重难点02 微生物培养技术的应用（期末真题汇编）高二生物下学期人教版

**基本信息** 聚焦微生物培养技术应用，汇编多地区高二期末真题，涵盖实验操作、数据分析及实际应用，情境真实且梯度分明。 **题型特征** |题型|题量|知识覆盖|命题特色| |----|----|----------|----------| |单选题|16|酵母菌计数、菌株筛选、灭菌技术|结合血细胞计数板使用、尿素呼气试验等真实情境| |多选题|8|实验设计、误差分析|如通过透明圈直径比判断分解能力，考查科学思维| |解答题|8|发酵工程流程、菌株分离纯化|综合柠檬酸发酵、纤维素分解菌筛选等，强调探究实践|

重难点 02 微生物培养技术的应用 一、单选题 1．(24-25高二下·安徽部分学校·期末)在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，采用了图1所示的血细胞计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm，计数室为16×25型）进行计数，连续培养一段时间后绘制培养液中酵母菌种群的数量变化如图2所示。图2中，在a点对应的时间将培养液稀释了100倍，经过一系列操作，检测四角上中方格的酵母菌的平均数量为32个。下列说法正确的是（　　） A．配制无菌马铃薯液体培养基时，先经高压蒸汽灭菌，再调节溶液pH后才能使用 B．对酵母菌计数时，先用吸管吸取培养液，当培养液渗入计数室后，再盖上盖玻片 C．此培养液中，酵母菌数量达到环境容纳量时的种群密度约为1.024×109个/mL/mL D．若将100mL培养液加无菌水至200mL，则酵母菌种群K值将增大至原来的2倍 【答案】C 【详解】A、培养基制备过程中应先调节pH，再经过高压蒸汽灭菌后使用，A错误； B、用血细胞计数板计数时，先将盖玻片放在计数室上，再用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，B错误； C、图2中，在a点对应的时间，培养液中酵母菌种群密度=32×16×104×100=5.12×108个/mL，b点为环境容纳量，其种群密度为a点的2倍，因此培养液中酵母菌数量达到环境容纳量时种群密度约为1.024×109个/mL，C正确； D、若将100mL培养液加无菌水至200mL，由于营养物质总量没有变化，种群K值受营养物质的限制而不能增大至原来的2倍，D错误。 故选C。 2．(24-25高二下·金太阳福建福州八县（，区）协作校·期末)养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物能使氨氮化合物转化为尿素进而产生 NH₃，影响畜禽健康。为筛选能利用氨氮化合物且减少 NH₃产生的微生物，实验小组进行了分离目的菌株的实验，流程如图所示。下列实验操作错误的是（　　） A．过程①将样本进行梯度稀释，接种到培养基后进行培养 B．过程②筛选的菌落能在a培养基上生长，不能在 b 培养基上生长 C．过程③可添加脲酶并检测其活性，结果菌株甲可以产生NH3 D．向粪便中添加菌株甲比添加菌株乙更有利于减少NH3的产生 【答案】D 【详解】A、过程①要从畜禽粪便样本中获取利用氨氮化合物的多个菌落，通常在梯度稀释后用涂布平板法获取单个菌落，A正确； B、a培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）为完全培养基，大多数微生物都能生长，b培养基（尿素唯一氮源培养基）只有能利用尿素的微生物才能生长。过程②要筛选的是能利用氨氮化合物但不能利用尿素的微生物，即能在a培养基生长却不能在b培养基生长的单个菌落，B正确； C、过程③中，可通过添加脲酶并检测其活性来鉴别，甲菌株不产脲酶，乙菌株分泌脲酶抑制剂，添加脲酶后，菌株甲可以产生NH3，C正确； D、因为乙菌株分泌脲酶抑制剂，能抑制脲酶将尿素分解为NH3，而甲菌株不产脲酶，在养殖场粪便中还有其他能产生脲酶的微生物，故添加菌株乙比菌株甲更有利于减少NH3的产生，D错误。 故选D。 3．(24-25高二下·河南天一大联考·期末)幽门螺杆菌是导致胃炎、胃溃疡的常见病原体。临床上常用尿素呼气试验进行无创诊断，其原理是让受试者口服含13C标记的尿素胶囊，随后检测呼出气体中是否含13CO2（反应式见下图）。下列有关说法正确的是（　　） A．13CO2是幽门螺杆菌通过细胞呼吸产生的 B．脲酶可为13C尿素分解提供活化能，提高反应速率 C．毕希纳利用丙酮从刀豆种子中分离出脲酶并证明其是蛋白质 D．若受试者胃内存在其他可分解尿素的细菌，则检测结果不准确 【答案】D 【详解】A、幽门螺杆菌分解尿素产生13CO2的过程是脲酶催化尿素水解的化学反应，并非通过细胞呼吸产生，A错误； B、脲酶的作用是降低反应的活化能，而非提供活化能，B错误； C、毕希纳通过实验证明酵母菌研磨液能使葡萄糖发酵，提出“酶在细胞外也可起作用”；萨姆纳从刀豆中提取脲酶并证明其化学本质是蛋白质，C错误； D、其他分解尿素的细菌也会产生13CO2，导致无法区分CO2是否来源于幽门螺杆菌，干扰检测结果，D正确。 故选D。 4．(24-25高二下·陕西西安新城区·期末)PAHs是一种不溶于水的碳氢化合物，具有致癌和致畸作用。科研人员欲从被PAHs污染的土壤中分离出降解PAHs的菌株并计数，过程如图。已知培养基中PAHs被降解后会形成透明圈。下列说法正确的是（　　）    A．培养皿中的培养基应以PAHs为唯一碳源 B．可用细菌计数板对试管3中PAHs分解菌进行计数 C．挑取单菌落时应选择透明圈与菌落直径比值小的菌落 D．1g样品土壤中约含7×105个PAHs分解菌 【答案】A 【分析】分析题图：图示表示科研人员从被PAHs污染的土壤中分离出高效降解PAHs的菌株并计数的主要步骤。其中培养液中加入多环芳烃菲作为唯一碳源，目的是筛选出高效降解PAHs的菌株。 【详解】A、该实验的目的是从被PAHs污染的土壤中分离出高效降解PAHs的菌株，所以培养基应以PAHs为唯一碳源，A正确； B、试管3中菌体不一定都是PAHs分解菌，不能用细菌计数板对试管3中PAHs分解菌进行计数，可用稀释涂布平板法根据透明圈计数，B错误； C、透明圈直径与菌落直径比值越大，降解PAHs的效果越好，挑取单菌落时应选择透明圈与菌落直径比值大的菌落，C错误； D、根据平板菌落数可知1g样品土壤中约含（66+76+68）÷3÷0.1×105=7.0×107个PAHs分解菌 ，D错误。 故选A。 5．(24-25高二下·福建漳州第一中学·期末)研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中（＋代表抗生素浓度，－代表不含抗生素）。在37℃环境下培养24小时后，观察结核杆菌菌落生长结果如图。下列叙述错误的是（　　） A．该实验接种结核杆菌使用稀释涂布平板法 B．两种抗生素都对结核杆菌的生长有较好的抑制作用 C．与单独用抗生素A相比，联合用抗生素B对结核杆菌抑制作用无明显增加 D．长期使用抗生素A可能会增加结核杆菌的抗药性基因频率 【答案】B 【分析】微生物的实验室培养时接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，如果要对菌落进行计数，应采用稀释涂布平板法。抗生素是能抑制特定微生物（主要是原核生物）生长的一大类化学试剂的统称。 【详解】A、由图可知，图中使用的接种方法是稀释涂布平板法，A正确； B、观察前四个平板，随着抗生素A增多，菌落数逐渐减少至无；观察第3、第5、第6这三个平板，可观察到抗生素B的含量多少与有无，对菌落数影响不大，所以抗生素A对结核杆菌的生长有较好的抑制作用，而抗生素B对结核杆菌的生长没有较好的抑制作用，B错误； C、通过分析B项，可知与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B对结核杆菌的抑制作用无明显增加，C正确； D、长期使用抗生素A会对菌群起到定向选择作用，使菌落的抗药基因频率增加，D正确。 故选B。 6．(24-25高二下·甘肃临夏州·期末)牛是一种反刍动物。在牛的瘤胃中存在大量微生物，它们可以释放纤维素酶，对纤维素进行分解。某科研团队准备从牛的新鲜粪便中筛选高效的纤维素分解菌。下列叙述错误的是（　　） A．配制培养基时，培养基中含有的唯一碳源是纤维素 B．收集到的牛粪样品和需要使用的接种工具都需消毒 C．在含有刚果红的培养基上，纤维素分解菌菌落周围会出现透明圈 D．分离高效的纤维素分解菌可以使用稀释涂布平板法或平板划线法 【答案】B 【详解】A、为了筛选纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源，能够分解纤维素的微生物能够生存，不能分解纤维素的微生物因无法获得碳源而死亡，因此培养基中唯一的碳源是纤维素，A正确； B、牛粪样品中的微生物是目标菌的来源，若消毒会杀死部分菌种，因此样品无需消毒；而接种工具（如接种环）需灭菌，而非消毒，B错误； C、刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后,红色复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，C正确； D、微生物接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法，分离高效的纤维素分解菌的方法可以是稀释涂布平板法或平板划线法，D正确。 故选B。 7．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)PE（聚乙烯）是世界上产量最大的塑料，通过磨损和风化等形成尺寸微小的微塑料，微塑料不可降解且难回收，积累于生物及环境中。本实验欲从泰山南侧土壤中分离筛选微塑料降解菌。下列叙述错误的是（    ） A．本实验所用的土样应从塑料垃圾较多的土壤中获取 B．①②③中所用培养基是以PE微塑料为唯一碳源的选择培养基 C．用含牛肉膏、蛋白胨的完全培养基接种等量菌种作对照，可证明选择培养基有选择作用 D．图示方法可分离得到单菌落，进行计数后可估算出土样中活菌数 【答案】D 【详解】A、本实验是分离筛选微塑料降解菌，因此所用的土样应从塑料垃圾较多的土壤中获取，A正确； B、本实验是分离筛选微塑料降解菌，①②③中所用培养基是以PE微塑料为唯一碳源的选择培养基，以抑制杂菌的生长，B正确； C、用含牛肉膏、蛋白胨的完全培养基接种等量菌种作对照，若选择培养基上的菌落数少于完全培养基，可证明选择培养基有选择作用，C正确； D、图示为稀释涂布平板法接种，可获得单菌落，通过计算可估算稀释之前培养液中的活菌数量，但由于①②③过程存在筛选，因此不能估算筛选前土样中活菌数，D错误。 故选D。 8．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)青霉素是人类发现的第一种抗生素，其工业化生产流程如图所示。