山西高二生物下学期阶段测试2025-2026学年人教版选择性必修三全册

**基本信息** 山西省高二生物选择性必修三阶段测试，以山西特色生物资源（如黄花菜、沙棘、老陈醋）为情境，融合发酵工程、基因工程等核心知识，注重科学思维与探究实践能力考查。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|20/50|发酵工程、植物细胞工程、基因工程等|原创山西情境题（如莜面发酵、沁州黄小米检测），联系地方产业| |非选择题|5/50|微生物培养、单克隆抗体制备、转基因技术等|实验探究题（如影印法筛选菌株、黄芪甲苷工厂化生产），考查科学思维与实践|

Sheet1 题号 题型 知识点 核心素养要求 分值 难度系数 1 单项选择题 食品保存原理 社会责任（STS） 2.5 0.9 2 单项选择题 发酵改良营养 社会责任（STS） 2.5 0.9 3 单项选择题 啤酒发酵工艺 科学探究（实验分析） 2.5 0.65 4 单项选择题 腐烂食品毒素 科学探究（实验分析） 2.5 0.65 5 单项选择题 愈伤组织诱导（激素调节） 科学思维（数据分析） 2.5 0.6 6 单项选择题 体细胞杂交 科学思维（原理应用） 2.5 0.65 7 单项选择题 两阶段培养法 科学思维（原理应用） 2.5 0.65 8 单项选择题 不对称体细胞杂交（核质杂交） 科学思维（逻辑推理） 2.5 0.4 9 单项选择题 iPS细胞（重编程） 生命观念（细胞全能性） 2.5 0.7 10 单项选择题 胚胎分割与移植 科学思维（原理辨析） 2.5 0.6 11 单项选择题 单克隆抗体技术 科学探究（技术流程） 2.5 0.55 12 单项选择题 单克隆抗体筛选与应用 科学探究（技术流程） 2.5 0.55 13 单项选择题 琼脂糖凝胶电泳操作 科学探究（实验操作） 2.5 0.85 14 单项选择题 原核表达载体构建与筛选 科学思维（原理辨析） 2.5 0.5 15 单项选择题 反向PCR技术 科学思维（创新应用） 2.5 0.35 16 单项选择题 基因工程综合 科学思维（创新应用） 2.5 0.35 17 单项选择题 PMA-qPCR活菌检测 科学探究（新技术理解） 2.5 0.3 18 单项选择题 转基因食品安全、伦理 社会责任（伦理辨析） 2.5 0.7 19 单项选择题 转基因食品安全、伦理 社会责任（伦理辨析） 2.5 0.7 20 单项选择题 细菌遗传物质（质粒vs拟核） 科学思维（逻辑推理） 2.5 0.55 21 非选择题 影印法、稀释涂布计数 科学探究（实验设计） 10 0.3 22 非选择题 植物组织培养、酶的专一性 科学思维（原理应用） 10 0.8 23 非选择题 双特异性抗体、动物细胞培养 科学思维（流程分析） 10 0.5 24 非选择题 基因工程+细胞工程（农杆菌转化） 科学探究（综合应用） 10 0.55 25 非选择题 载体构建、重叠延伸PCR、鉴定 科学思维（综合设计） 10 0.25 $ 山西省高二生物下学期阶段测试 选择性必修三全册 （考试时间：75分钟，分值：100分） 一、选择题（共20小题，每小题2.5分，共50分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。） 1.（原创·山西情境）山西大同的黄花菜（萱草）是著名的地理标志产品。在制作黄花菜干制品时，常采用自然晾晒或烘干的方式。从发酵工程的角度分析，这种脱水处理的主要目的是（ ） A.杀死黄花菜表面的所有微生物 B.抑制微生物的生长和繁殖，延长保质期 C.促进黄花菜中酶的活性，增加风味 D.改变黄花菜的细胞结构，便于储存 2.（原创·山西情境）山西忻州的“莜面栲栳栳”是用莜麦（燕麦的一种）制作的特色面食。莜麦富含膳食纤维和蛋白质，但其中含有一定量的植酸，会影响矿物质的吸收。若利用发酵工程技术改良莜面的营养价值，可接种的微生物是（ ） A.乳酸菌（可分解植酸，产生乳酸） B.酵母菌（可产生酒精，增加风味） C.醋酸菌（可产生醋酸，抑制杂菌） D.毛霉（可分解蛋白质，产生氨基酸） 3.传统啤酒酿造过程中，发酵在敞开式发酵池中进行，麦芽汁中接入酿酒酵母后通入大量无菌空气，之后会产生大量气体翻腾逸出，在麦芽汁表面形成25~30cm厚的泡盖（气泡层），然后停止通气，进入静止发酵阶段，一段时间后可得啤酒。下列叙述正确的是（ ） A.传统啤酒酿造过程中所需的菌种无需选育，也不需要对菌种扩大培养 B.