨基（-NH2）和一个羧基（-COOH），直链八肽化合物由8个氨基酸脱去7分子水形成，其中8个氨基酸中至少的氧原子数为8×2=16，7分子水（H2O）包含的氧原子数7，直链八肽化合物至少有氧原子8×2-7=9，D正确。 二、多选题 31．图甲为实验室果酒、果醋制作的发酵装置，图乙为发酵过程中葡萄糖的物质转化路径。下列相关叙述正确的是（    ） A．利用该装置制作果酒时，应全程关闭阀a和阀b，营造严格的无氧发酵环境 B．图乙中过程①在有氧、无氧条件下均能发生，过程②仅在无氧条件下进行 C．制作果醋时，需持续打开阀b通入无菌空气，同时将发酵温度控制在30~35℃ D．图乙中过程③和过程④均有 CO₂生成，催化两个过程的菌种均为原核生物 【答案】BC 【详解】A、制作果酒时，酵母菌无氧呼吸产生酒精和CO₂，需关闭阀a隔绝氧气，但要定期打开阀b排出产生的CO₂，不能全程关闭所有阀门，A错误； B、图乙中过程①是细胞呼吸的第一阶段，葡萄糖分解为丙酮酸，该过程在酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸中均可发生；过程②是无氧呼吸的第二阶段，丙酮酸转化为乙醇和CO₂，该过程仅在无氧条件下进行，B正确； C、醋酸菌是严格好氧菌，果醋发酵的最适温度为30~35℃，该装置中阀b连接长管深入发酵液，是进气口，因此制作果醋时需持续打开阀b通入无菌空气，同时控制好发酵温度，C正确； D、过程③是酵母菌的有氧呼吸第二、三阶段，会产生CO₂，酵母菌是真核生物；过程④为醋酸发酵，若以酒精为底物发酵，产物仅为醋酸和水，无CO₂生成，因此两个过程并非均有CO₂生成，且催化过程③的菌种不是原核生物，D错误。 32．抗生素是海水养殖中常用的有机抗菌药物，残留的抗生素会产生很多危害。研究人员欲从海水中筛选能高效降解不同抗生素的细菌，设计如下流程。下列相关叙述正确的是（　　） A．X培养基的作用是对采集到的微生物进行扩大培养 B．组别1、2、3的培养基应以不同种类的抗生素作为唯一碳源 C．不同组别的Z培养基上有可能分离出同种细菌 D．图示流程、器材以及培养基也能直接用于筛选降解抗生素的真菌 【答案】ABC 【详解】A、X培养基属于富集培养基，作用是对采集到的微生物进行扩大培养，增加目标微生物的数量，A正确； B、实验目的是筛选能高效降解不同抗生素的细菌，所以组别1、2、3的培养基需要以不同种类的抗生素作为唯一碳源，这样只有能降解对应抗生素的微生物可以生长，B正确； C、不同抗生素可能被同一种细菌降解，因此不同组别的Z培养基上有可能分离出同种细菌，C正确； D、图示流程、器材以及培养基是针对细菌的筛选设计的，真菌的培养条件和细菌不同（比如培养基成分、培养温度等），因此不能直接用于筛选降解抗生素的真菌，D错误。 33．工业上常利用黑曲霉通过深层通气发酵生产柠檬酸，其发酵流程如图所示。下列分析正确的是（　　） A．种子培养基为固体培养基，可用于对黑曲霉进行扩大培养 B．发酵培养基和种子培养基加入到发酵罐前需经过严格灭菌处理 C．深层通气能够增加发酵罐内的溶氧量，有利于柠檬酸的积累 D．发酵结束之后，可以根据柠檬酸的性质采取适当的措施进行提取分离 【答案】CD 【详解】A、对黑曲霉进行扩大培养需要使用液体培养基，可让菌种与营养充分接触，提高繁殖效率，种子培养基不属于固体培养基，A错误； B、为避免杂菌污染，保证发酵过程中黑曲霉的生长优势和产物纯度，发酵培养基在加入发酵罐前都需要经过严格灭菌，而黑曲霉孢子接种到种子培养基前，种子培养基就需要完成灭菌，而接种后加入到发酵罐前不需要再灭菌，防止杀死菌种，B错误； C、黑曲霉是需氧型微生物，深层通气能够提高发酵罐内的溶氧量，促进黑曲霉的有氧呼吸，有利于柠檬酸的合成与积累，C正确； D、不同发酵产物的理化性质存在差异，发酵结束后需要根据柠檬酸的特有性质选择合适的方法对其进行提取分离，D正确。 34．老五甑（蒸馏酒用的锅）酿造法主要特点是混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒。将发酵后的四甑酒醅分层出窖，按一定比例加入新粮，分成五甑后依次蒸酒。蒸酒后一甑糟丢弃，另四甑料重新放回窖池发酵。糟醅配料时需润料、拌匀并堆积；蒸酒出甑后的粮糟需加水、摊凉、撒曲；粮糟入窖后需踩窖，以压紧发酵材料并封窖；窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌的载体，主要位于窖池底部和四壁，是生产浓香型白酒的基础。下列叙述正确的是（　　） A．该工艺可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累 B．窖泥的作用主要是提供酿酒微生物和以淀粉酶、蛋白酶为主的各种糖化酶类 C．摊凉可防止酵母等微生物死亡，踩窖可抑制好氧菌繁殖 D．可采用抽样检测法对窖池底部和四壁的窖泥微生物进行计数 【答案】ACD 【详解】A、该工艺混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒，其中多轮次发酵蒸酒等过程可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累，A正确； B、分析题意可知，窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌的载体，其能起到密封以及排废作用，此外还可提供酿酒微生物，但不提供糖化酶类，B错误； C、果酒发酵需要适宜的温度，通常是25℃左右，摊凉可防止酵母等微生物死亡；踩窖可减少氧气，抑制好气性细菌繁殖，C正确； D、由于微生物数量多，故对其计数时可采用抽样检测法，检测前要搅拌均匀，随机取样，D正确。 35．甜叶菊是一种菊科多年生草本植物，其叶片产生的甜菊糖苷是重要的天然甜味剂。研究表明，甜菊糖苷在植物体内具有抵御植食动物和病原菌的作用。生产上常用植物组织培养技术进行规模化繁殖。其过程如图所示，下列相关叙述错误的是（    ） 外植体愈伤组织甜叶菊植株提取甜菊糖苷 A．①过程中一般不需要光照，②过程中生长素与细胞分裂素的比值低有利于芽的生成 B．在组织培养过程中，用射线等诱变因素处理细胞，可诱发基因突变和基因重组，为育种提供丰富材料 C．甜菊糖苷属于次生代谢产物，在植物整个生命周期的所有组织中持续合成 D．可用植物细胞培养生产甜菊糖苷，将外植体培养至愈伤组织阶段即可大量产生 【答案】BCD 【详解】A、①过程为脱分化形成愈伤组织，一般不需要光照（避免形成维管组织、叶绿体），②过程为再分化，生长素/细胞分裂素比值低利于生芽，比值高利于生根，A正确； B、射线处理可诱发基因突变和染色体变异，组织培养细胞进行有丝分裂；不发生减数分裂，不会出现基因重组，B错误； C、甜菊糖苷属于次生代谢产物，并非在整个生命周期、所有组织中持续合成，通常只在特定器官、特定发育阶段、特定环境胁迫下合成积累，C错误； D、甜菊糖苷由叶片产生，说明其合成具有组织特异性，愈伤组织是未分化的细胞团，缺乏叶片结构与功能，通常无法大量合成这类次生代谢产物，D错误。 36．