下列叙述错误的是（    ）    A．虽然青霉素具有杀菌作用，但仍然需对发酵罐进行灭菌 B．过程①、②的目的是快速增加菌种的数量，③是接种发酵，都使用了液体培养基 C．过程③中需从下方的充气口通入无菌空气以提高溶解氧，过程④一般通过湿热灭菌 D．过程⑤常用的方法是过滤和沉淀，可从分离出的菌种中提取到单细胞蛋白，但菌种不可再使用 【答案】D 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。发酵工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产品的分离、提纯等。 【详解】A、发酵工程中所用的菌种大多是单一菌种。一旦有杂菌污染，可能导致产量大大下降。虽然青霉素能杀细菌，但为了防止其他真菌等微生物的污染，获得纯净的青霉素，发酵罐仍需严格灭菌，A正确； B、发酵工程需要接种大量菌种，过程①、②的目的是快速增加菌种的数量，过程③是将菌种接种到发酵罐，过程①、②、③都使用了液体培养基，B正确； C、青霉菌是异养需氧型微生物，因此在发酵过程中需从下方的充气口通入无菌空气以提高溶解氧，过程④是对培养基进行灭菌，一般采用湿热灭菌，C正确； D、发酵产品单细胞蛋白指通过发酵获得的大量微生物菌体，可在发酵结束之后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，分离出的菌种具有生物活性，可以再使用，D错误。 故选D。 9．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列叙述正确的是（    ） A．取样时用的铁铲、纸袋在使用前进行消毒处理，对培养基进行干热灭菌，对培养皿要进行湿热灭菌 B．实验中的培养基以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的 C．涂布3个平板可避免对尿素分解菌进行计数时菌落数比活菌实际数目少 D．若取1克土样稀释105倍的0.1mL菌液进行涂布，获得菌落数目的平均值为168，则每克土样中尿素分解菌的数量为1.68×108 【答案】D 【详解】A、培养基需通过高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），而干热灭菌用于耐高温且需保持干燥的物品（如培养皿、金属工具），A错误； B、尿素分解菌的培养基以尿素为唯一氮源，碳源可能来自其他有机物（如葡萄糖），而硝化细菌为自养型，以CO2为碳源，两者碳源不同，B错误； C、涂布3个平板是为了减少实验误差，取平均值提高准确性，但无法避免因多个细菌聚集导致菌落数少于实际活菌数的问题，C错误； D、1克土样中尿素分解菌的数量为：菌落数（168）/涂布体积（0.1mL）×稀释倍数（105）=168×10×105=1.68×108，D正确。 故选D。 10．(24-25高二下·湖南雅礼中学·期末)双层平板法是对噬菌体进行计数的常用方法。具体做法是：在无菌培养皿中倒入琼脂含量为2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量为1%的培养基熔化并冷却至45~48℃，然后加入敏感指示菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板（见下图）。培养一段时间后，在双层培养基的上层会出现透亮无菌圆形空斑——噬菌斑，根据噬菌斑的数目可计算原液中噬菌体的数量。判断下列正确的是（　　） A．需先调节灭菌后培养基的pH，然后再进行倒平板 B．倒上层平板时需将培养基冷却到45~48℃的最主要原因是防止下层固体培养基被液态化 C．利用双层平板法统计出的噬菌体数量往往比实际值偏大 D．与底层平板相比，上层培养基中琼脂浓度较低的好处是形成的噬菌斑较大，有利于计数 【答案】D 【分析】双层平板法的优点：①加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到弥补；②所形成的全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象；③因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数。 【详解】A、配制培养基时，要先调pH再灭菌，然后进行倒平板，A错误； B、高温会破坏蛋白质的空间结构，故将培养基冷却至45~48℃最主要的原因是避免高温杀死细菌和噬菌体，B错误； C、在计数时，有可能噬菌体入侵细菌后还未裂解细菌，未形成噬菌斑。因此，利用双层平板法统计出的噬菌体数量往往比实际值偏小，C错误； D、与底层平板相比，上层培养基中琼脂浓度较低的好处是形成的噬菌斑较大，有利于计数，D正确。 故选D。 11．(24-25高二下·重庆第一中学校·期末)酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图Ⅰ所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，对瓶中酒精浓度和活菌数量的检测结果如图Ⅱ。下列说法错误的是（    ） A．葡萄酒发酵过程中，缺氧酸性的环境及酵母菌产生的酒精等可抑制杂菌的繁殖 B．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109（个/L），此数值可能低于实际的活菌数 C．可用干热灭菌法对培养皿、培养基进行灭菌，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌 D．由图Ⅱ可知，丙组可能是锥形瓶密封不严所致，丁组的酵母菌产酒精能力比乙组的强 【答案】C 【详解】A、利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精，而大多数杂菌在缺氧酸性、有酒精的环境下无法繁殖，而酵母菌在该环境中能处于优势地位，A正确； B、若对菌液计数，需选取菌落数处于30～300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘103算每升发酵液的微生物数，因此葡萄酒过滤液的活菌数为（62+68+74）÷3÷0.1×104×103=6.8×109（个·L-1），计数过程中两个或两个以上细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落，所以数目偏小，B正确； C、培养基灭菌应采用湿热灭菌，不能用干热灭菌，接种过程中，试管口、瓶口等容易被污染的部位，可以通过火焰灼烧灭菌，C错误； D、据图Ⅱ可知，甲中没有酵母菌，为对照组，乙、丙、丁挑取不同的菌落培养，丙瓶与乙、丁瓶相同条件培养，但培养液没有酒精产生，且瓶内活菌数量较高，推测丙瓶是通气培养；丁瓶的活菌数少于乙瓶，但丁瓶中酒精浓度与乙瓶一致，说明丁组酵母菌产酒精能力比乙强，D正确。 故选C。 12．(24-25高二下·湖南娄底部分普通高中·期末)研究人员利用石油污染滩涂土壤筛选高效降解石油细菌，进行如下图所示的操作（① - ⑤表示不同的菌落）。下列叙述正确的是（　　） A．图中液体培养基和固体培养基成分的唯一不同是后者含有琼脂 B．甲过程采用的接种方法可用于菌体计数，但结果通常偏小 C．菌落①中菌体因不能分解石油而无降解圈产生，其生长不需要碳源 D．乙过程选择菌落③接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估 【答案】B 【详解】A、图中液体富集培养基和固体选择培养基成分的不同之处有，后者以石油作为唯一碳源、后者固体培养基中含有琼脂，A错误； B、甲过程采用的是稀释涂布平板法，使用该方法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该方法用于计数时往往使结果偏小，B正确； C、菌落①周围无降解圈产生，说明其中的菌体不能利用石油这唯一的碳源，很可能是自养型微生物，以CO2作为碳源，C错误； D、乙过程选择菌落⑤（降解圈最大）接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估，石油的剩余量越少，则菌种降解能力越强，D错误。 故选B。 13．(24-25高二下·吉林长春外五县·期末)如图所示为实验室中纯化微生物菌种的一种方法，下列有关叙述错误的是（　　） A．该方法为平板划线法 B．使用涂布器进行划线操作 C．需要对接种工具灼烧5次 D．可能在D区出现单一菌落 【答案】B 【详解】A、据图可知，该方法为平板划线法，A正确； B、平板划线法使用的工具是接种环，稀释涂布平板法使用的是涂布器，B错误； C、据图可知，图示中共划了4次线，划线前和每一次划线后，均需要灭菌，所以接种工具接种环需要灼烧5次，C正确； D、依据图示中的箭头方向可知，D属于最后一次划线，所以可能在D区出现单一菌落，D正确。 故选B。 14．(24-25高二下·广东江门·期末)科研人员在平板上接种某种革兰氏阳性菌（G+），然后探究PPC（培养过P菌的培养液）对G+生长的影响，实验结果见下图。下列分析错误的是（    ） 注：Hot-PPC（100℃处理15min后再加入）、NaOH-PPC（加NaOH调节pH值至中性）、PBA能抑制G+生长。 A．PPC能抑制G+生长 B．PPC的热稳定性比较弱 C．P菌酸性物质能抑制G+生长 D．PPC和PBA的作用效果相近 【答案】B 【详解】A、观察图中“PPC”组有明显抑菌圈，说明PPC能抑制G+生长，A正确； B、“Hot - PPC”是经100℃处理15min后的PPC。对比“PPC”组和“Hot - PPC”组的抑菌圈相似。这说明加热后PPC的抑制能力不变，即PPC热稳定性高，B错误； C、NaOH-PPC组没有抑菌圈，该组在PPC中加入了NaOH后调节到了中性，说明PPC呈酸性；而PPC组存在抑菌圈，表明P菌酸性物质能抑制G+生长，C正确； D、观察图中“PPC”和“PBA”组的抑菌圈大小：二者抑菌圈范围相近，说明抑制G+生长的效果相近，D正确。 故选B。 15．(24-25高二下·山东德州·期末)消毒或灭菌是进行微生物培养、植物细胞工程和动物细胞工程的必要操作之一。下列说法错误的是（　　） A．利用稀释涂布平板法接种时，用引燃的酒精灼烧涂布器属于灭菌处理 B．对培养基进行灭菌时，可使用干热灭菌或高压蒸汽灭菌 C．进行植物组织培养时，用次氯酸钠浸泡外植体30分钟属于消毒处理 D．进行动物细胞培养时，所有培养用具都必须进行灭菌处理 【答案】B 【详解】A、稀释涂布平板法中，涂布器需灼烧灭菌。灼烧可杀死所有微生物（包括芽孢），属于灭菌处理，A正确； B、培养基通常含水分，需用高压蒸汽灭菌；干热灭菌适用于耐高温且干燥的物品（如玻璃器皿），不能用于培养基灭菌，B错误； C、植物组织培养中，次氯酸钠浸泡外植体仅杀死表面微生物（未灭杀芽孢），属于消毒处理，C正确； D、动物细胞培养要求严格无菌，所有直接接触细胞的用具（如培养瓶、培养液）均需灭菌（如高压蒸汽灭菌或过滤灭菌），D正确。 