泡盖的形成是由于酵母菌有氧呼吸产生大量CO2，能将麦芽汁与空气隔绝 C.焙烤大麦芽可杀死活细胞并使淀粉酶失去活性，有利于增加麦芽汁中麦芽糖的含量 D.静止发酵阶段相当于现代啤酒发酵工程的后发酵阶段 4.食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，实验基本步骤如图所示。下列说法正确的是（ ） A.根据该实验的探究目的，步骤二采用的接种方法是平板划线法 B.在适宜环境下培养8小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量 C.若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低 D.若⑤所在部位微生物的数量极少，则切掉①～④后的苹果便可放心食用 5.研究人员以野生窄叶芍药的幼嫩茎段为外植体，通过在MS培养基中添加不同的植物生长调节剂研究影响愈伤组织诱导的主要因素，结果如下表。下列叙述错误的是（ ） 编号 植物生长调节剂组合 诱导率% 污染率% 褐化率% ① 6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L 84.3 3.60 3.33 ② 6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L 88.8 9.71 13.76 ③ 6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L 79.0 7.14 18.25 ④ 6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L 70.3 1.60 26.70 注：植物组织培养中，（外植体）褐化会导致外植体脱分化、再分化和生长受阻，甚至使培养材料死亡。 A.选择嫩茎为外植体的主要原因是其分化程度低，易于诱导出愈伤组织 B.外植体接种到诱导愈伤组织培养基的操作应在酒精灯火焰旁进行 C.窄叶芍药愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂组合为② D.本研究为野生芍药资源的保护、扩大及开发利用提供了实践参考 6.（原创·山西情境）山西吕梁山区盛产沙棘，但野生沙棘果实小、采摘困难。科研人员尝试利用体细胞杂交技术，将野生沙棘与果实大、易采摘的品种进行融合。下列相关叙述错误的是（ ） A.去除沙棘细胞壁制备原生质体时，需使用纤维素酶和果胶酶处理 B.诱导沙棘原生质体融合的方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法 C.杂种细胞再生出细胞壁是原生质体融合成功的标志，之后需通过植物组织培养获得杂种植株 D.该技术能克服远缘杂交不亲和的障碍，为培育优良沙棘新品种提供了新途径 7.水母雪莲细胞合成的紫檀芪具有抗癌价值，但野生资源有限。科研人员建立细胞悬浮体系，采用“两阶段法”生产：第一阶段在黑暗、摇瓶中培养以积累细胞生物量；第二阶段将细胞转入光照生物反应器，并添加茉莉酸甲酯以提升紫檀芪合成能力。下列推测或叙述错误的是（ ） A.第一阶段黑暗培养可减少能量损耗，利于细胞快速增殖 B.第二阶段的光照主要作为环境信号激活紫檀芪合成途径 C.此方法有助于紫檀芪的规模化生产从而增加其产量 D.茉莉酸甲酯通过促进细胞分裂增加产紫檀芪的细胞数量 8.不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，让其与未经射线照射的受体细胞融合成杂种细胞的技术。所得融合细胞含受体的全部遗传物质及供体的部分遗传物质。研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，期望培育能产生紫杉醇的柴胡。科研人员对获得的部分植株细胞进行染色体观察、计数和DNA分子标记鉴定，结果如下：下列叙述错误的是（ ） 后代植株类型 染色体数目及形态 DNA分子标记鉴定 甲 12，与柴胡染色体相似 含双亲DNA片段 乙 12，与柴胡染色体相似 无红豆杉DNA片段 丙 12，与柴胡染色体相似 含双亲DNA片段和新的DNA片段 A.红豆杉与柴胡融合前需进行细胞去壁处理，且需对柴胡的原生质体进行射线处理 B.可用高Ca2+-高pH融合法、离心法等方法诱导原生质体融合 C.