精品解析：四川省内江市第一中学2025-2026学年高二下学期期中考试生物试题

内江一中高2027届高二下学期半期考试（生物试题） 一、选择题（本题包括20小题，每小题2分，共40分。每小题只有一个选项符合题意） 1. 下列关于传统发酵技术及应用的相关叙述正确的是（ ） A. 传统发酵以单一菌种的固体发酵及半固体发酵为主 B. 果酒、果醋发酵过程中PH均有先升高后明显下降的现象 C. 多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是曲霉 D. 发酵期间，当泡菜中乳酸的质量分数为0.4%～0.8%时，泡菜的口味、品质最佳 2. 下列有关发酵技术在食品加工中应用的叙述，不正确的是（　　） A. 为了避免杂菌污染，乳酸菌发酵成酸奶时在牛奶中添加一定量的抗生素 B. 为了提高果酒品质，挑选新鲜的葡萄榨汁前应先用清水冲洗1至2次，再去除枝梗 C. 为了防止果酒变酸，果酒发酵排气时应避免空气进入及发酵引起的升温 D. 泡菜坛边加水的目的是隔绝空气，创造无氧环境有利于发酵 3. 某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下，下列说法不正确的是（　　） A. 图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，能生长的微生物一定能合成脲酶 B. 若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为2.7，5号试管共稀释了106倍 C. 图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的 D. 若仅以4号试管接种培养基计数，5 g该土壤中含分解尿素菌的估算数目是7×108个 4. 野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ） A. 图中①②④为完全培养基，③为基本培养基 B. A操作的目的是提高突变率，增加突变株的数量 C. B操作是用涂布器将菌液均匀地涂布在②表面 D. 经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取E进行纯化培养 5. 科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株Q，步骤如下图所示，下列相关的叙述中，错误的是（ ） A. 步骤①—③中，培养液中需加入多环芳烃菲作为唯一碳源 B. 步骤①—③中，将锥形瓶放在摇床上充分振荡，使菌株与培养液充分接触 C. 步骤④是利用平板划线法纯化菌株Q，图中所示接种环最少灼烧5次 D. 步骤④中每一区域可重复画几次，但1区和5区不能出现交叉 6. 发酵广泛应用于农业、食品工业、医药工业等工业生产。下列叙述正确的是（　　） A. 用单细胞蛋白制成的微生物饲料，可通过发酵工程从微生物细胞中提取 B. 菌种的选育是发酵工程的中心环节，优良菌种可从自然界筛选出来 C. 发酵产品包括微生物菌体本身或代谢产物，可通过过滤、离心、蒸馏等方法纯化 D. 筛选出高产柠檬酸的黑曲霉菌种后可直接接种到发酵罐中进行发酵生产 7. 组织培养可快速繁殖植物，得到的试管苗常先移至草炭土或蛭石中炼苗，苗健壮后可移栽定植。关于菊花的组织培养及幼苗的移栽，下列说法错误的是（ ） A. MS培养基的碳源一般用蔗糖而不用葡萄糖，以减少微生物污染 B. 用酒精对外植体进行消毒持续的时间不能太长，消毒后应立即用蒸馏水清洗2～3次 C. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，避免倒插 D. 对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基 8. 如图是“番茄—马铃薯”杂种植株的培育过程，其中①～⑤表示过程，字母表示细胞、组织或植株。下列相关叙述正确的是（ ） A. 过程①表示在低渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体 B. c是正在融合的原生质体，诱导融合的方法可以是低Ca+—低pH融合法 C. 可以根据是否发生质壁分离现象鉴别杂种细胞的细胞壁是否再生 D. 植物有性杂交和体细胞杂交都能克服远缘杂交不亲和的障碍 9. Vero细胞是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的，可无限增殖且能悬浮培养。因不能合成抗病毒蛋白干扰素，因而广泛应用在病毒性疫苗生产上，下列叙述错误的是（ ） A. 培养Vero细胞时需要提供5%二氧化碳和95%空气 B. 培养液需要定期更换，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害 C. Vero细胞无需胰蛋白酶等处理可传代培养 D. 生产病毒性疫苗时，可将病毒接种到Vero细胞，培养后提取病毒可直接成为疫苗 10. 如图为iPS细胞的获得及用其培育不同种细胞的示意图，相关叙述错误的是（ ） A. 在培养iPS细胞的过程中定期更换培养液的目的是清除细胞代谢物，防止对细胞自身造成伤害 B. 过程③④分化得到的细胞不同，是因为iPS细胞在培养过程中发生了遗传物质的改变 C. 若iPS细胞来源于病人自身体细胞，再将其分化出的细胞移入患者体内可以避免免疫排斥反应发生 D. 若要了解这4个关键基因在诱导产生iPS细胞时每个基因作用的相对大小，可以在各实验组中依次去掉1个基因来进行推测 11. 甲型流感单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象，不考虑基因互作和其他变异，相关叙述错误的是（ ） A. 可从多次间歇注射甲型流感疫苗的动物脾脏中筛选获得已免疫的B淋巴细胞 B. 在HAT 选择培养基上，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均无法长期存活 C. 用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞时每一个孔尽量只接种一个细胞 D. 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞即具有持续产生甲型流感抗体的能力 12. 野生动物郊狼的物种数量近年不断减少、濒临灭绝，科研人员利用种间体细胞核移植技术（iSCNT）培育小郊狼的流程如下图。下列叙述正确的是（ ） A. 图中①是第二极体，②是透明带 B. iSCNT技术比胚胎细胞核移植技术难度要小 C. 图中“卵母细胞去核”中的“去核”指的是去除纺锤体-染色体复合物 D. 结构③通常需要用电刺激、Ca2+载体等方法激活，使其完成减数分裂和发育进程 13. 目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ） A. ①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理 B. 将外源基因整合到精子的染色体上，可保证外源基因稳定遗传 C. ②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合 D. 精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小 14. 研究者获得导入S基因的基因编辑小鼠的过程如下图所示，下列相关叙述正确的是（　　） A. 过程①一般需要用促性腺激素处理 B. 过程②是在雌鼠a的输卵管内完成 C. 过程③需将表达载体注射到子宫中 D. 过程④需抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥 15. 下图表示研究人员利用胚胎工程培育优质奶牛的过程，下列相关说法正确的是（ ） A. 通过过程①-⑤培育优质奶牛的过程与克隆牛的原理相同 B. 在胚胎发育中，桑葚胚时期的胚胎会从透明带中伸展出来 C. ③代表胚胎分割，需均等分割原肠胚的内细胞团，以免影响胚胎发育 D. ⑤代表胚胎移植，胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状态有关 16. 某小组通过PCR（假设引物长度为8个碱基短于实际长度）获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切（下图），再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是（ ） A. 