故选B。 16．(24-25高二下·福建泉州四校联盟·期末)利用石油降解菌降解石油可作为修复被石油污染的土壤或水源的一项重要措施，筛选石油降解菌的过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．图中的土壤样本可能被石油污染 B．④接种方法为平板划线法，接种过程需要使用接种环 C．⑤最好用固体培养基培养④中的石油降解菌，检测该菌对石油的降解能力 D．稀释涂布平板法不仅可以分离、纯化石油分解菌，还可以对目的菌进行计数 【答案】B 【分析】常用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的步骤为土壤取样→溶化→梯度稀释→涂布平板。 【详解】A、图中的土壤样本可能被石油污染，因为在被石油污染的土壤中可能获得石油分解菌，A正确； B、根据平板中菌落的分布可知，④接种方法为稀释涂布平板法，接种过程需要使用涂布器，B错误； C、⑤鉴别优质菌种和保存备用，该过程可以用固体培养基培养④中的石油降解菌，检测该菌对石油的降解能力，菌种的保存也可用固体斜面培养基进行操作，C正确； D、稀释涂布平板法不仅可以分离、纯化石油分解菌，还可以对目的菌进行计数，但平板划线法不能用于对菌种计数，D正确。 故选B。 二、多选题 17．(24-25高二下·湖南怀化·期末)为筛选出淀粉分解菌，研究人员进行了相关实验，结果如下。相关叙述正确的是（　　） 菌种 菌落直径：C/mm 透明圈直径：H/mm 细菌Ⅰ 5.1 11.2 细菌Ⅱ 8.1 13.0 A．本实验中微生物培养基以淀粉作为唯一碳源 B．为形成透明圈，应使用刚果红进行染色处理 C．实验结果表明细菌Ⅰ分解淀粉能力较细菌Ⅱ要强 D．为进一步筛选分解淀粉的细菌，只能使用稀释涂布平板法 【答案】AC 【详解】A、为筛选出淀粉分解菌，应使用淀粉为唯一碳源，A正确； B、淀粉应使用碘液染色，刚果红会与纤维素结合形成红色复合物，B错误； C、透明圈直径/菌落直径比值越大，则分解淀粉能力越强，据表中数据可知，细菌Ⅰ的H/C的值更大，说明其分解能力更强，C正确； D、为进一步筛选细菌可使用平板划线法或稀释涂布平板法，D错误。 故选AC。 18．(24-25高二下·江西景德镇·期末)“五一”期间，景德镇市旅游业火爆，众多美食赢得了消费者的高度赞扬，油炸臭豆腐是众多风味小吃的一种，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵。下列说法，正确的是（　　） A．经煮沸灭菌的卤汁需冷却后才能浸入豆腐 B．制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基 C．利用乳酸菌制作酸奶时，为了防止杂菌污染，可在牛奶中加入少量抗生素 D．将果酒用于果醋发酵时，提高温度是“激活”醋酸菌的重要条件之一 【答案】BD 【详解】A、制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵，即卤汁中含有发酵所需菌种，因此不能煮沸灭菌，A错误； B、制作豆腐时微生物生长所需的营养物质来源于豆腐，因此豆腐相当于微生物生长的培养基，B正确； C、抗生素会抑制乳酸菌的生长繁殖，在利用乳酸菌制作酸奶时，不能在牛奶中加入抗生素来防止杂菌污染，C错误； D、果酒发酵的最适温度是18-30°C，果醋发酵温度是30-35°C，醋酸菌发酵的适宜温度比酵母菌发酵产生酒精的适宜温度高，将果酒用于果醋发酵时，提高温度是“激活”醋酸菌的重要条件之一，D正确。 故选BD。 19．(24-25高二下·江苏东台·期末)研究人员欲测定大熊猫肠道中纤维素分解菌的数量，实验操作过程如下图所示。下列有关叙述错误的有（　　） A．用接种环将稀释液接种到以纤维素为唯一碳源的培养基上培养 B．梯度稀释时若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为3ml C．在统计菌落数时，宜选择4号试管接种得到的培养物进行计数 D．根据实验结果计算出5g粪便中含纤维素分解菌的数目是1.4×108个 【答案】ABD 【详解】A、用涂布器将稀释液接种到以纤维素为唯一碳源的培养基上培养，A错误； B、研究人员采用稀释涂布平板法分离纤维素分解菌，图中是将0.3ml菌液添加到aml无菌水中，若每支试管稀释10倍，则a的数值应为2.7ml，B错误； C、稀释涂布平板法计数时应选择菌落数30-300之间的菌落，故在统计菌落数时，宜选择4号试管接种得到的培养物进行计数，C正确； D、图中共稀释105倍，由此计算出5g粪便中含纤维素分解菌的数目是（275＋285＋280）/3÷0.2×105×5=7×108个，D错误。 故选ABD。 20．(24-25高二下·辽宁县域重点高中·期末)肺炎链球菌可使人患细菌性肺炎。现有一种新的抗生素，为了检验不同浓度的该抗生素对细菌性肺炎的疗效，研究者进行了抑菌实验。图中的PBS为磷酸盐缓冲液。下列说法正确的是（　　） A．不同浓度的抗生素应使用磷酸盐缓冲液配制 B．图中4个滤纸片应在细菌培养之前放在标注区域 C．通过对形成的菌落计数可对抗生素的药效进行衡量 D．由图可知，抗生素的浓度会影响抗生素对细菌的抑制效果 【答案】ABD 【详解】A、贴含有PBS的滤纸片是作为对照，说明实验组是用磷酸盐缓冲液配制，A正确； B、图中4个滤纸片应在细菌培养前放在标注区域，这样才能看出抗生素对细菌生长的抑制作用大小，B正确； C、对抗生素的药效进行衡量是通过抑菌圈的大小判断，C错误； D、由图可知，浓度越大，抑菌圈越大，故浓度会影响抗生素对细菌的抑制效果，D正确。 故选ABD 。 21．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中，摇匀后再依次等比稀释3次，取0.1mL稀释后的湖泊水样涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列相关叙述正确的有（    ） A．分离计数溶菌细菌的培养基应含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂 B．应使用灼烧灭菌冷却后的涂布器将湖泊水样均匀地涂布到薄层上 C．待接种的水样被充分吸收后，将平板倒置于恒温培养箱中培养 D．1mL的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 【答案】ABC 【详解】A、分离计数溶菌细菌使用的是固体培养基，固体培养基的基本成分包括水、碳源、氮源、无机盐和琼脂（凝固剂，使培养基呈固体状态），A正确； B、涂布接种时，涂布器需经灼烧灭菌，冷却后再使用（避免高温杀死待接种的细菌），以保证水样均匀涂布在薄层上，B正确； C、接种后需待水样被培养基充分吸收，再将平板倒置培养，目的是：防止冷凝水滴落污染培养基；避免培养基水分过快蒸发，C正确； D、水样稀释104倍，涂布0.1mL稀释液后，溶菌菌落数为15个；1mL原水样中溶菌细菌数量应为：15÷0.1×104 = 1.5×106，D错误。 故选ABC。 22．(24-25高二下·河北部分名校·期末)为了提取环境中的独特菌种，某校生物研究小组以优质的高粱和小麦为原料，制作培养基，搜集、分离空气中的酿酒微生物。将上述培养基暴露在空气中培养一段时间后，取10g该培养基用无菌水制成100mL样品溶液。再将样品溶液稀释104倍后，各取样品溶液0.1mL，在5个培养基平板上接种。培养一段时间后，平板上长出的微生物菌落数分别为13、156、462、178和191。下列叙述正确的是（    ） A．纯化培养时，应将接种后的5个平板倒置放入适宜温度的培养箱内培养 B．为减少实验误差，一般选择菌落数30~300之间的平板进行计数 C．根据实验结果，每克培养基样品中的微生物数量是1.75×109个 D．与用血细胞计数板计数相比，该学习小组采用的计数方法测得的微生物数目偏高 【答案】AB 【详解】A、微生物纯化培养时，培养皿应倒置放入适宜温度的培养箱内培养，A正确； BC、统计的菌落数应介于30~300之间，故选菌落数为156、178和191的平板计数，每克培养基样品中的微生物数量为（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108个，B正确，C错误； D、由于死亡的微生物不能形成菌落，以及两个或多个菌体连在一起时形成一个菌落，所以与用血细胞计数板计数相比，用稀释涂布平板法测得的微生物数目要偏低，D错误。 故选AB。 23．(24-25高二下·辽宁重点高中联合体·期末)香蕉枯萎病是由土壤中的尖孢镰刀菌感染香蕉植株所导致，菌株S可抑制尖孢镰刀菌。某研究小组将菌株S施于香蕉种植园的土壤中，并从中筛选出与菌株S协同作用的菌株P。为验证菌株P与菌株S对尖孢镰刀菌的抑制具有协同作用，进行了以下操作。下列叙述正确的是（　　） 培养基 预先涂布菌株 点接菌液 实验组1 实验组2 实验组3 固体培养基 菌株X 菌株S 菌株P ？ A．菌株X是尖孢镰刀菌 B．实验组3“？”为菌株S+菌株P C．该实验的因变量为溶菌圈的大小 D．能够说明菌株P对菌株S的作用的组别为实验组2和3 【答案】ABC 【详解】A 、该实验目的是验证菌株P与菌株S对尖孢镰刀菌的抑制具有协同作用，所以预先涂布的菌株X应该是尖孢镰刀菌，这样才能观察菌株S和P对它的抑制作用，A 正确 ； B 、为了验证协同作用，实验组3应该是菌株S+菌株P，与实验组1（菌株S）、实验组2（菌株P）形成对比，B 正确； C、该实验是验证两种菌株对尖孢镰刀菌的抑制作用，可通过观察溶菌圈的大小来判断抑制效果，所以因变量为溶菌圈的大小，C 正确 ； D 、要说明菌株P对菌株S的作用，需要设置有菌株S单独作用和菌株S与菌株P共同作用的组进行对比，有无菌株P为自变量，即实验组1和3，而不是实验组2和3，D 错误 。 故选ABC。 24．(24-25高二下·江西抚州·)酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，研究人员进行如图1所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，得到如图2的结果，下列说法正确的是（    ） A．②涂布后应放在CO2培养箱中培养 B．葡萄酒发酵过程中，酵母菌产生的次生代谢产物酒精可抑制杂菌的繁殖 C．由图2可知产酒精能力最强的活菌是丁，其能耐受酒精度20％以上的发酵液 D．为了保证结果准确，应选择图1中稀释倍数为104的培养皿进行平板计数 【答案】BD 【详解】A、因为酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下也能生长繁殖，所以在②涂布后的培养过程中不需要在CO2培养箱中培养，A错误； B、在葡萄酒发酵过程中，酵母菌产生的次生代谢产物酒精可抑制杂菌的繁殖，B正确； C、由图2不能推出活菌丁能耐受酒精度20％以上的发酵液，C错误； D、平板计数时，应选择菌落数在 30-300 之间的培养皿，以保证结果的准确性。