后代乙类型一定不是所需植株，后代甲和丙类型不一定能够产生紫杉醇 D.红豆杉亲本的遗传物质可能以DNA片段的方式整合进柴胡的基因组 9.iPS细胞可培育出不同细胞（过程如图所示），用于治疗阿尔兹海默症、心血管等疾病。下列相关叙述错误的是（ ） A.图示过程说明人体内细胞分化具有可逆性 B.培养成纤维细胞时，需要CO2培养箱进行培养 C.病人的成纤维细胞诱导而成的iPS细胞用于自身疾病的治疗，可避免免疫排斥 D.iPS细胞中可能含有c-Myc、Klf4、Sox2和Oct-3/4表达的蛋白质 10.（原创·山西情境）晋南牛是我国优良的黄牛品种。为了加快良种晋南牛的繁育速度，养殖场采用了胚胎分割和胚胎移植技术。下列有关叙述错误的是（ ） A.对供体母牛注射促性腺激素进行超数排卵处理，可获得更多的卵母细胞 B.胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚，并注意将内细胞团均等分割 C.受体母牛必须与供体母牛进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境 D.经胚胎分割产生的后代，其遗传物质完全相同，表现型也一定完全相同 11.单克隆抗体的筛选是建立杂交瘤细胞株的关键步骤之一。在筛选时，研究人员首先分别吸取96孔板的每个培养孔的上清液，利用酶联免疫吸附技术检测上清液中抗体的类型与相对浓度，如图所示，其中P为有色产物。下列有关叙述不正确的是（ ） A.三次充分洗涤的目的分别是冲洗掉没有结合的抗原、待测抗体、酶标抗体 B.利用96孔板培养时应确保每个孔中至少有一个杂交瘤细胞，以产生大量抗体 C.若第三次洗涤不充分，则单位时间内反应体系中有色产物P的生成量可能会增多 D.该方法可用于检测小鼠腹水或培养液中某抗体的浓度，确定适宜的收集时间 12.（原创·山西情境）山西特产“沁州黄小米”营养丰富，但市场上偶有假冒伪劣产品。为了快速检测小米中是否掺入了其他廉价谷物（如玉米），科研人员制备了针对玉米特异性蛋白的单克隆抗体。下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是（ ） A.向小鼠体内注射玉米特异性蛋白，目的是刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 B.细胞融合完成后，融合体系中只含有杂交瘤细胞和未融合的细胞两种类型 C.杂交瘤细胞在体外培养时，会出现接触抑制现象，需定期用胰蛋白酶处理 D.单克隆抗体最主要的优点是灵敏度高、特异性强，且可大量制备 13.关于“琼脂糖凝胶电泳”实验，下列叙述错误的是（ ） A.根据待分离DNA片段的大小，需用缓冲液配制0.8%～1.2%的琼脂糖溶液 B.向琼脂糖溶液中加入适量的核酸染料后，需在沸水浴内加热至琼脂糖熔化 C.将PCR产物和载样缓冲液混合后，需用微量移液器将混合液缓慢注入加样孔 D.待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，需及时断电并取出凝胶置于紫外灯下观察 14.（原创·山西情境）山西老陈醋以其独特的风味闻名全国，其发酵核心菌株为醋酸杆菌。为了提高醋酸产量，科研人员欲将耐高浓度乙醇的基因导入醋酸杆菌中。下列关于基因工程操作的叙述，正确的是（ ） A.构建基因表达载体时，需用同一种限制酶切割目的基因和运载体，以保证产生相同的黏性末端 B.醋酸杆菌作为原核生物，其基因结构中不含内含子，因此从真核生物获取的目的基因可直接在其体内表达 C.筛选含有重组DNA分子的醋酸杆菌时，可利用标记基因表达的产物进行检测 D.PCR技术扩增目的基因时，引物结合在模板DNA的3'端，DNA聚合酶从引物的5'端开始延伸子链 15.如图所示，在一段未知序列的突变体DNA片段中，插入了己知序列的T-DNA，要想对T-DNA两侧的未知序列进行测序，下列做法正确的是（ ） A.用引物1和引物4直接进行PCR扩增之后再测序 B.用引物2和引物3直接进行PCR扩增之后再测序 C.用DNA连接酶连接成环状后，再用引物1、4PCR扩增后测序 D.用DNA连接酶连接成环状后，再用引物2、3PCR扩增后测序 16.（原创·山西情境）某科研团队为了提升老陈醋的发酵效率，计划利用基因工程技术对醋酸菌进行改造，使其能够高效表达一种耐酸性极强的α-淀粉酶基因（amyA），从而直接利用淀粉原料进行产醋。