其中一个引物序列为5＇TGCGCAGT-3＇ B. 步骤①所用的酶是SpeI和CfoI C. 用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2个片段 D. 酶切片段和载体连接时，可使用E．coli连接酶或T4连接酶 17. 下列关于DNA粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与电泳鉴定的叙述，正确的是（ ） A. 用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量相近 B. 使用二苯胺试剂能有效测定不同提取液中DNA的纯度差别 C. PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶浓度、DNA分子大小等有关 D. PCR扩增4次循环后，得到的含有两种引物的DNA片段所占比例为1/8 18. 为探究M基因的功能，科研人员利用基因工程技术将M基因导入拟南芥中，培育出转M基因拟南芥植株，相关流程如图所示，其中b过程利用了PCR技术。下列相关叙述错误的是（ ） A. a、b过程中所需要的酶分别是逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶 B. b过程中将温度降至50℃左右的目的是将双链DNA解聚为单链 C. e过程中，Ti质粒的T-DNA可携带着M基因转移到拟南芥细胞中 D. 获得的转M基因拟南芥植株自交，子代可能会发生性状分离 19. 改良二倍体水稻的株高和产量是实现袁隆平先生“禾下乘凉梦”的一种可能途径。研究人员克隆了可显著增高和增产的 eui基因，并开展了相关探索，过程如图所示。下列相关分析正确的是（ ） A. 步骤 Ⅰ 花药离体培养得到愈伤组织的过程中细胞失去其特有的结构和功能 B. 步骤 Ⅰ 在培养得到愈伤组织、丛芽和组培苗的过程中，不需要更换培养基 C. 步骤 Ⅱ 在构建重组 Ti 质粒时使用的工具酶有 DNA 解旋酶和DNA 连接酶 D. 为筛选含重组 Ti 质粒的农杆菌菌株，需在培养基中添加抗生素的抗性基因 20. 下列关于目的基因的检测和鉴定的叙述，正确的是（ ） A. 目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是能否转录出 mRNA B. 可采用PCR检测目的基因是否转录和翻译 C. 可从转基因生物中提取蛋白质来检测目的基因是否翻译成相应蛋白质 D. 抗虫、抗病检验用于确定转基因生物是否具备相关性状属于分子水平的检测 二、填空题 21. ε-聚赖氨酸（ε-PL）能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，做了如图所示的实验（1~V表示过程，①~③表示菌落），已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。 （1）图中第I步最常用的接种方法是_________。若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，则应在第I步之前_________，再进行接种。接种后的培养基应倒置放在37℃的恒温箱中培养，倒置的目的是_________。 （2）第Ⅲ步接种，应挑选_________（①/②/③）号菌落。一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的_________来判断微生物种类。 （3）本实验中用到了4种培养基，其中乙、丁培养基的作用分别是_________、_________。 （4）为检测上述收集到的ε-PL对不同种类微生物的抑制能力，研究人员将大肠杆菌等菌种分别涂布于某培养基表面，再将浸有不同浓度ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区（单位：mm）的宽度，得到了表所示的结果。 ε-PL浓度/mg·L-1微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 + + 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 + + 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 - 红曲霉 + + + + 5.1 6.3 注：“+”表示无清晰区，“-”表示未进行实验。 下列关于上述抑菌实验的叙述，正确的是_________（多选）。 A. 结果显示ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强 B. ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关 C. 用于实验的培养基应该用液体的选择培养基 D. 接种需在超净工作台上酒精灯火焰周围进行 22. 不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，培育能产生紫杉醇的柴胡，过程如图所示。请回答下列问题： （注：X射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位或染色体消除，使细胞不再持续分裂；碘乙酰胺处理能使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂。） （1）过程①中需将植物组织经_____后接种于MS培养基上诱导_____过程，产生愈伤组织。对原生质体进行的A处理为_____。 （2）采用二乙酸荧光素（FDA）法可测定原生质体活力。已知FDA本身无荧光，当其进入细胞后可被酯酶分解为无毒、具有荧光的物质，该荧光物质不能透过活细胞质膜，会留在细胞内发出荧光。据此分析应选择_____的原生质体用于融合。融合前对原生质体在显微镜下用血细胞计数板计数，以确定原生质体密度。 （3）获得的原生质体经诱导融合后，只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团，原因是_____。过程④再分化阶段，芽的分化要求培养基中_____（激素）比例较高。 （4）科研人员对获得的部分植株细胞进行染色体观察、计数和DNA分子标记鉴定，结果如表所示。后代植株中_____类型一定不是所需植株。科研人员推测杂种植株的染色体主要来源于亲本柴胡的染色体，另一方亲本的遗传物质可能不是以染色体的形式存在于杂种植株细胞中，而是以DNA片段的方式整合进柴胡的基因组，作出以上推测的依据有_____。 后代植株类型 染色体数目、形态 DNA分子标记鉴定 甲 12，形态与柴胡染色体相似 含双亲DNA片段 乙 12，形态与柴胡染色体相似 无红豆杉DNA片段 丙 12，形态与柴胡染色体相似 含双亲DNA片段和新的DNA片段 23. 自1994年科学家首次将精原细胞移植到不育的受体睾丸中并恢复其生殖能力以来，对啮齿动物睾丸中精原干细胞（SSCs）的体内、体外研究和操作一直处于火热状态。对于家畜动物来说，SSCs的培养和移植有可能提高动物的生产效率，为转基因动物的制备提供新的途径。由于SSCs在睾丸中数量稀少，因此体外培养系统的建立是研究和操作这一稀有细胞群体的重要前提。下图为体外精子发生的策略（精子发生过程主要包括精原细胞自我更新与分化、精母细胞减数分裂和精子形成）。回答相关问题： （1）精原干细胞是位于睾丸组织曲细精管基底膜上能稳定进行自我更新并分化为成熟精子的一类_________干细胞，是精子发生的基础。一般认为，其具有_________，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。 （2）据图推测，用_________将睾丸分散成单个细胞，再制成细胞悬液，在培养睾丸细胞过程中这类细胞往往会出现细胞贴壁现象，当贴壁细胞在生长增殖时，会受到细胞密度过大、有害代谢物积累、_________以及_________等因素而分裂受阻。 （3）将获得的精子在体外进行受精，首先要进行精子获能，获能液的有效成分为_________。待受精的细胞为_________（写出细胞名称和所处时期），将体外受精获得的小鼠桑葚胚移植到代孕母鼠子宫，此阶段胚胎_________（填“是”或“否”）已经开始分化。 （4）“三亲婴儿”是“三合一”胚胎人工授精技术诞生的婴儿，含有“一父两母”三人的遗传物质，可有效防止某些遗传病的发生。据图回答下列问题： a．诞生“三亲婴儿”的过程中，用到的胚胎工程技术有_________（至少写两种）。 b．“三亲婴儿”的培育技术_________（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，而_________（填“能”或“不能”）避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。 24. 玉米营养价值高，是优良的粮食作物，但普通玉米缺乏动物生长发育所必需的赖氨酸。科研人员利用转基因技术将马铃薯中已知序列的高赖氨酸蛋白基因（G基因）转入玉米细胞获得高赖氨酸玉米新品种。请回答下列问题： （1）利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增G基因，需要的引物有_______（从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。 （2）为了提高玉米中赖氨酸蛋白的含量，研究者将G基因与能够驱动基因持续转录的强启动子连接起来，如图2所示。强启动子是一段特殊序列的DNA片段，位于基因的______（填“上游”或“下游”），能被_______识别并结合。在转录过程中，模板链的5'端位于_____（填“M”或“N”）端。 （3）可用PCR技术在目的基因的两端添加限制酶识别序列，使目的基因能定向插入T-DNA中。将目的基因插入T-DNA的原因是______，M、N端应分别添加限制酶______的识别序列。 （4）可分别用________技术对转基因玉米植株中的DNA和蛋白质进行检测，结果发现有些植株虽有R基因，但几乎没有高赖氨酸蛋白，原因可能是______。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 内江一中高2027届高二下学期半期考试（生物试题） 一、选择题（本题包括20小题，每小题2分，共40分。每小题只有一个选项符合题意） 1. 下列关于传统发酵技术及应用的相关叙述正确的是（ ） A. 传统发酵以单一菌种的固体发酵及半固体发酵为主 B. 果酒、果醋发酵过程中PH均有先升高后明显下降的现象 C. 多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是曲霉 D. 发酵期间，当泡菜中乳酸的质量分数为0.4%～0.8%时，泡菜的口味、品质最佳 【答案】D 【解析】 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 2、腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。 【详解】A、传统发酵食品所用的是自然菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，A错误； B、果酒制作过程中会产生二氧化碳，二氧化碳溶于水，使pH降低；果醋制作过程中产生醋酸，同样会使pH下降，B错误； C、在制作腐乳的过程中，多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉，C错误； D、制作传统泡菜是利用植物体表面天然 的乳酸菌来进行发酵的。发酵期间，乳酸会不断积累，当它的质量分数为0.4%～0.8% 时，泡菜的口味、品质最佳，D正确。 故选D。 2. 下列有关发酵技术在食品加工中应用的叙述，不正确的是（　　） A. 为了避免杂菌污染，乳酸菌发酵成酸奶时在牛奶中添加一定量的抗生素 B. 为了提高果酒品质，挑选新鲜的葡萄榨汁前应先用清水冲洗1至2次，再去除枝梗 C. 为了防止果酒变酸，果酒发酵排气时应避免空气进入及发酵引起的升温 D. 泡菜坛边加水的目的是隔绝空气，创造无氧环境有利于发酵 【答案】A 【解析】 【详解】A、抗生素能够抑制细菌的生长繁殖，乳酸菌属于细菌，若向牛奶中添加抗生素会杀死乳酸菌，导致酸奶发酵失败，A错误； B、挑选新鲜葡萄制作果酒时，先冲洗1~2次再去除枝梗，可避免去枝梗时葡萄破损造成杂菌污染，同时可减少葡萄表面野生酵母菌的流失，有利于果酒发酵，B正确； C、果酒变酸是醋酸菌在有氧条件下将酒精转化为醋酸导致的，醋酸菌为好氧菌，且发酵所需温度高于果酒发酵温度，因此排气时避免空气进入、防止发酵升温可抑制醋酸菌繁殖，避免果酒变酸，C正确； D、泡菜发酵的菌种是乳酸菌，乳酸菌为厌氧微生物，泡菜坛边加水可密封隔绝空气，创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，D正确。 3. 某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下，下列说法不正确的是（　　） A. 图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，能生长的微生物一定能合成脲酶 B. 若每支试管稀释10倍，则图中a的数值应为2.7，5号试管共稀释了106倍 C. 图中左上角培养基菌落连成一片，可能是涂布不均匀造成的 D. 若仅以4号试管接种培养基计数，5 g该土壤中含分解尿素菌的估算数目是7×108个 【答案】A 【解析】 【详解】A、本实验是探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，因此图中接种的培养基是以尿素为唯一氮源的固体培养基，但在此培养基上能生长的微生物不一定都能合成脲酶，如固氮菌也能生存，A错误； B、若每支试管稀释10倍，则将0.3 mL与amL无菌水混合稀释10倍，需要a的数值为2.7，5 g土壤溶于定溶剂形成50 mL溶液被稀释了10倍，故5号试管共稀释了106倍，B正确； C、图中左上角培养基菌落连成一片，若涂布不均匀会造成图中的结果，C正确； D、若仅以4号试管接种培养基计数，5 g该土壤中含分解尿素菌的估算数目是（275+285+280）÷3÷0.2×105×5=7×108个，D正确。 4. 野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ） A. 图中①②④为完全培养基，③为基本培养基 B. A操作的目的是提高突变率，增加突变株的数量 C. B操作是用涂布器将菌液均匀地涂布在②表面 D. 经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取E进行纯化培养 【答案】D 【解析】 【分析】分析题图：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用影印法将菌种接种到两种培养基中，分别是基本培养基、完全培养基；野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，而氨基酸营养缺陷型菌株由于发生基因突变无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，据此利用培养基的种类便可以选择出氨基酸突变株。 【详解】A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，根据题干信息和图形分析，图中①②④为完全培养基，③为基本培养基，A正确； B、紫外线可以提高突变的频率，A操作的目的是提高突变菌株的浓度，即增加突变株的数量，B正确； C、B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C正确； D、从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D错误。 故选D。 5. 科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株Q，步骤如下图所示，下列相关的叙述中，错误的是（ ） A. 步骤①—③中，培养液中需加入多环芳烃菲作为唯一碳源 B. 步骤①—③中，将锥形瓶放在摇床上充分振荡，使菌株与培养液充分接触 C. 步骤④是利用平板划线法纯化菌株Q，图中所示接种环最少灼烧5次 D. 