图 1 中10⁴稀释倍数的菌落数在此范围内，D正确。 故选BD。 三、解答题 25．(24-25高二下·四川广安加德中学·期末)柠檬酸是一种应用广泛的食品酸度调节剂。研究人员以红薯粉为原料经黑曲霉（需氧型真菌）发酵生产柠檬酸的简要流程如图所示。回答下列问题： (1)甲过程所用的培养基能为黑曲霉提供碳源、______、水和无机盐等营养物质。对培养基灭菌应该采用的方法是__________。据图甲分析，在该培养基上接种黑曲霉采用的方法是______，该方法可以获得纯培养物的原因是____________________。 (2)乙过程表示发酵工程的______环节。研究发现，振荡培养的黑曲霉比静置培养的黑曲霉生长繁殖速度______，原因是________________________________。 (3)丙过程是发酵的中心环节。该过程以一定的速度不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出旧的培养基，可大大提高生产效率，原因是________________________________________________（答出两点）。 【答案】(1) 氮源 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 平板划线法 连续划线可逐步稀释菌种，得到分散的单个细胞 (2) 扩大培养 快 振荡培养能提高培养液中氧气的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率 (3)为菌种提供营养物质；排出代谢废弃物；调节相关发酵条件 【详解】（1）培养基能为黑曲霉提供碳源、氮源、水、无机盐等营养物质，对培养基的灭菌采用的方法是高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）。具体分析，该培养基上接种黑曲霉的方法是平板划线法，平板划线除了第一次划线蘸取了菌液以后，后面的每次划线都不蘸取菌液，都是从上次划线末端开始划线，因此该方法通过连续划线可逐步稀释菌种，得到分散的单个细胞。 （2）乙过程使用了液体培养基，并采用了适宜温度和振荡培养，为菌种繁殖提供了合适的条件，属于发酵过程的扩大培养的环节，黑曲霉是需氧型真菌，因此振荡培养提高培养液中氧气的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。 （3）发酵过程中以一定的速度不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出旧的培养基，可大大提高生产效率，原因是为不断添加新的培养基，为菌种提供营养物质；放出旧的培养基，即排出代谢废弃物；此外，在发酵过程中，也可以调节相关发酵条件。 26．(24-25高二下·甘肃定西临洮县·期末)纤维素是地球上含量较为丰富的可再生资源。人们欲从自然界中筛选出可分解纤维素的细菌，部分过程如图1～3所示，其中图3所示培养基中含有刚果红染料，其可与纤维素形成红色复合物，与纤维素的水解产物无此反应。回答下列问题： (1)图1、2所示培养基为________（填物理形态）培养基，图1、2中的接种方法均为________。 (2)若图3中的细菌均为能分解纤维素的细菌，则分解能力最强的菌落是________（填“Ⅰ”“Ⅱ”或“Ⅲ”），判断依据是________。 (3)图1、2所示的培养基均出现异常情况，其中图1所示培养基出现异常情况的原因是________。图2所示培养基出现异常情况的原因是培养过程中受到了污染，有同学认为污染的杂菌并非都能分解纤维素，他提出该观点的依据是________（答出1点）。 【答案】(1) 固体 稀释涂布平板法 (2) Ⅱ 分解纤维素能力越强的菌株，周围的透明圈直径与菌落直径的比值越大，图3中Ⅱ的透明圈直径与菌落直径的比值最大，说明其分解纤维素的能力最强 (3) 接种时涂布不均匀所致 能分解纤维素的菌落周围会出现透明圈，若杂菌周围无透明圈，则说明该杂菌不能分解纤维素 【分析】题图分析：图中平板表面都长菌落，因此用的是稀释涂布平板法接种。图1中菌落分布不均匀，是涂布不均匀所致；图2有菌落蔓延，未倒置培养，水滴污染所致；图3出现透明圈，是选择培养基。 【详解】（1）培养基能形成菌落，固体培养基可以用于菌落的观察和分离；从菌落的分布形态能判断，稀释涂布平板法会让菌落均匀分布在培养基表面。 （2）分解纤维素能力越强的菌株，周围的透明圈直径与菌落直径的比值越大，图3中Ⅱ的透明圈相对最大，说明其分解纤维素的能力最强。 （3）图1所长菌落分布不均匀，应该是接种时涂布不均匀所致。纤维素分解菌能将纤维素水解，使培养基中与纤维素结合的色素复合物解离，从而形成透明圈，不能分解纤维素的杂菌则无法形成透明圈。 27．(24-25高二下·贵州遵义区县一中·期末)枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤、水体等环境中的益生菌，菌体产生的枯草菌素、短杆菌肽对水产养殖中的弧菌、大肠杆菌等有害微生物有很强的抑制作用，净化水质的同时能分解残饵、粪便、有机物等。 成分 H2O K2SO4 （CH2O） NaCl 含量 1000mL 0.2g 30g 3g (1)分析表格中培养基配方，实验室中培养枯草芽孢杆菌的培养基中还需要加入________，其在枯草芽孢杆菌体内可以用于合成________等生物大分子（答出2种）。 (2)为了验证2种不同类型的枯草芽孢杆菌对水体中的大肠杆菌的抑制作用，进行如下操作流程：其中①②区域未接种任何菌液，取适量的大肠杆菌菌液涂在③④区域内，再取统一10mm直径的圆形无菌滤纸片分别在无菌水、等浓度的A枯草芽孢杆菌的菌液和B枯草芽孢杆菌的菌液中浸泡，后用无菌镊子按顺序覆盖在大肠杆菌培养基上②③④区域，培养箱倒置培养一段时间后形成下图结果，其中①和②内未发现微生物生长，进行①和②区域操作目的是_______（答2点）。通过测量________的直径判断________区域接种枯草芽孢杆菌的抑菌效果较好。 注：“●”代表滤纸片。 (3)将④中的枯草芽孢杆菌进行扩大培养后用稀释涂布平板法进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目要少，原因是______。 (4)枯草芽孢杆菌在生态系统中的成分是________，通过发酵工程大规模发酵产生的枯草芽孢杆菌作为微生物农药与传统农药相比，其优点是_______。 【答案】(1) 氮源 蛋白质、核酸 (2) 确保培养基、无菌水没有被杂菌污染 抑菌圈 ④ (3)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (4) 分解者 减少环境污染 【分析】1.培养基的基本成分包括水、无机盐、碳源和氮源，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 2.微生物常见的接种的方法：①平板划线法:将已经溶化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）不同微生物的培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。分析表格中培养基配方，实验室中培养枯草芽孢杆菌的培养基中还需要加入氮源，氮元素在枯草芽孢杆菌体内可以用于合成蛋白质和核酸等生物大分子。 （2）为了验证两种不同类型的枯草芽孢杆菌对水体中的大肠杆菌的抑制作用，需要选择两种不同类型的枯草芽孢杆菌和大肠杆菌。准备固体培养基，用于涂布大肠杆菌和接种枯草芽孢杆菌。准备无菌滤纸片用于浸泡枯草芽孢杆菌的滤液。图中①②区域未接种任何菌液，②覆盖了无菌水，培养一段时间后①和②内未发现微生物生长，这样做可以确保培养基没有被杂菌污染，无菌水的覆盖保证了实验的单一变量，和取适量的大肠杆菌菌液涂在③④区域内，再取统一10mm直径的圆形无菌滤纸片分别在无菌水、等浓度的A枯草芽孢杆菌的菌液和B枯草芽孢杆菌的菌液中浸泡，后用无菌镊子按顺序覆盖在大肠杆菌培养基上②③④区域，通过测量抑菌圈的大小来判断枯草芽孢杆菌对大肠杆菌的抑制效果。抑菌圈越大，说明抑制效果越好。图中④区域的抑菌圈最大，因此④区域接种枯草芽孢杆菌的抑菌效果较好。 （3）将④中的枯草芽孢杆菌进行扩大培养后用稀释涂布平板法进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 （4）枯草芽孢杆菌以广泛存在于土壤、水体等环境中，利用其中的有机碳源，因此在生态系统中的成分是分解者。通过发酵工程大规模发酵产生的枯草芽孢杆菌作为微生物农药，减少了传统农药的使用，有利于环境保护。 28．(24-25高二下·河北沧州泊头文宇中学·期末)苯并芘（C20H12）是一类具有致癌作用的有机化合物。研究表明，生活环境中的苯并芘含量每增加1%，肺癌的死亡率上升5%。为有效处理被石油污染的土壤或焦化废水等工业污水中的苯并芘，科研人员从焦化废水中分离筛选出苯并芘降解菌，过程如下图所示。回答下列问题： (1)推测富集培养的作用是_________，方法之一是在适于苯并芘降解菌而不适于其他微生物生长的条件下培养，因此富集培养所用培养基与甲、乙所用分离筛选培养基在组成成分上的相同之处是_________（答出2点）。 (2)图中甲培养基的接种方法是_________。理论上，甲培养基上生长的菌落为纯培养物，原因是_________，且每个菌落中的细菌均能降解苯并芘，但仍需进一步鉴定。进一步鉴定时，乙培养基的接种方法为_________，其操作顺序是_________（用数字和箭头表示）。 (3)富集培养后，研究人员将菌液稀释106倍后，接种至甲培养基上，则1、2、3号试管中需分别加入_________mL无菌水。经统计，该稀释倍数下的三个平板上菌落数分别为72、78、75，则富集培养后菌液的密度为_________个/mL。 【答案】(1) 提高培养液中苯并芘降解菌的数量（和比例） 都含有碳源、氮源、水和无机盐，都以苯并芘为唯一碳源 (2) 稀释涂布平板法 菌落一般是由单个微生物繁殖形成的微生物群体 平板划线法 1→3→2→4 (3) 99 7.5×108 【分析】1、人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质称为培养基。其中，配制成的液体状态的基质称为液体培养基，配制成的固体状态的基质称为固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基，它是实验室中最常用的培养基；根据物理性质划分，富集培养基属于液体培养基。 