研究人员构建了如图所示的重组质粒，并利用农杆菌转化法将其导入醋酸菌中（注：lacZ基因表达的β-半乳糖苷酶能催化无色底物X-gal产生蓝色物质，使菌落呈蓝色；Amp^r为氨苄青霉素抗性基因）。下列相关叙述错误的是（ ） A. 为保证amyA基因在醋酸菌中高效表达，构建重组质粒时需在其首端接入醋酸菌的强启动子 B. 若使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶切割质粒和目的基因，能有效防止质粒和目的基因的自身环化及反向连接 C. 将转化后的醋酸菌接种在含有氨苄青霉素、X-gal和淀粉的固体培养基上，应挑选白色的透明圈菌落作为工程菌 D. 若amyA基因成功导入醋酸菌染色体DNA中，则该醋酸菌产生的子代个体一定都能稳定遗传耐酸性淀粉酶性状 17.PMA（叠氮溴化丙锭）是一种可以插入死细胞DNA的染料，该染料一旦插入到DNA中，就会抑制后续qPCR扩增。利用PMA-qPCR可以快速测得溶液中活菌的数量，PMA处理后，提取样品细菌DNA进行qPCR。（注：qPCR是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链碱基互补配对的荧光探针，当TaqDNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子。）下列说法错误是（ ） A.提取样品细菌DNA前需要除去多余的PMA B.qPCR所用的引物可根据细菌中拟核DNA序列来设计 C.TaqDNA聚合酶具有5'→3'聚合活性和核酸水解酶的活性 D.据图可知每个DNA扩增一次，就产生两个荧光信号 18.科学家将金鱼草的橙色花青素合成基因导入水稻，培育出“黄金大米”。为确保其安全性，需特别检测（ ） A.花青素合成基因是否整合到水稻基因组 B.转基因大米中维生素A前体含量是否稳定 C.花青素合成酶是否会引起人体过敏反应 D.转基因水稻是否产生基因突变 19.生物技术的安全性与伦理性一直是人类关注和讨论的热点问题。下列叙述正确的是（ ） A.转基因技术的原理是基因重组，不会改变生物的遗传多样性 B.“试管婴儿”与“设计试管婴儿”都要进行胚胎选择，但二者的选择目的不同 C.生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力 D.因为向受体转入其他物种的基因，所以转基因产品是有危害的 20.炭疽杆菌造成感染者死亡率极高的主要原因之一是它能产生两种成分为蛋白质的内毒素。有科学家将该菌的大型环状DNA分子破坏，该菌仍能产生内毒素。下列对炭疽杆菌的叙述，不正确的是（ ） A.炭疽杆菌合成的内毒素属于代谢产物 B.控制内毒素合成的基因位于炭疽杆菌的拟核中 C.若将炭疽杆菌用于军事用途或恐怖活动，则属于生物武器 D.将蜡样芽孢杆菌改造成像炭疽杆菌一样的致病菌需要通过转基因技术 二、非选择题（共5小题，共50分） 21.（10分，除标注外每空2分）研究人员用甲基磺酸乙酯（EMS）处理大肠杆菌，使鸟嘌呤烷基化，从而获得了无法合成赖氨酸的营养缺陷型菌株。如图是科研人员利用影印法（将丝绒布轻轻按压在平板的菌落表面，粘附菌体。然后将粘有菌落的丝绒布按压到新的培养基上，使菌落“复印”到新平板上）初检赖氨酸缺陷型菌株的过程。回答下列问题： （1）获得纯净的微生物培养物的关键是 。（1分）某次培养由于操作不当，培养基上存在多个不同种类的微生物菌落，其中一个菌落由 形成且无杂菌污染是纯培养物。 （2）影印法接种时需要注意丝绒布不转动任何角度目的是 。 （3）进行图示②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至 （基本/完全）（1分）培养基上，再“复印”至另一培养基。赖氨酸缺陷型菌株应在图中的菌落 菌落数为220个，则菌液中该菌株的细胞数为 个/ml。 22.（10分，每空2分）狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生植物，其产生的黄酮类化合物可入药，但狼爪瓦松野生资源有限，通过植物细胞工程大规模培养的流程如图所示，其中的数字序号代表处理或生理过程。回答下列问题： （1）将狼爪瓦松幼嫩的叶消毒后用 清洗。通过③过程获得植株乙，需要调整不同植物激素的 来诱导芽和根的分化。 （2）⑤过程获得原生质体时，需要用相关酶去除细胞壁，但不用特意严格限制处理时间，原因是 。 （3）⑥过程通过培养愈伤组织来大量生产黄酮类化合物，该过程利用了植物细胞培养技术，该技术的原理是 ，与从植株中直接提取相比，该方法的优势是 （答出2点）。 23.（10分，每空2分）癌症免疫疗法是指重新激活抗肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫逃逸。某些种类癌细胞表面有高表达的蛋白PSMA，CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于癌细胞与T细胞聚集。图甲为科研人员尝试构建的双特异性抗体PSMA×CD28生产流程图；图乙为双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理图。回答下列问题： （1）据图甲分析可知，制备双特异性抗体PSMA×CD28的过程中，涉及到的动物细胞工程技术主要有 。 （2）制备双特异性抗体PSMA×CD28时，应先将 （填物质X的具体名称）分别注射到小鼠体内再分离出B淋巴细胞。 （3）若要使能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有 （2种）。 （4）抗体都是由两条H链和两条L链组成的4条肽链对称结构。由于融合细胞会表达出两种L链和两种H链且L链和H链又能随机组合，因此杂交瘤细胞A×B会产生 （填“一种”或“多种”）抗体。双特异性抗体PSMA×CD28协助杀伤癌细胞的机理是 。 24.（原创，山西药用植物·黄芪的工厂化生产，每空2分，共10分） 黄芪是著名的“晋药”，其主要活性成分黄芪甲苷具有增强免疫力的功效。传统种植受环境影响大，科研人员利用生物工程技术实现了黄芪甲苷的工厂化生产。请回答下列问题： （1）科研人员首先取黄芪无菌苗的叶片为外植体，接种到含有适宜配比的 （填植物激素种类）的培养基上，诱导形成愈伤组织。 （2）为了提高黄芪甲苷的产量，研究者从另一种高产植物中克隆了关键合成酶基因（HMG基因）。在构建基因表达载体时，为了保证HMG基因能定向插入Ti质粒的T-DNA中，应选用不同限制酶分别切割含HMG基因的DNA片段和Ti质粒。构建好的重组质粒需导入农杆菌，再利用农杆菌转化法侵染黄芪愈伤组织，其原理是利用了农杆菌Ti质粒上的T-DNA具有 的特点。 （3）将转化后的愈伤组织进行液体悬浮培养，以获得单细胞或小细胞团。在培养过程中，需要不断通入无菌空气并进行搅拌，搅拌的主要目的是 。 （4）经过多轮筛选，获得了一株高产细胞系。若要检测该细胞系中HMG基因是否成功转录出了mRNA，可采用 技术；若要检测黄芪甲苷的产量是否提高，则需要进行个体生物学水平的鉴定，具体做法是 。 25.（10分，每空2分）夏侧金盏花是高等植物中罕见的能合成虾青素的物种，Adkc基因是其虾青素合成的关键酶基因，科研人员利用分子克隆技术构建了含Adkc基因的双T-DNA表达载体，如右图1所示，并将其通过农杆菌转化法导入番茄（番茄富含虾青素前体-胡萝卜素，无虾青素合成能力），最终获得能高效合成虾青素且无抗生素筛选标记的转基因番茄。已知E8为果实特异性启动子，Hsp为终止子，NplI为卡那霉素抗性基因，Cnrf为氯霉素抗性基因，HindIlII和Xhol是两种限制酶。回答下列问题: （1）Hsp作为终止子，其功能是 。 （2）科研人员为了将E8、Adkc和Hsp按顺序连接在T-DNA中，首先采用重叠延伸PCR将Adkc基因和Hsp拼接为一个“融合基因”。其设计思路是： ①首先让Adkc的反向引物和Hsp的正向引物存在部分重叠序列分别扩增，如下图2所示。则引物F2-F、F1-R应在图3选项中分别选用 ②为获得“融合基因”，须将Adke和Hsp的扩增产物混合后用 （填“FI-F和F2-R”、“F1-R和F2-F”或“不使用”）引物进一步扩增。 ③将“融合基因”与己包含E8启动子的质粒连接，形成环化质粒。 （3）可通过 （填写方法）鉴定该农杆菌转化的番茄植株是否成功表达adke基因。 （4）请写出利用该载体再次获取完整的Adke基因编码区的简要思路： 学科网（北京）股份有限公司 $ 山西省高二生物下学期阶段测试 选择性必修三全册 答案及解析 一、选择题（共20小题，每小题2.5分，共50分） 1. 答案：B 解析：本题结合山西大同黄花菜情境考察发酵工程中“脱水处理”的目的。脱水（降低水分活度）主要是为了抑制微生物的生长和繁殖，从而延长保质期。A选项“杀死所有微生物”通常需要高温灭菌，单纯的晾晒很难做到“所有”；C、D并非脱水的主要目的。 