广西高二生物下学期期末测试卷（人教版高中生物选择性必修3）

**基本信息** 高二生物下学期期末测试卷，聚焦现代生物技术，原创题与新情境题结合（如黄金大米、克隆猴培育），注重科学思维与探究实践，适配期末复习与检测需求。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|16题/40分|DNA提取、PCR、单克隆抗体、植物体细胞杂交等|原创题（如第1题PCR实验分析）、新情境题（如第6题黄金大米）| |非选择题|5题/60分|植物细胞工程、微生物分离、基因表达载体构建、克隆猴培育等|结合科研流程（如第18题微生物分离计数），突出探究实践与科学思维|

Sheet1 题号 题型 分值 必备知识 关键能力 学科素养 学业质量水平 难度系数 1 选择题 2 DNA提取鉴定、PCR扩增 实验分析与判断 科学探究、科学思维 水平2 0.65 2 选择题 2 miRNA、胚胎发育、体外受精 信息提取与推理 生命观念、科学思维 水平2 0.6 3 选择题 2 单克隆抗体制备、HAT筛选 过程分析、原理应用 科学探究、社会责任 水平2 0.6 4 选择题 2 植物体细胞杂交、动物细胞工程 原理匹配判断 生命观念、科学思维 水平2 0.65 5 选择题 2 动物细胞培养、原代/传代培养 过程辨析 科学探究 水平2 0.65 6 选择题 2 基因工程、载体构建、标记基因 基因工程操作分析 科学思维、社会责任 水平2 0.6 7 选择题 2 克隆技术、胚胎工程 技术流程分析 科学思维、生命观念 水平2 0.55 8 选择题 2 体细胞核移植、胚胎移植 流程正误判断 科学探究、科学思维 水平2 0.6 9 选择题 2 单克隆抗体、抗原决定簇 概念辨析与推理 生命观念、科学思维 水平2 0.55 10 选择题 2 发酵工程、柠檬酸发酵 条件分析、产物提取 科学思维、社会责任 水平2 0.6 11 选择题 2 植物组织培养、外植体选择 条件判断 科学探究 水平2 0.65 12 选择题 2 微生物分离、选择培养基 培养基功能判断 科学探究 水平2 0.65 13 选择题 4 胡萝卜组织培养 操作细节辨析 科学探究 水平2 0.55 14 选择题 4 传统发酵技术 菌种与条件辨析 社会责任、科学思维 水平2 0.6 15 选择题 4 蛋白质工程 原理与过程分析 科学思维、创新 水平2 0.5 16 选择题 4 植物体细胞杂交育种 流程与原理分析 生命观念、科学思维 水平2 0.55 17 非选择题 12 植物体细胞杂交、组织培养、次生代谢物 综合分析、表述 科学探究、科学思维 水平2 0.5 18 非选择题 8 尿素分解菌分离、计数、鉴定 实验设计、计算 科学探究 水平2 0.55 19 非选择题 8 单克隆抗体制备 流程梳理、原理应用 科学探究、社会责任 水平2 0.55 20 非选择题 14 基因工程、载体构建、农杆菌转化 综合分析、设计 科学思维、创新 水平2 0.45 21 非选择题 12 核移植、克隆动物、胚胎工程 过程分析、表述 生命观念、科学思维 水平2 0.45 $ 应用场景：期末复习卷/期末测试卷 高二生物下学期期末测试题 注意事项： 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、选择题（本题共16小题，在每一个小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。第1~12小题，每小题2分；第13~16小题，每小题4分，共40分） 1．（原创）下列关于DNA提取鉴定与PCR扩增实验的表述，不正确的是（） A．植物组织破碎取滤液后，低温冷藏静置能富集DNA B．用冷酒精溶解析出的DNA絮状物，即可直接用二苯胺显色鉴定 C．PCR中四种脱氧核苷三磷酸兼具原料和能源物质功能 D．引物设计不合理、特异性低会造成PCR产物电泳条带杂乱 2．研究发现,微小RNA(miRNA)的合成与胚胎的早期发育有密切关系。科研人员以小鼠卵母细胞为材料,研究miR-135(一种miRNA)的合成情况对胚胎发育的影响,技术路线和最后收集高质量和低质量囊胚并统计来源于对照组和实验组的比例,具体情况如图所示。下列说法正确的是() A.通常选用早期胚胎的内细胞团进行DNA分析等检测 B.将MI期的卵母细胞与刚采集的精子共同培养完成体外受精 C.miR-135的合成过程不需要核糖体的直接参与 D.miR-135会抑制胚胎的发育导致胚胎质量降低 3．