专题01 发酵工程（期末真题汇编，天津专用）高二生物下学期

**基本信息** 发酵工程专题期末试题汇编，整合天津多区期末真题，聚焦传统发酵及微生物纯培养两大考点，以泡菜制作、石油降解菌筛选等真实情境考查核心知识与实验能力。 **题型特征** |题型|题量|知识覆盖|命题特色| |----|----|----------|----------| |单选题|13题|传统发酵（泡菜/果酒制作原理）、微生物培养（培养基灭菌/接种方法）|立足天津期末真题，基础题占比60%，如考查醋酸菌代谢类型| |非选择题|4题|亚硝酸盐检测、菌落计数、α-淀粉酶菌株筛选|综合实验设计，如结合曲线图分析食盐用量对亚硝酸盐的影响，体现科学探究素养|

专题01 发酵工程 答案版 地 城 考点01 传统发酵及其应用 1、 单选题 1．【答案】B 2．【答案】B 3．【答案】A 二、非选择题 1． 【答案】 (1)无机盐 (2) 乳酸菌进行无氧呼吸产生了乳酸 腌制时间 (3) B 3.4×106 个别菌落可能是由2个或多个细菌形成 地 城 考点02 微生物纯培养及其应用 一、单选题 1．【答案】D 2．【答案】B 3．  【答案】B 4．【答案】D 5．【答案】C 6．【答案】D 7．【答案】A 8．【答案】A 9．【答案】A 10．【答案】C 二、非选择题 1． 【答案】 (1) 琼脂 湿热灭菌法（或高压蒸汽灭菌法） A (2)①②⑤ (3) 小 二苯胺 农杆菌转化法 (4)2.4×108 2． 【答案】 (1) A 浓度和比例（配比） (2) 稀释涂布 3.2×107 a (3)醋酸 (4) 提供的氧气越充足 酸性重铬酸钾 3． 【答案】 （1）氮源、碳源 （2）A菌能在培养平板中生长繁殖 （3） ①. 稀释 ②. 溶菌圈 （4）假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题01 发酵工程 2大高频考点概览 考点01 传统发酵及其应用 考点02 微生物纯培养及其应用 地 城 考点01 传统发酵及其应用 1、 单选题 1．（24-25高二下·天津部分区·期末）泡菜、腐乳、米酒和米醋等传统发酵食品的制作均依赖特定微生物的作用，下列叙述正确的是（　　） A．泡菜坛需完全装满并密封，以防止乳酸菌代谢产生的气体导致发酵液溢出 B．腐乳制作过程中，毛霉分泌的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸 C．制作米酒时，需将蒸熟的米饭立即与酒曲混合，并在高温环境下保温以加速发酵 D．醋酸菌在无氧条件下可将乙醇转化为醋酸，因此米醋制作需在较低温度下进行 【答案】B 【知识点】泡菜的腌制、腐乳制作的原理、果酒和果醋的制作原理 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。 2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 3、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。 4、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。 【详解】A、泡菜制作依赖乳酸菌的无氧呼吸，但初期坛内残留的氧气可能使杂菌如酵母菌等繁殖产气，因此装坛时需留约1/3空间，A错误； B、毛霉产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，脂肪酶分解脂肪为甘油和脂肪酸，B正确； C、蒸熟的米饭需冷却至室温后再加入酒曲，高温会杀死酒曲中的霉菌和酵母菌。酵母菌酒精发酵需在20℃左右进行，高温会抑制其活性。C错误； D、醋酸菌为好氧型细菌，其将乙醇转化为醋酸需在有氧条件下进行，且最适生长温度为30-35℃，D错误。 故选B。 2．（24-25高二下·天津部分区·期末）关于果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是（　　） A．发酵所利用的微生物都属于原核生物 B．发酵后形成的溶液都呈酸性 C．泡菜腌制时间越长，亚硝酸盐含量越高，宜尽早食用 D．果酒果醋发酵装置应该尽量缩短排气口胶管长度，以便顺利排气 【答案】B 【知识点】泡菜的腌制、果酒和果醋的制作原理 【分析】传统发酵是指直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。 【详解】A、果酒发酵的微生物是酵母菌（真核生物），果醋和泡菜发酵的微生物分别是醋酸菌和乳酸菌（均为原核生物）。因此并非所有微生物都属于原核生物，A错误； B、果酒发酵产生CO2和酒精，CO2溶于水形成碳酸；果醋发酵生成醋酸；泡菜发酵产生乳酸。三者均使溶液呈酸性，B正确； C、泡菜中亚硝酸盐含量先升高后降低，腌制时间过长反而会减少其含量，因此并非“时间越长含量越高”，C错误； D、果酒发酵初期需排出CO2，但排气口胶管设计为长而弯曲是为了防止杂菌污染，缩短胶管会增加污染风险，D错误。 故选B。 3．（24-25高二下·天津滨海新区·期末） 传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（ ） A. 泡菜的风味由乳酸菌的种类决定 B. 用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌 C. 家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸 D. 传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵 【答案】A 【解析】 【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 【详解】A、泡菜的风味由原料、发酵菌种类、发酵环境等因素共同决定的，A错误； B、用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧型微生物，B正确； C、家庭酿制米酒主要用的是酵母菌，在酿制米酒的过程中，首先让酵母菌在有氧的环境进行增殖，然后在无氧的环境中进行发酵，C正确； D、传统发酵食品所用的是自然菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，D正确。 故选A。 二、非选择题 1．（24-25高二下·天津和平·期末）乳酸菌能产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解，某兴趣小组从泡菜滤液中筛选出亚硝酸盐还原酶活力较高的乳酸菌，进行了相关实验。请回答下列问题： (1)乳酸菌生长繁殖所需要的主要营养物质有碳源、氮源、水、_____四类，分离、纯化乳酸菌所用的选择培养基以亚硝酸盐为唯一氮源，进入乳酸菌的亚硝酸盐的主要作用是用于合成菌体的含氮物质（用于合成菌体细胞物质）。    (2)将筛选出的乳酸菌，用于泡菜制作过程，进行食盐用量与亚硝酸盐含量的探索实验，结果如图。 ①泡菜制作过程中，pH呈下降趋势，原因是_____。 ②据图可知，腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现的越早，且峰值较高，原因是食盐用量过低，造成杂菌大量繁殖。实验结果说明，食盐用量和_____影响亚硝酸盐含量。 (3)①取若要对的乳酸菌稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是下图中的_____。    ②图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测乳酸菌稀释救中每毫升含细菌数为_____个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是_____。 【答案】(1)无机盐 (2) 乳酸菌进行无氧呼吸产生了乳酸 腌制时间 (3) B 3.4×106 个别菌落可能是由2个或多个细菌形成 【知识点】泡菜的腌制、微生物的接种方法、培养基的成分及其功能 【分析】泡菜制作的原理是乳酸菌发酵；由于在泡菜制作过程中，微生物会将原料中的硝酸盐还原形成亚硝酸盐，因此在发酵初期亚硝酸盐含量会逐渐升高，发酵后期亚硝酸盐又会被某些微生物氧化成硝酸盐，亚硝酸盐含量又会逐渐下降，因此在泡菜制作过程中要检测亚硝酸盐的含量，确定合适的取食时间。 【详解】（1）乳酸菌等微生物生长繁殖所需要的主要营养物质有氮源、碳源、水和无机盐四类。 （2）①泡菜制作的原理是乳酸菌的无氧呼吸，无氧呼吸过程中产生了乳酸，导致pH呈下降趋势； ②食盐用量过低，会造成细菌大量繁殖，因此图中腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现的越早，且峰值较高；结合题图可知，食盐用量和腌制时间都会影响亚硝酸盐含量。 （3）①将液体菌种接种在固体培养基上常用的方法主要是稀释涂布平板法，所用的接种工具是涂布器，即图2中的B； ②菌落的平均数是34个，由于图中稀释了104倍，每毫升含细菌数=菌落平均数/涂布量×稀释倍数=34÷0.1×104=3.4×106个。由于经此方法接种培养时当两个或多个菌落重叠在一起时按一个菌落计算，所以运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是个别菌落可能是由2个或多个细菌形成。 地 城 考点02 微生物纯培养及其应用 一、单选题 1．（24-25高二下·天津西青·期末）为从高粘度原油（主要是含碳有机物）中筛选得到高效降解石油污染物的细菌，研究者以原油污染污泥为研究对象进行如图所示实验。下列叙述正确的是（　　） A．培养基①的作用是增加目的菌株的种类 B．图示表明，油泥混合液被稀释了106倍 C．只有培养基②要以原油为唯一碳源 D．培养基③采用的接种方法不能用于统计活菌的数量 【答案】D 【知识点】培养基的类型及其应用、微生物的接种方法、其他微生物的分离与计数 【详解】A、由图可知培养基①按物理状态划分属于液体培养基，可增加目的菌株的数量；按功能划分属于选择培养基，可富集目的菌株，A错误； B、图示表明培养基①的溶液被稀释了105倍，但由于缺乏初始数值，故油泥混合液的稀释倍数无法确定，B错误； C、培养基①②③均要以原油为唯一碳源，以筛选得到高效降解石油污染物的细菌，C错误； D、培养基③采用了平板划线法接种微生物，该方法无法用于活菌数量的统计，D正确。 故选D。 2．（24-25高二下·天津部分区·期末）下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（　　） A．选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 B．配制培养基时，需先进行高压蒸汽灭菌，再调节pH至中性或弱碱性 C．平均每克土壤中分解尿素的细菌数约为2.2×108个 D．实验需设置未接种的培养基作对照，以验证培养基的灭菌效果 【答案】B 【知识点】土壤中分解尿素的细菌的分离与计数、无菌技术、培养基的成分及其功能 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。 【详解】A、培养基的营养成分应该包括碳源、氮源、水和无机盐等，实验目的是分离尿素分解菌，应该以尿素为唯一氮源，A正确； B、为了防止杂菌污染，应将培养基的pH调至中性或弱碱性后，再高压蒸汽灭菌，B错误； C、将10g土壤先稀释10倍，再进行梯度稀释10000倍，然后取0.1mL进行涂布平板，若步骤④平板上统计的菌落数平均为（212+230+218）÷3=220个，则每克土壤含分解尿素的细菌数约220÷0.1×10×10000=2.2×108个，C正确； D、验证培养基的灭菌效果，可培养未接种的培养基，观察表面是否有菌落产生，D正确。 故选B。 3．（24-25高二下·天津部分区·期末）野生型大肠杆菌能在未添加某些氨基酸的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种氨基酸的完全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①、②、③、④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述正确的是（　　）    A．图中①、②、④为基本培养基，③为完全培养基 B．紫外线照射的目的是诱变，提高突变频率 C．图中B的正确操作是用接种环把菌液均匀地涂布在②表面 D．经图中C过程原位影印及培养后，可从④中挑取E进行纯化培养 【答案】B 【知识点】其他微生物的分离与计数、微生物的接种方法、培养基的类型及其应用、基因突变 【分析】分析题图可知：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中，分别是基本培养基、完全培养基；在基本培养基中，某氨基酸营养缺陷型突变株不能生长，而在完全培养基中能够生长，据此可以选择出氨基酸营养缺陷型突变株。 【详解】A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，根据题干信息和题图分析，③无菌落，说明图中①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误； B、紫外线照射的目的诱导野生大肠杆菌发生基因突变，通过紫外线照射处理可提高突变频率，从而增加突变株的数量，B正确； C、B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C错误； D、从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D错误。 故选B。 4．（24-25高二下·天津河北·期末）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（    ） A．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿盖上 B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．含有机磷农药的培养基不可分离出能降解有机磷农药的细菌 D．为了防止污染及正常接种，接种环经火焰灭菌后应先进行冷却，之后再进行接种 【答案】D 【知识点】其他微生物的分离与计数、微生物的接种方法 【分析】在利用微生物时，常要求所利用的微生物不被其他微生物污染，因此在培养微生物时必须进行无菌操作，无菌操作包括灭菌和消毒两种方式：消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。微生物的分离方法中最常用的是划线分离法和涂布分离法，常用来统计样品活菌数目的方法是涂布分离法。 【详解】A、用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底，因为培养时皿盖朝上，标记皿底便于观察，A错误； B、倒平板时，不能将打开的皿盖放到一边，这样会导致杂菌污染，应将皿盖打开一条稍大于瓶口的缝隙，B错误； C、含有机磷农药的培养基可作为选择培养基，能分离出能降解有机磷农药的细菌（该类细菌可利用有机磷农药作为营养物质 ），C错误； D、接种环经火焰灭菌后温度很高，若直接接种会杀死菌种，所以应先冷却之后再进行接种，这样能防止污染及保证正常接种，D正确， 故选D。 5．（24-25高二下·天津部分区·期末）研究人员利用石油污染滩涂土壤筛选高效降解石油细菌，进行如下图所示的操作（①－⑤表示不同的菌落）。下列叙述错误的是（　　） A．图中液体富集培养基和液体选择培养基的成分不同，后者以石油为唯一碳源 B．甲过程采用的接种方法可用于菌体计数，但结果通常偏小 C．菌落①可能是自养菌，因不能分解石油而无降解圈产生，其生长不需要碳源 D．乙过程选择菌落⑤接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估 【答案】C 【知识点】其他微生物的分离与计数、微生物的接种方法、培养基的类型及其应用 【分析】液体培养基是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养分的壁障，养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高生产量。 【详解】A、液体富集培养基通常含有多种碳源、氮源、无机盐以及水等营养物质，旨在提供丰富的营养环境，促进目标微生物的快速增殖，主要用于增加目标微生物的数量，为后续的分离纯化等操作提供足够的菌体量；液体选择培养基‌是以‌石油‌为‌唯一碳源‌，同时包含必要的氮源、无机盐和水等，通过限制碳源的种类，只允许能够利用石油作为碳源的微生物生长，从而筛选出具有特定代谢能力的菌株，A正确； B、甲过程采用的是稀释涂布平板法，但这种方法在用于计数时，由于可能存在两个或多个细菌聚在一起形成一个菌落的情况，往往会导致结果偏小，B正确； C、菌落①周围无降解圈产生，说明其中的菌体不能利用石油这唯一的碳源，很可能是自养型微生物，以CO2作为碳源，C错误； D、乙过程选择菌落⑤（降解圈最大）接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估，石油的剩余量越少，则菌种降解能力越强，D正确。 故选C。 6．（24-25高二下·天津部分区·期末）与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列相关叙述正确的是（　　） A．利用发酵工程生产的井冈霉素可作为微生物农药用于化学防治 B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 C．平板划线法纯化菌种时，接种环灼烧了4次，则操作员在培养基上进行了5次划线 D．发酵工程中所用菌种大多是单一菌种，一旦有杂菌污染，可能导致产量大大下降，而传统发酵技术中通常利用的是天然存在的混合菌种 【答案】D 【知识点】发酵工程的应用、微生物的接种方法、无菌技术 【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。与传统发酵技术相比，它在产品种类、产量和质量等方面有优势。 【详解】A 、利用发酵工程生产的井冈霉素可作为微生物农药用于生物防治，而非化学防治，A 错误； B 、单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量的微生物菌体，而不是从微生物细胞中提取，B 错误； C 、平板划线法纯化菌种时，接种环灼烧次数比划线次数多 1 次，若接种环灼烧了 4 次，则操作员在培养基上进行了 3 次划线，C 错误；    D 、发酵工程中所用菌种大多是单一菌种，一旦有杂菌污染，杂菌会与目的菌竞争营养物质等，可能导致产量大大下降。而传统发酵技术中通常用的是天然存在的混合菌种，D 正确。 故选D。 7．（24-25高二下·天津部分区·期末）下述实验操作需在无菌环境条件下进行的是（　　） A．用接种环在固体培养基上接种分离微生物 B．从新鲜洋葱中粗提取DNA C．对平板中分解尿素细菌计数 D．用PCR仪对DNA片段进行扩增 【答案】A 【知识点】PCR扩增的原理与过程、DNA的粗提取及鉴定、微生物的接种方法、无菌技术 【分析】无菌技术：（1）关键：防止外来杂菌的入侵。（2）具体操作：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。 【详解】A、用接种环接种微生物时，需将接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌并冷却后蘸取菌种，防止杂菌污染培养基，接种过程需在酒精灯火焰旁，即该过程必须在无菌条件下进行，A正确； B、从新鲜洋葱中粗提取DNA，该实验主要是利用物理和化学方法将DNA从细胞中分离出来，不需要严格的无菌环境，B错误； C、对分解尿素的细菌计数时，若采用稀释涂布平板法，接种需无菌操作，但计数时菌落已形成，无需无菌环境，C错误； D、PCR扩增DNA时，反应体系中的高温步骤（如变性）可灭活污染物，且反应在密闭管中进行，无需全程无菌，D错误。 故选A。 8．（24-25高二下·天津和平·期末）用高盐稀态发酵法酿造的酱油风味独特，其工艺流程如下图所示。相关叙述不正确的是（　　） A．发酵原理是利用米曲霉、酵母菌和乳酸菌等微生物的无氧呼吸 B．-5℃的盐水的作用是抑制杂菌生长，防止酱醪腐败 C．发酵期间晾晒、翻缸等操作可控制发酵温度和改善通气状况 D．酿造过程中，微生物一般由耐酸性较差的优势菌株向耐酸性较强的演变 【答案】A 【知识点】果酒和果醋的制作原理 【分析】制作酱油的过程中利用的微生物主要有米曲霉、酵母菌和乳酸菌等，其中米曲霉能够产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂肪分别水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸。 【详解】A、发酵原理是利用米曲霉的有氧呼吸、酵母菌和乳酸菌的无氧呼吸，A错误； B、-5℃的盐水制造了低温，高盐环境，可抑制杂菌生长，防止酱醪腐败，B正确； C、发酵期间晾晒、翻缸等操作可控制发酵温度、改善通气，酵母菌通过有氧呼吸快速增殖，有利于微生物的发酵，C正确； D、酱油的制作是乳酸菌、米曲霉、酵母菌等代谢类型不同的微生物共同作用的结果，酿造过程中，会产生酸性物质，则微生物一般由耐酸性较差的优势菌株向耐酸性较强的演变，D正确。 故选A。 9.（24-25高二下·天津滨海新区·期末） 物质A是一种难降解的有机物，细菌X体内存在可降解A的酶。科研人员欲从淤泥中分离得到细菌X，相关叙述正确的是（ ） A. 需对配制好的培养基进行湿热灭菌 B. 用于分离X的培养基蛋添加葡萄糖作为碳源 C. 细菌X的纯化与计数可使用平板划线法 D. 培养后某平板无菌落生长，则原因不可能是样品稀释倍数过大 【答案】A 【解析】 【分析】常用的灭菌方法包括干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。微生物的接种方法包括稀释涂布平板法和平板划线法，二者都可以用于筛选单菌落，但是前者可以用于计数，后者不行。平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 【详解】A、湿热灭菌如高压蒸汽灭菌法可对培养基进行灭菌，A正确； B、由题干可知，物质A是一种难降解的有机物，细菌X可以利用A进行增殖，因此用于分离X的选择培养基应以物质A作为唯一碳源，其他微生物因不能利用A缺乏碳源而无法繁殖，起到筛选作用，B错误； C、稀释涂布平板法和平板划线法都可以用于接种得到单菌落，达到纯化的目的，但平板划线法无法计数，可以用稀释涂布平板法进行分离并计数，C错误； D、若样品稀释倍数过大，涂布所用的菌液中很可能不含该细菌，则会导致培养基上无菌落生长，D错误。 故选A。 10.（24-25高二下·天津和平区·期末）为探究抗生素对细菌的选择作用，将含抗生素的滤纸片放到接种了大肠杆菌的平板培养基上（如下图），一段时间后测量并记录抑菌圈的直径。从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌扩大培养，重复实验2~5次。下列叙述不正确的是（　　） A. 接种时，将高浓度菌液涂布在平板培养基上 B. ①处滤纸片上不含抗生素，起对照作用 C. 重复2~5次实验后，抑菌圈的直径会变大 D. 抑菌圈边缘的菌落上挑取的细菌抗药性较强 【答案】C 【解析】 【分析】本实验的思路为：将含抗生素的滤纸片放到接种了大肠杆菌的平板培养基上，滤纸片周围会出现抑菌圈，在抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌；若抗生素对细菌起选择作用，则随着培养次数增多，耐药菌的比例增大，在连续培养几代后，抑菌圈的平均直径变小。 【详解】A、将高浓度菌液涂布在平板培养基上，使平板上长出密集菌落，利于观察抑菌圈，A正确； B、①处滤纸片周围未出现抑菌圈，滤纸片上不含抗生素，起对照作用，B正确； C、随重复次数增加，抗药菌株的比例增加，抑菌圈的直径会变小，C错误； D、抑菌圈边缘的菌落可能是耐药菌，所以，抑菌圈边缘的菌落上挑取的细菌抗药性较强，D正确。 故选C。 二、非选择题 1．（24-25高二下·天津部分区·期末）科研人员按照如图所示流程从盐湖土壤中分离筛选出了一株高产α-淀粉酶的耐盐性菌株NWU-8，并通过He-Ne激光照射提高该菌株产α-淀粉酶的能力，实验中需要a、b两种培养基，a的组分为牛肉膏、蛋白胨、高浓度 NaCl、水，相比培养基a，培养基b的组分增加了可溶性淀粉。回答下列问题。 (1)要在培养基上形成菌落，a、b培养基中均还应加入______，配制好的培养基通常采用的灭菌方法是_______，挑取a培养基平板上的菌落进一步纯化时，下列图示中正确的操作示意图为______。 (2)在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是______（填序号）。 ①培养细菌用的培养基与培养皿 ②玻棒、试管、锥形瓶 ③实验操作者的双手 ④操作空间 ⑤接种用具 (3)b培养基平板滴加碘液后，部分菌落周围出现透明圈，菌落直径/透明圈直径的比值______（填“大”或“小”）的菌落初步判断为产酶能力较高的菌株。实验小组为获得纯培养物的耐盐基因X，实验小组应用纯培养物提取了DNA，检测DNA 所用的试剂是________，若将耐盐基因X导入大豆细胞，常采用________法。 (4)He-Ne激光照射诱导后的菌种需要对耐盐性和产酶能力等进行检测和筛选，若取某一时刻的发酵样液，在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到下图数据，推测样液中菌体的数量为________个/mL。 平板1 平板2 平板3 104 320 342 356 105 198 243 279 106 23 18 21 【答案】(1) 琼脂 湿热灭菌法（或高压蒸汽灭菌法） A (2)①②⑤ (3) 小 二苯胺 农杆菌转化法 (4)2.4×108 【知识点】目的基因的检测与鉴定、其他微生物的分离与计数、微生物的接种方法、无菌技术 【分析】实验室中目的菌株的筛选： ①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 ②从土壤中分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。 ③培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌，富集培养可以使用液体培养基，选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的。 【详解】（1）要在培养基上形成菌落，应使用固体培养基，故应在a、b培养基中加入琼脂，配制好的培养基采用高压蒸汽灭菌法 （或“湿热灭菌法”）进行灭菌。平板划线时，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线，注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连，A正确，BC错误。 故选A。 （2）① 培养基和培养皿直接接触细菌培养物，若有杂菌污染会严重影响实验结果，所以需要灭菌，①正确； ②玻棒、试管、锥形瓶这些器具在实验操作中会与培养物或可能被污染的物质接触，为避免杂菌引入，需要灭菌，②正确； ③实验操作者的双手主要采用消毒的方法，如用酒精擦拭等，因为灭菌方法过于强烈会对皮肤造成伤害，③错误； ④操作空间一般采用消毒的方式，如用紫外线照射等，无法进行灭菌处理，因为灭菌操作难以对整个空间内的所有物体和角落都达到彻底灭菌的效果，④错误； ⑤接种用具直接接触菌种和培养物，必须进行灭菌，以防止杂菌污染，⑤正确。 故选①②⑤。 （3）b培养基平板滴加碘液后，部分菌落周围出现透明圈，根据菌落直径和透明圈大小，菌落直径/透明圈直径的比值小的菌落初步判断为产酶能力较高的菌株。用纯培养物提取了DNA，检测DNA 所用的试剂为二苯胺试剂，若要将耐盐基因X导入大豆细胞，常采用农杆菌转化法。 （4）在微生物计数中，通常选择菌落数在 30 - 300 之间的平板进行计数。计算菌体数量的公式为：菌体数量 = （平板上的平均菌落数 ÷ 涂布的菌液体积）× 稀释倍数。对于稀释度为104的平板，菌落数分别为 320、342、356，均大于 300，不适合用于计数。对于稀释度为105的平板，菌落数分别为 198、243、279，均在 30 - 300 之间，适合用于计数。其平均菌落数为(198+243+279)÷3=240。根据公式，样液中菌体的数量 = (240÷0.1)×105=2.4×108个 /mL 。对于稀释度为106的平板，菌落数分别为 23、18、21，均小于 30，不适合用于计数。 2．（24-25高二下·天津河东·期末）酿酒酵母是重要的发酵菌种，广泛应用于酿酒、食品加工及生物燃料生产等，研究人员对酿酒酵母菌株的生活条件进行分析研究，以提高发酵产物的产量。 (1)对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为______（A．马铃薯蔗糖培养基B．MS培养基C牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的______。 (2)发酵过程中要测定酵母菌的繁殖速度，可用______平板法对酵母菌进行计数。将培养到某一时期的培养液制备成1×105倍稀释的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为34个、32个、30个，则培养液中的酵母菌数量为______个/mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图______（填“a”或“b”）。    (3)该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短、条件和底物不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了______（填物质）。 (4)某研究小组从葡萄皮上成功分离出某品种的酵母菌后，取等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中，并分别置于转速为150r/min、200r/min、250r/min的摇床上培养，检测结果如图甲所示，摇床转速为250r/min的酵母菌种群密度最大的原因是摇床转速越高，______，酵母菌代谢旺盛，增殖快。小组同学继续用分离出的酵母菌进行果酒的发酵，发酵产物酒精可用______溶液检验。    【答案】(1) A 浓度和比例（配比） (2) 稀释涂布 3.2×107 a (3)醋酸 (4) 提供的氧气越充足 酸性重铬酸钾 【知识点】果酒和果醋的制作流程及实验分析、果酒和果醋的制作原理、微生物的接种方法、培养基的成分及其功能 【分析】微生物培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。不同的微生物需要不同的培养基成分，因此培养基的种类繁多，可以根据不同的需求进行配制。一般来说，培养基的成分应该能够满足微生物的基本营养需求，并且不会对微生物造成伤害。在配制培养基时，需要注意成分的比例和浓度，以及培养基的pH值和灭菌处理等细节。 【详解】（1）酵母菌主要以糖类作为底物进行呼吸作用产生酒精，因此比较适合的培养为以糖类为碳源的培养基，即A马铃薯蔗糖培养基。除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的浓度和比例（配比），以确保微生物能正常生存和发酵产品的品质。 （2）对酵母菌进行计数，可用稀释涂布平板法接种，统计培养基上的菌落数来进行计数。将培养到某一时期的培养液制备成1×105倍稀释的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为（35+32+29）÷3÷0.1×105=3.2×107个/mL。利用培养皿培养微生物时，需要将培养皿倒置培养，即a所示状况。 （3）酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为混入了醋酸菌将酒精分解产生了醋酸。 （4）摇床转速越高，提供的氧气越充足，酵母菌繁殖的速度和总量越高。酒精与酸性重铬酸钾反应形成灰绿色，因此发酵产物酒精可用重铬酸钾溶液检验。 3．（24-25高二下·天津滨海新区·期末） 自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 （1）用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供___________和维生素等。 （2）A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明______________________。 （3）为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样___________后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现___________。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。 （4）为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱）___________。 【答案】（1）氮源、碳源 （2）A菌能在培养平板中生长繁殖 （3） ①. 稀释 ②. 溶菌圈 （4）假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂 【解析】 【分析】微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。微生物的培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。 【小问1详解】 蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。 【小问2详解】 将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。 【小问3详解】 将含菌量较高的湖泊水样稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。　 【小问4详解】 根据实验材料和设备，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题01 发酵工程 2大高频考点概览 考点01 传统发酵及其应用 考点02 微生物纯培养及其应用 地 城 考点01 传统发酵及其应用 一、单选题 1．（24-25高二下·天津部分区·期末）泡菜、腐乳、米酒和米醋等传统发酵食品的制作均依赖特定微生物的作用，下列叙述正确的是（　　） A．泡菜坛需完全装满并密封，以防止乳酸菌代谢产生的气体导致发酵液溢出 B．腐乳制作过程中，毛霉分泌的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸 C．制作米酒时，需将蒸熟的米饭立即与酒曲混合，并在高温环境下保温以加速发酵 D．醋酸菌在无氧条件下可将乙醇转化为醋酸，因此米醋制作需在较低温度下进行 2．（24-25高二下·天津部分区·期末）关于果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是（　　） A．发酵所利用的微生物都属于原核生物 B．发酵后形成的溶液都呈酸性 C．泡菜腌制时间越长，亚硝酸盐含量越高，宜尽早食用 D．果酒果醋发酵装置应该尽量缩短排气口胶管长度，以便顺利排气 3．（24-25高二下·天津滨海新区·期末）关于果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是（　　） A．发酵所利用的微生物都属于原核生物 B．发酵后形成的溶液都呈酸性 C．泡菜腌制时间越长，亚硝酸盐含量越高，宜尽早食用 D．果酒果醋发酵装置应该尽量缩短排气口胶管长度，以便顺利排气 二、非选择题 1．（24-25高二下·天津和平·期末）乳酸菌能产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解，某兴趣小组从泡菜滤液中筛选出亚硝酸盐还原酶活力较高的乳酸菌，进行了相关实验。请回答下列问题： (1)乳酸菌生长繁殖所需要的主要营养物质有碳源、氮源、水、_____四类，分离、纯化乳酸菌所用的选择培养基以亚硝酸盐为唯一氮源，进入乳酸菌的亚硝酸盐的主要作用是用于合成菌体的含氮物质（用于合成菌体细胞物质）。    (2)将筛选出的乳酸菌，用于泡菜制作过程，进行食盐用量与亚硝酸盐含量的探索实验，结果如图。 ①泡菜制作过程中，pH呈下降趋势，原因是_____。 ②据图可知，腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现的越早，且峰值较高，原因是食盐用量过低，造成杂菌大量繁殖。实验结果说明，食盐用量和_____影响亚硝酸盐含量。 (3)①取若要对的乳酸菌稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是下图中的_____。    ②图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测乳酸菌稀释救中每毫升含细菌数为_____个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是_____。 地 城 考点02 微生物纯培养及其应用 一、单选题 1．（24-25高二下·天津西青·期末）为从高粘度原油（主要是含碳有机物）中筛选得到高效降解石油污染物的细菌，研究者以原油污染污泥为研究对象进行如图所示实验。下列叙述正确的是（　　） A．培养基①的作用是增加目的菌株的种类 B．图示表明，油泥混合液被稀释了106倍 C．只有培养基②要以原油为唯一碳源 D．培养基③采用的接种方法不能用于统计活菌的数量 2．（24-25高二下·天津部分区·期末）下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（　　） A．选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源 B．配制培养基时，需先进行高压蒸汽灭菌，再调节pH至中性或弱碱性 C．平均每克土壤中分解尿素的细菌数约为2.2×108个 D．实验需设置未接种的培养基作对照，以验证培养基的灭菌效果 3．（24-25高二下·天津部分区·期末）野生型大肠杆菌能在未添加某些氨基酸的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种氨基酸的完全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①、②、③、④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述正确的是（　　）    A．图中①、②、④为基本培养基，③为完全培养基 B．紫外线照射的目的是诱变，提高突变频率 C．图中B的正确操作是用接种环把菌液均匀地涂布在②表面 D．经图中C过程原位影印及培养后，可从④中挑取E进行纯化培养 4．（24-25高二下·天津河北·期末）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（    ） A．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿盖上 B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．含有机磷农药的培养基不可分离出能降解有机磷农药的细菌 D．为了防止污染及正常接种，接种环经火焰灭菌后应先进行冷却，之后再进行接种 5．（24-25高二下·天津部分区·期末）研究人员利用石油污染滩涂土壤筛选高效降解石油细菌，进行如下图所示的操作（①－⑤表示不同的菌落）。下列叙述错误的是（　　） A．图中液体富集培养基和液体选择培养基的成分不同，后者以石油为唯一碳源 B．甲过程采用的接种方法可用于菌体计数，但结果通常偏小 C．菌落①可能是自养菌，因不能分解石油而无降解圈产生，其生长不需要碳源 D．乙过程选择菌落⑤接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估 6．（24-25高二下·天津部分区·期末）与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列相关叙述正确的是（　　） A．利用发酵工程生产的井冈霉素可作为微生物农药用于化学防治 B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 C．平板划线法纯化菌种时，接种环灼烧了4次，则操作员在培养基上进行了5次划线 D．发酵工程中所用菌种大多是单一菌种，一旦有杂菌污染，可能导致产量大大下降，而传统发酵技术中通常利用的是天然存在的混合菌种 7．（24-25高二下·天津部分区·期末）下述实验操作需在无菌环境条件下进行的是（　　） A．用接种环在固体培养基上接种分离微生物 B．从新鲜洋葱中粗提取DNA C．对平板中分解尿素细菌计数 D．用PCR仪对DNA片段进行扩增 8.（24-25高二下·天津和平·期末）用高盐稀态发酵法酿造的酱油风味独特，其工艺流程如下图所示。相关叙述不正确的是（　　） A．发酵原理是利用米曲霉、酵母菌和乳酸菌等微生物的无氧呼吸 B．-5℃的盐水的作用是抑制杂菌生长，防止酱醪腐败 C．发酵期间晾晒、翻缸等操作可控制发酵温度和改善通气状况 D．酿造过程中，微生物一般由耐酸性较差的优势菌株向耐酸性较强的演变 9.（24-25高二下·天津滨海新区·期末） 物质A是一种难降解的有机物，细菌X体内存在可降解A的酶。科研人员欲从淤泥中分离得到细菌X，相关叙述正确的是（ ） A. 需对配制好的培养基进行湿热灭菌 B. 用于分离X的培养基蛋添加葡萄糖作为碳源 C. 细菌X的纯化与计数可使用平板划线法 D. 培养后某平板无菌落生长，则原因不可能是样品稀释倍数过大 10.（24-25高二下·天津和平区·期末）为探究抗生素对细菌的选择作用，将含抗生素的滤纸片放到接种了大肠杆菌的平板培养基上（如下图），一段时间后测量并记录抑菌圈的直径。从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌扩大培养，重复实验2~5次。下列叙述不正确的是（　　） A. 接种时，将高浓度菌液涂布在平板培养基上 B. ①处滤纸片上不含抗生素，起对照作用 C. 重复2~5次实验后，抑菌圈的直径会变大 D. 抑菌圈边缘的菌落上挑取的细菌抗药性较强 二、非选择题 1．（24-25高二下·天津部分区·期末）科研人员按照如图所示流程从盐湖土壤中分离筛选出了一株高产α-淀粉酶的耐盐性菌株NWU-8，并通过He-Ne激光照射提高该菌株产α-淀粉酶的能力，实验中需要a、b两种培养基，a的组分为牛肉膏、蛋白胨、高浓度 NaCl、水，相比培养基a，培养基b的组分增加了可溶性淀粉。回答下列问题。 (1)要在培养基上形成菌落，a、b培养基中均还应加入______，配制好的培养基通常采用的灭菌方法是_______，挑取a培养基平板上的菌落进一步纯化时，下列图示中正确的操作示意图为______。 (2)在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是______（填序号）。 ①培养细菌用的培养基与培养皿 ②玻棒、试管、锥形瓶 ③实验操作者的双手 ④操作空间 ⑤接种用具 (3)b培养基平板滴加碘液后，部分菌落周围出现透明圈，菌落直径/透明圈直径的比值______（填“大”或“小”）的菌落初步判断为产酶能力较高的菌株。实验小组为获得纯培养物的耐盐基因X，实验小组应用纯培养物提取了DNA，检测DNA 所用的试剂是________，若将耐盐基因X导入大豆细胞，常采用________法。 (4)He-Ne激光照射诱导后的菌种需要对耐盐性和产酶能力等进行检测和筛选，若取某一时刻的发酵样液，在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到下图数据，推测样液中菌体的数量为________个/mL。 平板1 平板2 平板3 104 320 342 356 105 198 243 279 106 23 18 21 2．（24-25高二下·天津河东·期末）酿酒酵母是重要的发酵菌种，广泛应用于酿酒、食品加工及生物燃料生产等，研究人员对酿酒酵母菌株的生活条件进行分析研究，以提高发酵产物的产量。 (1)对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为______（A．马铃薯蔗糖培养基B．MS培养基C牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的______。 (2)发酵过程中要测定酵母菌的繁殖速度，可用______平板法对酵母菌进行计数。将培养到某一时期的培养液制备成1×105倍稀释的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为34个、32个、30个，则培养液中的酵母菌数量为______个/mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图______（填“a”或“b”）。    (3)该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短、条件和底物不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了______（填物质）。 (4)某研究小组从葡萄皮上成功分离出某品种的酵母菌后，取等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中，并分别置于转速为150r/min、200r/min、250r/min的摇床上培养，检测结果如图甲所示，摇床转速为250r/min的酵母菌种群密度最大的原因是摇床转速越高，______，酵母菌代谢旺盛，增殖快。小组同学继续用分离出的酵母菌进行果酒的发酵，发酵产物酒精可用______溶液检验。    3．（24-25高二下·天津滨海新区·期末） 自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 （1）用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供___________和维生素等。 （2）A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明______________________。 （3）为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样___________后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现___________。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。 （4）为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱）___________。 试卷第1页，共3页 / 学科网（北京）股份有限公司 $