2. 答案：A 解析：考察发酵工程改良食品营养。莜麦中的植酸会影响矿物质吸收。乳酸菌在发酵过程中可以分解植酸，产生乳酸，降低pH，从而提高矿物质的生物利用率。酵母菌主要用于产气（CO2）和酒精，醋酸菌产醋酸，毛霉主要分解蛋白质。 3. 答案：B 解析：考察啤酒酿造工艺。 A错误：传统酿造虽然利用天然菌种，但现代发酵工程强调优良菌种的选育和扩大培养。 B正确：通入无菌空气，酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖并产生CO2，形成厚厚的泡盖，这层泡盖能有效将麦芽汁与空气隔绝，为后续的无氧发酵（酒精发酵）创造条件。 C错误：焙烤大麦芽是为了产生风味物质，且高温会使淀粉酶失活，但这不利于糖化，实际生产中需要控制温度保留酶活性或后续添加酶。 D错误：静止发酵阶段主要是酒精发酵，相当于主发酵，而非后发酵（后发酵通常指下酒后的低温陈酿）。 4. 答案：C 解析：考察腐烂水果毒素扩散实验。 A错误：根据图示，步骤二将样品稀释后接种，目的是计数和分离，通常采用稀释涂布平板法，平板划线法一般不用于定量。 B错误：8小时培养时间太短，且“全部微生物”很难在一种培养基上长出。 C正确：若菌落种类数量由①（腐烂中心）向⑤（健康部位）减少，说明微生物代谢产生的毒素可能随着扩散距离增加而浓度降低。 D错误：即使微生物数量极少，毒素可能已经扩散，切掉腐烂部分后剩余部分也可能含有毒素，不能放心食用。 5. 答案：C 解析：考察植物组织培养中愈伤组织的诱导。 A正确：嫩茎分生能力强，易脱分化。 B正确：无菌操作是必须的。 C错误：最佳组合不仅要看出诱导率，还要看污染率和褐化率。②号虽然诱导率最高（88.8%），但污染率（9.71%）和褐化率（13.76%）也较高。相比之下，①号诱导率高且各项指标稳定，通常认为综合指标更优。题目问“错误”的叙述，C项直接断定②为最佳，忽略了褐化和污染风险。 D正确：这是研究的意义。 6. 答案：B 解析：考察植物体细胞杂交。 A正确：去壁需要纤维素酶和果胶酶。 B错误：诱导植物原生质体融合的方法有物理法（电融合、离心）和化学法（PEG）。灭活病毒诱导法是用于动物细胞融合的，不适用于植物。 C、D正确：融合后需再生细胞壁，再通过组织培养得到植株，可以克服远缘杂交不亲和。 7. 答案：D 解析：考察细胞工程“两阶段法”培养。 A正确：第一阶段黑暗培养利于细胞增殖（生物量积累）。 B正确：第二阶段光照作为信号激活次生代谢途径。 C正确：悬浮培养利于规模化。 D错误：茉莉酸甲酯通常作为诱导子（elicitor），诱导植物细胞合成次生代谢物（紫檀芪），而不是促进细胞分裂。促进分裂的是生长素和细胞分裂素。 8. 答案：A 解析：考察不对称体细胞杂交技术。 A错误：题干明确指出“利用射线破坏供体细胞的染色质”。红豆杉是供体（提供紫杉醇合成基因），柴胡是受体。因此需要对红豆杉的原生质体进行射线处理，而不是柴胡。 B正确：高Ca2+-高pH、离心均可诱导融合。 C正确：乙不含红豆杉DNA，肯定不是；甲和丙虽然含片段，但不一定含全套合成基因或能表达。 D正确：射线处理可能导致供体DNA片段整合。 9. 答案：A 解析：考察iPS细胞。 A错误：图示过程是体细胞（成纤维细胞）通过导入因子变成iPS细胞，这属于人工诱导的重编程，并不能说明人体内细胞分化在自然状态下具有可逆性。在体内，细胞分化通常是不可逆的。 B正确：动物细胞培养通常需要CO2培养箱维持pH。 C正确：自体移植避免免疫排斥。 D正确：Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc是著名的“山中伸弥因子”。 10. 答案：D 解析：考察胚胎工程。 A正确：促性腺激素用于超数排卵。 B正确：桑葚胚或囊胚适合分割，内细胞团需均等分割。 C正确：同期发情保证生理环境一致。 D错误：经胚胎分割产生的后代遗传物质（核基因）理论上相同，但表现型受细胞质基因（线粒体）和环境因素影响，不一定完全相同。 11. 答案：B 解析：考察单克隆抗体筛选（ELISA原理）。 A正确：洗涤是为了去除非特异性结合物。 B错误：利用96孔板进行有限稀释法时，目的是确保每个孔中最多有一个杂交瘤细胞（或概率上大部分孔为单细胞），从而获得单克隆。B项说“至少有一个”，这样会导致多个细胞混合生长，无法保证单克隆性。 C正确：若洗涤不充分，残留的酶标抗体会催化底物显色，导致假阳性或背景值升高（有色产物增多）。 