已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但其一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但其能不断分裂增殖。如图是科研人员为制备抗登革热病毒单克隆抗体而设计的流程图。下列叙述正确的是(      ) A.图中过程①获得的淋巴细胞都能产生抗登革热病毒的抗体 B.过程③使用的HAT培养基中要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需加入血清等天然成分；除此之外，还必须加入动物激素 C.可分别从④的各个小室中提取抗体，与登革热病毒混合，出现阴性反应的小室中的细胞就是所需的杂交瘤细胞 D.制备的单克隆抗体可以用于登革热病毒的检测，利用了抗原抗体特异性结合的原理 4．（原创题）下列有关植物体细胞杂交技术与动物细胞工程相关技术的叙述，所用方法、技术与其对应原理不匹配的是（） A.植物组织培养培育完整植株、杂交瘤细胞制备单克隆抗体——均依据细胞全能性 B.利用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁——酶具有专一性 C.植物原生质体融合、动物体细胞融合形成融合细胞——细胞膜具有一定流动性 D.悬浮培养人参细胞生产人参皂苷、体外培养杂交瘤细胞——依靠细胞分裂增殖 5．下图为肾脏上皮细胞培养过程示意图。下列有关叙述错误的是(      ) A.甲→乙过程可用机械法或酶解法处理获得单个细胞 B.丙过程指细胞在添加血清的合成培养基中原代培养 C.丙过程会出现细胞贴壁生长和接触抑制现象 D.丁过程为传代培养，细胞都能进行无限增殖 6.（新情境题）八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtI表示）参与β胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtI基因转入水稻，使水稻胚乳中含有ß-胡萝卜素，由此生产出的大米称为“黄金大米”。相关叙述错误的是（） A.psy和crtI基因中含有构建基因表达载体使用的限制酶的识别序列 B．基因表达载体中的启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点 C.黄金大米培育过程中构建基因表达载体时可用pmi基因作为标记基因 D.若检测出水稻细胞中含有psy和crtI基因，仍不能说明黄金大米培育成功 7．图展示了一种改良后的克隆技术，甲和乙代表不同的物种。关于该克隆技术，下列说法正确的是(      ) A.需要对物种甲和物种乙进行同期发情处理 B.该技术的改良价值在于能提高囊胚的着床率 C.图中的“发育”过程经历了桑葚胚和原肠胚等阶段 D.宜选取囊胚③的滋养层细胞鉴定克隆动物的性别 8．调查结果显示，野生郊狼种群数量不断锐减、濒临灭绝。科学家利用种间体细胞核移植技术来增加郊狼数量，一般流程如图所示。下列叙述错误的是(      ) A.郊狼耳廓组织细胞培养需要无菌无毒、适宜温度、适宜pH等 B.流程图中的①②分别表示为第一极体、透明带 C.供体郊狼、供体家犬和代孕家犬都需要进行同期发情处理 D.与胚胎细胞核移植相比，体细胞核移植难度相对较大 9．一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗p72的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是(      ) A.注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大 B.单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合 C.利用该小鼠只能制备出一种抗p72的单抗 D.p72部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况 10．在发酵过程中，多个黑曲霉菌体常聚集成团形成菌球体，菌球体大小仅由菌体数量决定。黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧。菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制。下列说法错误的是(      ) A.