河南驻马店市二中等校2025-2026学年下学期5月高二期中考试生物试题

高二生物学 （试卷总分：100分 考试时间：75分钟） 注意事项： 1．答卷前，考生务必将自己的学校、班级、姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、单选题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中只有一项是符合题目要求的。 1．宋代朱肱在《北山酒经》中记载了“卧浆”法：“造酒最在浆，…，不得过夏。”其核心是在三伏天将小麦煮粥，借助空气中的乳酸菌等自然发酵成酸浆。次年酿酒时，以此酸浆浸米、蒸煮，再加入酒曲发酵。此法可有效抑制杂菌，提升酒质。下列关于“卧浆”法的现代生物学解释，错误的是（ ） A．“浆不得过夏”：酸浆若储存过久，其积累的酒精可能被醋酸菌转化为乙酸导致酸败 B．“三伏天卧浆”：夏季温度较高有利于乳酸菌等微生物快速繁殖，缩短酸浆成熟时间 C．“以酸浆浸米”：酸浆的较高pH值可抑制大多数杂菌生长，为酵母菌创造竞争优势环境 D．“酸浆煮粥”：蒸煮酸浆的目的是为了杀死部分杂菌，确保后续的酿酒过程的顺利进行 2．关于高中生物实验中涉及到的微生物培养与应用，下列说法正确的是（ ） A．土壤中分解尿素的细菌可利用平板划线法和稀释涂布平板法进行分离与计数 B．利用醋酸菌制作果醋时，应拧紧瓶盖以促进充分发酵 C．酵母菌纯培养时，灼烧接种环后应冷却再蘸取菌液划线以防止菌种被杀死 D．探究抗生素对细菌的选择作用时，应先将抗生素涂布于平板上再接种 3．发酵工程和基因工程在农牧业、医药卫生领域和食品工业方面都有广泛的应用，以下叙述不正确的是（ ） A．发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白制成微生物饲料 B．柠檬酸是一种食品酸度调节剂，可通过黑曲霉发酵生产 C．利用基因工程菌除了可以生产药物，还能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等 D．基因工程将病原体的相关抗原基因转入适当的微生物细胞，其表达产物可以作为疫苗 4．“华柚2号”是国际首例柑橘细胞工程直接培育的胞质重组新品种，其线粒体基因组来自具有细胞质雄性不育特性的“国庆1号”温州蜜柑，核基因组来自“华柚1号”。如图所示科研人员培育“华柚2号”的过程。下列相关叙述正确的是（ ） A．失活处理的结果是使A1的细胞质失活，使B1的细胞核失活 B．①过程可用纤维素酶和果胶酶进行处理，②过程的完成需要高尔基体参与 C．③过程为植物组织培养，该过程的顺利进行需要始终有光照条件 D．③过程中，培养基中细胞分裂素与生长素的比值较高时，有利于根的分化 5．科研人员通过基因编辑技术敲除动物细胞的贴壁相关基因，构建完全悬浮生长的细胞株，在5000L生物反应器中，细胞密度可达2×107个/mL，比传统贴壁培养提升5～10倍。下列叙述不正确的是（ ） A．动物细胞悬浮培养的原理是动物细胞增殖 B．悬浮培养细胞在传代培养前要用胰蛋白酶处理组织细胞 C．培养过程要定期更换培养液以清除代谢废物并提供营养 D．应将动物细胞置于95%的空气和5%的CO2气体环境中培养 6．精准治疗已经成为肿瘤治疗的重要思路，根据患者的基因特征和分子分型来筛选相应的靶向药物，给予患者个体化精准治疗。如图表示抗人体胃癌单克隆抗体的制备过程，有关叙述不正确的是（ ） A．只考虑两两融合，乙中融合的细胞种类应该有三种 B．丁细胞均能分泌抗胃癌单克隆抗体 C．丙中只有产生特定抗体的杂交瘤细胞才能生长 D．抗人体胃癌的单克隆抗体可以用来诊断人体是否患胃癌 7．犏牛是以牦牛为母本、黄牛为父本杂交产生的后代，兼具高产和强适应性，但雄性犏牛因染色体异常而无法产生精子。2025年5月，我国科学家利用体细胞核移植技术成功获得全球首例体细胞克隆犏牛，流程如图。下列叙述正确的是（ ） A．克隆犏牛的成功，证明了动物体细胞具有全能性 B．该技术通过激活重构胚，使其完成有丝分裂并开始发育 C．耳缘细胞作为核供体是因为其已高度分化，不再分裂 D．克隆得到的雄性犏牛会表现出雄性可育的特征 8．单倍体胚胎干细胞是指只含一套染色体，但拥有类似于正常干细胞分裂分化能力的细胞群。构建孤雌单倍体胚胎方法如下，下列说法中不正确的是（ ） A．①过程需将卵母细胞培养到减数分裂Ⅱ中期 B．③过程可采用PEG或电刺激或灭活的病毒诱导 C．④过程应以囊胚期的内细胞团细胞作候选细胞 D．经图示4个过程最终得到的细胞都只含一套染色体 9．胚胎工程通过体外受精、胚胎移植等技术手段，已成为驱动畜牧业生产效率变革的强大工具。