步骤④中每一区域可重复画几次，但1区和5区不能出现交叉 【答案】C 【解析】 【分析】 【详解】A、要想分离出能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株Q，所用培养液中需加入多环芳烃菲作为唯一碳源，A正确； B、培养过程中，将锥形瓶充分振荡，目的是使菌株与培养液充分接触，B正确； C、接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤④中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，完成步骤④共需灼烧接种环6次，C错误； D、纯化菌株Q过程中，由于线条末端细菌的数目比线条起始处要少，所以在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，1区和5区不能交叉，D正确。 故选C。 6. 发酵广泛应用于农业、食品工业、医药工业等工业生产。下列叙述正确的是（　　） A. 用单细胞蛋白制成的微生物饲料，可通过发酵工程从微生物细胞中提取 B. 菌种的选育是发酵工程的中心环节，优良菌种可从自然界筛选出来 C. 发酵产品包括微生物菌体本身或代谢产物，可通过过滤、离心、蒸馏等方法纯化 D. 筛选出高产柠檬酸的黑曲霉菌种后可直接接种到发酵罐中进行发酵生产 【答案】C 【解析】 【分析】发酵过程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。 【详解】A、单细胞蛋白是指利用发酵工程生产的微生物菌体，而不是从微生物细胞中提取的产物，A错误； B、发酵工程的中心环节是发酵过程，而不是菌种的选育，B错误； C、发酵产品包括微生物菌体本身（如单细胞蛋白）或代谢产物（如抗生素、氨基酸等）。对于不同性质的产品，可采用不同的纯化方法，过滤、离心、蒸馏等是常用的纯化方法。过滤可用于分离固体和液体，离心可利用不同物质的密度差异进行分离，蒸馏可根据物质的沸点差异进行分离，C正确； D、筛选出高产柠檬酸的黑曲霉菌种后，不能直接接种到发酵罐中进行发酵生产。在接种前，需要对发酵罐进行严格的灭菌处理，以防止杂菌污染影响发酵过程和产品质量。同时，还需要对筛选出的菌种进行扩大培养，使其数量达到适合发酵罐接种的量，D错误。 故选C。 7. 组织培养可快速繁殖植物，得到的试管苗常先移至草炭土或蛭石中炼苗，苗健壮后可移栽定植。关于菊花的组织培养及幼苗的移栽，下列说法错误的是（ ） A. MS培养基的碳源一般用蔗糖而不用葡萄糖，以减少微生物污染 B. 用酒精对外植体进行消毒持续的时间不能太长，消毒后应立即用蒸馏水清洗2～3次 C. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，避免倒插 D. 对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基 【答案】B 【解析】 【分析】组织培养过程中需要对外植体消毒：选取合适的外植体，用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70%的酒精中摇动2-3次，持续10s左右，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中1-2min。取出后，在无菌水水中至少清洗3次，漂净消毒液。 【详解】A、培养微生物时一般用葡萄糖作为能源物质，微生物一般不能利用蔗糖，所以使用蔗糖可以有效减少培养基的污染，A正确； B、用酒精对外植体进行消毒持续的时间不能太长，消毒后应立即用无菌水（蒸馏水清洗可能会造成污染）清洗2～3次，以免酒精对外植体造成伤害，B错误； C、由于生长素的极性运输，接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，再插入培养基，不能倒插，C正确； D、对试管苗炼苗（驯化）的操作步骤之一是用流水除去根部培养基，携带培养基容易造成污染，D正确。 故选B。 8. 如图是“番茄—马铃薯”杂种植株的培育过程，其中①～⑤表示过程，字母表示细胞、组织或植株。下列相关叙述正确的是（ ） A. 过程①表示在低渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体 B. c是正在融合的原生质体，诱导融合的方法可以是低Ca+—低pH融合法 C. 可以根据是否发生质壁分离现象鉴别杂种细胞的细胞壁是否再生 D. 植物有性杂交和体细胞杂交都能克服远缘杂交不亲和的障碍 【答案】C 【解析】 【分析】1、原生质体融合的方法： ⑴物理法是电融合法。先将两种原生质体以适当的比例混合成悬浮液，滴入电融合小室中；然后给小室两极以交变电流，使原生质体沿电场方向排列成串珠状；接着给以瞬间高强度的电脉冲，使原生质体膜产生局部破损而导致融合； ⑵化学法有高Ca2+-高pH融合法和聚乙二醇(PEG)融合法。高Ca2+-高pH融合法诱导原生质体融合的基本原理是中和原生质体表面所带的电荷，使原生质体的质膜紧密接触，从而有利于质膜的融合。PEG能够改变细胞的膜结构，使两个细胞接触处质膜的脂类分子发生疏散和重组，从而导致质膜相互亲和，促进融合； 2、分析题图：图示为植物体细胞杂交过程示意图，其中①表示去壁获取原生质体的过程；②表示人工诱导原生质体融合；③表示再生出新细胞壁的过程；④表示脱分化过程；⑤表示再分化过程。 【详解】A、获得植物的原生质体，操作一般在等渗溶液中进行，若在低渗溶液中进行，则去掉细胞壁的原生质体会因吸水而涨破，A错误； B、诱导原生质体融合的方法可以是高Ca2+-高pH和聚乙二醇(PEG)融合法融合法，B错误； C、融合后的杂种细胞再生出新的细胞壁是原生质体融合完成的标志，故可利用质壁分离现象鉴定细胞壁是否再生，C正确； D、番茄和马铃薯在自然状态下具有生殖隔离，不能通过有性生殖进行杂交，而通过植物体细胞杂交就可以培育杂种植株，体现植物体细胞杂交能打破物种生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，D错误。 故选C。 9. Vero细胞是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的，可无限增殖且能悬浮培养。因不能合成抗病毒蛋白干扰素，因而广泛应用在病毒性疫苗生产上，下列叙述错误的是（ ） A. 培养Vero细胞时需要提供5%二氧化碳和95%空气 B. 培养液需要定期更换，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害 C. Vero细胞无需胰蛋白酶等处理可传代培养 D. 生产病毒性疫苗时，可将病毒接种到Vero细胞，培养后提取病毒可直接成为疫苗 【答案】D 【解析】 【分析】动物细胞培养条件： （1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物； （2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质； （3）温度和pH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4； （4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。 【详解】A、动物细胞培养的过程中需要控制培养箱中的气体条件为95%空气+5%CO2，其中CO2起到维持培养液的pH的作用，A正确； B、进行动物细胞培养时，培养液需要定期更换，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，B正确； C、Vero细胞悬浮培养，无需胰蛋白酶处理可传代培养，C正确； D、生产病毒性疫苗时，可将病毒接种到Vero细胞，培养后提取病毒进行灭活或减毒处理方可成为疫苗，D错误。 故选D。 10. 如图为iPS细胞的获得及用其培育不同种细胞的示意图，相关叙述错误的是（ ） A. 在培养iPS细胞的过程中定期更换培养液的目的是清除细胞代谢物，防止对细胞自身造成伤害 B. 过程③④分化得到的细胞不同，是因为iPS细胞在培养过程中发生了遗传物质的改变 C. 若iPS细胞来源于病人自身体细胞，再将其分化出的细胞移入患者体内可以避免免疫排斥反应发生 D. 若要了解这4个关键基因在诱导产生iPS细胞时每个基因作用的相对大小，可以在各实验组中依次去掉1个基因来进行推测 【答案】B 【解析】 【分析】动物细胞培养需要满足以下条件：（1）充足的营养供给，微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。