相同菌体密度下，菌球体越大柠檬酸产生速率越慢 B.发酵中期添加一定量的硫酸铵可提高柠檬酸产量 C.发酵过程中pH下降可抑制大部分细菌的生长 D.发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行干燥即可获得柠檬酸产品 11．（原创题）选取某种观赏植物的幼嫩茎段与成熟花药作为外植体，借助植物组织培养技术开展离体繁育，下列相关说法错误的是（） A.用于组织培养的外植体都需进行严格表面消毒，避免杂菌污染 B.幼嫩茎段和成熟花药均可作为外植体，培育得到完整试管苗 C.外植体经脱分化形成疏松愈伤组织，离不开植物激素的调控 D.能通过组织培养发育成完整植株的植物体细胞，必须同时具备完整细胞核与光合叶绿体 12．平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(      ) A.不含氮源的平板不能用于微生物培养 B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 13．利用胡萝卜根段培养获得试管苗的过程如图。下列有关叙述错误的是(      ) A.步骤②消毒方法一般是先用体积分数为50%的酒精浸泡30s，再用无菌水冲洗2～3次 B.步骤③切取的组织块中需带有形成层，原因是其分裂旺盛易脱分化 C.步骤⑤和步骤⑥所用培养基中生长素和细胞分裂素相对含量不同 D.步骤⑥要进行照光培养，从而诱导细胞合成叶绿素 14．（原创题）我国传统发酵食品制作技艺源远流长，果酒、果醋、腐乳、泡菜皆是经典发酵产物。下列相关叙述正确的是（） A.四种发酵食品里，依靠细菌发酵制作的只有果醋 B.酿制葡萄果酒时，先冲洗葡萄再去除果梗，可减少杂菌侵染 C.果酒转果醋发酵，只需调高培养温度即可顺利完成转化 D.泡菜腌制与腐乳制作过程中，起主导作用的菌种均为真菌 15．T4溶菌酶来源于T4噬菌体，是重要的工业用酶。科学家通过一定技术使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸(异亮氨酸的密码子是AUU、AUC、AUA，半胱氨酸的密码子是UGU、UGC)，于是在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，从而使T4溶菌酶的耐热性得到了提高。对上述过程的叙述错误的是(      ) A.对T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程的范畴 B.上述过程通过直接改造T4溶菌酶密码子上的2个碱基实现 C.参与新的T4溶菌酶合成所用到的tRNA种类可能不变 D.改造后的T4溶菌酶肽键数不变，新形成二硫键能够增强蛋白质分子的稳定性 16．土地盐渍化是一种全球化现象，严重制约着农业生产的发展。我国育种专家用普通小麦（2N=42）与耐盐偃麦草（2N=70）的体细胞杂交获得耐盐新品种山融3号，培育过程如图所示，图中序号代表过程或结构。下列叙述正确的是(      ) A.可使用胰蛋白酶去除细胞壁获得原生质体 B.PEG诱导融合成功的标志是再生出细胞壁 C.①形成愈伤组织的过程中，其细胞发生了再分化 D.由愈伤组织到②的过程中不需要更换新的培养基 二、非选择题（本题共5小题，共60分） 17．（12分）Ⅰ、下图表示科学家通过植物细胞工程，培育“矮牵牛—粉蓝烟草”杂种植株的过程。 Ⅱ、银杏的次生代谢产物，如银杏黄酮（具有抑制癌细胞增殖，扩张冠脉血管、增加冠脉血液流量和解除痉挛的作用）、银杏内酯（具有促进脑血微循环、抑菌抗炎的作用）等，一般从叶片中取得，但传统栽植方法周期长、成本高、受环境影响大，无法很好满足市场需求。因而利用组织培养技术，从愈伤组织中提取，具有一定的研究意义与应用前景。 请回答下列相关问题： 外植体愈伤组织试管苗植株 (1)利用矮牵牛的茎尖分生组织经过一系列实验操作可得到新的矮牵牛植株的根本原因是________________。 (2)人工诱导原生质体融合的方法基本可分为两大类——物理法和化学法，其中化学法包括PEG融合法和__________________。 (3)“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种细胞融合成功的标志是______________，植物体细胞杂交技术的重要意义是____________。 (4)外植体的选择不能太嫩，因为太嫩的组织细胞虽细胞分裂较旺盛，但在____________（灭菌/消毒）时次氯酸钠等药品渗透也较快，在后续用______________________多次冲洗也不易清除，导致细胞易失活甚至破裂。为获得银杏的次生代谢产物，________________（需要/不需要）走完上述流程图的全过程。 (5)此外，研究表明，用通气较为不良的介质封口，如塑料膜或玻璃纸，可以提升黄酮和内酯的产量，可能原因是______________________胁迫细胞诱导产生次生代谢物。 (6)学习了植物组培技术后，同学们尝试进行了以菊花枝条为外植体的组织培养，结果有同学在首次对菊花继代培养配制MS生根培养基时，忘记添加NAA（NAA：萘乙酸，为生长素类似物），结果与添加NAA的生根培养基中的菊花幼苗相比，无添加NAA培养基中的菊花幼苗也有生根，其原因可能是______________。不过其生根数量较少且根长较短，可能的原因是__________________。 18．（新情境）（8分）农业生产中施用的尿素肥料易残留富集，影响土壤生态。科研发现农田根际土壤中存在一类功能微生物，可高效利用尿素作为唯一氮源完成自身增殖代谢。某实验小组参照图示操作流程，从作物根际土壤中分离筛选该类高效解尿素功能菌，并统计每毫升菌液中目标活菌数量，请据图回答相关问题。 （1）在该图示操作流程步骤3是____________，步骤6的接种方法是___________。 （2）在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源的物质是____________，提供氮源的物质是____________。配制培养基的过程中，可在倒平板时加入____________（填写指示剂名称），培养某种微生物后，如果pH升高，指示剂将变红，我们就可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。 （3）从功能角度分析，土壤深处、沼泽湿地的尿素分解菌区别于其他微生物的关键特征是：它们能合成______，从而以尿素作为唯一氮源生长繁殖。 （4）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的胃部样液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为190、17、325、173和180。则每毫升样品中含有细菌数量为____________×108个。与血细胞计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_______（填“多”或“少”）。 19．（8分）为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。 回答下列问题： （1）上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是____________。 （2）写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：________________。 （3）为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于____________，使用该培养基进行细胞培养的结果是____________。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是____________。 （4）若要使能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有____________（答出2点即可）。 20．（14分）白藜芦醇具有抗氧化、抗炎等生理功能，由对香豆酸在基因STS与4CL的调控下合成。水稻含有对香豆酸，但因缺乏相关基因不能合成白藜芦醇。为实现水稻胚乳高效合成白藜芦醇，科研人员从其它植物中获取STS与4CL基因，构建了基因表达载体，如图1所示。实验所用限制酶BsaⅠ的识别序列为，切割位点如图2所示(N表示任意碱基)。回答下列问题： 注：P26、P10是特异性启动子，只在胚乳细胞中起作用；Pnos是普通启动子；T35、Tnos是终止子；HygR是潮霉素抗性基因 (1)扩增相关基因。扩增所用引物包括“BsaⅠ识别序列—切割序列—模板结合序列”三个区域，其中“BsaⅠ识别序列”位于引物________________端。