2、菌种纯化的方法包括平板划线法和稀释涂布平板法，二者都可以用于筛选单菌落，但是前者可以用于计数，后者不行。前者不需进行梯度稀释操作，较为简单，因此常常采用该方法筛选单菌落，具体做法是：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 【详解】（1）根据题意，富集培养的方法之一是在适于苯并芘降解菌而不适于其他微生物生长的条件下培养，故通过富集培养可提高培养液中苯并芘降解菌的数量（和比例）。甲、乙培养基为固体培养基，用于苯并芘降解菌的分离筛选，因此富集培养所用培养基与甲、乙所用分离筛选培养基在组成成分上的相同之处是都含有碳源、氮源、水和无机盐，且都以苯并芘为唯一碳源。 （2）据图可知，甲培养基的接种方式是稀释涂布平板法。纯培养物是由单一个体繁殖所获得的微生物群体，而菌落一般就是由单个微生物繁殖形成的微生物群体，属于纯培养物。据图可知，乙培养基的接种方法为平板划线法，由各区域菌落的形状可知，操作顺序是1→3→2→4。 （3）根据题意，研究人员将菌液稀释了106倍，故1、2、3号试管中应分别稀释100倍，每支试管需加入无菌水99mL。该稀释倍数下三个平板上的平均菌落数为75，则富集培养后菌液的密度为75×106×10=7.5×108个/mL。 29．(24-25高二下·福建漳州第一中学·期末)杨梅鲜果是酿酒的良好材料。科研人员研究某杨梅产区的酵母资源，筛选出转化率高、耐酒精的优质酿酒酵母。请回答： (1)为了筛选优质的杨梅酿酒酵母，从杨梅鲜果中分离菌种的原因是_______。 (2)图1中，过程②③④⑤中所用培养基为适于酵母菌生长的YPD培养基，其成分包括1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖等，其中蛋白胨提供的营养有_______；与过程②所用培养基相比，过程③所用培养基中还添加了_______（成分）。取多个稀释倍数的酵母菌培养液0.1mL分别接种到多个平板上，目的是_______。 (3)根据④，接种时第一划线区域为_______（填字母）。如果划线区域c上几乎无菌落生长，原因可能是__________（答出两点）。 (4)分离获得的酵母菌还需经过多级筛选才能获取到理想菌株。科研人员利用DY5、RY1、JW14三种菌株，发酵制作杨梅酒，并进行酒精耐受性检测，结果如下表和图2： 菌株名称 酒精度% 总糖/g·L-1 总酸/g·L-1 DY5 7.0 34.23 12.045 RY1 9.0 15.01 12.675 JW14 6.5 33.64 12.099 杨梅汁 - 78.80 10.737 三种菌株中，最适于杨梅果酒发酵的是_______，理由是_______。 【答案】(1)野生杨梅酿酒酵母在杨梅表面较多（且较活跃） (2) 碳源、氮源 琼脂 为了获得菌落数量合适的平板，并且排除偶然因素造成的误差 (3) b 接种环灼烧后未冷却就划线；未从第一区域末端开始划线 (4) RY1 酒精转化率高、酒精耐受力强 【分析】1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 2、微生物生长繁殖的基本成分含有水、无机盐、碳源和氮源。 【详解】（1）杨梅鲜果表面天然附着着多种微生物，其中就包括适应杨梅生长环境的酿酒酵母。这些酵母长期与杨梅共存，对杨梅果实的营养成分具有较好的适应性，更容易在以杨梅为原料的酿酒过程中表现出较高的活性和转化效率。因此，从杨梅鲜果中分离菌种，能够更大概率获得适合杨梅酿酒的优质酵母菌株。 （2）蛋白胨是一种复杂的有机化合物，它含有多种氨基酸、肽类以及含氮化合物等。在微生物培养中，这些成分可以为酵母菌提供生长所必需的氮源，同时其中含有的一些碳链结构也能作为碳源被酵母菌利用。过程②是振荡培养，使用的是液体培养基，目的是扩大培养酵母菌；过程③是稀释涂布平板法接种，需要使用固体培养基来形成单菌落。固体培养基与液体培养基的主要区别在于添加了凝固剂，而微生物培养中常用的凝固剂是琼脂。不同稀释倍数的酵母菌培养液中菌体密度不同。取多个稀释倍数的培养液接种到多个平板上，通过观察不同平板上的菌落生长情况，可以从中选择出菌落数量在 30-300 之间（这个范围内的菌落数统计结果较为准确）的平板进行计数。同时，多个平板和多个稀释倍数的设置能够排除个别平板因操作等偶然因素造成的误差，保证实验结果的可靠性。 （3）平板划线法的操作是从待分离的菌液开始，第一次划线的区域是最初接种菌液的区域，随着划线次数的增加，菌落密度逐渐降低。在典型的平板划线结果中，第一划线区域菌落密度最大，通常标记为 b 区域 。 划线区域 c 上几乎无菌落生长的原因 接种环在每次划线前需要灼烧灭菌，如果灼烧后未冷却就进行划线，高温会杀死菌种，导致后续区域无法生长菌落。 平板划线要求每次划线都从上次划线的末端开始，这样才能逐步稀释菌种。如果未从第一区域末端开始划线，菌种没有得到有效稀释，可能导致后面的区域（如 c 区域）无法获得足够的菌种生长。 （4）判断最适于杨梅果酒发酵的菌株，需要综合考虑酒精度、总糖含量以及酒精耐受性等指标。RY1 菌株发酵得到的酒精度为 9.0%，高于 DY5 的 7.0% 和 JW14 的 6.5%，说明 RY1 将杨梅汁中的糖分转化为酒精的能力更强，酒精转化率高。 RY1 发酵后总糖为 15.01g・L-1，远低于 DY5 和 JW14 发酵后的总糖含量，进一步说明 RY1 对糖分的利用更充分。结合图 2 可知，在较高酒精含量环境下，RY1 的数量相对值较高，说明其酒精耐受力强。 30．(24-25高二下·广东江门·期末)牛奶富含多种氨基酸和矿物质，多饮用牛奶有利于增强体质，但牛奶消毒不严格也容易携带细菌。根据国家标准规定，每毫升合格的牛奶细菌总数不能超过50000个。某兴趣小组利用恒温水浴锅对生牛奶进行消毒，然后检测消毒的效果。回答下列问题：    (1)步骤①对生牛奶消毒的方法被称为______，牛肉膏蛋白胨培养基一般采用的灭菌方法是______。从效果方面进行分析，生牛奶消毒的方法的优点是______。 (2)步骤②是将牛奶进行梯度稀释，这样做的目的是______。步骤③的接种方法是______，该方法可以用来统计样品中活菌的数目，其原理是______。 (3)兴趣小组的同学通过步骤①-③接种了3个平板，将这3个平板和1个未接种的平板放入恒温培养箱，在适宜的温度条件下培养48h，然后统计出4个平板上的菌落数分别是57、53、55和9。根据这样的实验结果，能否判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标？为什么？______ 【答案】(1) 巴氏消毒 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒有利于营养的保存而且容易做到，超高温消毒不仅仅将细菌、病毒杀死，就连有益的微生物也有可能杀死 (2) 使聚集在一起的微生物分散，便于能在培养基表面形成单个菌落 稀释涂布平板法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌 (3)不能；因为未接种的培养基上有菌落出现，说明培养基灭菌不彻底，则其它培养基上的菌落数不能表示牛奶中细菌数量 【分析】消毒 指使用较为温和的物理或化学方法，杀死物体表面或环境中所有病原微生物（不包括芽孢和孢子），达到防止传染病传播的目的。灭菌指使用强烈的理化因素，彻底杀灭物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子（微生物的休眠体，抵抗力极强）。接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 【详解】（1）由题目中利用恒温水浴锅对生牛奶消毒及常见消毒方法可知，步骤①对生牛奶消毒的方法是巴氏消毒。 在微生物培养中，牛肉膏蛋白胨培养基一般采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。 巴氏消毒法是在较低温度下进行消毒，这样有利于营养的保存，并且相对容易操作。而超高温消毒虽然能杀灭细菌、病毒，但可能会杀死有益微生物。 （2）步骤②将牛奶进行梯度稀释，目的是使聚集在一起的微生物分散开。因为如果微生物聚集，在接种后就难以在培养基表面形成单个菌落，不利于后续的计数等操作。步骤③的接种方法是稀释涂布平板法。 该方法可以统计样品中活菌数目的原理是，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 （3） 不能判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标。因为未接种的培养基上出现了菌落，这说明培养基灭菌不彻底。在培养基灭菌不彻底的情况下，其他接种了牛奶的培养基上的菌落数就不能准确代表牛奶中细菌的数量。 31．(24-25高二下·山东德州·期末)木质素是由C、H、O构成的复杂聚合物，是植物细胞壁的结构组分之一，自然降解较为困难。白蚁作为食木昆虫，其体内含有大量分解木质素的微生物，研究者为从白蚁体内分离出能够高效降解木质素的细菌，进行了相关实验，流程如下图所示。 (1)培养基A和B都是以木质素为______，它们在成分上的差异是______。使用培养基A培养的目的是______，使用培养基B培养的目的是______。 (2)分离得到的细菌是生活在白蚁肠道中的微生物，培养时应提供______（填“有氧”或“无氧”）条件，振荡的目的是______。 (3)苯胺蓝与木质素结合后会形成蓝色复合物，菌株分泌的木质素降解酶可分解该复合物，形成透明圈。据图分析，菌落______分解木质素的能力更强，判断依据是______。 (4)木质素、纤维素和半纤维素共同构成木质纤维素，木质纤维素是地球上最丰富的有机物，包括了农业废弃物、林业废弃物和工业加工剩余物等。以木质纤维素为固态基质培养微生物生产发酵产物的优点是______（答出2点）。 【答案】(1) 唯一碳源 是否加入琼脂 筛选出能利用木质素的菌株 将分解木质素的菌株进行扩大培养 (2) 无氧 使菌体与木质素充分接触，以增大增殖速率 (3) E 形成的透明圈大小可反映菌株分解木质素的能力，透明圈越大说明降解能力越强，其中A和E透明圈大小相当，但A菌落明显大于E菌落 (4)原料来源广、价格低廉，能有效利用农业或林业废弃物； 减少环境污染，并可节约能源和生产成本等 【分析】由图可知，培养基A是固体培养基，而B是液体培养基，二者在成分上的差异是是否加入琼脂。形成的透明圈大小可反映菌株分解木质素的能力，透明圈越大说明降解能力越强，其中A和E透明圈大小相当，但A菌落明显大于E菌落，说明E菌落分解木质素的能力更强。 【详解】（1） 木质素是由C、H、O构成的复杂聚合物，研究者为从白蚁体内分离出能够高效降解木质素的细菌，则培养基A和B都以木质素为唯一碳源；由图可知，培养基A是固体培养基，而B是液体培养基，二者在成分上的差异是是否加入琼脂。