下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述错误的是（　　） A．提取小鼠脾中的骨髓瘤细胞后与W细胞融合 B．提取B淋巴细胞后用PML蛋白免疫获得W细胞 C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 【答案】ABC 【详解】A、骨髓瘤细胞来自小鼠的骨髓瘤组织，小鼠脾脏中提取的是经免疫的B淋巴细胞，不是骨髓瘤细胞，A错误； B、制备流程中需先用PML蛋白免疫小鼠，再从免疫小鼠的脾脏中提取能产生抗PML抗体的B淋巴细胞（W细胞），并非先提取B淋巴细胞再进行免疫，B错误； C、步骤2为第一次筛选，目的是用选择培养基去除未融合的亲本细胞、同种融合的细胞，筛选获得杂交瘤细胞，该步骤不涉及抗体特异性筛选，去除不能产生特异性抗体的细胞是后续抗体检测的目的，C错误； D、制备抗PML的单克隆抗体，需要筛选出仅产生抗PML抗体、不产生抗大肠杆菌其他蛋白抗体的杂交瘤细胞，孔2的抗体仅与PML蛋白反应，与不含PML的大肠杆菌总蛋白不反应，符合要求，应选择孔2的细胞进行后续处理，D正确。 37．组蛋白乙酰化水平异常是制约异种体细胞核移植（iSCNT）效率的关键因素，下表为组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Sc）对iSCNT胚胎发育效率的影响结果。下列相关叙述错误的是（　　） 组别 克隆胚胎数 卵裂率（%） 4-细胞期率（%） 8-细胞期率（%） 对照组 95 9.47±1.70 6.32±1.07 5.26±0.85 Sc处理组 91 23.08±2.94 18.68±3.25 9.89±1.95 A．体细胞核移植中的“去核”就是将卵母细胞的细胞核去除 B．体细胞与去核卵母细胞融合时膜上蛋白质和脂质分子重新排布 C．提高组蛋白去乙酰化水平能提高胚胎发育效率 D．Sc对iSCNT胚胎发育效率的影响程度随发育进程的推进而增强 【答案】ACD 【详解】A、卵母细胞中的“核”其实是纺锤体-染色体复合物，去核操作其实是去除卵母细胞中的染色体-纺锤体复合物，A错误； B、体细胞与去核卵母细胞融合依赖细胞膜的流动性，融合时膜蛋白和磷脂分子发生重新排布，该过程符合膜的结构特点，B正确； C、由题干可知，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Sc）处理可提高胚胎发育效率，而Sc会抑制去乙酰化反应，即提高组蛋白乙酰化水平，能提高胚胎发育效率，C错误； D、对比表格数据，Sc处理组卵裂率提升13.61%（23.08%-9.47%=13.61%），4-细胞期率提升12.36%（18.68%-6.32%=12.36%），8-细胞期率提升4.63%（9.89%-5.26%=4.63%），提升幅度递减，说明Sc的影响程度随发育进程减弱，D错误。 38．将能杀灭玉米螟的苏云金杆菌（甲）和能杀灭蚊子的灭蚊球孢菌（乙）作为亲本菌株，进行原生质体融合育种，以得到既能杀蚊又能杀螟的融合菌株。下图为部分育种过程，下列叙述错误的有（　　） A．育种过程中加入的酶可能是纤维素酶和果胶酶 B．为维持原生质体稳定性，整个融合过程需使用等渗或略高渗溶液 C．原生质体融合过程依赖于生物膜的流动性，常用灭活的仙台病毒诱导 D．融合菌株的遗传物质是甲、乙菌株遗传物质的简单相加，属于多倍体 【答案】ACD 【详解】A、苏云金杆菌和灭蚊球孢菌均为原核生物（细菌），其细胞壁的主要成分是肽聚糖，而非植物细胞的纤维素和果胶。因此，去除细菌细胞壁制备原生质体应使用溶菌酶，而非纤维素酶和果胶酶，A错误； B、原生质体无细胞壁保护，在低渗溶液中会因吸水而涨破。为维持其形态和稳定性，原生质体的制备、融合及培养全过程均需在等渗或略高渗溶液中进行，B正确； C、原生质体融合依赖于生物膜的流动性，但灭活的仙台病毒是诱导动物细胞融合的特有方法，微生物（细菌）原生质体融合常用的诱导剂是聚乙二醇（PEG），也可采用电融合法，一般不使用灭活病毒，C错误； D、细菌是原核生物，无染色体，因此不存在“多倍体”的说法，D错误。 39．我国在胚胎移植与异种器官移植领域取得重要突破，2025年3月成功将基因编辑猪肾脏移植至终末期肾病患者体内，其核心流程为：①从猪耳提取体细胞→②基因编辑→③构建胚胎→④移植至代孕母猪体内→培育出供体。下列相关叙述错误的有（　　） A．步骤①体细胞培养时通常添加维生素以防止微生物污染 B．步骤②的目的之一是消除猪细胞表面引发人免疫排斥的关键抗原 C．步骤③需向重组细胞中添加促性腺激素以激活其发育 D．步骤④应对代孕母体进行超数排卵和同期发情处理 【答案】ACD 【详解】A、动物体细胞培养时，添加抗生素防止微生物污染，维生素仅作为营养物质补充，A错误； B、异种器官移植会引发人体的免疫排斥反应，基因编辑的目的之一就是敲除编码猪细胞表面引起人免疫排斥的关键抗原的基因，B正确； C、促性腺激素的作用是对供受体进行同期发情处理或诱导超数排卵，激活重组细胞发育不需要添加促性腺激素，一般采用物理或化学方法激活，C错误； D、步骤④是将胚胎移植至代孕母猪体内，需要对代孕母体进行同期发情处理，而超数排卵是对供体母牛应做的处理，D错误。 40．下列有关生物技术与工程的叙述，错误的是（    ） A．涂布平板操作时，应待涂布器冷却后蘸取菌液在平板上涂布 B．单克隆抗体制备时，经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞均能产生所需抗体 C．胚胎工程中常以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志 D．诱导植物原生质体和动物细胞融合时，都可使用PEG或灭活的病毒 【答案】ABD 【详解】A、涂布平板操作中，先在培养基上滴加菌液，再对涂布器进行灼烧灭菌待冷却再进行涂布，避免高温杀死菌种，操作正确，A错误； B、单克隆抗体制备时，选择培养基仅能筛选出杂交瘤细胞，无法保证筛选出的杂交瘤细胞都能产生所需抗体，还需要进一步做抗体阳性检测，B错误； C、胚胎工程中，常以观察到卵细胞膜和透明带之间存在两个极体，或观察到雌、雄原核，作为受精完成的标志，C正确； D、PEG可以诱导两种细胞或原生质体融合，但灭活病毒只能用于诱导动物细胞融合，不能用于植物原生质体融合，D错误。 41．植物组织培养技术常用于兰花种苗的规模化繁殖，大大降低了兰花的市场价格，普通百姓也能购买观赏。下列相关说法正确的是（　　） A．同一培养基诱导兰花愈伤组织生芽、生根，该过程为再分化 B．培养基中添加的蔗糖既能提供营养物质又能调节渗透压 C．植物组织培养过程中，使用的培养基均属于固体培养基 D．获得的试管苗应先移植到经消毒后的蛭石环境中 【答案】BD 【详解】A、诱导愈伤组织生芽、生根时，需要不同浓度比例的生长素和细胞分裂素，因此需要更换不同的培养基，不能在同一培养基完成，A错误； B、培养基中添加的蔗糖，一方面可以作为碳源提供营养，另一方面可以调节培养基的渗透压，维持植物细胞正常形态，B正确； C、植物组织培养并非都使用固体培养基，例如工业化悬浮培养细胞、生产细胞产物时会使用液体培养基，C错误； D、刚获得的试管苗幼嫩，适应能力差，需要先移植到消毒后的蛭石（透气保水）环境中锻炼培育，待幼苗长壮后再移栽到土壤中，D正确。 