下图以奶牛为例，阐释了利用该技术进行繁殖的过程。下列相关说法错误的是（ ） A．精子需进行获能处理才能与成熟的卵子结合，观察到两个极体可以作为受精的标志 B．超数排卵需要注射的激素是促性腺激素，分割胚胎需将①均等分割 C．胚胎移植前，一般取原肠胚滋养层中的细胞进行胚胎性别鉴定 D．需要选择同种的生理状态相同的雌性个体作为接受胚胎的个体 10．DNA连接酶是基因工程中最常用的工具酶，其作用是恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。下列箭头指向处属于T4DNA连接酶正确连接位点的是（ ） A． B． C． D． 11．下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ） A．利用酒精初步分离DNA与蛋白质的原理是DNA溶于酒精 B．预冷的酒精溶液能抑制蛋白酶的活性，防止蛋白质水解 C．DNA粗提取时，通过离心研磨液可以加速DNA的沉淀 D．将DNA丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂，沸水浴加热出现蓝色 12．为在大肠杆菌中表达人的胰岛素基因，将胰岛素基因（目的基因）插入质粒Po，构建重组质粒Px，并导入大肠杆菌。为鉴定大肠杆菌中是否含有正确插入胰岛素基因的重组质粒，设计引物进行PCR扩增（引物1～4结合位置如图所示，→表示引物5′→3′方向），所用模板、引物和结果如表。下列分析错误的是（ ） 管号 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ 模板 Po Px Po Px Po Px Po Px 引物对 引物1、2 引物3、4 引物2、3 引物1、4 扩增产物 无 有 有 有 无 无 无 有 A．图中的“酶处理”与PCR中的酶不同，但形成的化学键相同 B．①与⑥离心管都没有扩增产物，形成的原因一定相同 C．可以确定⑧离心管中的Px是胰岛素基因正向插入的重组质粒 D．在PCR反应过程中，两条单链DNA与引物在复性阶段结合 13．关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列说法错误的是（ ） A．PCR复性温度与引物的长度以及引物中GC碱基的相对含量有关 B．在同一电场作用下，通常DNA片段越长，在凝胶中迁移速率越慢 C．实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高温高压灭菌处理 D．凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 14．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得，生产流程如下图所示。下列有关叙述正确的是（ ） A．构建重组表达载体时需要用DNA聚合酶和DNA连接酶 B．检测目的基因是否表达出htPA，可采用PCR等技术 C．将重组表达载体导入受精卵之前，用CaCl2处理受精卵，有利于提高转化效率 D．若在母羊的羊乳中检测到htPA，说明目的基因成功表达 15．某水母体内含有的绿色荧光蛋白（GFP）能发出绿色荧光，但荧光中有5/6为不可见光，所以绿光很微弱。有科学家采用PCR定点突变的方法，将GFP第65位的丝氨酸替换为苏氨酸得到绿光荧光强度增强的eGFP。关于该技术，下列说法错误的是（ ） A．该技术是以GFP结构和荧光强度增加的关系为基础 B．将eGFP基因直接导入酵母菌，而非大肠杆菌，以获得正确折叠的eGFP C．该设计改造GFP结构的实质是改造GFP基因的结构 D．将eGFP与某蛋白连接，可追踪该蛋白在细胞中的分布与含量 16．草甘膦是一种广谱、内吸、高效的灭生性除草剂，它通过与EPSPS（叶绿体中的一种酶）结合，抑制EPSPS的作用，阻断芳香族氨基酸的合成，从而引起细胞死亡。为了提高普通烟草对草甘膦的抗性，科学家通过转基因的方法将某外源EPSPS基因转入烟草的叶绿体中，使其产生更多的EPSPS，使得转基因烟草对草甘膦的抗性比野生型烟草高出约10倍。下列说法正确的是（ ） A．可利用显微注射法将EPSPS基因转入叶绿体中 B．从生物安全角度分析，把基因转入叶绿体比转入细胞核更安全 C．利用PCR技术扩增EPSPS基因所需的原料是四种核糖核苷酸 D．EPSPS基因导入成功后，是否赋予烟草对草甘膦的预期抗性，还需利用PCR技术进行鉴定 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17．