D正确：该方法可用于定量检测抗体浓度。 12. 答案：A 解析：考察单克隆抗体制备。 A正确：向小鼠注射抗原（玉米特异性蛋白），目的是使其产生免疫反应，生成相应的B淋巴细胞。 B错误：融合体系中包含：未融合的B细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B-B融合、瘤-瘤融合、以及杂交瘤细胞。 C错误：杂交瘤细胞是骨髓瘤细胞（癌细胞）和B细胞的融合，通常不会出现接触抑制，可以无限增殖。 D虽然也是单抗的优点，但题目问“制备过程”的叙述，A更符合过程描述。 13. 答案：B 解析：考察琼脂糖凝胶电泳。 A正确：0.8%-1.2%是常用浓度范围。 B错误：核酸染料（如Goldview或EB）通常是在琼脂糖冷却至60℃左右（不烫手但未凝固）时加入，不能在沸水浴中加入，因为高温可能会降解某些染料或导致挥发。 C正确：PCR产物需与载样缓冲液（含甘油和指示剂）混合后点样。 D正确：电泳结束标准是指示剂跑到凝胶边缘。 14. 答案：C 解析：考察基因工程在原核生物中的应用。 A错误：为了防止自身环化和实现定向连接，通常用两种限制酶切割。 B错误：虽然醋酸杆菌是原核生物，但如果目的基因来自真核生物，可能含有内含子，原核生物无法切除内含子（无真核的剪接体），因此通常需要使用cDNA（互补DNA，由mRNA反转录而来，无内含子）。 C正确：标记基因（如抗性基因）用于筛选含有重组DNA的受体细胞。 D错误：引物结合在模板的3'端，DNA聚合酶从引物的3'端开始延伸（方向5'→3'），不是5'端。 15. 答案：C 解析：考察反向PCR（Inverse PCR）原理。 目的：扩增已知序列（T-DNA）侧翼的未知序列。 C正确：将酶切后的DNA片段用DNA连接酶连成环状，然后设计引物（引物1和引物4，方向向外），就可以扩增出中间的未知序列。 A、B错误：直接PCR无法扩增未知序列（没有引物结合位点）。 D错误：引物2和3在环状结构上无法扩增出目标片段。 16. 答案：D 解析：A项正确：启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。为了让外源的amyA基因在受体细胞（醋酸菌）中高效表达，必须将其连接在适合该受体细胞的强启动子之后。 B项正确：使用两种不同的限制酶（BamHⅠ和HindⅢ）进行双酶切，可以使质粒和目的基因的两端产生不同的黏性末端。这样既能防止质粒和目的基因发生自身环化，又能保证目的基因以正确的方向（定向）插入质粒，避免了反向连接。 C项正确：这是典型的蓝白斑筛选结合功能筛选。 含有重组质粒的细菌，由于目的基因amyA插入到了lacZ基因内部，破坏了lacZ基因的结构，导致其无法表达β-半乳糖苷酶，因此菌落不能分解X-gal产生蓝色物质，表现为白色。 同时，该工程菌表达了耐酸性α-淀粉酶，能分解培养基中的淀粉，因此在菌落周围会形成透明圈。 此外，培养基中加入氨苄青霉素是为了筛选出导入了含抗性基因质粒的细菌。因此，应挑选白色的透明圈菌落。 D项错误：即使amyA基因成功导入醋酸菌的染色体DNA中，该性状的遗传也不一定绝对稳定。 首先，外源基因可能会因为位置效应、表观遗传修饰（如甲基化）等原因发生基因沉默，导致性状丢失。 其次，在细菌的分裂和传代过程中，染色体可能会发生突变或重组，导致目的基因丢失或失活。 最后，如果导入的基因整合在质粒上而非染色体上（虽然题干假设整合在染色体），质粒在细胞分裂时也可能分配不均导致丢失。因此，“一定都能稳定遗传”的表述过于绝对。 17. 答案：D 解析：考察PMA-qPCR检测活菌。 A正确：PMA会抑制PCR，提取DNA前需去除多余染料。 B正确：引物通常根据保守序列（如16S rRNA或拟核特定序列）设计。 C正确：Taq酶具有聚合活性和5'→3'外切酶活性（水解探针）。 D错误：在TaqMan探针法中，每扩增一个子代双链DNA，就会水解一个探针，产生一个荧光信号，而不是两个。 18. 答案：C 解析：考察转基因生物的安全性。 A、B、D也是需要检测的，但题目问“为确保其安全性”。 C正确：黄金大米导入的是花青素合成基因，属于外源蛋白。食品安全性评价的核心原则之一是致敏性评价，即该新表达的蛋白质是否会引起人体过敏反应。这是直接关系到食用安全的关键点。 19. 答案：B 解析：考察生物技术伦理。 A错误：转基因技术通过基因重组，实际上增加了生物的遗传多样性（引入了新基因）。 