42．重叠延伸PCR技术可通过设计带有互补末端的引物，实现不同DNA片段的无缝拼接与长片段基因扩增，无需限制酶切割和DNA连接酶连接，在基因工程领域应用广泛。下图为利用该技术拼接并扩增融合基因AD的流程，下列相关叙述正确的是（    ） A．PCR1与PCR2的扩增过程中，需加入解旋酶和耐高温的DNA 聚合酶催化反应 B．产物AB 与CD可通过末端互补序列配对结合，其3'端可互为引物完成链的延伸 C．引物b与引物c的互补序列越长，该技术拼接DNA片段的特异性就越低 D．过程②获得的融合基因AD，可加入引物a和引物d进行PCR扩增以富集目标产物 【答案】BD 【详解】A、PCR扩增过程中通过高温加热使DNA双链解旋，不需要额外加入解旋酶，仅需耐高温的DNA聚合酶即可完成扩增，A错误； B、产物AB与CD的末端存在互补序列，可通过碱基互补配对结合，两条链的3'端可互为引物，在DNA聚合酶的作用下完成延伸，拼接形成完整的融合基因AD，B正确； C、引物b与引物c的互补序列越长，碱基互补配对的专一性越强，DNA片段拼接的特异性越高，C错误； D、过程②获得的融合基因AD的两端，分别对应引物a和引物d的结合位点，因此可加入引物a和引物d进行常规PCR扩增，大量富集目标融合基因，D正确。 43．大肠杆菌的培养分为生长期和稳定期两个阶段，其胞内莽草酸代谢途径如图甲。由于野生型大肠杆菌胞内酶A活性弱，且莽草酸会被快速转化为细胞生长必需物，细胞中无法大量积累莽草酸。为保证大肠杆菌生长期正常生长且稳定期大量积累莽草酸，研究者敲除野生型大肠杆菌某个相关内源酶基因，并导入图乙两种质粒，调控代谢途径中关键酶在不同阶段的合成与分解速率。下列说法错误的是（　　） 注：M、N为酶A或酶B基因；启动子Pgeo仅在生长期开启转录；基因X编码的阻遏蛋白可阻遏启动子PX开启转录；带SsrA短肽的蛋白质可被大肠杆菌逐渐降解。 A．敲除的内源酶基因是酶B基因 B．质粒①中的M表示酶A基因 C．改造后的菌株在生长期可正常合成细胞生长必需物 D．改造后的菌株胞内阻遏蛋白X的含量进入稳定期后不再变化 【答案】BD 【详解】A、由图甲可知，酶B可将莽草酸转化为细胞生长必需物，欲在稳定期大量积累莽草酸，应敲除酶B对应的基因，A正确； B、为了保证细胞正常生长，并在稳定期实现莽草酸的大量积累，利用上述两种质粒的调控功能，结合野生型菌株遗传物质的改造，首先对野生型大肠杆菌进行改造，敲除酶B基因；然后将质粒①中的M基因替换为酶B基因，使相关代谢途径酶B在生长期正常表达以保证细胞正常生长，进入稳定期后该酶降解，减少对莽草酸的转化；同时将质粒②中的N基因替换为酶A基因，利用其调控机制在稳定期实现莽草酸合成相关基因的稳定表达，从而大量积累莽草酸，最后将两种质粒导入野生菌株，即质粒①中的M表示酶B基因，质粒②中的N表示酶A基因，B错误； C、改造后的菌株在生长期莽草酸正常转化为细胞生长必需物，并无前体积累，稳定期由于酶B基因受到抑制，酶B的合成受阻，从而提高莽草酸的积累量，C正确； D、由题意可知，要保证大肠杆菌生长期正常生长且稳定期大量积累莽草酸，则生长期让菌株能正常合成细胞生长所需物质，需要酶B把莽草酸继续转化，而在稳定期又能尽量“关闭”对莽草酸的进一步利用，从而高水平积累莽草酸，基因X编码的阻遏蛋白可阻遏启动子PX开启转录，所以菌株经改造后，胞内阻遏蛋白X的含量在生长期保持稳定、在稳定期积累，D错误。 44．某质粒结构、TaPPR13基因编辑区域和限制酶识别序列及切割位点如图所示。研究人员以限制酶SalⅠ和XhoⅠ、DNA连接酶为操作工具，构建含TaPPR13基因的重组质粒。基因与质粒以相同限制酶切割位点进行连接的为正连接质粒，以不同限制酶切割位点进行连接的为反连接质粒。下列叙述正确的是（    ） A．正连接质粒能被限制酶SalⅠ和XhoⅠ切断 B．反连接质粒能被限制酶SalⅠ和XhoⅠ切断 C．正连接质粒能被限制酶NocⅠ和MonⅠ切断 D．反连接质粒能被限制酶NocⅠ和MonⅠ切断 【答案】AD 【详解】A、正连接：质粒上的 SalⅠ 端与基因的 SalⅠ 端连接，质粒上的 XhoⅠ 端与基因的 XhoⅠ 端连接，两个连接位点仍为原来的酶切序列，A正确； D、反连接：SalⅠ和 XhoⅠ切割后产生相同的黏性末端，质粒的 SalⅠ端与基因的 XhoⅠ 端连接，连接后的单链序列为GTCGAG，能被NocⅠ切断，质粒的 XhoⅠ 端与基因的 SalⅠ 端连接，连接后的单链序列为CTCGAC，能被MonⅠ切断，D正确，BC错误。 45．染色体的某一片段位置颠倒称为倒位。某男性患者X染色体的S片段（远大于3000碱基对）发生了倒位，为检测其父母和姐姐的S片段是否发生了倒位，在图1的F1、F2、R1、R2中选择引物对X染色体DNA进行PCR扩增（只能扩增小于3000碱基对的片段），经电泳后，结果如图2所示。下列叙述正确的是（　　） A．正常X染色体DNA以F1、R2进行PCR无法得到产物 B．患者父亲性染色体组成为X+Y，母亲性染色体组成为X+X- C．患者姐姐的X染色体DNA以F1、R1进行PCR可能无产物 D．患者F1、F2扩增后的电泳结果无条带是因为S片段太长 【答案】ABC 【详解】A、F1 在最左侧，延伸方向向右；R2 在最右侧，延伸方向向左。 两个引物分别位于整个 S 片段的两端，中间包含了整个 S 片段（远大于 3000bp），PCR 只能扩增小于 3000bp 的片段，因此无法得到产物，A正确； B、父亲是男性，F1+F2、R1+R2 扩增均有条带，符合X+的扩增特征，F1+R1、F2+R2 无条带，也符合X+的特征；Y 染色体无 X 同源序列，因此 患者父亲性染色体组成为X+Y，母亲是女性，电泳结果中 F1+R1、F2+R2、F1+F2、R1+R2 均有条带，说明她同时含有X+和X−，即基因型为X+X−，B正确； C、患者姐姐的 X 染色体一条来自父亲（X+），一条来自母亲（X+或X−），因此基因型有两种可能： X+X+：两条都是正常 X 染色体，F1+R1 同向，则无扩增条带。 X+X−：一条正常、一条倒位，和母亲一样，F1+R1 扩增会有条带，C正确； D、患者的 X 染色体是倒位的X−，在倒位的X−上，F1 在片段最左侧（向右延伸），F2 在 S 片段内部（向左延伸）。 两个引物的延伸方向是相向而行的，根本无法形成扩增产物，而不是因为S片段太长，D错误。 46．抗体由4条肽链构成，结构分为可变区（V区）和恒定区（C区，是抗体分子中相对较为保守的区域，在不同物种间的差异较大），与抗原特异性结合的区域为CDR区，位于Ⅴ区中。单克隆抗体在疾病诊断和病原体鉴定中发挥重要作用，但鼠源的单抗容易在人体内引发人抗鼠抗体反应（HAMA），从而削弱其治疗的有效性。科学家对鼠源杂交抗体进行改造，生产出效果更好的鼠—人嵌合抗体，主要流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．