使用培养基A的目的是筛选出能利用木质素的菌株，使用培养基B的目的是挑选出能够分解木质素的菌株进行扩大培养。 （2）肠道通常是无氧状态，所以培养白蚁肠道分离得到的微生物，应提供无氧条件；振荡的目的是使菌体与木质素充分接触，以增大增殖速率。 （3）由图可知，形成的透明圈大小可反映菌株分解木质素的能力，透明圈越大说明降解能力越强，其中A和E透明圈大小相当，但A菌落明显大于E菌落，说明E菌落分解木质素的能力更强。 （4）以木质纤维素为固态基质进行发酵的优点有：原料来源广、价格低廉，能有效利用农业或林业废弃物； 减少环境污染，并可节约能源和生产成本等。 32．(24-25高二下·贵州六盘水·期末)安莎霉素（一种抗生素）主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染，其是深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的次生代谢产物。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。 回答下列问题： (1)过程A中用紫外线对放线菌进行诱变处理的原理是______。过程B使用涂布器进行操作时，应先将涂布器______后，再进行涂布。 (2)与④相比，③使用的培养基成分的主要区别是______，这些培养基均需______灭菌。 (3)科研人员发现，仅有部分赖氨酸缺陷型放线菌具备产安莎霉素的能力。为获得产安莎霉素的赖氨酸缺陷型放线菌，兴趣小组从④中挑取某个______（填字母）菌落进行纯化培养并扩大培养，获取其细胞代谢产物。将培养基的皿底分为4个区域，分别标记为a、b、c、d。先将______接种到培养基上，然后在a、b、c区域分别放置含______的圆形滤纸片，d区域放置不含该成分的圆形滤纸片，在适宜条件下培养一段时间。若观察到______的现象，说明该赖氨酸缺陷型放线菌能产安莎霉素。 【答案】(1) 基因突变 酒精浸泡、灼烧冷却 (2) 缺乏赖氨酸的选择培养基 高压蒸汽灭菌 (3) D 结核分枝杆菌 D菌落的细胞代谢产物 a、b、c 区域滤纸片周围出现抑菌圈，d 区域滤纸片周围不出现抑菌圈 【分析】影印培养法是指确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法。主要操作方法是：用灭菌的丝绒覆盖在一块与培养皿同样大小（或略小）的木制圆柱体上，轻轻地在母种培养皿的菌苔上印一下，把细菌菌落全部转移到丝绒面上，然后将这一丝绒面再印在另外的选择性培养基平板上，获得与原始平板完全相同的接种平板。待培养后，比对各培养皿在相同位置出现相同的菌落，从而筛选出适当的菌株。 【详解】（1）紫外线诱变原理是诱导基因突变，处理后有极少数放线菌可能成为赖氨酸缺陷型放线菌；使用涂布器时，需用酒精浸泡，灼烧冷却后再涂布，避免杂菌污染与高温杀死目标微生物。 （2）④中所有微生物都能长出菌落，所以④是完全培养基，③中没有D菌落，说明③具有选择作用，赖氨酸缺陷型放线菌不能在其中生长，所以③是缺少赖氨酸的选择培养基；这些培养基均需进行高压蒸汽灭菌。 （3）D菌落在③中不能生存，在④中可以生存，说明D菌落只能生活在完全培养基中，不能生活在缺赖氨酸的完全培养基中，即D菌落是赖氨酸缺陷型放线菌菌落，所以挑取某个D菌落进行纯化培养并扩大培养，获取其细胞代谢产物，并把细胞代谢产物滴加在圆形干燥的滤纸片上，将培养基的皿底分为4个区域，分别标记为a、b、c、d。先将结核分枝杆菌接种到培养基上，然后在a、b、c区域分别放含有D菌落的细胞代谢产物的滤纸片，d区域作为对照，放置不含该成分的圆形滤纸片，在适宜条件下培养一段时间，因为赖氨酸缺陷型放线菌（D菌落）能产生次生代谢产物安莎霉素，用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染，如果在a、b、c区域能观察到抑菌圈，说明该赖氨酸缺陷型放线菌能产安莎霉素。 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 重难点 02 微生物培养技术的应用 一、单选题 1．(24-25高二下·安徽部分学校·期末)在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，采用了图1所示的血细胞计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm，计数室为16×25型）进行计数，连续培养一段时间后绘制培养液中酵母菌种群的数量变化如图2所示。图2中，在a点对应的时间将培养液稀释了100倍，经过一系列操作，检测四角上中方格的酵母菌的平均数量为32个。下列说法正确的是（　　） A．配制无菌马铃薯液体培养基时，先经高压蒸汽灭菌，再调节溶液pH后才能使用 B．对酵母菌计数时，先用吸管吸取培养液，当培养液渗入计数室后，再盖上盖玻片 C．此培养液中，酵母菌数量达到环境容纳量时的种群密度约为1.024×109个/mL/mL D．若将100mL培养液加无菌水至200mL，则酵母菌种群K值将增大至原来的2倍 2．(24-25高二下·金太阳福建福州八县（，区）协作校·期末)养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物能使氨氮化合物转化为尿素进而产生 NH₃，影响畜禽健康。为筛选能利用氨氮化合物且减少 NH₃产生的微生物，实验小组进行了分离目的菌株的实验，流程如图所示。下列实验操作错误的是（　　） A．过程①将样本进行梯度稀释，接种到培养基后进行培养 B．过程②筛选的菌落能在a培养基上生长，不能在 b 培养基上生长 C．过程③可添加脲酶并检测其活性，结果菌株甲可以产生NH3 D．向粪便中添加菌株甲比添加菌株乙更有利于减少NH3的产生 3．(24-25高二下·河南天一大联考·期末)幽门螺杆菌是导致胃炎、胃溃疡的常见病原体。临床上常用尿素呼气试验进行无创诊断，其原理是让受试者口服含13C标记的尿素胶囊，随后检测呼出气体中是否含13CO2（反应式见下图）。下列有关说法正确的是（　　） A．13CO2是幽门螺杆菌通过细胞呼吸产生的 B．脲酶可为13C尿素分解提供活化能，提高反应速率 C．毕希纳利用丙酮从刀豆种子中分离出脲酶并证明其是蛋白质 D．若受试者胃内存在其他可分解尿素的细菌，则检测结果不准确 4．(24-25高二下·陕西西安新城区·期末)PAHs是一种不溶于水的碳氢化合物，具有致癌和致畸作用。科研人员欲从被PAHs污染的土壤中分离出降解PAHs的菌株并计数，过程如图。已知培养基中PAHs被降解后会形成透明圈。下列说法正确的是（　　）    A．培养皿中的培养基应以PAHs为唯一碳源 B．可用细菌计数板对试管3中PAHs分解菌进行计数 C．挑取单菌落时应选择透明圈与菌落直径比值小的菌落 D．1g样品土壤中约含7×105个PAHs分解菌 5．(24-25高二下·福建漳州第一中学·期末)研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中（＋代表抗生素浓度，－代表不含抗生素）。在37℃环境下培养24小时后，观察结核杆菌菌落生长结果如图。下列叙述错误的是（　　） A．该实验接种结核杆菌使用稀释涂布平板法 B．两种抗生素都对结核杆菌的生长有较好的抑制作用 C．与单独用抗生素A相比，联合用抗生素B对结核杆菌抑制作用无明显增加 D．长期使用抗生素A可能会增加结核杆菌的抗药性基因频率 6．(24-25高二下·甘肃临夏州·期末)牛是一种反刍动物。在牛的瘤胃中存在大量微生物，它们可以释放纤维素酶，对纤维素进行分解。某科研团队准备从牛的新鲜粪便中筛选高效的纤维素分解菌。下列叙述错误的是（　　） A．配制培养基时，培养基中含有的唯一碳源是纤维素 B．收集到的牛粪样品和需要使用的接种工具都需消毒 C．在含有刚果红的培养基上，纤维素分解菌菌落周围会出现透明圈 D．分离高效的纤维素分解菌可以使用稀释涂布平板法或平板划线法 7．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)PE（聚乙烯）是世界上产量最大的塑料，通过磨损和风化等形成尺寸微小的微塑料，微塑料不可降解且难回收，积累于生物及环境中。本实验欲从泰山南侧土壤中分离筛选微塑料降解菌。下列叙述错误的是（    ） A．本实验所用的土样应从塑料垃圾较多的土壤中获取 B．①②③中所用培养基是以PE微塑料为唯一碳源的选择培养基 C．用含牛肉膏、蛋白胨的完全培养基接种等量菌种作对照，可证明选择培养基有选择作用 D．图示方法可分离得到单菌落，进行计数后可估算出土样中活菌数 8．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)青霉素是人类发现的第一种抗生素，其工业化生产流程如图所示。下列叙述错误的是（    ）    A．虽然青霉素具有杀菌作用，但仍然需对发酵罐进行灭菌 B．过程①、②的目的是快速增加菌种的数量，③是接种发酵，都使用了液体培养基 C．过程③中需从下方的充气口通入无菌空气以提高溶解氧，过程④一般通过湿热灭菌 D．过程⑤常用的方法是过滤和沉淀，可从分离出的菌种中提取到单细胞蛋白，但菌种不可再使用 9．(24-25高二下·福建泉州鲤城区福建泉州第七中学·期末)关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，下列叙述正确的是（    ） A．取样时用的铁铲、纸袋在使用前进行消毒处理，对培养基进行干热灭菌，对培养皿要进行湿热灭菌 B．实验中的培养基以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的 C．涂布3个平板可避免对尿素分解菌进行计数时菌落数比活菌实际数目少 D．若取1克土样稀释105倍的0.1mL菌液进行涂布，获得菌落数目的平均值为168，则每克土样中尿素分解菌的数量为1.68×108 10．(24-25高二下·湖南雅礼中学·期末)双层平板法是对噬菌体进行计数的常用方法。具体做法是：在无菌培养皿中倒入琼脂含量为2%的培养基凝固成底层平板后，将琼脂含量为1%的培养基熔化并冷却至45~48℃，然后加入敏感指示菌和待测噬菌体稀释悬液的混合液，充分混匀后立即倒入底层平板上形成双层平板（见下图）。培养一段时间后，在双层培养基的上层会出现透亮无菌圆形空斑——噬菌斑，根据噬菌斑的数目可计算原液中噬菌体的数量。判断下列正确的是（　　） A．需先调节灭菌后培养基的pH，然后再进行倒平板 B．倒上层平板时需将培养基冷却到45~48℃的最主要原因是防止下层固体培养基被液态化 C．利用双层平板法统计出的噬菌体数量往往比实际值偏大 D．与底层平板相比，上层培养基中琼脂浓度较低的好处是形成的噬菌斑较大，有利于计数 11．(24-25高二下·重庆第一中学校·期末)酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图Ⅰ所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，对瓶中酒精浓度和活菌数量的检测结果如图Ⅱ。