B正确：“试管婴儿”通常指解决不孕不育，主要进行性别/遗传病筛查；“设计试管婴儿”通常指为了治疗疾病（如提供骨髓配型）而进行胚胎选择。二者都有选择，但目的不同。 Abstract: C错误：干扰素是免疫活性物质，通常不被视为生物武器成分。生物武器包括致病菌、病毒、毒素等。 D错误：转基因产品经过安全评价后上市的通常是安全的，不能一概而论说“都有危害”。 20.答案：B 解析：考察细菌的结构与代谢。 A正确：内毒素是代谢产物。 B错误：题干说“将大型环状DNA分子破坏，该菌仍能产生内毒素”。细菌的大型环状DNA通常是拟核（染色体）。如果破坏拟核后仍能产生毒素，说明控制毒素的基因位于质粒（小型环状DNA）上，而不在于拟核中。 C正确：炭疽杆菌是典型的生物战剂。 D正确：改造细菌致病性需要基因工程（转基因）技术。 第二部分：非选择题答案解析 21. 题（10分）：微生物的筛选与计数（影印法） (1) 纯培养物。解析：由单一个体繁殖形成的群体称为纯培养物（或纯种）。 (2) 保持菌落的相对位置不变。解析：影印法的核心在于定位，不转动角度是为了保证在不同培养基上菌落的位置对应关系，便于对比筛选。 (3) 基本；A； 。 解析：营养缺陷型菌株只能在完全培养基上生长，在基本培养基上不能生长。 顺序：先印到基本培养基，再印到完全培养基。在基本培养基上不长但在完全培养基上长的菌落即为缺陷型。图中A在基本培养基上未出现（被影印走了），说明它是缺陷型。 计算： 。 22. 题（10分）：植物细胞工程（狼爪瓦松） (1) 无菌水；浓度、用量比例。 解析：外植体消毒后需用无菌水清洗去除残留消毒剂。激素的比例（如生长素/细胞分裂素比值）决定脱分化和再分化方向。 (2) 酶具有专一性，细胞壁和细胞膜的成分不同。 解析：纤维素酶和果胶酶只分解细胞壁（纤维素和果胶），不分解细胞膜（磷脂和蛋白质），因此酶解时间稍长一般不会破坏原生质体。 (3) 细胞增殖；不占用耕地，几乎不受季节、天气等限制（或：可大规模工厂化生产；提取效率高；不破坏野生资源等）。 解析：愈伤组织生产次生代谢物利用的是细胞分裂增殖的原理。 23. 题（10分）：动物细胞工程与免疫（双特异性抗体） (1) 动物细胞融合、动物细胞培养。 (2) PSMA、CD28。 解析：要制备双特异性抗体，需要分别用两种抗原免疫小鼠，获得针对这两种抗原的B淋巴细胞。 (3) 将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖；将杂交瘤细胞在体外培养。 (4) 多种；双特异性抗体PSMA×CD28既能结合PSMA，又能结合CD28，使得癌细胞与T细胞可更好的聚集。 解析：杂交瘤技术A+B会产生多种抗体组合（A-A, B-B, A-B），需要筛选。双抗的作用是“桥接”癌细胞和T细胞。 24. 题（10分）：基因工程与细胞工程（黄芪甲苷） (1) 生长素和细胞分裂素。 (2) 不同；Ti质粒上的T-DNA具有可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。 解析：定向克隆需双酶切。农杆菌转化法的原理是T-DNA的转移整合特性。 (3) 使细胞与培养液充分接触，增加溶解氧含量。 (4) 分子杂交；提取细胞中的黄芪甲苷并进行含量测定。 · 解析：检测mRNA用分子杂交（或RT-PCR）；检测产物含量需进行化学分析（如色谱法）。 25. 题（12分）：基因工程综合（番茄合成虾青素） (1) 调控基因转录的终止。 (2) C、D；不使用。 解析：重叠延伸PCR。F2-F需要包含Hsp的重叠序列（选C），F1-R需要包含Adkc的重叠序列（选D）。第二步扩增融合基因时，利用的是第一步产物末端的互补配对，通常不需要加引物进行延伸拼接（或者使用外侧引物，但题目选项中“不使用”更符合常规重叠延伸的第一步拼接逻辑，即靠退火延伸）。 （注：此处根据图示逻辑，F1-F和F2-R是外侧引物，拼接中间片段时通常先让内侧引物扩增出带重叠的片段，混合后不加引物进行变性退火延伸（或循环），形成环状或长片段）。 (3) 抗原-抗体杂交；检测番茄果实中的虾青素含量。 (4) 利用限制酶HindIII+XhoI对重组载体进行充分酶切；以重组载体为模板，设计特异性引物对进行PCR扩增。 解析：获取编码区通常用限制酶切下或PCR扩增。由于载体上有这两个酶切位点，且Adkc位于其间，故可用双酶切回收，或直接设计引物PCR。 学科网（北京）股份有限公司 $