鼠—人嵌合抗体至少含有4个游离氨基，其抗体特异性由肽链的C区决定 B．鼠源单抗易引发人体免疫排斥反应与其可变区有关 C．构建鼠—人嵌合抗体表达载体时需限制酶和DNA聚合酶 D．鼠—人嵌合抗体的研制过程属于蛋白质工程，图中转染细胞的方法可能是显微注射法 【答案】ABC 【详解】A、由图可知，鼠—人嵌合抗体含有4条肽链，因此至少含有4个游离氨基，抗体与抗原特异性结合的区域为CDR区，位于V区中，因此抗体特异性由肽链的V区决定，A错误； B、恒定区是抗体分子中相对较为保守的区域，在不同物种间的差异较大，鼠源单抗易引发人体免疫排斥反应可能与其恒定区有关，B错误； C、构建鼠—人嵌合抗体表达载体时需限制酶（切割目的基因和运载体）和DNA连接酶（连接切割后的目的基因和运载体），C错误； D、鼠—人嵌合抗体是对鼠源抗体改造，即对蛋白质改造，属于蛋白质工程；将基因表达载体导入动物细胞常用显微注射法，D正确。 47．β-葡萄糖苷酶（BglB）是工业生产中降解纤维素的关键酶，研究人员利用基因工程技术，将编码BglB的基因转移到了大肠杆菌细胞中并使之表达。图1表示BglII、BamHI两种限制酶的识别序列和酶切位点，质粒和目的基因上的限制酶酶切位点如图2、3所示。将重组质粒转入某种大肠杆菌，该细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养。下列叙述错误的是（    ） 注：leu2 基因是控制合成亮氨酸的基因，KanR是卡那霉素抗性基因 A．图1中BglII与BamHI的识别序列不同，酶切后形成的黏性末端也不同 B．用BglII和BamHI酶切后的质粒与目的基因可用E.coli DNA连接酶“缝合” C．使用BglII处理重组质粒，可以得到长度为3300bp的链状DNA片段 D．用含亮氨酸和卡那霉素的培养基可以成功筛选出含有重组质粒的大肠杆菌 【答案】ACD 【详解】A、BglII与BamHI的识别序列不同，但是酶切后形成的黏性末端都为GATC，A错误； B、用BglII和BamHI酶切后的质粒与目的基因产生黏性末端，E.coli DNA连接酶可以连接黏性末端，B正确； C、质粒长度为2800bp，目的基因长度为500bp，重组后重组质粒上没有BglII的酶切位点，故使用BgI II处理重组质粒，可以得到长度为2800+500=3300bp的环状DNA，不是链状，C错误； D、将连接后的产物转入某种大肠杆菌，根据该细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养，若要筛选含有重组质粒的大肠杆菌，应选择含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基进行培养，D错误。 48．下列有关基因工程的叙述，错误的是（　　） A．引物长度越长、CG含量越高，PCR时需设定的复性温度越低 B．通过反转录法获得的目的基因中不含启动子、终止子序列 C．可通过诱变育种获得含有 Bt抗虫蛋白(来自苏云金杆菌)的玉米品种 D．可在载体中人工构建诱导型启动子，以激活目的基因的表达 【答案】ACD 【详解】A、引物长度越长、CG含量越高，复性过程中产生的氢键越多，因而PCR时需设定的复性温度越高，A错误； B、通过反转录法获得的目的基因中不含启动子、终止子序列，只包含编码序列，B正确； C、Bt抗虫蛋白基因来自苏云金杆菌，通过诱变育种不能获得含有Bt抗虫蛋白的玉米植株，C错误； D、在载体中人工构建诱导型启动子，可调控（激活或抑制）目的基因的表达，D错误。 49．肾小管上皮细胞部分生理过程如图甲所示，其中cAMP是由ATP在酶的催化下形成的，在调节细胞代谢方面发挥重要作用；该细胞的细胞膜局部亚显微结构如图乙所示，其中1～5为运输方式。下列相关叙述正确的是（    ） A．据图推测cAMP增多可能改变了某些酶的活性从而促进了水通道蛋白的合成 B．肾小管上皮细胞吸水的方式有图乙中的2和3两种 C．图乙中的5可表示肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的过程 D．图乙中的1和5两种运输方式都会受O2浓度的影响 【答案】ABD 【详解】A、由图甲可知，cAMP可调节相关酶的作用，酶进入细胞核后调控DNA的表达过程，因此可推测cAMP增多可通过改变某些酶的活性促进水通道蛋白的合成，A正确； B、肾小管上皮细胞吸水的过程是顺浓度梯度的，其方式包括自由扩散和协助扩散，自由扩散对应图乙中的方式2，协助扩散（通过水通道蛋白实现）对应题图乙中的方式3，B正确； C、图乙是图甲细胞膜局部放大图，由其中的物质运输方向可知，图乙中上侧为细胞外，下侧为细胞内，肾小管上皮细胞通过主动运输将葡萄糖吸收到细胞内，而图乙中方式5表示将物质运出细胞，与之不符，C错误； D、图乙中方式1和5均为逆浓度梯度的主动运输，二者都需要消耗ATP，而O2浓度会影响有氧呼吸的速率，影响ATP的生成量，因此两种运输方式都会受O2浓度的影响，D正确。 50．图1为某种绿色植物叶片的气孔结构示意图、所示箭头为水分流动的总方向，中间两个呈肾形的细胞称为保卫细胞，其细胞壁近气孔侧更厚是调节气孔开闭的结构基础。研究人员将该叶片放在内部温度为15℃的密闭容器中，研究光照强度与光合作用速率的关系，下列有关叙述错误的是（    ） A．图1水分开始向箭头方向流动时，叶肉细胞C5含量将减少 B．图1所示过程中保卫细胞的吸水能力逐渐减弱 C．据图2分析，在1klx光照条件下，该叶片8小时光合作用产生O2量为179．2mL D．图1水分流动箭头方向发生改变时，图2中B点向右移动 【答案】ABD 【详解】A、图1中水分箭头方向是保卫细胞失水，导致气孔关闭。气孔关闭会使CO2供应减少，暗反应中CO2与RuBP（核酮糖二磷酸）的固定速率下降，而RuBP的再生速率暂时不变，因此叶肉细胞中RuBP含量会增加，A错误； B、图1中水分箭头方向是保卫细胞失水，随着水分流失，保卫细胞的细胞液渗透压升高，吸水能力会逐渐增强，B错误； C、据图2分析：1klx光照下，净光合速率（O2吸收量）为11.2mL/h。呼吸速率（黑暗中O2吸收量）为11.2mL/h；总光合产O2量=净光合+呼吸消耗=11.2+11.2=22.4mL/h。8小时总产O2量=22.4×8=179.2mL，C正确； D、图1水分流动箭头方向改变，即保卫细胞吸水、气孔开放，CO2供应增加，光合速率提升，光补偿点（B点）会向左移动，D错误。 三、解答题 51．卡拉胶是一种大分子聚合物硫酸多糖，溶解性较差，可被卡拉胶酶降解。降解产物具有多种生物活性，如抗炎、抗凝血等，在食品、医药等领域具有广阔的应用前景。科研人员利用腐烂的角叉菜为材料，筛选了高产卡拉胶酶的菌株，过程如下图。 (1)筛选高产卡拉胶酶菌株的培养基按物理性质是_____培养基，为检测该培养基灭菌是否彻底，应采用的检测方法是将______（填“未接种”或“接种”）的培养基放在恒温培养箱中培养，检验是否有菌落产生。 (2)培养基中的卡拉胶被卡拉胶酶降解，在菌落周围会形成______。根据上图中初筛的结果判断，欲进一步纯化培养菌株时，应挑取培养基a中的菌落_______（填字母）。 (3)结合上图分析，科研人员采用了_______法对产卡拉胶酶菌株进行了初筛。从试管⑤中分别取0.2 mL稀释液，涂布在三个上述培养基上，培养72小时后，三个培养基上的菌落数分别为：56、59、62，推测腐烂角叉菜液中菌株数为_______个/L。利用上述方法进行微生物分离计数时，通常需要用到的实验用具有_____（填下图中相应的序号）。 【答案】(1) 固体 未接种 (2) 透明圈 C (3) 稀释涂布平板 2.95×1012 ①③④ 【详解】（1）筛选和分离菌株需要在固体培养基上形成单菌落，便于观察和挑取。检测培养基灭菌是否彻底，需设置空白对照：将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养，若无菌落产生，说明灭菌彻底；若出现菌落，说明灭菌不彻底。 （2）培养基中的卡拉胶被卡拉胶酶降解后，菌落周围会形成透明圈。透明圈直径与菌落直径的比值大小与菌株产卡拉胶酶的能力正相关：比值越大，说明该菌株分解卡拉胶的能力越强（产酶量越高 / 酶活性越强）。从图中可见，菌落 C 周围的透明圈与菌落直径比值最大，因此是高产卡拉胶酶的目标菌株，需进一步纯化培养。 （3）科研人员采用了稀释涂布平板法对菌株进行初筛。该方法通过梯度稀释菌液，将稀释液涂布在固体培养基上，使单菌落分散生长，可用于微生物的分离、纯化与计数。0.2毫升放到19.8毫升中稀释100倍，每次稀释102倍，共稀释1010倍，平均菌落数：(56+59+62)÷3=59 个，涂布体积：0.2mL，原液菌数计算公式：每mL菌数=平均菌落数÷涂布体积×稀释倍数，代入数值得：59÷0.2×1010=2.95×1012 个 /mL。稀释涂布平板法需要的用具:①酒精灯：用于操作过程的无菌环境（灼烧涂布器、试管口等）， ③培养皿：用于盛放固体培养基， ④涂布器：用于将稀释液均匀涂布在培养基表面（②为接种环，用于平板划线法，不用于稀释涂布平板法），故答案为①③④。 52．异亮氨酸是一种必需氨基酸，具有多种生理作用和功效。广泛用于医药、食品和饲料等领域。发酵法是目前生产异亮氨酸的最主要的方法。科研人员欲从土壤中筛选能产生异亮氨酸的菌株，进行如图所示的实验，回答下列问题： (1)发酵工程一般包括菌种的选育、___________、培养基的配制、灭菌、接种、发酵产品的分离、提纯等方面。其中___________是发酵工程的中心环节，要随时取样检测培养基中的微生物数目、产物浓度等，以了解发酵进度。研究人员先从发酵罐内取10mL发酵液，进行如下操作，则可以推测发酵液中每毫升含菌数为___________个。 (2)实验中的培养基需要进行___________灭菌，待培养基冷却到50℃左右时，进行倒平板，培养基凝固后需___________，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，以免造成污染。⑤过程的接种方法是___________。过程⑥中菌种可以接种到试管的斜面固体培养基上，在合适的条件下培养一段时间，然后置于___________(填温度)冰箱中保存。 (3)研究人员为初步筛选高产的异亮氨酸菌株，将待测菌种接种到含有异亮氨酸缺陷型指示菌的平板上，培养后观察待测菌种周围指示菌的生长圈，结果如图：初步筛选时配置的固体培养基中应该不含___________；图中待测菌种___________(填“字母”)产异亮氨酸的能力最强。 【答案】(1) 扩大培养 发酵罐发酵 1.7×109 (2) 高压蒸汽 倒置 稀释涂布平板法(或平板划线法) 4℃ (3) 异亮氨酸 A 【详解】（1）发酵过程包括菌种选育→扩大培养（增加菌种数量）→培养基的配制→灭菌→接种→发酵→分离提纯，其中发酵罐发酵是发酵工程的中心环节；10mL发酵液加90mL无菌水，稀释10倍，之后连续5次每次1mL菌液转入9mL无菌水，每次稀释10倍，总稀释倍数为101×105=106，每毫升菌数 =（平板平均菌落数 ÷ 涂布体积）× 稀释倍数，因此每毫升含菌数=（168+175+167）/3/0.1×106=1.7×109。 （2）微生物培养基常用高压蒸汽灭菌；平板凝固后倒置，避免冷凝水滴落引发杂菌污染；⑤过程的接种方法是稀释涂布平板法(或平板划线法)；过程⑥中菌种可以接种到试管的斜面固体培养基上，在合适的条件下培养一段时间，然后置于4℃冰箱中低温环境保存。 （3）异亮氨酸缺陷型指示菌自身无法合成异亮氨酸，因此培养基不加异亮氨酸，仅依靠待测菌株分泌的异亮氨酸存活；菌株产异亮氨酸越多，周围指示菌生长圈越大，故A菌株产能最强。 53．利用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”杂种植株，实验过程如图所示，但是该杂种植株并非是想象中的地上长番茄，地下结马铃薯的“超级作物”。 (1)材料中所用到的植物体细胞杂交技术应用了植物原生质体融合和植物组织培养技术，人工诱导原生质体融合常用的化学方法，除PEG融合法外，还有________，植物组织培养技术的原理是________。 (2)图中①步骤所示用________酶除去植物细胞的细胞壁，分离出有活力的原生质体。后续要促进杂种细胞分裂生长，培养基中应有________和________两类关键激素。 (3)由杂种细胞培育成试管苗，需要经过细胞的④________和⑤________过程。 (4)利用马铃薯和番茄的________得到单倍体植株，然后取单倍体植株的细胞进行体细胞杂交，再用________处理之后也可得到可育的“番茄—马铃薯”杂种植株。 【答案】(1) 高Ca2+-高pH融合法 植物细胞的全能性 (2) 纤维素酶和果胶酶 生长素 细胞分裂素 (3) 脱分化 再分化 (4) 花药/雄配子 秋水仙素 【详解】（1）人工诱导原生质体融合常用的化学方法，除PEG融合法外，还有高Ca2+-高pH融合法，由于植物细胞具有全能性，因此培养植物的细胞即能得到完整的植物体（植物组织培养技术的原理）。 （2）图中①步骤所示用纤维素酶和果胶酶除去植物细胞的细胞壁，分离出有活力的原生质体。后续要促进杂种细胞分裂生长，培养基中需要添加生长素和细胞分裂素两类关键激素。 （3）杂种细胞高度分化，要使其变成植株，需先经④脱分化，然后再经过⑤再分化过程。 （4）单倍体是配子发育来的，利用马铃薯和番茄的花药（雄配子）进行花药离体培养可得到单倍体植株，然后取单倍体植株的细胞进行体细胞杂交，用秋水仙素处理，可以使其染色体加倍，可得到可育的“番茄—马铃薯”杂种植株。 54．Ⅰ、下图表示科学家通过植物细胞工程，培育“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的过程。根据所学知识完成下列问题： Ⅱ、银杏的次生代谢产物，如银杏黄酮（具有抑制癌细胞增殖，扩张冠脉血管、增加冠脉血液流量和解除痉挛的作用）、银杏内酯（具有促进脑血微循环、抑菌抗炎的作用）等，一般从叶片中取得，但传统栽植方法周期长、成本高、受环境影响大，无法很好满足市场需求。因而利用组织培养技术，从获得的细胞中提取，具有一定的研究意义与应用前景。