（除注明外，每空1分，共10分）奶啤是一种含牛奶的啤酒，是通过微生物发酵将麦汁中的麦芽糖和其他糖类转化为乙酸和乳酸，配以一定比例的原料乳，再经过酒精发酵制作而成，工艺流程如图所示。请回答下列问题： （1）酵母不能直接利用淀粉，可用____________溶液浸泡大麦种子，诱导种子无需发芽也能产生淀粉酶（α—淀粉酶），同时粉碎过程有利于大麦粉与酶的充分接触，以缩短图中所示的________________过程的时间。 （2）接种醋酸菌和乳酸菌制作发酵乳，促进前期酸味的形成。醋酸菌和乳酸菌在同一容器中进行发酵时，不能同时产生乙酸和乳酸，原因是________________________________________。（2分） （3）主发酵阶段在菌种活化的过程中，需定时取样，检测酵母的生长状况。若某次样品经3次10倍稀释后，经台盼蓝染色（体积不计），在25×16型血细胞计数板上计数____________色细胞，5个中格中的细胞数为248个，该样品中活酵母细胞的密度为________________个细胞/mL。 （4）主发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期应____________（从“延长”“缩短”中选填）排气时间间隔。从食品安全的角度考虑，上述工艺流程图中①的操作应该是________________。 （5）敲除酿酒酵母中的某个蛋白酶基因，减少发酵液中蛋白的水解，有助于增强啤酒泡沫的稳定性。用蛋白固体培养基筛选敲除了该基因的酵母菌，野生型可以水解酪蛋白，在菌落周围形成透明圈。需要筛选透明圈较____________（填“大”、“小”）的菌落，表明其蛋白酶活性____________________________。 18．（除注明外，每空1分，共11分）鹤甫碱茅（2n＝28）是禾本科的一种植物，能在低湿盐碱地中生长。科研工作者尝试将其体细胞和水稻（2n＝24）体细胞进行融合，用于制备耐盐、高产的杂种植株，实验流程如下图所示。请回答下列相关问题： （1）上图所示过程用到的细胞工程技术是____________，该①过程中发现水稻的原生质体大量破裂，推测原生质体破裂的可能原因有____________________（至少写出一种）。 （2）融合过程中所依据的原理是____________。如果只考虑细胞两两融合，则理论上融合细胞在不分裂的情况下，染色体数目可能为____________。植物体细胞融合成功的标志是____________________。 （3）诱导原生质体融合的化学法除图示方法外还有________________。 （4）③过程表示____________，该过程一般要使用高钠的________________（填“固体”、“液体”）培养基，获得的植株最终还要检测其________________相关性状，才能判断所得植株是否符合预设要求。 （5）这一新技术在农作物育种方面的应用，相较于传统杂交育种，优点在于________________。（2分） 19．（除注明外，每空1分，共10分）H1N1病毒是甲型流感病毒的一种，也是人类最常感染的流感病毒之一，该病毒危害性很大，可利用细胞工程生产抗H1N1病毒抗体用于检测和治疗，生产流程图如下。请回答下列有关问题。 （1）图中Y细胞和Z细胞分别代表_______和__________。 （2）经过①②过程获得的肝细胞与神经细胞的核基因转录出的mRNA__________（填“相同”或“不完全相同”）。 （3）促进X细胞和Y细胞融合时可采用灭活的病毒，灭活的病毒诱导融合的原理是__________。（2分） （4）③过程先选择培养基对融合后的细胞进行筛选，获得所需细胞，再将其接种到96孔板上进行培养和__________检测。在96孔板的每个孔中尽量只接种1个细胞，原因是_________________________。（2分） （5）已知H1N1病毒表面同一抗原的不同位点可分别与抗体1和抗体2发生特异性结合。现将制备好的抗H1N1抗体1和抗H1N1抗体2用于检测患者是否感染H1N1，原理如下图，其中待测液体加到A处样本垫，B处含有过量游离的结合胶体金的抗体1，C处的垫子上固定有抗体2，D处垫子上固定有与抗体1特异性结合的抗体。将待测液体加到A处，一段时间后，若C处_____________（填“变”、“不变”）红色，D处________________（填“变”、“不变”）红色，则说明受检个体没有感染H1N1。 注：胶体金与抗体1结合后可显红色，胶体金和抗原与抗体1的结合位点不同，且不固定在垫子上。 20．