扩增P10时，设计的上、下游引物“切割序列”不同，目的是________________。若P10下游引物部分序列为：5′-GTCTCGCTCGGGAG……-3′，据图推测STS上游引物的前两个区域的序列为_________。 (2)利用BsaⅠ酶构建基因表达载体。选择Pnos驱动HygR表达，原因是________________。据图2可知，BsaⅠ切割基因片段后，理论上可产生________________种粘性末端，这是单种酶完成多片段精准组装的关键。 (3)农杆菌介导转化水稻。将表达载体导入农杆菌前，需处理农杆菌使其成为________________细胞。随后将水稻组织与上述农杆菌共培养，再转移至含潮霉素的培养基，该培养基属于________________培养基。 (4)鉴定转基因植株。 ①为检测4CL基因是否成功整合，科研人员进行了PCR鉴定。将上游引物设计在启动子区。结合电泳结果分析，下游引物结合区域应设计在________________，该设计的优势是________________。 ②为检测4CL基因在水稻中的表达水平，科研人员选取阳性植株的________________作为实验材料检测相关指标，因为该部位目的基因表达水平最高。 21．（原创）（12分）下图为克隆猴的培育过程，请回答下列问题。 （1）动物细胞培养过程中，贴壁生长的细胞会出现___________现象，需定期用_________处理，使细胞分散成单个细胞，再分瓶培养。 （2）核移植时，若直接将供体细胞核注入去核卵母细胞，还需进行细胞融合，常用的诱导因素有___________（答出2点即可）；融合后的重组细胞在发育过程中，细胞质的遗传物质主要来自___________（填“A猴”“B猴”或“代孕猴”）。 （3）研究发现，对供体细胞的组蛋白进行去甲基化处理，可显著提高克隆猴的成功率，原因是___________；该过程体现了___________对细胞全能性表达的影响。 （4）克隆猴的培育过程中，需将早期胚胎移植到代孕母猴的___________内，胚胎移植前需对代孕母猴进行___________处理，以保证胚胎移入的生理环境一致。与传统的药物实验相比，利用克隆猴构建疾病模型的优势是___________。 学科网（北京）股份有限公司 $ 参考答案及解析 1 2 3 4 5 6 7 8 B C D A D A B C 9 10 11 12 13 14 15 16 D D D D A B B B 1.答案：B 解析：A正确低温冷藏静置可降低DNA溶解度，利于DNA聚集富集，便于后续提取。 B错误冷酒精析出的DNA絮状物沾有酒精，酒精会抑制、干扰二苯胺显色反应，不能直接鉴定；需先用蒸馏水溶解去除酒精，再沸水浴二苯胺鉴定。 C正确dNTP（四种脱氧核苷三磷酸）既是DNA合成原料，水解高能磷酸键又能提供能量。 D正确引物特异性差、设计不当会出现非特异性扩增，电泳就会出现杂乱杂带。 故选B。 2．答案：C 解析：A.通常选用早期胚胎的滋养层细胞进行DNA分析等检测,这样不会对胚胎发育造成影响,A错误; B.将MⅡ期的卵母细胞与获能的精子共同培养完成体外受精,B错误; C.miR-135是一种miRNA,其合成过程需要通过转录过程实现,不需要核糖体的参与,C正确; D.结合图示可知,miR-135抑制处理后低质量囊胚占比较高,说明miR-135会促进胚胎发育进而提高胚胎质量,D错误。 故选C。 3．答案：D 解析：A.过程①是从免疫处理后的小鼠体内获取淋巴细胞，小鼠体内存在多种不同的淋巴细胞，只有特定的浆细胞能产生抗登革热病毒的抗体，并非所有淋巴细胞都能产生该抗体，A错误； B.过程③使用的HAT培养基中要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需加入血清等天然成分；该培养基为选择培养基，还需要加入氨基蝶呤以抑制骨髓瘤细胞的D途径，使培养基中只有杂交瘤细胞能增殖，B错误； C.④过程是筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，可分别从各个小室中提取抗体，与登革热病毒混合，出现抗原抗体杂交带（阳性）的小室中的细胞就是所需的杂交瘤细胞，C错误； D.抗体能与引起它产生的抗原发生特异性结合反应，制备的单克隆抗体可以用于登革热病毒的检测，就是利用了抗原抗体能发生特异性结合的原理，D正确。 4．答案：A 解析：A错误植物组织培养原理：植物细胞的全能性；制备单克隆抗体用到动物细胞融合、动物细胞培养，原理是细胞膜的流动性、细胞增殖，不涉及细胞全能性，二者原理不匹配。 