请回答下列相关问题： 外植体愈伤组织试管苗植株 (1)人工诱导原生质体融合的方法基本可分为两大类-物理法和化学法，其中化学法包括_____和_____。 (2)“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的体细胞内含_____条染色体，属于_____倍体植株。 (3)研究表明，选择银杏叶片比选择胚作为外植体材料成功率更低，原因可能是诱导叶片脱分化形成_____的难度较大。因此，往往选择细胞生长分裂旺盛的部位作为外植体，但外植体也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞虽细胞分裂较旺盛，但在_____时次氯酸钠等药品渗透也较快，在后续用_____多次冲洗也不易清除，导致细胞易失活甚至破裂。 (4)为获得银杏的次生代谢产物，_____（“需要”或“不需要”）走完上述流程图的全过程。 (5)此外，研究表明，用通气较为不良的介质封口，如塑料膜或玻璃纸，可以提升黄酮和内酯的产量，可能原因是_____。 【答案】(1) PEG融合法 高Ca2+-高pH融合法 (2) 38 四 (3) 愈伤组织 消毒 无菌水 (4)不需要 (5)低氧胁迫细胞诱导产生次生代谢物 【详解】（1）人工诱导原生质体融合的方法很多，基本可分为两大类，物理法和化学法，其中化学法主要使用PEG（或聚乙二醇）融合法和高Ca2+-高pH融合法。 （2）“矮牵牛——粉蓝烟草”杂种植株的体细胞内含有的染色体数目是矮牵牛和粉蓝烟草的体细胞中染色体数目之和，为14+24=38，属于异源四倍体植株。 （3）选择银杏叶片比选择胚作为外植体材料成功率更低，因为叶片细胞分化程度高，脱分化形成愈伤组织的难度较大。选材用的外植体也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞虽细胞分裂较旺盛，但在消毒时次氯酸钠等药品渗透也较快，在后续用无菌水多次冲洗也不易清除，导致细胞易失活甚至破裂。 （4）为获得银杏的次生代谢产物，只需要培养到愈伤组织阶段就可以，不需要走完如上述流程图的全过程。 （5）研究表明，用通气较为不良的介质封口，如塑料膜或玻璃纸，可以提升黄酮和内酯的产量，可能的原因是在低氧胁迫条件下，可诱导细胞产生次生代谢物，因而产量上升。 55．紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的新型牧草，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图：（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的功能） (1)在制备两种植物原生质体时，先将两种细胞分别置于0.5-0.6mol/L的甘露醇溶液中，从而有利于用________去除细胞壁，分别获得两种植物的原生质体。 (2)①过程获得的只有异源融合体才能存活和具有再生能力，请推测原因是________。 (3)步骤②为________，经过步骤②、③到形成再生植株，体现的主要原理是________。 (4)谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质，科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量，想通过制备相应的单克隆抗体进行检测，部分流程如下图： 图中注射的特定抗原是________。经过a步骤，细胞两两融合的产物有_______种。在步骤b的基础上经过步骤c________和抗体检测筛选得到符合要求的杂交瘤细胞。 (5)百脉根花的提取液可用于生产护肤品，为研究百脉根花提取液对受损皮肤的修复效果，需要一批遗传性状基本一致的实验小鼠，研究人员从________（填“同一”或“不同”）小鼠个体中取出体细胞核进行体细胞核移植，形成的多个胚胎再通过_______技术，以进一步增加胚胎的数量，最后移植到经过处理________的受体雌鼠中获得实验小鼠。 【答案】(1)纤维素酶和果胶酶 (2)异源融合体因代谢互补可恢复生长并获得再生能力（或答异源融合体具有完整的有氧呼吸过程，能存活和具有再生能力） (3) 脱分化 植物细胞的全能性 (4) 谷蛋白 3 克隆化培养 (5) 同一 胚胎分割 同期发情 【详解】（1）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经过滤灭菌处理的较高渗透压的混合酶液中，植物原生质体的获取过程中一般使用相同浓度的甘露醇溶液，目的是维持一定的渗透压，保持原生质体的形态，用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。 （2）异源融合产物因代谢互补可恢复生长并获得再生能力，故只有异源融合体才能存活和具有再生能力。 （3）愈伤组织是经脱分化形成的；步骤②为脱分化，图中③过程愈伤组织经过再分化形成再生植株，②③过程的原理是植物细胞的全能性。 （4）本实验的目的是获得抗谷蛋白的单克隆抗体，因此需要给小鼠注射谷蛋白。步骤a为诱导细胞融合的操作，细胞两两融合的产物有同种融合的和不同细胞融合的3种。获得的杂交瘤细胞必须进行步骤c克隆化培养和特异性抗体检测，才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞。 （5）要满足遗传性状基本一致的实验小鼠，需要从同一小鼠个体中取出体细胞核进行体细胞核移植，形成的多个胚胎再通过胚胎分割技术，以进一步增加胚胎的数量，最后移植到经过处理同期发情的受体雌鼠中获得大量的实验小鼠。 56．甲状旁腺激素（PTH）是一种含有84个氨基酸的多肽，是调节钙磷代谢的主要激素之一、 临床上PTH被作为低钙血症等疾病的重要诊断指标。拟制备抗PTH单克隆抗体（单抗），并建立定量检测PTH的方法。 (1)人工合成PTH肽链7～25氨基酸组成的多肽（A肽）和39～84氨基酸组成的多肽（B肽），分别用A肽、B肽多次免疫小鼠。 ①取小鼠脾脏中的B细胞与骨髓瘤细胞混合培养，用动物细胞融合特有的_____法促进二者融合，并用特定的选择培养基进行筛选。对获得的杂交瘤细胞进行_____和_____，经多次筛选获得能稳定分泌抗PTH单抗的两种细胞株。细胞培养过程中需要定期更换培养液，目的是_____（答一点）。培养过程的气体环境为_____的混合气体。 ②将两种杂交瘤细胞株分别注射到小鼠腹腔内，一段时间后分离获得抗PTH的两种单抗，分别是对应A肽的A1，对应B肽的B1。 (2)研究人员将A1、B1用于定量检测PTH，思路为：将B1固定在固相载体上作为捕获抗体，用酶标记A1，酶可将无色底物转化成棕色产物，从而建立定量检测PTH的方法（如下图）。 ①据图分析，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中PTH的关系是捕获抗体和酶标抗体特异性结合于PTH的_____（“相同”或“不同”）位点。 ②若要定量检测PTH，在图中所示步骤的基础上还需_____。