（2）适宜的温度：36.5°，适宜的pH:7.2~7.4。（3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。（4）气体环境：95%空气+5% CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 【详解】A、定期更换培养液的目的是为细胞提供充足营养物质，并清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身的伤害，因此，体外培养小鼠成纤维细胞和iPS细胞时，可通过定期更换培养液以清除细胞的代谢产物，A正确； B、过程③④分化得到的细胞不同，是因为iPS细胞在培养过程中发生了基因的选择性表达，B错误； C、若iPS细胞来源于病人自身体细胞，经诱导产生的组织和器官再移植回病人体内后，由于移植的组织或器官是由病人自身的细胞经过分裂、分化产生的，因此，理论上可避免发生免疫排斥反应，C正确。 D、若要了解这4个关键基因在诱导产生iPS细胞时每个基因作用的相对大小，可以应用“减法原理”，即在各实验组中依次去掉1个基因来进行推测，D正确。 故选B。 11. 甲型流感单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象，不考虑基因互作和其他变异，相关叙述错误的是（ ） A. 可从多次间歇注射甲型流感疫苗的动物脾脏中筛选获得已免疫的B淋巴细胞 B. 在HAT 选择培养基上，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均无法长期存活 C. 用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞时每一个孔尽量只接种一个细胞 D. 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞即具有持续产生甲型流感抗体的能力 【答案】D 【解析】 【分析】在制备单克隆抗体时，首先要给小鼠免疫，产生相应的B细胞，然后将B细胞与骨髓瘤细胞融合，经过选择培养基两次筛选，最后获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。在单克隆抗体的制备过程中，使用了动物细胞培养和动物细胞融合等动物细胞工程技术。 【详解】A、对动物进行间歇注射抗原处理，以刺激动物机体产生相应的B淋巴细胞，且脾脏是免疫器官，故B淋巴细胞可从多次间歇注射甲型流感疫苗的动物脾脏中筛选获得，A正确； B、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合后，再用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长，B正确； C、为确保产生特异性强的抗体，用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞时，每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞，C正确； D、杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象，若丢失的染色体含有产生甲型流感抗体的基因，则利用抗体检测筛选的杂交瘤细胞不一定具有持续产生甲型流感抗体的能力，D错误。 故选D。 12. 野生动物郊狼的物种数量近年不断减少、濒临灭绝，科研人员利用种间体细胞核移植技术（iSCNT）培育小郊狼的流程如下图。下列叙述正确的是（ ） A. 图中①是第二极体，②是透明带 B. iSCNT技术比胚胎细胞核移植技术难度要小 C. 图中“卵母细胞去核”中的“去核”指的是去除纺锤体-染色体复合物 D. 结构③通常需要用电刺激、Ca2+载体等方法激活，使其完成减数分裂和发育进程 【答案】C 【解析】 【分析】动物细胞培养条件：（1）无菌、无毒的环境，①消毒、灭菌，②添加一定量的抗生素，③定期更换培养液，以清除代谢废物；（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH：哺乳动物多以36.5℃为宜，最适pH为7.2-7.4；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。 【详解】A、图中①是第一极体，②是透明带，A错误； B、与胚胎细胞核移植技术相比，种间体细胞核移植技术（iSCNT）的成功率更低，这是由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，故与胚胎细胞核移植技术相比，iSCNT技术难度更大，B错误； C、减数分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母细胞中的“核”其实是纺锤体—染色体复合物；图中“卵母细胞去核”中的“去核”指的是去除纺锤体-染色体复合物，C正确； D、③是重组细胞，通常需要激活，使其完成细胞分裂和发育进程，但此过程中不含减数分裂，D错误。 故选C。 13. 目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列说法错误的是（ ） A. ①过程需将成熟的精子放入ATP溶液中进行获能处理 B. 将外源基因整合到精子的染色体上，可保证外源基因稳定遗传 C. ②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合 D. 精子载体法与显微注射法相比，对受精卵中核的影响更小 【答案】A 【解析】 【分析】分析题图：图示表示培育转基因鼠的基本流程，其中①是筛选获得导入外源基因的精子的过程，②是体外受精过程，③是早期胚胎培养过程，④是胚胎移植过程。 【详解】A、①过程需将成熟的精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体溶液中，用化学药物诱导精子获能，获能是指获得受精的能力而不是获得能量，因此不是放在ATP溶液中，A错误； B、受精卵中几乎不含精子的细胞质，将外源基因整合到精子的染色体上，是保证外源基因稳定遗传的关键，B正确； C、受精是精子和卵细胞的结合，②采用体外受精技术，受精完成的标志是雌雄原核融合，C正确； D、与显微注射法相比，精子载体法对受精卵中核的影响会更小，理由是不需要穿过核膜，雌雄原核自动融合（通过受精作用完成整合），D正确。 故选A。 14. 研究者获得导入S基因的基因编辑小鼠的过程如下图所示，下列相关叙述正确的是（　　） A. 过程①一般需要用促性腺激素处理 B. 过程②是在雌鼠a的输卵管内完成 C. 过程③需将表达载体注射到子宫中 D. 过程④需抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥 【答案】A 【解析】 【分析】胚胎移植的生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。 【详解】A、过程①用促性腺激素对供体进行超数排卵处理，获得更多的卵母细胞，A正确； B、过程②是体外受精，体外受精是将获能的精子和培养成熟的卵子置于适当的培养液中共同培养一段时间，来促使它们完成受精，B错误； C、③是导入含S基因的表达载体，应该将含S基因的表达载体通过显微注射法注射至小鼠的受精卵中，C错误； D、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，故过程④不需要抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥，D错误。 故选A。 15. 下图表示研究人员利用胚胎工程培育优质奶牛的过程，下列相关说法正确的是（ ） A. 通过过程①-⑤培育优质奶牛的过程与克隆牛的原理相同 B. 在胚胎发育中，桑葚胚时期的胚胎会从透明带中伸展出来 C. ③代表胚胎分割，需均等分割原肠胚的内细胞团，以免影响胚胎发育 D. ⑤代表胚胎移植，胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状态有关 【答案】D 【解析】 【分析】图中①表示体外受精，②表示早期胚胎培养，③表示胚胎分割，④表示分割后的胚胎进行恢复和继续发育，⑤表示胚胎移植。 