B正确纤维素酶只分解纤维素，果胶酶只分解果胶，依据酶的专一性去除植物细胞壁。 C正确植物原生质体融合、动物细胞融合，共同原理都是细胞膜具有一定的流动性。 D正确悬浮培养人参细胞产次生代谢产物、体外培养杂交瘤细胞，都依靠细胞有丝分裂增殖实现。 5．答案：D 解析：A.甲→乙过程需要用胰蛋白酶或胶原酶处理获得单细胞悬液然后进行细胞培养，也可用机械法处理获得单个细胞，A正确； B.丙过程指细胞在添加血清的合成培养基中原代培养的过程，属于获取单细胞悬液的初次培养，B正确； C.丙过程为原代培养，该过程中会出现细胞贴壁生长和接触抑制现象，C正确； D.丁过程为传代培养，细胞传至10~50代会逐渐缓慢，直到完全停止，当继续传代培养时少部分细胞会获得不死性，这些细胞已经发生了突变，D错误。 故选D。 6． 答案：A 解析：A.在构建基因表达载体时，需要用限制酶切割质粒和目的基因，以便将目的基因插入载体。如果目的基因（psy和crtI）内部含有所用限制酶的识别序列，则限制酶会将其切断，破坏基因结构，导致后续无法正常表达。因此，目的基因中应不含所用限制酶的识别序列，或在设计时选择识别序列不在基因内部的限制酶。 B. 正确。启动子是基因转录起始的关键调控序列，RNA聚合酶与之结合后启动转录。 C. 正确。pmi基因编码的磷酸甘露醇异构酶可使细胞在特殊培养基（如以甘露醇为碳源的培养基）上生长，因此可作为标记基因用于筛选成功导入目的基因的受体细胞。 D.正确。检测到目的基因存在仅说明基因己导入细胞，但可能未转录或未翻译，需进一步检测是否表达出相应蛋白质（或产物β-胡萝卜素）才能确认培育成功 7．答案：B 解析：A、胚胎移植时只需对受体物种乙进行同期发情处理，供体物种甲无需同期发情处理，A错误； B、该改良克隆技术将重组细胞发育的囊胚与受精卵发育的囊胚结合，可提高囊胚的着床率，是技术改良的价值所在，B正确； C、图中的“发育”过程经历了桑葚胚阶段，但未经历原肠胚阶段，胚胎移植一般选择桑葚胚或囊胚，C错误； D、鉴定克隆动物性别应选取囊胚①的滋养层细胞，囊胚③是受精卵发育的胚胎，并非克隆动物的胚胎，D错误。 故选B。 8．答案：C 解析：动物组织细胞培养需要无菌无毒、适宜温度、适宜PH、适宜渗透压和气体环境等，A正确；图中①表示第一极体、②表示透明带，B正确；供体郊狼不需要同期发情处理，C错误；与胚胎细胞核移植相比，由于体细胞分化程度高，恢复全能性困难，因此体细胞核移植难度相对较大，D正确。 9．答案：D 解析：A.单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，因此原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A错误； B.单抗制备过程中通常将经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，B错误； C.非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72上有多种抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，所以向小鼠体内注入p72后，可以刺激小鼠产生多种抗p72的单抗，C错误； D.p72部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D正确。 10．答案：D 解析：A.黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧，相同菌体密度下，菌球体越大越不利于菌体与氧气接触，柠檬酸产生速率越慢，A正确； B.菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制，发酵中期添加一定量的硫酸铵，提高铵离子浓度，菌体内可提高柠檬酸产量，B正确； C.发酵过程中pH下降导致细菌生命活动所必须的酶失活，可抑制大部分细菌的生长，C正确； D.发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行分离、纯化、浓缩、干燥等一系列操作后才能获得柠檬酸产品，D错误。 故选D。 11． 答案：D 解析：A正确植物组培全程无菌环境，外植体必须做表面消毒，防止杂菌污染导致培养失败。 