（多选） A．测定已知浓度梯度的PTH对应的棕色产物产量 B．测定已知浓度梯度的底物对应的棕色产物产量 C．加入底物后的相同时间内测定棕色产物产量 D．在不添加PTH的条件下测定棕色产物产量排除无关变量干扰 (3)研究表明，人体内除全长PTH外，还存在PTH的7～84氨基酸肽段，它与全长PTH的生物学功能完全相反。为更准确地检测血中全长PTH的含量，其改进思路为_____。 (4)利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体，鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除（称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应）。如图为抗体结构示意图，通过制备人鼠嵌合抗体可以减弱HAMA反应。制备过程中需将编码抗体_____（填编号）的基因片段进行拼接，最终表达出嵌合抗体。 【答案】(1) 灭活病毒诱导 克隆化培养 抗体检测 清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，同时提供营养物质，防止分裂受阻 95%空气和5%二氧化碳 (2) 不同 ACD (3)制备针对PTH1～6氨基酸组成的多肽的单抗为酶标抗体或者捕获抗体 (4)①④ 【详解】（1）动物细胞融合特有的诱导方法是灭活病毒诱导；单克隆抗体制备中，经选择培养基筛选得到杂交瘤细胞后，需要进行克隆化培养和抗体检测，才能获得能稳定分泌目标抗体的杂交瘤细胞株。动物细胞培养中定期更换培养液的目的是清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，同时提供营养物质，防止分裂受阻。动物细胞培养的气体环境为95%空气（保证细胞有氧呼吸）加5%CO2（维持培养液pH）。 （2）① 据图可知，捕获抗体和酶标抗体与待测样本中PTH的关系是：捕获抗体和酶标抗体特异性结合于PTH的不同位点。 ②定量检测PTH时：需要先测定已知浓度梯度PTH对应的产物产量，制作标准曲线（A正确，B错误）；需要控制无关变量，在相同反应时间后测定产物量（C正确）；需要设置空白对照，测定不添加PTH时的本底产物量，排除无关变量干扰（D正确），故选ACD。 （3）依据题干信息可知，人体内除全长PTH外，还存在PTH的7~84氨基酸肽段，它与全长PTH的生物学功能完全相反，即7~84氨基酸肽段的存在会干扰上述检测结果的准确性，故应制备针对PTH1~6氨基酸组成的多肽的单抗作为酶标抗体或者捕获抗体，避免7~84肽段的干扰。 （4）要减弱人抗鼠抗体反应，需要保留鼠抗体中负责特异性识别抗原的可变区（保证抗体结合PTH的能力），将抗原性强的恒定区替换为人抗体的恒定区，因此需要拼接编码鼠抗体①可变区和人抗体④恒定区的基因片段。 57．为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物（ADC）来对乳腺癌患者进行治疗，过程如图1所示。 (1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自______________细胞。 (2)步骤①的原理是_________，与诱导植物原生质体融合的不同的处理方法是用______。 (3)步骤②的筛选方法是___________。体外培养杂交瘤细胞的气体环境是________。由于人们对细胞所需营养物质尚未全部研究清楚，体外培养杂交瘤细胞时，培养液中除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的___________。 (4)研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。 ①ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为________能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于_______原理。 ②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于______，可导致癌细胞凋亡。 【答案】(1)人的乳腺癌/乳腺癌 (2) 细胞膜的流动性 灭活的病毒 (3) 选择培养基筛选 95%的空气和5%的CO2 动物血清/血清 (4) 单克隆抗体 抗原-抗体杂交 细胞核 【详解】（1）为获得治疗乳腺癌的抗体，给小鼠注射的特定抗原应取自人的乳腺癌细胞。 （2）步骤①表示细胞融合过程，其原理是利用了细胞膜的流动性；由于不存在诱导植物细胞融合的植物病毒，故与诱导植物原生质体融合的不同的处理方法是用灭活的病毒。 （3）步骤②表示通过筛选和检测获得特异性杂交瘤细胞，先用选择培养基筛选杂交瘤细胞(多种)，再进行抗体检测从而筛选出所需的特异性杂交瘤细胞；动物细胞培养的气体条件是95%的空气和5%二氧化碳的气体环境；由于人们对细胞所需营养物质尚未全部研究清楚，体外培养杂交瘤细胞时，培养液中除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的(动物)血清。 （4）①据图分析，ADC药物是利用单克隆抗体的导向作用，精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于抗原-抗体杂交原理。 ②据图分析，ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致癌细胞凋亡。 58．番茄生长过程中经常遭受低温冷害，冷害容易造成落花落果、果实畸形，降低品质和经济效益。研究表明水孔蛋白参与植物的低温适应过程。为培育抗冻转基因番茄，研究人员将天山雪莲水孔蛋白S基因转入番茄植株。回答下列问题： (1)根据已知的S基因核苷酸序列设计P1、P2两种引物（见图1），已知P1、P2分别携带BamHⅠ和SalⅠ两种限制酶的识别序列（均为含6个核苷酸的回文序列），根据引物P1的碱基序列分析，BamHⅠ的识别序列为5´-_________3´；引物P2与模板链结合后，引物的_________（填“3´”或“5´”）端不能与模板链完全配对。 P1：5´-TGCGGATCCCAAACCCTAACCTCACTCC-3´ P2：5´-TCGGTCGACAGCAAGTGCAGCTCCAATG-3´ 图1 (2)采用PCR方法扩增目的基因，扩增出的DNA片段可用_________电泳进行检测，当DNA分子的构象相同时，在同一次电泳中，DNA的迁移速率主要与_________有关。 (3)将目的基因插入Ti质粒，再将重组质粒导入农杆菌，利用农杆菌侵染番茄愈伤组织，培育获得再生苗。提取再生苗的核DNA和mRNA进行PCR鉴定，图2为其中6个株系的鉴定结果： 根据鉴定结果，株系_________可作为备选株系，进行后续实验，判断依据是_________。 (4)现获得了S基因成功表达的株系A，若要研究S基因成功表达是否提高了转基因番茄的耐低温能力，应如何进行后续实验？