【详解】A、通过过程①-⑤培育优质奶牛的过程属于有性繁殖，克隆牛属于无性繁殖，故两者的原理不同，A错误； B、在胚胎发育中，囊胚时期的胚胎会从透明带中伸展出来，B错误； C、③代表胚胎分割，需均等分割囊胚的内细胞团，以免影响胚胎发育，C错误； D、⑤代表胚胎移植，胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状态有关，因此胚胎移植前需要进行同期发情处理，使供体和受体的生理状态相同，D正确。 故选D。 16. 某小组通过PCR（假设引物长度为8个碱基短于实际长度）获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切（下图），再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是（ ） A. 其中一个引物序列为5＇TGCGCAGT-3＇ B. 步骤①所用的酶是SpeI和CfoI C. 用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2个片段 D. 酶切片段和载体连接时，可使用E．coli连接酶或T4连接酶 【答案】B 【解析】 【详解】A、由于引物只能引导子链从5＇到3＇，根据碱基互补配对原则，其中一个引物序列为5＇TGCGCAGT-3＇，A正确； B、根据三种酶的酶切位点，左侧的黏性末端是使用NheI切割形成的，右边的黏性末端是用CfoI切割形成的，B错误； C、用步骤①的酶对载体进行酶切，使用了NheI和CfoI进行切割，根据他们的识别位点以及原本DNA的序列，切割之后至少获得了2个片段，C正确； D、图中形成的是黏性末端，而E.coliDNA连接酶能连接黏性末端；T4DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端，D正确。 故选B。 17. 下列关于DNA粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与电泳鉴定的叙述，正确的是（ ） A. 用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量相近 B. 使用二苯胺试剂能有效测定不同提取液中DNA的纯度差别 C. PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶浓度、DNA分子大小等有关 D. PCR扩增4次循环后，得到的含有两种引物的DNA片段所占比例为1/8 【答案】C 【解析】 【分析】1、DNA的粗提取和分离 （1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 （2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。 2、DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 【详解】A、猪是哺乳动物，哺乳动物的成熟红细胞中没有细胞核，不含DNA，因此用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量不是相近的，A错误； B、DNA遇二苯胺会被染成蓝色，二苯胺试剂只能鉴定DNA的有或无，不能测定DNA的纯度，B错误； C、PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶浓度、DNA分子大小等有关，C正确； D、PCR扩增4次即DNA复制4次，共形成16个DNA，根据半保留复制，有2个子代DNA含有其中一种引物，14个子代DNA同时含有两种引物，因此同时含有两种引物的DNA占14/16=7/8，D错误。 故选C。 【点睛】 18. 为探究M基因的功能，科研人员利用基因工程技术将M基因导入拟南芥中，培育出转M基因拟南芥植株，相关流程如图所示，其中b过程利用了PCR技术。下列相关叙述错误的是（ ） A. a、b过程中所需要的酶分别是逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶 B. b过程中将温度降至50℃左右的目的是将双链DNA解聚为单链 C. e过程中，Ti质粒的T-DNA可携带着M基因转移到拟南芥细胞中 D. 获得的转M基因拟南芥植株自交，子代可能会发生性状分离 【答案】B 【解析】 【分析】PCR原理：在高温作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的，实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。 【详解】A、根据图示分析，a过程以mRNA为模板合成DNA，是逆转录过程，需要逆转录酶的催化，b过程为利用PCR技术扩增M基因，该过程需要耐高温的DNA聚合酶催化，A正确； B、PCR过程中，每次循环可分为变性、复性和延伸三步，其中变性是指当温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链，复性是指当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，B错误； C、在农杆菌转化法中，将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，T-DNA可携带着目的基因转移到受体细胞中，C正确； D、若获得的转M基因拟南芥植株的细胞中只有一条染色体上含有M基因，相当于杂合子，则其自交会发生性状分离，D正确。 故选B。 19. 改良二倍体水稻的株高和产量是实现袁隆平先生“禾下乘凉梦”的一种可能途径。研究人员克隆了可显著增高和增产的 eui基因，并开展了相关探索，过程如图所示。下列相关分析正确的是（ ） A. 步骤 Ⅰ 花药离体培养得到愈伤组织的过程中细胞失去其特有的结构和功能 B. 步骤 Ⅰ 在培养得到愈伤组织、丛芽和组培苗的过程中，不需要更换培养基 C. 步骤 Ⅱ 在构建重组 Ti 质粒时使用的工具酶有 DNA 解旋酶和DNA 连接酶 D. 为筛选含重组 Ti 质粒的农杆菌菌株，需在培养基中添加抗生素的抗性基因 【答案】A 【解析】 【分析】1、单倍体育种的原理是染色体变异，方法是用花药离体培养获得单倍体植株，再人工诱导染色体数目加倍；优点是纯合体自交后代不发生性状分离，因而能明显缩短育种年限。 2、基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。 3、PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。 4、植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。 【详解】A、已经分化的细胞 可以经过脱分化，即失去其特有的结构和功 能，转变成未分化的细胞，进而形成不定形的薄壁组织团块，这称为愈伤组织；可见步骤 Ⅰ 花药离体培养得到愈伤组织的过程中细胞失去其特有的结构和功能，A正确； B、步骤 Ⅰ 在培养得到愈伤组织、丛芽和组培苗的过程中，需要更换培养基，B错误； C、步骤 Ⅱ 在构建重组 Ti 质粒时使用的工具酶有限制酶和DNA 连接酶，C错误； D、为筛选含重组 Ti 质粒的农杆菌菌株，需在培养基中添加抗生素，D错误。 故选A。 20. 下列关于目的基因的检测和鉴定的叙述，正确的是（ ） A. 目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是能否转录出 mRNA B. 可采用PCR检测目的基因是否转录和翻译 C. 可从转基因生物中提取蛋白质来检测目的基因是否翻译成相应蛋白质 D. 抗虫、抗病检验用于确定转基因生物是否具备相关性状属于分子水平的检测 【答案】C 【解析】 【分析】基因工程技术中目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。 【详解】A、目的基因导入受体细胞后，首先要检测转基 因生物(染色体)DNA上是否插入了目的基因，这 是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键，A错误； B、目的基因是否转录和翻译的检测方法依次是分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术，B错误； C、可从转基因生物中提取蛋白质来检测目的基因是否翻译成相应蛋白质，C正确； D、抗虫、抗病鉴定可用于确定转基因生物是否具备相关性状，属于个体水平的检测，D错误。 