B正确幼嫩茎段属于体细胞，可经组织培养成苗；成熟花药可进行花药离体培养培育单倍体试管苗。 C正确脱分化形成愈伤组织，需要生长素和细胞分裂素配比调控，离不开植物激素作用。 D错误植物体细胞能发育成完整植株的前提是含有完整细胞核、具备全套遗传物质，不需要一定有叶绿体。如根尖细胞无叶绿体，依旧可通过组培长成完整植株，叶绿体是分化后才形成的。 12．答案：D 解析：A.不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误； B.平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误； C.使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误； D.脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。 故选D。 13．答案：A 解析：A.步骤②消毒方法一般是先用70%酒精浸泡10s（时间过长会伤害植物细胞），再用无菌水冲洗2～3次，A错误； B.步骤③切取的组织块中要带有形成层。其原因是形成层有大量的纺锤状原始细胞和射线原始细胞，它们分裂迅速，组培时容易形成愈伤组织，继而获得组培苗，B正确； C.步骤⑤（脱分化）和步骤⑥（再分化）所用培养基中生长素和细胞分裂素相对含量不同，C正确； D.步骤⑥为再分化，要进行照光培养，从而诱导细胞合成叶绿素，D正确。 故选A。 14． 答案：B 解析：A错误果醋（醋酸菌）、泡菜（乳酸菌）都属于细菌，并非只有果醋。 B正确先冲洗葡萄再去果梗，可避免去除果梗时破损果肉，减少杂菌进入果肉内部侵染。•C错误果酒转果醋，不仅要升高温度，还需要通入无菌空气，醋酸菌是好氧菌。 D错误腐乳主要菌种毛霉（真菌）；泡菜主要菌种乳酸菌（细菌），二者菌种类型不同。 15．答案：B 解析：A、蛋白质工程通过修改基因来定向改造蛋白质，题干中改变T4溶菌酶的结构属于此范畴，A正确； B、密码子位于mRNA上，科学家通过改变基因(DNA)的碱基序列来间接改变密码子，而非直接修改密码子，B错误； C、异亮氨酸和半胱氨酸的密码子不同，但细胞中可能已存在对应的tRNA，因此合成新酶时tRNA种类可能不变，C正确； D、氨基酸替换未改变肽链长度，肽键数不变；二硫键的形成增强了蛋白质的空间结构稳定性，D正确。 故选B。 16．答案：B 解析：A、植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，因此，可使用纤维素酶或果胶酶去除细胞壁获得原生质体，A错误； B、杂种细胞再生出细胞壁是诱导细胞融合成功的标志，即PEG诱导融合成功的标志是再生出细胞壁，B正确； C、①形成愈伤组织的过程中，其细胞发生了脱分化，C错误； D、由愈伤组织到②的过程为再分化过程，该过程中需要更换新的培养基，D错误。 故选B。 17．答案：(1)矮牵牛的茎尖分生组织含有矮牵牛的全部遗传物质 (2)高Ca2+-高pH融合法 (3)再生出细胞壁；打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 (4)消毒；无菌水；不需要 (5)低氧 (6)植物体内可以产生内源生长素；植物体内可以产生的内源生长素较少 解析：（1）利用矮牵牛的茎尖分生组织经过一系列实验操作可得到新的矮牵牛植株，这体现植物细胞的全能性，而细胞具有全能性的原因是矮牵牛的茎尖分生组织含有矮牵牛的全部遗传物质。 （2）人工诱导原生质体融合的方法很多，基本可分为两大类，物理法和化学法，其中化学法主要使用PEG(或聚乙二醇)和高Ca2+-高pH融合法促融。 （3）植物细胞有细胞壁后结构才完整，“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种细胞融合成功的标志是再生出细胞壁；植物体细胞杂交是指将不同种、属或科植物通过人工诱导原生质体融合并离体培养再生杂种植株的技术，能够打破生殖隔离，实现远缘杂交育种。 （4）外植体也不能太嫩，因为太嫩的组织细胞虽细胞分裂较旺盛，但在消毒时次氯酸钠等药品渗透也较快，在后续用无菌水多次冲洗也不易清除，导致细胞易失活甚至破裂。为获得银杏的次生代谢产物，只需要培养到愈伤组织阶段就可以，故不需要走完如上述流程图的全过程。 （5）研究表明，用通气较为不良的介质封口，如塑料膜或玻璃纸，可以提升黄酮和内酯的产量，可能原因是在低氧胁迫条件下，细胞诱导产生次生代谢物。 （6）在未添加NAA（NAA：萘乙酸，为生长素类似物）的培养基中，菊花幼苗也有生根，可能是因为植物体内可以产生内源生长素，内源生长素促进植物生根；其生根数量较少且根长较短，可能是植物体内产生的内源性生长素较少，不足以维持植物正常生根。 18．答案：（1）倒平板；稀释涂布平板法 （2）葡萄糖；尿素；酚红指示剂 （3）脲酶 （4）1.81；少 解析：（1）据图分析可知，图示操作流程步骤3是倒平板，6是稀释涂布平板法接种。 （2）根据图示培养基配方可知，葡萄糖是碳源、尿素是氮源，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，可以初步鉴定该种细菌能分解尿素。 （3）脲酶将尿素分解成氨，土壤深处、沼泽湿地的微生物能分解尿素是因为它们能合成脲酶。 （4）根据题意可知，低于30个高于300个的菌落数的平板计数时应该舍弃，则每毫升样品中含有细菌数量为（190＋173＋180）÷3÷0.1×105＝1.81×108个。与血细胞计数法相比，此计数方法测得的细菌数只有活菌形成的菌落，且可能两个或多个细胞形成一个菌落，所以结果会偏较少。 19．答案：诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞；取小鼠甲脾脏剪碎，用胰蛋白酶处理使其分散成单个细胞，加入培养液制成单细胞悬液；选择培养基；只有杂交瘤细胞能够生存；抗原与抗体的反应具有特异性；将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖；将杂交瘤细胞在体外培养 解析：（1）实验前给小鼠甲注射病毒A，是为了诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞。 （2）取小鼠的脾脏，剪碎组织，用胰蛋白酶处理获得单个细胞，加入培养液可以制成单细胞悬液。 （3）图中筛选1需要用到选择培养基，只有杂交瘤细胞可以存活。筛选2是为了获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，该过程要用到抗原抗体杂交，故筛选所依据的原理是抗原－抗体反应具有特异性。 （4）获得能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞后，可以在体外培养液中进行培养，或在小鼠的腹腔中进行培养，使杂交瘤细胞大量增殖。 20．答案：(1)5'；产生不同的粘性末端，实现目的基因的定向连接；5′-GTCTCGAGC-3′ (2)使该抗性基因在各阶段、各组织持续表达，便于筛选；256 (3)感受态；选择 (4)4CL基因区；验证目的基因的连接方向是否正确；胚乳 解析：(1)引物的BsaⅠ识别序列位于5'端；上下游引物切割序列不同，可产生不同粘性末端，保证目的基因定向连接；STS上游引物前两个区域序列为5′-GTCTCGAGC-3′。 (2)Pnos是普通启动子，可驱动潮霉素抗性基因在各组织、各时期持续表达，便于筛选转化细胞；BsaⅠ切割后粘性末端由4个任意碱基组成，理论上可产生256种粘性末端。 (3)农杆菌需用Ca2+处理成为感受态细胞，才能吸收外源DNA；含潮霉素的培养基可筛选出转化成功的细胞，属于选择培养基。 (4)①下游引物结合在4CL基因区，可验证目的基因连接方向是否正确；②目的基因由胚乳特异性启动子驱动，因此选取胚乳检测表达水平。 21．答案：（1）接触抑制；胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）； （2）电激、PEG（聚乙二醇）（或灭活的病毒）；B猴； （3）去除甲基化修饰，利于供体细胞核中相关基因正常表达，恢复细胞全能性；表观遗传；（4）子宫；同期发情；遗传背景一致，个体差异小，实验结果更准确，可减少实验动物用量 解析：（1）动物细胞贴壁生长，相互接触就停止分裂，即接触抑制；定期用胰蛋白酶/胶原蛋白酶分解细胞间质，分散细胞传代培养。 （2）动物细胞融合诱导手段：电刺激、PEG、灭活病毒，写出两点即可。去核卵母细胞来自B猴，细胞质遗传物质主要来自卵母细胞供体B猴；代孕猴只提供孕育环境，不提供遗传物质。 （3）组蛋白去甲基化属于表观遗传调控，可解除基因沉默，让体细胞核内全能性相关基因顺利表达，大幅提升克隆动物成功率。 （4）早期胚胎移植入代孕母猴子宫；对受体做同期发情处理，使供受体生理状态同步；克隆猴基因型相同，构建疾病模型个体差异小，药物实验数据更可靠。 学科网（北京）股份有限公司 $