（每空1分，共11分）随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图表示胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体甲是良种荷斯坦高产奶牛，供体乙是健康的黄牛。请据图分析并回答下列问题： （1）图中产生小牛的多个途径中，属于无性繁殖途径的应用有：__________________（填数字）。 （2）应用①、②、③中均运用胚胎工程的最终技术环节是____________，该工程技术的实质是__________________。其优势是______________________________。 （3）应用①中的细胞B常采用__________________法做去核处理，去核前应保证采集的细胞B在体外培养至__________________期，最终获得的良种小牛遗传物质来源于__________________，性别为__________________性。 （4）应用③可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过胚胎分割技术获得二分胚a和b，操作时需要注意____________，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。若要进行性别鉴定，应取______________________________细胞。 （5）与克隆牛相比，试管牛更具有多样性，其原因是试管牛是有性生殖的后代，其亲代减数分裂过程中会发生______________________________。 21．（除注明外，每空1分，共10分）番茄在较低温度下运输或储存时易出现冻伤。科学家利用基因工程技术培育出抗冻番茄，如图为外源DNA和质粒上标出的酶切位点及相关基因，其中AFPs基因为抗冻基因，回答下列问题： （1）基因工程中，常用的工具酶有限制性内切核酸酶和____________。基因工程中使用的载体除质粒外，还有____________等。 （2）基因工程操作程序的核心工作是____________。此题的该过程，科学家应选择____________两种限制酶切割目的基因和质粒，选择两种不同的限制酶切割可以避免____________。（2分） （3）要将含抗冻基因AFPs的质粒导入番茄细胞中，最常用的方法是____________。该方法使含目的基因的质粒能进入番茄细胞并整合到番茄细胞的基因组序列中，整合后可用____________技术在分子水平检测抗冻基因AFPs是否成功出相关蛋白。 （4）欲鉴定转基因抗冻番茄是否培育成功，在个体水平上进行鉴定的方法是____________。（2分） 高二生物学参考答案与评分标准 一、单选题：本题共16小题，每小题3分，共48分。 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 答案 C C A B B C B B 题号 9 10 11 12 13 14 15 16 答案 C D D B D D B B 1.【答案】C 【详解】A.酸浆自然发酵过程中除乳酸菌外，还会有酵母菌等微生物参与，产生少量酒精，醋酸菌为好氧菌，若酸浆储存过久进入氧气，醋酸菌可将酒精转化为乙酸导致酸败，A正确； B.微生物繁殖需要适宜的温度，三伏天温度较高，契合乳酸菌等微生物的适宜生长温度，可加快其繁殖速率，缩短酸浆成熟时间，B正确； C.乳酸菌发酵产生乳酸使酸浆pH较低，多数杂菌不耐酸性环境，生长被抑制，而酵母菌耐酸性较强，因此酸浆能为酵母菌创造竞争优势环境，C错误； D.传统酿酒属于混合发酵，酒曲本身就含有酵母菌、霉菌等多种微生物，且蒸煮的目的是使原料淀粉糊化同时杀灭部分杂菌，确保后续的酿酒过程的顺利进行，D正确。 故选C。 2.【答案】C 【详解】A.土壤中分解尿素的细菌可利用稀释涂布平板法进行分离与计数，平板划线法不能计数，A错误； B.醋酸菌为好氧菌，果醋发酵需持续通入无菌空气，拧紧瓶盖会导致无氧环境，抑制醋酸菌代谢，无法完成醋酸发酵，B错误； C.酵母菌纯培养时，灼烧的接种环需冷却后再蘸取菌液，防止菌种被杀死，C正确； D.探究抗生素对细菌的选择作用时，应先在平板表面涂布细菌，再将含抗生素的滤纸片置于平板表面，D错误。 故选C。 3.【答案】A 【详解】A.单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量微生物菌体，并不是从微生物细胞中提取单细胞蛋白，A错误； B.柠檬酸是通过黑曲霉发酵生产的，B正确； C.利用基因工程菌不仅可以生产药物（如胰岛素、干扰素），还能生产食品工业用酶、氨基酸和维生素等，C正确； D.基因工程操作对象是基因，科学家利用基因工程将病原体的某个或某几个抗原基因转入适当的微生物细胞，获得的表达产物可以作为疫苗，D正确。 故选A。 4.【答案】B 【详解】A.根据题干信息可知，“华柚2号”的核基因组来自“华柚1号”，线粒体基因组来自具有细胞质雄性不育特性的“国庆1号”温州蜜柑，因而推测，失活处理的结果是使A1的细胞核失活，使B1的细胞质失活，A错误； B.①过程需要用纤维素酶和果胶酶进行去壁处理，②过程涉及再生细胞壁，所以该过程需要高尔基体参与，B正确； C.③过程为植物组织培养，植物组织培养过程中，脱分化阶段不需要光照，再分化阶段需要光照，以利于叶绿素的合成等，C错误； D.植物组织培养的过程中，细胞分裂素与生长素的比值高时有利于芽的分化，比值低时有利于根的分化，D错误。 故选B。 5.【答案】B 【详解】A.动物细胞培养（包括悬浮培养）仅能使细胞增殖，不能发育成个体，动物细胞悬浮培养的原理是细胞增殖（有丝分裂），A正确； B.悬浮培养的细胞已通过基因编辑敲除贴壁相关基因，可在培养液中直接悬浮生长，无需使用胰蛋白酶处理（胰蛋白酶用于贴壁培养时分散贴壁细胞），B错误； C.动物细胞培养过程中，代谢废物积累会抑制细胞生长，定期更换培养液可清除废物并补充营养物质（如葡萄糖、氨基酸），这是维持细胞高密度生长的必要措施，C正确； D.动物细胞培养的气体环境通常为95%的空气和5%的CO2，CO2用于维持培养液pH，D正确。 故选B。 6.【答案】C 【详解】A.细胞融合时，会出现三种融合细胞，B淋巴细胞与B淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，A正确； B.丁细胞是经过专一抗体检测后的杂交瘤细胞，均能分泌抗胃癌单克隆抗体，B正确； C.选择培养（丙阶段）的目的是筛选出杂交瘤细胞，但此时筛选出的杂交瘤细胞还未经过专一抗体检测，不一定能产生特定抗体。只有经过专一抗体检测后，才能筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，C错误； D.抗人体胃癌的单克隆抗体可以与胃癌细胞特异性结合，因此可以用来诊断人体是否患胃癌，D正确。 故选C。 7.【答案】B 【详解】A.克隆牛的成功证明了动物体细胞核具有全能性，而不是整个体细胞具有全能性。因为克隆过程中，是将体细胞核移植到去核卵母细胞中发育成完整个体，所以只能说明细胞核具有发育成完整个体的潜能，而不是整个体细胞，A错误； B.激活重构胚的目的是让它进行有丝分裂和胚胎发育，B正确； C.耳缘细胞作为核供体，是因为它易获取、分裂能力稳定，而不是“不再分裂”。实际上，这类体细胞在体外培养时可以进行分裂，只是分化程度较高，C错误； D.克隆牛的遗传物质主要来自供体（雄性犏牛）的细胞核，而犏牛雄性不育是由其细胞核基因决定的遗传特性。因此，克隆得到的雄性犏牛会继承这一特性，依然表现为雄性不育，D错误。 故选B。 8.【答案】B 【详解】A.①过程中，细胞排出了第二极体，说明卵母细胞被激活，处于减数分裂Ⅱ中期，A正确； B.③过程是激活重构胚，常用电刺激、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等激活，B错误； C.单倍体胚胎干细胞应取自囊胚期的内细胞团细胞，滋养层细胞将发育为胎膜等结构，不具有发育全能性，C正确； D.图示为构建孤雌单倍体胚胎过程，故经图示4个过程得到的细胞都只含一套染色体，D正确。 故选B。 9.【答案】C 【详解】A.精子需经获能处理后才能与成熟的卵子结合形成受精卵，常以在卵细胞膜和透明带的间隙观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志，A正确； B.为获得更多的卵子，需要给良种母畜注射促性腺激素，图中①处细胞是内细胞团细胞，对囊胚期的胚胎进行分割时需要注意将内细胞团均等分割，可以避免因切割不均，导致两个胚胎的分裂和进一步发育受影响，B正确； C.在胚胎移植前应取囊胚中滋养层的细胞进行性别鉴定，C错误； D.需要选择同种的生理状态相同（同期发情处理）的雌性个体作为接受胚胎的个体，D正确。 故选C。 10.【答案】D 【详解】DNA连接酶的作用是将限制酶切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，单链DNA中，5′端存在游离的磷酸基团（P），3′端存在-OH，两个DNA片段之间的磷酸基团（P）和-OH在DNA连接酶作用下形成磷酸二酯键，D正确，ABC错误。 故选D。 11.【答案】D 【详解】A.DNA不溶于酒精，蛋白质等杂质可溶于酒精，该原理可用于初步分离DNA与蛋白质，A错误； B.预冷的酒精溶液具有两个功能：第一，能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解；第二，DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质溶于酒精溶液，因此利用酒精溶液可以将DNA析出，B错误； C.粗提取DNA时，离心研磨液的作用是去除细胞碎片等不溶性杂质，DNA溶解于上清液中，并非加速DNA沉淀，C错误； D.DNA与二苯胺试剂反应需要DNA处于溶解状态，应先将DNA丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂沸水浴，直接加入DNA丝状物无法充分反应，不会出现蓝色，D正确。 故选D。 12.【答案】B 【详解】A.图中的酶处理（DNA连接酶）与PCR中的酶（Taq酶）不同，但形成的化学键相同，均涉及磷酸二酯键，A正确； B.①无扩增产物，因质粒Po无胰岛素基因，⑥无扩增产物，可能因胰岛素基因反向插入质粒Po，故①与⑥离心管都没有扩增产物，但形成的原因可能不相同，B错误； C.引物1和引物2扩增出的是胰岛素基因，故②离心管中的Px无法确定胰岛素基因是否被正向插入。引物3和引物4含与Po互补的碱基序列，无法确定④离心管中的Px中胰岛素基因是否被正向插入。Po含与引物4互补的碱基序列，胰岛素基因含与引物1互补的碱基序列，可确定⑧离心管中的Px是胰岛素基因正向插入的重组质粒，因为反向插入应该无扩增产物出现，C正确； D.在PCR反应过程中，复性阶段发生引物与两条模板DNA结合，D正确。 故选B。 13.【答案】D 【详解】A.PCR复性过程是引物与模板DNA单链互补配对的过程，引物长度越长、GC碱基对相对含量越高，引物与模板结合的稳定性越强，所需复性温度越高，因此复性温度与引物长度、GC相对含量有关，A正确； B.DNA带负电，在电场作用下向正极迁移，凝胶的分子筛效应会使更长的DNA片段受到的阻力更大，因此同一电场下，DNA片段越长，在凝胶中迁移速率越慢，B正确。 C.为避免外源DNA等杂质污染，干扰PCR扩增结果，实验使用的微量离心管、枪头、蒸馏水等试剂和耗材，使用前必须进行高温高压灭菌处理，C正确； D.凝胶载样缓冲液中的指示剂仅用于指示电泳的迁移进程，方便判断电泳终止时机，但无法指示DNA分子的具体位置，电泳结束DNA在凝胶上的位置需要经过专门染色后用紫外灯才能观察到，D错误。 故选D。 14.【答案】D 【详解】A.构建重组表达载体时需要用限制酶和DNA连接酶，A错误； B.在转基因操作过程中为检测目的基因是否表达出htPA，可采用抗原—抗体杂交等技术，B错误； C.将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法，将目的基因导入微生物细胞时需要用CaCl2处理，C错误； D.若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达，D正确。 故选D。 15.【答案】B 【详解】A.蛋白质工程以蛋白质的结构和功能的关系为基础，要改造GFP获得荧光增强的eGFP，需要先明确GFP结构和荧光强度增加的关系，A正确； B.目的基因不能直接导入受体细胞，需要先构建基因表达载体才能导入；B错误； C.蛋白质的结构由对应的基因决定，改造蛋白质结构的实质是改造编码该蛋白质的基因的结构，C正确； D.eGFP可以发出绿色荧光，将其与目标蛋白连接后，可通过检测荧光的位置和强度，追踪该蛋白在细胞中的分布与含量，D正确。 故选B。 16.【答案】B 【详解】A.显微注射法主要用于动物细胞的基因导入，植物细胞常用农杆菌转化法或基因枪法。叶绿体作为细胞器，其转基因需特殊技术（如叶绿体同质化载体），显微注射法不适用，A错误； B.将基因转入叶绿体（细胞质基因组）可降低基因通过花粉扩散的风险（因花粉仅含父本核基因），而核基因组转基因可能通过花粉传播至其他物种，故叶绿体转化更安全，B正确； C.PCR扩增目的基因需热稳定DNA聚合酶（如Taq酶），原料为四种脱氧核糖核苷酸（dNTP），核糖核苷酸是转录（RNA合成）的原料，C错误； D.外源基因导入后需检测其表达产物（如EPSPS酶活性）及抗性表型（喷洒草甘膦后的存活情况），以确认是否达到预期抗性效果，以上检测不能利用PCR技术，D错误。 故选B。 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17.