故选C。 二、填空题 21. ε-聚赖氨酸（ε-PL）能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，做了如图所示的实验（1~V表示过程，①~③表示菌落），已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。 （1）图中第I步最常用的接种方法是_________。若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，则应在第I步之前_________，再进行接种。接种后的培养基应倒置放在37℃的恒温箱中培养，倒置的目的是_________。 （2）第Ⅲ步接种，应挑选_________（①/②/③）号菌落。一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的_________来判断微生物种类。 （3）本实验中用到了4种培养基，其中乙、丁培养基的作用分别是_________、_________。 （4）为检测上述收集到的ε-PL对不同种类微生物的抑制能力，研究人员将大肠杆菌等菌种分别涂布于某培养基表面，再将浸有不同浓度ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区（单位：mm）的宽度，得到了表所示的结果。 ε-PL浓度/mg·L-1微生物 20 30 40 50 60 70 大肠杆菌 + + 7.2 10.8 11.6 13.3 沙门氏菌 + + 6.5 9.2 10.9 13.0 酿酒酵母 7.2 9.1 12.6 13.4 14.8 - 红曲霉 + + + + 5.1 6.3 注：“+”表示无清晰区，“-”表示未进行实验。 下列关于上述抑菌实验的叙述，正确的是_________（多选）。 A. 结果显示ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强 B. ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关 C. 用于实验的培养基应该用液体的选择培养基 D. 接种需在超净工作台上酒精灯火焰周围进行 【答案】（1） ①. 稀释涂布平板法 ②. （无菌水）稀释 ③. 避免培养基中的水分过分挥发或防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 （2） ①. ① ②. 菌落特征（菌落的形状、大小和颜色等） （3） ①. 选择产ε-PL的菌种 ②. 增加目的菌数量和生产ε-PL （4）ABD 【解析】 【小问1详解】 据图可知，步骤I为接种，结合培养II后的平板上菌落呈现均匀分布可知，所用接种方法是稀释涂布平板法；若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，说明密度过大，故则应在第I步之前先稀释，再进行接种。接种后的培养基倒置放在37℃的恒温箱中培养，以避免培养基中的水分过分挥发或防止皿盖上水珠落入培养基造成污染。 【小问2详解】 培养过程中由于ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈，因此应挑选透明圈直径大的菌落继续培养，故选①。不同微生物在固体培养基表面形成的菌落特征不同，一般来说，在相同培养条件下，用不同微生物表现出的稳定的菌落特征（菌落的形状、大小和颜色等）来判断微生物种类。 【小问3详解】 本实验中用到了4种培养基，甲培养基是液体培养基，能提供目的菌所需的全部营养，以保证目的菌的正常生长；乙培养基是固体培养基，用于选择产生ε-PL的菌种，通常需要添加琼脂等凝固剂；丙培养基是固体培养基，用于分离、纯化产生ε-PL的菌种，即可对目的菌进行扩大培养；丁培养基是液体培养基，用于富集培养目的菌，让目的菌增殖、生产ε-PL。 【小问4详解】 A、表中结果显示：不同浓度ε-PL处理下，酿酒酵母清晰区的宽度最大，说明ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强，A正确； B、表中数据显示随浓度增加，清晰区域宽度越大，即ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关，B正确； C、该实验中会出现抑菌圈，说明用于实验的培养基是固体的选择培养基，C错误； D、为了避免周围环境中微生物的污染，接种应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行，D正确。 22. 不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，培育能产生紫杉醇的柴胡，过程如图所示。请回答下列问题： （注：X射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位或染色体消除，使细胞不再持续分裂；碘乙酰胺处理能使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂。） （1）过程①中需将植物组织经_____后接种于MS培养基上诱导_____过程，产生愈伤组织。对原生质体进行的A处理为_____。 （2）采用二乙酸荧光素（FDA）法可测定原生质体活力。已知FDA本身无荧光，当其进入细胞后可被酯酶分解为无毒、具有荧光的物质，该荧光物质不能透过活细胞质膜，会留在细胞内发出荧光。据此分析应选择_____的原生质体用于融合。融合前对原生质体在显微镜下用血细胞计数板计数，以确定原生质体密度。 （3）获得的原生质体经诱导融合后，只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团，原因是_____。过程④再分化阶段，芽的分化要求培养基中_____（激素）比例较高。 （4）科研人员对获得的部分植株细胞进行染色体观察、计数和DNA分子标记鉴定，结果如表所示。后代植株中_____类型一定不是所需植株。科研人员推测杂种植株的染色体主要来源于亲本柴胡的染色体，另一方亲本的遗传物质可能不是以染色体的形式存在于杂种植株细胞中，而是以DNA片段的方式整合进柴胡的基因组，作出以上推测的依据有_____。 后代植株类型 染色体数目、形态 DNA分子标记鉴定 甲 12，形态与柴胡染色体相似 含双亲DNA片段 乙 12，形态与柴胡染色体相似 无红豆杉DNA片段 丙 12，形态与柴胡染色体相似 含双亲DNA片段和新的DNA片段 【答案】（1） ①. 消毒 ②. 脱分化 ③. X射线 （2）有荧光 （3） ①. 杂种细胞由于融合后在细胞核和细胞质的功能上实现互补，使细胞恢复正常分裂 ②. 细胞分裂素 （4） ①. 乙 ②. 甲、丙类型植株细胞的染色体与柴胡细胞中的染色体数目、形态相似，且含有双亲的DNA片段 【解析】 【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【小问1详解】 植物组织培养过程应注意无菌操作，故植物首先经过消毒处理；由外植体形成愈伤组织的过程是脱分化；A处理为X射线处理，破坏供体细胞的染色质。 【小问2详解】 分析题意，FAD本身无荧光，当其进入细胞后可被酯酶分解为无毒、具有荧光的物质会留在细胞内发出荧光发出荧光，故应选择发出荧光的原生质体用于融合。 【小问3详解】 获得的原生质体常使用化学试剂聚乙二醇（PEG）诱导融合；由于杂种细胞由于融合后在细胞核和细胞质的功能上实现互补，使细胞恢复正常分裂，故只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团；过程④是再分化阶段，芽的分化要求培养基中细胞分裂素比例较高。 【小问4详解】 据表格信息可知，植株后代乙无红豆杉DNA片段，说明其不是杂种植株，一定不是所需植株；甲、丙类型植株与柴胡细胞中的染色体数目相同、形态相似，且含有双亲的DNA片段，说明甲、丙植株属于杂种植株，它们的染色体主要由柴胡亲本来源的染色体组成，红豆杉亲本的遗传物质可能不是以染色体的形式存在于杂种植株细胞中，而是以遗传物质重组的方式整合进柴胡的基因组。 23. 自1994年科学家首次将精原细胞移植到不育的受体睾丸中并恢复其生殖能力以来，对啮齿动物睾丸中精原干细胞（SSCs）的体内、体外研究和操作一直处于火热状态。对于家畜动物来说，SSCs的培养和移植有可能提高动物的生产效率，为转基因动物的制备提供新的途径。