写出实验思路：_________。 【答案】(1) GGATCC 5´ (2) 琼脂糖凝胶 DNA分子的大小 (3) 1和4 株系1和4中有目的基因和相应的mRNA (4)将生理状况相似的转基因番茄A和非转基因番茄在相同的低温条件下进行培养，观察两种番茄的生长情况（答案合理即可） 【详解】（1）由于两种限制酶的识别序列均为含6个核苷酸的回文序列，而P1中只有GGATCC区域的DNA片段为6个核苷酸的回文序列，可知BamHⅠ的识别序列为5´-GGATCC-3´；由于限制酶识别序列加在引物的5´端，而模板链没有限制酶识别序列，因此引物的5´端不能与模板链完全配对。 （2）PCR产物可利用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。DNA在凝胶中的移动速率主要与凝胶浓度、DNA分子的大小和构象有关，当DNA分子的构象相同时，在同一次电泳中，DNA分子的移动速率主要取决于DNA分子的大小。 （3）根据电泳结果可知，株系1～6中，株系2未能成功转入目的基因，而株系3、5、6中没有目的基因的mRNA，目的基因未能在这些株系中转录，而株系1和4中有目的基因和相应的mRNA，可作为备选株系进行后续实验。 （4）若要研究S基因成功表达是否提高了转基因番茄的耐低温特性，应将转基因番茄和非转基因番茄在相同的低温条件下培养，观察两种番茄的生长情况。 59．玉米的籽粒状态决定了籽粒的发芽能力，干瘪的籽粒无发芽能力。研究人员利用农杆菌转化法将含抗除草剂基因的T-DNA随机整合到玉米的染色体基因组上，获得了两株籽粒干瘪的纯合突变体甲、乙。Ti质粒的部分信息如图1，抗除草剂基因的信息如图2，限制酶的识别序列及切割位点如表所示。 限制酶 BamH I Bcl I Sau3A I Hind Ⅲ 识别序列及切割位点 5'-GGA↓TCC-3' 5'-TG↓ATCA-3' 5'-GA↓TC-3' 5'-AA↓GCTT-3' (1)PCR扩增抗除草剂基因时，图2中的引物1需要添加限制酶_____的识别序列，另一个引物的部分序列需与抗除草剂基因_____（填“a链”或“b链”）相应部分的序列相同。 (2)PCR过程中将反应体系的温度调节到72℃左右的目的是_____。若PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____（填序号）。 ①降低变性温度②降低复性温度③升高复性温度④重新设计引物 (3)将PCR产物和Ti质粒重组后，导入农杆菌，然后侵染玉米细胞，在含潮霉素的固体培养基上_____（填“能”或“不能”）筛选出转基因玉米细胞，其原因是_____。 (4)为进一步确定突变体甲、乙是不是T-DNA插入玉米基因组中的同一基因产生的，提取玉米基因组DNA，经酶切后产生含有T-DNA的基因组片段（图3）。首先将图3的片段_____，才能利用引物P1和P2成功扩增未知序列。PCR扩增出未知序列后，进行了一系列操作，其中可以判断出2条片段的未知序列是否属于同一个基因的操作为_____（填“琼脂糖凝胶电泳”或“测序和序列比对”）。 【答案】(1) BamH I a链 (2) 合成新的DNA子链（或延伸；或使4种脱氧核苷酸在耐高温DNA聚合酶的作用下连接到DNA子链上） ②④ (3) 不能 潮霉素抗性基因不在T-DNA 的序列中，无法随T-DNA整合到玉米细胞的染色体上并实现表达 (4) 环化 测序和序列比对 【详解】（1）由Ti质粒的信息及限制酶的识别序列及切割位点可判断，切割Ti质粒时应选择限制酶BamH I和Hind Ⅲ，结合抗除草剂基因的转录方向，扩增抗除草剂基因的上游，应添加靠近启动子的限制酶BamH I的识别序列；根据另一个引物的方向，可以确定该引物需与抗除草剂基因的b链碱基互补配对，因此该引物应与抗除草剂基因a链相应部分的序列相同。 （2）PCR中温度调到72℃是合成新的DNA子链（或延伸；或使4种脱氧核苷酸在耐高温DNA聚合酶的作用下连接到DNA子链上）。PCR中降低变性温度会导致双链DNA不能解旋；退火温度过高或引物设计不合理都会使引物无法与模板链结合，导致无扩增产物。若PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取降低退火温度（②）或重新设计引物的措施来改进（④）。 （3）由图1可知，潮霉素抗性基因不在T-DNA的序列中，因此该基因无法随T-DNA整合到玉米细胞的染色体上并实现表达，不能用于转基因玉米细胞的筛选。 （4）由于引物是根据已知序列设计的，但此时需要扩增未知序列，因此可以将图3的片段环化，这样就可以利用现有引物扩增出未知序列。为了确定未知序列是否是同一基因，需要准确比对其上的碱基序列，因此对同一个基因的操作为测序和序列比对。 60．镉离子（Cd2+）是一种在环境中广泛存在的、易在体内蓄积的有毒重金属离子，对生态系统和人类健康构成严重威胁，因此Cd2+的检测就尤为重要。科研人员构建可对Cd2+响应的大肠杆菌传感器，其原理和构建过程分别如图1、图2所示。已知CadR基因与启动子a相连，czcR3可启动下游基因的表达，P1、P2、P3均为引物。回答下列问题： (1)据图1分析，CadR基因的表达是否受Cd2+的诱导？________（填“是”或“否”），判断依据是________。 (2)据图2分析，应选用限制酶________切割目的基因，以实现质粒与目的基因的高效重组。重组后利用PCR技术扩增GFP基因时，应选择引物P1和________。已知GFP基因转录得到的RNA中缺乏起始密码子AUG，为了保证GFP基因能被限制酶识别且能正常表达，应该在引物P1的5′端增加的碱基序列为5′-_______-3′。 (3)为筛选出导入重组质粒并且成功表达目的基因的目标菌，可以将转化后的大肠杆菌接种到含有________的培养基上，观察菌落是否有绿色荧光出现。 【答案】(1) 否 无论是否有Cd2+存在，CadR基因都会表达出相应的蛋白质 (2) EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ P2 GAATTCATG (3)四环素和Cd2+ 【详解】（1）无论是否有 Cd2+存在，CadR 基因都会表达出相应的蛋白质，因此CadR 基因的表达不受Cd2+的诱导。 （2）切割质粒时应使用限制酶 Mun Ⅰ和 Xho Ⅰ进行切割，因此为实现质粒与目的基因的高效重组，应使用限制酶 EcoR Ⅰ和 Sal Ⅰ切割目的基因。利用 PCR 技术获取 GFP 基因时，应选择引物P1 和P2。结合题图分析可知，为了保证 GFP 基因能被限制酶识别且能正常表达，应在引物P1 的5′端增加5′－GAATTCATG－3′的碱基序列。 （3）若重组质粒成功导入目标菌，且目的基因成功表达，则该目标菌会生成抗四环素的物质，且GFP基因可正常表达，所以为筛选出能导入重组质粒并且成功表达目的基因的目标菌，可以将转化后的大肠杆菌接种到含有四环素和Cd2+的培养基上。 第1页 共4页 ◎ 第2页 共4页 / 学科网（北京）股份有限公司 $