（除注明外，每空1分，共10分） （1）赤霉素 糖化 （2）醋酸菌是好氧细菌，在无氧条件下不能存活，而乳酸菌是厌氧细菌，在有氧条件下不能存活（合理即可，2分） （3）无 1.24×1010 （4）延长 灭菌处理或巴氏消毒（合理即可） （5）小 （较）低 【详解】（1）酵母不能直接利用淀粉，可用赤霉素溶液浸泡大麦种子，诱导种子无需发芽也能产生淀粉酶（α-淀粉酶），同时粉碎过程有利于大麦粉与酶的充分接触，以缩短图中所示的糖化（淀粉酶将淀粉分解成糖浆）过程的时间。 （2）接种醋酸菌和乳酸菌制作发酵乳，促进前期酸味的形成。醋酸菌和乳酸菌在同一容器中进行发酵时，不能同时产生乙酸和乳酸，原因是醋酸菌是好氧细菌，在无氧条件下不能存活，而乳酸菌是厌氧细菌，在有氧条件下不能存活。 （3）细胞膜具有选择透过性，用台盼蓝染色，着色的细胞为死细胞。因此，应计数无色细胞。25×16型血细胞计数板上共有25个中格，5个中格中的细胞数为248个，该样品中活酵母细胞的密度为248÷5×25×103×104=1.24×1010个细胞/mL。 （4）主发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期反应速率变慢，应延长排气时间间隔。发酵一定时间后，从食品安全的角度考虑，在上市或入库前应进行①灭菌处理或巴氏消毒处理。 （5）用酪蛋白固体培养基筛选突变体，野生型可以水解酪蛋白，在菌落周围形成透明圈。因此需要筛选透明圈较小的菌落，表明其蛋白酶活性较弱，这样的突变体能减少发酵液中蛋白的水解，有助于增强啤酒泡沫的稳定性，从而改善啤酒的品质。 18.（除注明外，每空1分，共11分） （1）植物体细胞杂交技术 酶解时间过长、酶浓度过高、（培养液）渗透压不适宜（或过低）等 （2）细胞膜（生物膜）具有一定的流动性 56、48、52 再生出新的细胞壁 （3）高Ca2+—高pH融合法 （4）再分化 固体 耐盐、高产 （5）植物体细胞杂交技术在打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种等方面展示出独特的优势（合理即可，2分） 【详解】（1）①去除植物细胞的细胞壁，主要用纤维素酶和果胶酶去除；水稻的原生质体大量破裂，可能是因为酶解时间过长，对原生质体造成过度损伤；也可能是酶浓度过高，破坏了原生质体的结构；或者是渗透压不适宜，原生质体因吸水或失水而破裂等。 （2）细胞融合过程中所依据的原理是细胞膜（生物膜）具有一定的流动性。如果只考虑细胞两两融合，存在鹤甫碱茅细胞-鹤甫碱茅细胞，不分裂时染色体数56；同理水稻细胞-水稻细胞，不分裂时染色体数48；水稻细胞-鹤甫碱茅细胞，不分裂时染色体数52。植物体细胞融合成功的标志是再生出新的细胞壁。 （3）人工诱导植物原生质体间的融合的方法有物理法（离心、振动、电激等）和化学法，除PEG融合法外，还可以用高Ca2+—高pH融合法； （4）②表示脱分化形成愈伤组织的过程，该过程一般不需要光照；题干信息“科研工作者尝试将其体细胞和水稻（2n=24）体细胞进行融合，用于制备耐盐、高产的杂种植株”可知，③过程一般要使用高钠的固体培养基，获得的植株最终还要检测其耐盐、高产相关性状，才能判断所得植株是否符合预设要求。 （5）植物细胞杂交技术相较于传统杂交育种，优点在于：植物体细胞杂交技术在打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种等方面展示出独特的优势。 19.（除注明外，每空1分，共10分） （1）（已免疫的）B淋巴细胞 杂交瘤细胞 （2）不完全相同 （3）病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布（合理即可，2分） （4）抗体 确保每个孔中的子细胞都来源于同一个亲本细胞，便于筛选出能分泌抗H1N1病毒抗体的杂交瘤细胞（合理即可，2分） （5）不变 变 【详解】（1）题图中X细胞为骨髓瘤细胞，Y细胞为已免疫的B淋巴细胞，因此Z细胞为能产生特定抗体的杂交瘤细胞，对该细胞进行体外或体内培养可获得大量的抗体。 （2）经过①②过程获得的肝细胞与神经细胞的核基因相同，因为它们都是由诱导干细胞经过有丝分裂、分化形成的，但由于基因的选择性表达，因此两种细胞中mRNA不完全相同。 （3）灭活的病毒诱导融合的原理是病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布 （4）③过程先用选择培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，再将其接种到96孔板上进行培养和抗原—抗体检测，经过多次筛选后选择出能分泌抗H1N1病毒抗体的杂交瘤细胞。在96孔板的每个孔中尽量只接种1个细胞，这样可以确保每个孔中的子细胞都来源于同一个亲本细胞，便于筛选出能分泌抗H1N1病毒抗体的杂交瘤细胞，进而获得由单一杂交瘤细胞克隆出的细胞群分泌的抗体。 （5）将待测液体加到A处，一段时间后，若待测液体中含有H1N1，则其带有的抗原会与B处的游离的结合胶体金的抗体1结合形成复合物，并向C处移动，由于C处固定有抗体2，因而抗原—抗体1—胶体金复合物在该处会与抗体2结合并聚集，使C处显色，若待测液体中没有H1N1，C处就不会有抗原—抗体1—胶体金复合物在该处会与抗体2结合并聚集，C处就不会有红色出现，多余的胶体金—抗体1复合物继续向D处移动，会与固定在D处的与抗体1特异性结合的抗体结合进而显色，据此可推测，若C处没有变红色，D处变为红色，则说明受检个体没有感染H1N1。 20.（每空1分，共11分） （1）①③ （2）胚胎移植 早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 （3）显微操作 MⅡ中 供体甲和供体乙 雌 （4）将内细胞团均等分割 滋养层 （5）基因重组 【详解】（1）应用①采用了核移植技术，形成克隆动物，属于无性生殖；应用②采用体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植技术，形成的是试管动物，属于有性生殖；应用④表示从早期胚胎或原始性腺中提取胚胎干细胞；应用③采用了胚胎分割技术，属于无性生殖，故图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的为应用①、③。 （2）胚胎工程的最终技术环节是胚胎移植。胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，供体的主要职能变为只产生具有优良遗传特性的胚胎，繁重而漫长的妊娠和育仔的任务由受体取代，大大缩短了供体本身的繁殖周期，并且可以通过超数排卵等技术获得多个胚胎，移植到不同受体中发育，从而加快优良种畜的繁殖速度。 （3）应用①中的细胞B常采用显微操作去核法做去核处理。去核前应保证采集的细胞B（卵母细胞）在体外培养至MⅡ中期。最终获得的良种小牛细胞核遗传物质来源于供体甲（良种荷斯坦高产奶牛），细胞质遗传物质来源于供体乙（健康的黄牛），由于细胞核决定性别，供体甲是雌性，所以小牛性别为雌性。 （4）对囊胚阶段的胚胎通过胚胎分割技术获得二分胚a和b，操作时需要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。若要进行性别鉴定，应取滋养层细胞，因为滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，取滋养层细胞进行鉴定不会影响胚胎的发育。 （5）试管牛是体外受精（有性生殖）的后代，其遗传物质来自父方和母方。亲代减数分裂过程中，同源染色体的非姐妹染色单体互换和非同源染色体自由组合会发生基因重组，导致配子遗传物质多样化，进而使后代（试管牛）具有更高的遗传多样性。 21.（除注明外，每空1分，共10分） （1）DNA连接酶 噬菌体、动植物病毒 （2）基因表达载体的构建 BamⅡ、HindⅢ 目的基因和质粒自身环化或反向连接（2分） （3）农杆菌转化法 抗原—抗体杂交 （4）对转基因番茄进行低温储存（2分） 【详解】（1）基因工程中，常用的工具酶有限制性内切核酸酶（切割目的基因和载体）和DNA连接酶（连接切割后的目的基因和载体）。基因工程中使用的载体除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等。 （2）基因工程操作程序的核心工作是基因表达载体的构建。科学家欲将抗冻基因AFPs切割下来，同时保证目的基因正向插入质粒，以及避免目的基因和质粒的自身环化，应选择两种酶对目的基因和质粒进行切割，由图示可知SmaI会破坏目的基因，故不能选择，据目的基因两端及载体的酶切位点可知，应选择BamHⅠ、HindIII对外源基因和质粒进行切割。 （3）要将含抗冻基因AFPs的质粒导入番茄细胞中，最常用的方法是农杆菌转化法，该方法使含目的基因的质粒能进入番茄细胞并整合到番茄细胞的基因组序列中，整合后可用抗原—抗体杂交技术鉴定抗冻基因AFPs是否成功表达相关蛋白。 （4）欲鉴定转基因抗冻番茄是否培育成功，在个体水平上进行鉴定的方法是对转基因番茄进行低温储存。 学科网（北京）股份有限公司 $