由于SSCs在睾丸中数量稀少，因此体外培养系统的建立是研究和操作这一稀有细胞群体的重要前提。下图为体外精子发生的策略（精子发生过程主要包括精原细胞自我更新与分化、精母细胞减数分裂和精子形成）。回答相关问题： （1）精原干细胞是位于睾丸组织曲细精管基底膜上能稳定进行自我更新并分化为成熟精子的一类_________干细胞，是精子发生的基础。一般认为，其具有_________，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。 （2）据图推测，用_________将睾丸分散成单个细胞，再制成细胞悬液，在培养睾丸细胞过程中这类细胞往往会出现细胞贴壁现象，当贴壁细胞在生长增殖时，会受到细胞密度过大、有害代谢物积累、_________以及_________等因素而分裂受阻。 （3）将获得的精子在体外进行受精，首先要进行精子获能，获能液的有效成分为_________。待受精的细胞为_________（写出细胞名称和所处时期），将体外受精获得的小鼠桑葚胚移植到代孕母鼠子宫，此阶段胚胎_________（填“是”或“否”）已经开始分化。 （4）“三亲婴儿”是“三合一”胚胎人工授精技术诞生的婴儿，含有“一父两母”三人的遗传物质，可有效防止某些遗传病的发生。据图回答下列问题： a．诞生“三亲婴儿”的过程中，用到的胚胎工程技术有_________（至少写两种）。 b．“三亲婴儿”的培育技术_________（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，而_________（填“能”或“不能”）避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。 【答案】（1） ①. 成体 ②. 组织特异性 （2） ①. 机械法（胰蛋白酶、胶原蛋白酶） ②. 培养液中营养物质缺乏 ③. 接触抑制现象 （3） ①. 肝素（钙离子载体） ②. MⅡ期的次级卵母细胞 ③. 否 （4） ①. 体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等 ②. 能 ③. 不能 【解析】 【小问1详解】 成体干细胞包括骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细胞和睾丸中的精原干细胞等，所以精原干细胞是位于睾丸组织曲细精管基底膜上能稳定进行自我更新并分化为成熟精子的一类成体干细胞，是精子发生的基础。一般认为，其具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。 【小问2详解】 据图推测，用机械法（胰蛋白酶、胶原蛋白酶）将睾丸制成单细胞悬液，在培养睾丸细胞过程中这类细胞往往会出现细胞贴壁现象，当贴壁细胞在生长增殖时，会受到细胞密度过大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏，以及接触抑制现象等因素而分裂受阻。 【小问3详解】 将获得的精子在体外进行受精，首先要进行精子获能，获能液的有效成分为肝素（钙离子载体）。待受精的细胞为MⅡ期的次级卵母细胞，将体外受精获得的小鼠桑葚胚移植到代孕母鼠子宫，此阶段胚胎没有开始分化。 【小问4详解】 由图可知，三亲婴儿的培育需要采用核移植、体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术，其中体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植属于胚胎工程技术。根据图示可知，重组卵母细胞的细胞质来自捐献者，而线粒体位于细胞质中，可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代。红绿色盲是细胞核遗传，而三亲婴儿的细胞核遗传物质来自父亲和母亲，因此不能避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。 24. 玉米营养价值高，是优良的粮食作物，但普通玉米缺乏动物生长发育所必需的赖氨酸。科研人员利用转基因技术将马铃薯中已知序列的高赖氨酸蛋白基因（G基因）转入玉米细胞获得高赖氨酸玉米新品种。请回答下列问题： （1）利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增G基因，需要的引物有_______（从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。 （2）为了提高玉米中赖氨酸蛋白的含量，研究者将G基因与能够驱动基因持续转录的强启动子连接起来，如图2所示。强启动子是一段特殊序列的DNA片段，位于基因的______（填“上游”或“下游”），能被_______识别并结合。在转录过程中，模板链的5'端位于_____（填“M”或“N”）端。 （3）可用PCR技术在目的基因的两端添加限制酶识别序列，使目的基因能定向插入T-DNA中。将目的基因插入T-DNA的原因是______，M、N端应分别添加限制酶______的识别序列。 （4）可分别用________技术对转基因玉米植株中的DNA和蛋白质进行检测，结果发现有些植株虽有R基因，但几乎没有高赖氨酸蛋白，原因可能是______。 【答案】（1）BC （2） ①. 上游 ②. RNA聚合酶 ③. M （3） ①. Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上 ②. NotI、SacI （4） ①. PCR/DNA分子杂交、抗原-抗体杂交 ②. 基因转化过程中强启动子可能丢失或断裂（不能正常转录或翻译） 【解析】 【分析】1、基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取；（2）基因表达载体的构建；（3）将目的基因导入受体细胞；（4）目的基因的检测与鉴定。2、利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增。PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA 双链的解聚与结合PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。一次PCR一般要经历30次循环DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。 【小问1详解】 PCR扩增需要一对引物，分别与待扩增片段两端的两条模板链的3'端结合。DNA聚合酶从引物的3'端开始合成新链。根据PCR的基本原理，扩增整个G基因需要的引物应该是 B和C。 【小问2详解】 启动子是基因转录的起始信号，它位于基因编码区的上游（5'端）。启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点，启动子的存在是基因能够被转录的前提。图2中，转录方向为从启动子开始，即从N端到M端。转录时，RNA聚合酶沿着模板链的3'→5'方向移动，合成5'→3'的mRNA。因此，被转录的模板链的方向应该是从N端（3'）到M端（5'）。所以，模板链的5'端位于M端。 【小问3详解】 农杆菌转化法的原理是，Ti质粒上的T-DNA（可转移DNA）在农杆菌侵染植物细胞后，可以从质粒上转移并随机整合到植物细胞的染色体DNA上，从而使目的基因在植物体内稳定维持和表达。为了将目的基因（即图2所示的“强启动子-G基因”片段）定向插入到T-DNA中，通常在目的基因的两端（M和N端）通过PCR技术添加不同的限制酶切点，同时用相同的两种限制酶切割质粒。这样可以确保目的基因以正确的方向插入，并防止质粒自身环化。而G基因内部含有BamHⅠ和HindⅢ以及EcoRⅠ三种酶的限制酶切割位点，故不能选择这个三个。同时观察图3中识别序列发现，Sau3AⅠ能够识别BamHⅠ酶的限制酶切割位点，也不能选。因此可以在M端添加NotI识别序列，在N端添加SacI识别序列。 【小问4详解】  检测目的基因（DNA）是否整合到受体细胞的染色体上，使用PCR技术。检测目的基因是否翻译出蛋白质，使用抗原-抗体杂交技术。有些植株虽有R基因，但几乎没有高赖氨酸蛋白，原因可能是基因转化过程中强启动子可能丢失或断裂（不能正常转录或翻译）。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $