内容正文:
首先准备好实验所需的仪器和材料,灭菌生理盐水、1%肌红细胞悬液、标准禽流感病毒抗原、水槽、微量移液器及吸头、96孔微型微量血凝板、微型振荡器等。接下来按照实验要求逐步操作,在微量血凝板第一排第1至12孔各加25微升生理盐水。需要注意的是,每滴加一种材料更换一次吸头,以免造成污染,影响试验效果。换一吸头,第一孔加入25微升标准抗原,反复吹吸3至5次,充分混匀,从第一孔吸取25微升加至第二孔混云,第二孔吸取25微升加至第三孔混云。依次被比稀释至第十一孔混匀,从第十一孔吸取25微升气,取缔十二孔,不加抗圆,设立为对照孔。需要注意的是,稀释时应将材料充分混匀后再吸出,滴入下一孔中。换一洗头,第1至12孔各加25微升生理盐水。换一吸头,第1至12孔各加25微升1%肌红细胞悬液。使用微量移液器时,先排空气再吸液,避免吸头中带有空气,这样才能保证吸液量准确。我们在加液体时,吸头应悬空,不触碰雪凝板,因为各孔中材料浓度不同,以上加材料步骤完成后,应检查各孔页面是否平齐,这样就可以检查所加材料是否足够。图中这一孔页面低于其他各孔,说明加材料时出现了失误。在第二、三排重复以上操作,做三个平行试验,以保证试验结果。将雪凝板放在微量振荡器上震荡或手动切换混匀反应物,室温约20度,静置40分钟。环境温度过高时,可在四度条件下静置60分钟。当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时,判定结果将微量血凝板倾斜60度,观察孔底的红细胞流动现象,红细胞均匀平铺于孔底,倾斜时无内柱样流淌,判为红细胞完全凝集。倾斜时,孔底的红细胞向下呈泪珠样流淌,与第十二孔红细胞对照孔一致范围红细胞完全不凝集。能使红细胞完全凝集的病毒最大稀释倍数为该病毒抗原的血凝效价表示一个血凝单位HAU如图第1至8孔红细胞完全凝集,完全凝集的抗原最大稀释倍数在第八孔,那么本病毒抗原的血凝效价为1比2的8方抗原稀释到1比2的8次方时,每25微升含一个血麟单位。图中第三排的9至11孔与第一二排的9至11孔呈现结果不一样,尤其是第十孔。这可能是由于操作过程中仪器或是人为加样的失误造成的,所以做了三排三个平行试验。像这样第三排出现的失误则取第一二排的结果。让我们再来回顾复习一下血凝试验吧。按照实验操作步骤,加生理盐水加病毒抗原并对比稀释,再加生理盐水加红细胞悬液,经震荡混匀,室温静置反应,最后观察结果就完成了病毒血凝试验检测,得出我们所使用的标准禽流感病毒抗原的血凝效价为为1比2的8次方。下一步我们就可以进行病毒的血凝抑制试验,最终完成情优。
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