下列说法错误的是（    ） A．葡萄酒发酵过程中，缺氧酸性的环境及酵母菌产生的酒精等可抑制杂菌的繁殖 B．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109（个/L），此数值可能低于实际的活菌数 C．可用干热灭菌法对培养皿、培养基进行灭菌，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌 D．由图Ⅱ可知，丙组可能是锥形瓶密封不严所致，丁组的酵母菌产酒精能力比乙组的强 12．(24-25高二下·湖南娄底部分普通高中·期末)研究人员利用石油污染滩涂土壤筛选高效降解石油细菌，进行如下图所示的操作（① - ⑤表示不同的菌落）。下列叙述正确的是（　　） A．图中液体培养基和固体培养基成分的唯一不同是后者含有琼脂 B．甲过程采用的接种方法可用于菌体计数，但结果通常偏小 C．菌落①中菌体因不能分解石油而无降解圈产生，其生长不需要碳源 D．乙过程选择菌落③接种到石油培养基，可根据石油剩余量进行降解能力评估 13．(24-25高二下·吉林长春外五县·期末)如图所示为实验室中纯化微生物菌种的一种方法，下列有关叙述错误的是（　　） A．该方法为平板划线法 B．使用涂布器进行划线操作 C．需要对接种工具灼烧5次 D．可能在D区出现单一菌落 14．(24-25高二下·广东江门·期末)科研人员在平板上接种某种革兰氏阳性菌（G+），然后探究PPC（培养过P菌的培养液）对G+生长的影响，实验结果见下图。下列分析错误的是（    ） 注：Hot-PPC（100℃处理15min后再加入）、NaOH-PPC（加NaOH调节pH值至中性）、PBA能抑制G+生长。 A．PPC能抑制G+生长 B．PPC的热稳定性比较弱 C．P菌酸性物质能抑制G+生长 D．PPC和PBA的作用效果相近 15．(24-25高二下·山东德州·期末)消毒或灭菌是进行微生物培养、植物细胞工程和动物细胞工程的必要操作之一。下列说法错误的是（　　） A．利用稀释涂布平板法接种时，用引燃的酒精灼烧涂布器属于灭菌处理 B．对培养基进行灭菌时，可使用干热灭菌或高压蒸汽灭菌 C．进行植物组织培养时，用次氯酸钠浸泡外植体30分钟属于消毒处理 D．进行动物细胞培养时，所有培养用具都必须进行灭菌处理 16．(24-25高二下·福建泉州四校联盟·期末)利用石油降解菌降解石油可作为修复被石油污染的土壤或水源的一项重要措施，筛选石油降解菌的过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．图中的土壤样本可能被石油污染 B．④接种方法为平板划线法，接种过程需要使用接种环 C．⑤最好用固体培养基培养④中的石油降解菌，检测该菌对石油的降解能力 D．稀释涂布平板法不仅可以分离、纯化石油分解菌，还可以对目的菌进行计数 二、多选题 17．(24-25高二下·湖南怀化·期末)为筛选出淀粉分解菌，研究人员进行了相关实验，结果如下。相关叙述正确的是（　　） 菌种 菌落直径：C/mm 透明圈直径：H/mm 细菌Ⅰ 5.1 11.2 细菌Ⅱ 8.1 13.0 A．本实验中微生物培养基以淀粉作为唯一碳源 B．为形成透明圈，应使用刚果红进行染色处理 C．实验结果表明细菌Ⅰ分解淀粉能力较细菌Ⅱ要强 D．为进一步筛选分解淀粉的细菌，只能使用稀释涂布平板法 18．(24-25高二下·江西景德镇·期末)“五一”期间，景德镇市旅游业火爆，众多美食赢得了消费者的高度赞扬，油炸臭豆腐是众多风味小吃的一种，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵。下列说法，正确的是（　　） A．经煮沸灭菌的卤汁需冷却后才能浸入豆腐 B．制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基 C．利用乳酸菌制作酸奶时，为了防止杂菌污染，可在牛奶中加入少量抗生素 D．将果酒用于果醋发酵时，提高温度是“激活”醋酸菌的重要条件之一 19．(24-25高二下·江苏东台·期末)研究人员欲测定大熊猫肠道中纤维素分解菌的数量，实验操作过程如下图所示。下列有关叙述错误的有（　　） A．用接种环将稀释液接种到以纤维素为唯一碳源的培养基上培养 B．梯度稀释时若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为3ml C．在统计菌落数时，宜选择4号试管接种得到的培养物进行计数 D．根据实验结果计算出5g粪便中含纤维素分解菌的数目是1.4×108个 20．(24-25高二下·辽宁县域重点高中·期末)肺炎链球菌可使人患细菌性肺炎。现有一种新的抗生素，为了检验不同浓度的该抗生素对细菌性肺炎的疗效，研究者进行了抑菌实验。图中的PBS为磷酸盐缓冲液。下列说法正确的是（　　） A．不同浓度的抗生素应使用磷酸盐缓冲液配制 B．图中4个滤纸片应在细菌培养之前放在标注区域 C．通过对形成的菌落计数可对抗生素的药效进行衡量 D．由图可知，抗生素的浓度会影响抗生素对细菌的抑制效果 21．(24-25高二下·江苏徐州邳州·期末)有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。研究人员试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。先将含有一定浓度α菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。一段时间后，将1mL湖泊水样加入9mL无菌水中，摇匀后再依次等比稀释3次，取0.1mL稀释后的湖泊水样涂布于薄层上，稳定后获得56个菌落，其中15个菌落周围出现溶菌圈。下列相关叙述正确的有（    ） A．分离计数溶菌细菌的培养基应含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂 B．应使用灼烧灭菌冷却后的涂布器将湖泊水样均匀地涂布到薄层上 C．待接种的水样被充分吸收后，将平板倒置于恒温培养箱中培养 D．1mL的湖泊水样中约有1.5×105个具溶菌特性的细菌 22．(24-25高二下·河北部分名校·期末)为了提取环境中的独特菌种，某校生物研究小组以优质的高粱和小麦为原料，制作培养基，搜集、分离空气中的酿酒微生物。将上述培养基暴露在空气中培养一段时间后，取10g该培养基用无菌水制成100mL样品溶液。再将样品溶液稀释104倍后，各取样品溶液0.1mL，在5个培养基平板上接种。培养一段时间后，平板上长出的微生物菌落数分别为13、156、462、178和191。下列叙述正确的是（    ） A．纯化培养时，应将接种后的5个平板倒置放入适宜温度的培养箱内培养 B．为减少实验误差，一般选择菌落数30~300之间的平板进行计数 C．根据实验结果，每克培养基样品中的微生物数量是1.75×109个 D．与用血细胞计数板计数相比，该学习小组采用的计数方法测得的微生物数目偏高 23．(24-25高二下·辽宁重点高中联合体·期末)香蕉枯萎病是由土壤中的尖孢镰刀菌感染香蕉植株所导致，菌株S可抑制尖孢镰刀菌。某研究小组将菌株S施于香蕉种植园的土壤中，并从中筛选出与菌株S协同作用的菌株P。为验证菌株P与菌株S对尖孢镰刀菌的抑制具有协同作用，进行了以下操作。下列叙述正确的是（　　） 培养基 预先涂布菌株 点接菌液 实验组1 实验组2 实验组3 固体培养基 菌株X 菌株S 菌株P ？ A．菌株X是尖孢镰刀菌 B．实验组3“？”为菌株S+菌株P C．该实验的因变量为溶菌圈的大小 D．能够说明菌株P对菌株S的作用的组别为实验组2和3 24．(24-25高二下·江西抚州·)酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，研究人员进行如图1所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，得到如图2的结果，下列说法正确的是（    ） A．②涂布后应放在CO2培养箱中培养 B．葡萄酒发酵过程中，酵母菌产生的次生代谢产物酒精可抑制杂菌的繁殖 C．由图2可知产酒精能力最强的活菌是丁，其能耐受酒精度20％以上的发酵液 D．为了保证结果准确，应选择图1中稀释倍数为104的培养皿进行平板计数 三、解答题 25．(24-25高二下·四川广安加德中学·期末)柠檬酸是一种应用广泛的食品酸度调节剂。研究人员以红薯粉为原料经黑曲霉（需氧型真菌）发酵生产柠檬酸的简要流程如图所示。回答下列问题： (1)甲过程所用的培养基能为黑曲霉提供碳源、______、水和无机盐等营养物质。对培养基灭菌应该采用的方法是__________。据图甲分析，在该培养基上接种黑曲霉采用的方法是______，该方法可以获得纯培养物的原因是____________________。 (2)乙过程表示发酵工程的______环节。研究发现，振荡培养的黑曲霉比静置培养的黑曲霉生长繁殖速度______，原因是________________________________。 (3)丙过程是发酵的中心环节。该过程以一定的速度不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出旧的培养基，可大大提高生产效率，原因是________________________________________________（答出两点）。 26．(24-25高二下·甘肃定西临洮县·期末)纤维素是地球上含量较为丰富的可再生资源。人们欲从自然界中筛选出可分解纤维素的细菌，部分过程如图1～3所示，其中图3所示培养基中含有刚果红染料，其可与纤维素形成红色复合物，与纤维素的水解产物无此反应。回答下列问题： (1)图1、2所示培养基为________（填物理形态）培养基，图1、2中的接种方法均为________。 (2)若图3中的细菌均为能分解纤维素的细菌，则分解能力最强的菌落是________（填“Ⅰ”“Ⅱ”或“Ⅲ”），判断依据是________。 (3)图1、2所示的培养基均出现异常情况，其中图1所示培养基出现异常情况的原因是________。图2所示培养基出现异常情况的原因是培养过程中受到了污染，有同学认为污染的杂菌并非都能分解纤维素，他提出该观点的依据是________（答出1点）。 27．(24-25高二下·贵州遵义区县一中·期末)枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤、水体等环境中的益生菌，菌体产生的枯草菌素、短杆菌肽对水产养殖中的弧菌、大肠杆菌等有害微生物有很强的抑制作用，净化水质的同时能分解残饵、粪便、有机物等。 成分 H2O K2SO4 （CH2O） NaCl 含量 1000mL 0.2g 30g 3g (1)分析表格中培养基配方，实验室中培养枯草芽孢杆菌的培养基中还需要加入________，其在枯草芽孢杆菌体内可以用于合成________等生物大分子（答出2种）。 (2)为了验证2种不同类型的枯草芽孢杆菌对水体中的大肠杆菌的抑制作用，进行如下操作流程：其中①②区域未接种任何菌液，取适量的大肠杆菌菌液涂在③④区域内，再取统一10mm直径的圆形无菌滤纸片分别在无菌水、等浓度的A枯草芽孢杆菌的菌液和B枯草芽孢杆菌的菌液中浸泡，后用无菌镊子按顺序覆盖在大肠杆菌培养基上②③④区域，培养箱倒置培养一段时间后形成下图结果，其中①和②内未发现微生物生长，进行①和②区域操作目的是_______（答2点）。通过测量________的直径判断________区域接种枯草芽孢杆菌的抑菌效果较好。 注：“●”代表滤纸片。 (3)将④中的枯草芽孢杆菌进行扩大培养后用稀释涂布平板法进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目要少，原因是______。 (4)枯草芽孢杆菌在生态系统中的成分是________，通过发酵工程大规模发酵产生的枯草芽孢杆菌作为微生物农药与传统农药相比，其优点是_______。 28．(24-25高二下·河北沧州泊头文宇中学·期末)苯并芘（C20H12）是一类具有致癌作用的有机化合物。研究表明，生活环境中的苯并芘含量每增加1%，肺癌的死亡率上升5%。为有效处理被石油污染的土壤或焦化废水等工业污水中的苯并芘，科研人员从焦化废水中分离筛选出苯并芘降解菌，过程如下图所示。回答下列问题： (1)推测富集培养的作用是_________，方法之一是在适于苯并芘降解菌而不适于其他微生物生长的条件下培养，因此富集培养所用培养基与甲、乙所用分离筛选培养基在组成成分上的相同之处是_________（答出2点）。 (2)图中甲培养基的接种方法是_________。理论上，甲培养基上生长的菌落为纯培养物，原因是_________，且每个菌落中的细菌均能降解苯并芘，但仍需进一步鉴定。进一步鉴定时，乙培养基的接种方法为_________，其操作顺序是_________（用数字和箭头表示）。 (3)富集培养后，研究人员将菌液稀释106倍后，接种至甲培养基上，则1、2、3号试管中需分别加入_________mL无菌水。经统计，该稀释倍数下的三个平板上菌落数分别为72、78、75，则富集培养后菌液的密度为_________个/mL。 29．(24-25高二下·福建漳州第一中学·期末)杨梅鲜果是酿酒的良好材料。科研人员研究某杨梅产区的酵母资源，筛选出转化率高、耐酒精的优质酿酒酵母。请回答： (1)为了筛选优质的杨梅酿酒酵母，从杨梅鲜果中分离菌种的原因是_______。 (2)图1中，过程②③④⑤中所用培养基为适于酵母菌生长的YPD培养基，其成分包括1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖等，其中蛋白胨提供的营养有_______；与过程②所用培养基相比，过程③所用培养基中还添加了_______（成分）。取多个稀释倍数的酵母菌培养液0.1mL分别接种到多个平板上，目的是_______。 (3)根据④，接种时第一划线区域为_______（填字母）。如果划线区域c上几乎无菌落生长，原因可能是__________（答出两点）。 (4)分离获得的酵母菌还需经过多级筛选才能获取到理想菌株。科研人员利用DY5、RY1、JW14三种菌株，发酵制作杨梅酒，并进行酒精耐受性检测，结果如下表和图2： 菌株名称 酒精度% 总糖/g·L-1 总酸/g·L-1 DY5 7.0 34.23 12.045 RY1 9.0 15.01 12.675 JW14 6.5 33.64 12.099 杨梅汁 - 78.80 10.737 三种菌株中，最适于杨梅果酒发酵的是_______，理由是_______。 30．(24-25高二下·广东江门·期末)牛奶富含多种氨基酸和矿物质，多饮用牛奶有利于增强体质，但牛奶消毒不严格也容易携带细菌。根据国家标准规定，每毫升合格的牛奶细菌总数不能超过50000个。某兴趣小组利用恒温水浴锅对生牛奶进行消毒，然后检测消毒的效果。回答下列问题：    (1)步骤①对生牛奶消毒的方法被称为______，牛肉膏蛋白胨培养基一般采用的灭菌方法是______。从效果方面进行分析，生牛奶消毒的方法的优点是______。 (2)步骤②是将牛奶进行梯度稀释，这样做的目的是______。步骤③的接种方法是______，该方法可以用来统计样品中活菌的数目，其原理是______。 (3)兴趣小组的同学通过步骤①-③接种了3个平板，将这3个平板和1个未接种的平板放入恒温培养箱，在适宜的温度条件下培养48h，然后统计出4个平板上的菌落数分别是57、53、55和9。根据这样的实验结果，能否判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标？为什么？______ 31．(24-25高二下·山东德州·期末)木质素是由C、H、O构成的复杂聚合物，是植物细胞壁的结构组分之一，自然降解较为困难。白蚁作为食木昆虫，其体内含有大量分解木质素的微生物，研究者为从白蚁体内分离出能够高效降解木质素的细菌，进行了相关实验，流程如下图所示。 (1)培养基A和B都是以木质素为______，它们在成分上的差异是______。使用培养基A培养的目的是______，使用培养基B培养的目的是______。 (2)分离得到的细菌是生活在白蚁肠道中的微生物，培养时应提供______（填“有氧”或“无氧”）条件，振荡的目的是______。 (3)苯胺蓝与木质素结合后会形成蓝色复合物，菌株分泌的木质素降解酶可分解该复合物，形成透明圈。据图分析，菌落______分解木质素的能力更强，判断依据是______。 (4)木质素、纤维素和半纤维素共同构成木质纤维素，木质纤维素是地球上最丰富的有机物，包括了农业废弃物、林业废弃物和工业加工剩余物等。以木质纤维素为固态基质培养微生物生产发酵产物的优点是______（答出2点）。 32．(24-25高二下·贵州六盘水·期末)安莎霉素（一种抗生素）主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染，其是深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的次生代谢产物。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。 回答下列问题： (1)过程A中用紫外线对放线菌进行诱变处理的原理是______。过程B使用涂布器进行操作时，应先将涂布器______后，再进行涂布。 (2)与④相比，③使用的培养基成分的主要区别是______，这些培养基均需______灭菌。 (3)科研人员发现，仅有部分赖氨酸缺陷型放线菌具备产安莎霉素的能力。为获得产安莎霉素的赖氨酸缺陷型放线菌，兴趣小组从④中挑取某个______（填字母）菌落进行纯化培养并扩大培养，获取其细胞代谢产物。将培养基的皿底分为4个区域，分别标记为a、b、c、d。先将______接种到培养基上，然后在a、b、c区域分别放置含______的圆形滤纸片，d区域放置不含该成分的圆形滤纸片，在适宜条件下培养一段时间。若观察到______的现象，说明该赖氨酸缺陷型放线菌能产安莎霉素。 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 重难点 02 微生物培养技术的应用 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 C D D A B B D D D D 题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 答案 C B B B B B AC BD ABD ABD 题号 21 22 23 24 答案 ABC AB ABC BD 25．(1) 氮源 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌） 平板划线法 连续划线可逐步稀释菌种，得到分散的单个细胞 (2) 扩大培养 快 振荡培养能提高培养液中氧气的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率 (3)为菌种提供营养物质；排出代谢废弃物；调节相关发酵条件 26．(1) 固体 稀释涂布平板法 (2) Ⅱ 分解纤维素能力越强的菌株，周围的透明圈直径与菌落直径的比值越大，图3中Ⅱ的透明圈直径与菌落直径的比值最大，说明其分解纤维素的能力最强 (3) 接种时涂布不均匀所致 能分解纤维素的菌落周围会出现透明圈，若杂菌周围无透明圈，则说明该杂菌不能分解纤维素 27．(1) 氮源 蛋白质、核酸 (2) 确保培养基、无菌水没有被杂菌污染 抑菌圈 ④ (3)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (4) 分解者 减少环境污染 28．(1) 提高培养液中苯并芘降解菌的数量（和比例） 都含有碳源、氮源、水和无机盐，都以苯并芘为唯一碳源 (2) 稀释涂布平板法 菌落一般是由单个微生物繁殖形成的微生物群体 平板划线法 1→3→2→4 (3) 99 7.5×108 29．(1)野生杨梅酿酒酵母在杨梅表面较多（且较活跃） (2) 碳源、氮源 琼脂 为了获得菌落数量合适的平板，并且排除偶然因素造成的误差 (3) b 接种环灼烧后未冷却就划线；未从第一区域末端开始划线 (4) RY1 酒精转化率高、酒精耐受力强 30．(1) 巴氏消毒 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒有利于营养的保存而且容易做到，超高温消毒不仅仅将细菌、病毒杀死，就连有益的微生物也有可能杀死 (2) 使聚集在一起的微生物分散，便于能在培养基表面形成单个菌落 稀释涂布平板法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌 (3)不能；因为未接种的培养基上有菌落出现，说明培养基灭菌不彻底，则其它培养基上的菌落数不能表示牛奶中细菌数量 31．(1) 唯一碳源 是否加入琼脂 筛选出能利用木质素的菌株 将分解木质素的菌株进行扩大培养 (2) 无氧 使菌体与木质素充分接触，以增大增殖速率 (3) E 形成的透明圈大小可反映菌株分解木质素的能力，透明圈越大说明降解能力越强，其中A和E透明圈大小相当，但A菌落明显大于E菌落 (4)原料来源广、价格低廉，能有效利用农业或林业废弃物； 减少环境污染，并可节约能源和生产成本等 32．(1) 基因突变 酒精浸泡、灼烧冷却 (2) 缺乏赖氨酸的选择培养基 高压蒸汽灭菌 (3) D 结核分枝杆菌 D菌落的细胞代谢产物 a、b、c 区域滤纸片周围出现抑菌圈，d 区域滤纸片周围不出现抑菌圈 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $