河北唐山市迁安市第四高级中学2025-2026年度高二年级第二学期期中考试生物学试题

**基本信息** 聚焦生物技术实践与前沿应用，通过传统发酵筛选、三亲婴儿培育等真实情境，考查生命观念与科学探究能力。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单项选择题|13题/26分|发酵技术、基因工程工具酶、细胞融合|结合抗生素抑菌实验考查科学思维（如第2题）| |多项选择题|5题/15分|原生质体融合、核移植、单克隆抗体|通过植物体细胞杂交分析生命观念（如第14题）| |非选择题|5题/59分|醋酸菌筛选、三亲婴儿培育、外泌体载体构建|以醋酸菌计数实验（第19题）和外泌体基因工程（第23题）突出探究实践与科技前沿|

2025-2026年度高二年级第二学期期中考试生物学试题 考生须知 1.答卷前，考生务必将自已的姓名、考生号等填写在答题卡上。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。 如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答 题卡上，写在本试卷上无效。 一、单项选择题：本题共13小题，每小题2分，共26分。在每小题给出的四个选项 中，只有一项是符合题目要求的。 1.在用传统发酵技术制作发酵食品过程中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是( ①传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主 ②果酒发酵和果醋发酵过程中，发酵液的pH都会下降 ③制作腐乳和酱油都有微生物产生蛋白酶将蛋白质分解成肽和氨基酸的过程 ④制作传统泡菜时，需用体积分数为70%的酒精对泡菜坛和蔬菜等原料进行消毒 ⑤问泡菜坛盖边沿的冰糟中混满水，为了獭止杂菌污染 相④②③， B.②③④ C.①②⑤ D.①②④⑤ 2.A、B、C、D四种抗生素均可治疗金黄色葡萄球菌(Sau)引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素 研究者将分别含等剂量抗生素的四张大小相同的滤纸片a、b、cd置于Su均匀分布的平板培养 基上，在适宜条件下培养48h:结果如图。下列叙述错误的是（) A.实验中一般采用干热灭菌的方法对培养血进行灭菌处理 B.四种抗生素中，抗生素A治疗Sau感染引起的肺炎效果最好 C.滤纸片b周围抑菌圈中出现的菌落，离抑菌圈越远抗药性越强 D.接种涂布后的培养皿倒置于37℃的恒温箱中培养 3.与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更丰富，产量和质量明显提高。下列说法正确的是() A.发酵王程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵 B.发酵工程的产品只包括微生物的代谢物和酶 C.在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢 1 途径。 D.通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 4.下列有关限制酶和DNA连接酶的叙述，正确的是(·) A.用限制酶酶切获得一个外源基因时得到两个切口，有2个磷酸二酯键被断开 B.限制酶识别序列越短，则该序列在D顿中出现的概率就越小 C.序列一CATG一和一G'GATCC一被限制酶切出的黏性未端碱基数不同 D.DNA连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接 5.甘薯是重要的农作物，为了改良甘薯品质，科学家利用甘薯(2N=90)与其近缘野生种(2N=30) 进行体细胞杂交，选育得到杂种植株M1。下列说法正确的是( A.需用几丁质酶和果胶酶来降解甘薯细胞壁 B.为防止原生质体失水，需使用低渗缓冲液 C.M1具有两个物种的所有性状，且染色体数目为2N=120 D.在培育M1时，配制的各种培养基常以MS培养基为基础 6.图示一种植物组织培养周期，①③表示相应过程。下列相关叙述错误的是（ A.过程①发生了细胞的脱分化和有丝分裂 组织奥 ① B.过程②经细胞的再分化形成不同种类的细胞 C.过程②③所用培养基的成分、浓度相同 植株 愈伤组织 炼移 D.培养基中糖类既能作为碳源，又与维持渗透压有 苗 栽 ② 关 试管苗 胚状体 7.假设世界上最后一头野驴刚死，以下使它“复生”的 ③ 方案中可行的是() A.将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育出新个体 B.将野驴的体细胞取出，利用组织培养培育出新个体 C.将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育出新个体 D.将野驴的体细胞核移植到家驴的去核卵母细胞中，经孕育培育出新个体 2 8.治疗性克隆有望解决供体器官短缺和免疫排斥等问题。下图为治疗性克隆的过程，有关叙述错误 的是( 患者正常体细胞 *肝细胞 一● 。心肌细胞 移植给患者本人 胚胎干细胞 +胰岛细胞 细胞A ·神经细胞一 A.细胞A常采用去核的卵母细胞 B.动物细胞的培养需提供95%空气和5%C0,的混合气体 C.胚胎干细胞分化为不同细胞的过程中发生了基因的选择性表达 D.该治疗过程应用了核移植、动物细胞培养和胚胎移植等技术 9.以下关于基因表达载体组成的说法正确的是( ) A.基因表达载体通常采用抗生素合成基因作为标记基因 B.终止子在基因的上游，它控制着转录的结束 C.基因表达载体中启动子的作用是驱动基因转录出mRNA D.基因表达载体的组成应包括目的基因、启动子、终止密码子、标记基因等 I0.利用PC方法克隆水通道蛋白基因P。基因P的部分序列如下图，请从①一④中选择扩增P基 因的合适引物组合是( 5′—GAAGTCCTCT-- ACGACGAACC-3 3′—CTTCAGGAGA-- - TGCTGCTTGG-5 ①5'-GAAGTCCTCT--3 ②3′-TGCTGCTTGG-5 ③3'-CTTCAGGAGA—5 ④5'-ACGACGAACC--3' A.①③ B.①② C.②③ D.②④ 11.下列关于PCR扩增DNA片段及电泳鉴定的叙述，正确的是() A.PCR扩增过程中双链DNA.解旋是通过酶解旋实现的 B.在凝胶中DNA分子的迁移速率只与凝胶的浓度、DNA分子的大小有关 3 C.PCR反应体系中需加入适量ATP溶液来驱动子链延伸 D.PCR扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳来进行鉴定 12.华西牛是我国具有完全自主知识产权的专门化肉牛新品种。科研人员在生产中采取胚胎工程的 手段实现了华西牛的快速繁育。下列叙述正确的是 A、采集的华西牛精子需要进行获能处理后，获能是指获得ATP B.可以选择发育良好的囊胚或桑葚胚进行分割，获得同卵双胎或多胎 C.受体母牛需性状优良且有较强的繁殖力，胚胎移植前需进行同期发情处理 D.移植胚胎前需对代孕母牛进行免疫排斥反应检测 13.下列相关实验操作正确的是( A.配制PC反应体系时，加入等量的4种核糖核替酸溶液作为扩增原料 B.利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳后，在紫外灯下观察结果 C.将配制的酵母培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板 D.将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养，获得单菌落 二、多项选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中， 有两个或两个以上选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全得1分，有选错 得0分。 14.研究人员用花椰菜(BB,2=18)根与黑芥(0C,2n=16)叶片分别制备原生质体，经PEG诱导 融合形成杂种细胞，进一步培养获得再生植株，其中的植株N经鉴定有33条染色体。下列叙述错 误的是( ) A.两个原生质体融合形成的细胞即为杂种细胞 B.再生植株N的形成证明杂种细胞仍具有全能性 C.花椰菜和黑芥的原生质体能融合，证明两种植物间不存在生殖隔离 D.植株N的B组和C组染色体不能正常联会配对，无法产生可育配子 15.植物细胞壁中存在大量不能被动物消化的多聚糖类物质：研究人员通过生物工程技术培育出含 多聚糖水解酶基因猪，主要流程如下图，①⑤表示操作过程。下列有关说法正确的是() 4 猪胎儿成 多聚糖水解酶基因 纤维细胞 @凌@4w@须9am ⊙0 重组早期 转基因猪 受体母猪 猪卵姆细胞 细跑 胚胎 A.在基因表达载体中构建诱导型启动子，可以利用诱导物激活多聚糖水解酶基因表达 B.用蛋白酶合成抑制剂激活③过程形成的重构胚使其完成分裂和发育进程 C.从卵巢中采集的卵母细胞需培养到MT期后用显微操作技术去除核膜包裹的细胞核 D.④过程的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移 16.下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述不正确的是（) 空质粒 含PML基因 的重组质粒 W细胞 骨髓瘤细胞 大肠杆菌■ 步骤1 提取蛋白 步骤2 OD 高纯度 总蛋白 PML蛋白 步骤3 分散稀释培养 孔3 注：+表示该孔中存在对应蛋白的抗体，一表示没有对应抗体 A.应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B.W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得 C.步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D.应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 17.琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1~4的电泳结果如图所示(“+”“-”分别代表 电泳槽的阳极和阴极)。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲只有限制酶R的一个酶切 位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是( 6 1 2 3 4 加样孔 甲 A.配制琼脂糖凝胶时需选用适当的缓冲溶液 B.该实验条件下甲、乙两种DNA分子均带负电荷 C.甲、乙两种DNA分子所含碱基对的数量一定相同 D.据图推测样品3可能是甲被酶R完全酶切后的产物 18.生物技术就像一把“双刃剑”，它既可以造福人类，也可能在使用不当时给人类带来潜在的危 害。下列叙述正确的是( ) A.反对设计试管婴几的原因之一是避免有人滥用此技术选择性设计婴儿 B.消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 C.转基因产品具有优良的品质，实验室培育的转基因产品可直接上市推广 D.α-淀粉酶基因与目的基因同时转入植物中能防止转基因花粉的传播 三、非选择题：本题共5题，共59分。 19.（13分)醋酸菌是一类生活在富含有机质土壤表层的细菌。筛选、鉴别醋酸菌的培养基常用 米曲汁乙醇培养基（米曲汁中富含蛋白质），该培养基的配方如下表。已知当微生物产生的物质能 够与培养基中特定成分（如米曲汁乙醇培养基中的碳酸钙）发生反应时，会使得原本不透明的培养 基区域变得透明；醋酸会与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸；大多数细菌在体积分数大于5%的乙醇 中会被杀死。回答下列问题： 组分 体积分数为8%的乙醇 碳酸钙 琼脂 米曲汁 含量 40mL 15g 10g 定容至1000mL （1)从物理性质看，米曲汁乙醇培养基为 培养基，该培养基中能为醋酸菌提供碳源的物质 是 ,土壤中微生物数量繁多，种类庞杂，该培养基能筛选出醋酸菌的原因是 6 (2)某实验小组将富集液进行梯度稀释，分别取10、10和10°倍数的稀释液0.1mL涂布于培养基 上，每个稀释倍数涂布三个平板，结果各平板的菌落数分别为(39、42、37)(276、291、283)， (6、11、9)。三组中适合用于计数的两组为 倍数的稀释液：该方法统计的菌落数量比实 际活菌数目一（填“多”或“少”）。为增加实验的信度，应再增设空白对照组，对照组的设 计是 0 (3)根据米曲汁乙醇培养基平板上菌落周围的透明圈可初步判断该菌落为醋酸菌，原因是 为进一步鉴别醋酸菌，可挑选菌落丰厚、边缘整齐、透明圈大的菌落，接种到液体米曲汁乙醇培养 基中培养并进行产醋酸实验。 (4)为了进一步挑选出耐酸的醋酸菌，需将(3)中获得的菌种接种于含 的培养基进行筛 选。当氧气充足、 时，醋酸菌能将 ,再将其转变为醋酸。 20.(9分)美国新希望生殖医学中心张进团队于2016年10月19日在美国生殖医学学会会议上正 式宣布，世界首个细胞核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。下图是该男婴的培育过程示 意图，请据图回答问题： 期卵 捐献 去核 母细胞 者乙 卵母细胞 母亲 二亲 母亲 取核 甲 儿 父亲丙→精子 受精卵 卵母细胞 (I)上述“三亲婴儿”的核DNA由提供，质DNA由 提供。由此可见，“三亲婴儿”的 意义在于可以避免子代 (填“细胞核或细胞质”)遗传病的发生。 (2)为获取更多的卵细胞，需要对女性注射激素。过程③的体外进行时需要对精子进行 处理。 (3)过程④是 需将受精卵移入发育培养液继续培养。以检查受精状况和受精卵的发育能力。 (4)过程⑤是 技术，取 的滋养层细胞可以对移植前的胚胎进行性别鉴定可采用的鉴定 7 方法是 法。 21.（11分)癌胚抗原(CEA)是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克 隆抗体来诊断癌症下图是CEA单克隆抗体的制备过程示意图，回答下列有关问题： 体外培养 小鼠绸胞 Y单克隆 o 染安窟细胞 细胞踣养 抗线 普檖痛钿胞 小厭体内培养 (1)制备CEA的单克隆抗体时，首先将 注入小鼠体内，使小鼠产生免疫反应。B过程是动物 细胞融合，该过程常用的方法 (至少回答两点) (2)经过多次筛选，最终获得的杂交瘤细胞具有 的特点。 (3)在动物细胞培养过程中，在使用合成培养基时通常需加入等天然成分；气体环境主要是 提供细胞所需的0，和C0,其中Q2用于细胞有氧呼吸，C0,的作用是。 当贴壁细胞分裂生长到 细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 (4)CEA单克隆抗体具主要优点是。CEA单克隆抗体与抗癌药物偶联后，可以使抗癌药物定 向作用于癌细胞，该过程所利用的免疫学原理为。 22(13分).如图表示培养克隆牛的流程。为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率， 流程中将Kdm4d(组蛋白去甲基化酶，可以催化组蛋白去甲基化)的mRNA注入重构胚。回答下列 问题： A牛 采集 培养 牛乳腺细胞 B牛 采集 卵母细胞 去核 去核卵母细胞 融合培养 克隆小牛 生出 代孕母牛C 胚胎移植 重构胚 注入 Kdm4d的mRNA (1)体外培养牛乳腺细胞需要提供的条件是 、 营养和气体环境，其中，在使用合 成培养基进行细胞培养时，通常需要加入血清等天然成分，其作用是 (2)从B牛采集来的卵母细胞需要在体外培养至 期，才能进行去核操作，“去核”其实是 去除 (3)胚胎移植过程中，需要对代孕母牛C进行同期发情处理的目的是。为使胚胎移植能得 到多个后代，可采用胚胎分割技术将 或囊胚进行分割，在分割襲胚阶段的胚胎时，要注意将 。进行胚胎移植的优势是 (4)注入的Kdm4d的mRNA可以 (填“降低”或“提高”)组蛋白的甲基化水平，使细胞发 生表观遗传水平的变异，从而激活被抑制基因的表达。 23.(13分)外泌体是一种大小为30~100m的细胞外膜囊泡，尤其在癌症的诊断及治疗等领域发 挥重要作用。研究人员构建了含有近红外荧光蛋白RFP682基因和外泌体标记蛋白CD63基因的表 达载体。载体构建过程中用到的限制酶的切割位点及部分过程如图所示(Amp表示氨苄青霉素抗性 基因)。请回答下列问题： 启动子 BamHI No1 I EcoR I BglⅡ Bgl II 5-TCCTCCGGATCC 终止子 EcoR I Not I CD63-iRFP682 CTTAAGTCTAGA-5 一启动子 CD63 终止子 iRFP682 EcoRI 5-GAATTC-3' 5-GGATCC-3' 3-CTTAAG-5' BamH13-CCTAGG-5 5-AGATCT-3' 5-GCGGCCGC-3 BglⅡ3-TCTAGA-5 NotI3-CGCCGGCG-5' 9 (1)为将CD63-iRFP682基因与质粒进行准确和高效地连接，对CD63-iRFP682基因、质粒分别 用 酶进行切割，破坏的化学键是 ；与只用一种限制酶酶 切相比，采用双酶切的目的在于避免 基因表达载体中启动子的功能是一。 (2)若将该基因片段扩增6次，则消耗 个引物分子。 (3)将构建好的基因表达载体通过 方法导入癌细胞。检测该基因表达载体是否成功导 入受体细胞的便捷方法是 (4)将目的基因导入大肠杆菌，提取其体内蛋白质注入兔子体内，进一步提取兔子体内的抗体， 再与提取的转基因癌细胞外泌体中的蛋白质进行杂交，然后进行电泳。若CD63~iRFP682基因在癌 细胞内表达，电泳结果会出现特异性条带，此过程依据的原理是 10 2025-2026年度高二年级第二学期期中考试生物学试题 考生须知 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考生号等填写在答题卡上。 2.回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。 一、单项选择题：本题共13小题，每小题2分，共26分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1.在用传统发酵技术制作发酵食品过程中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的是( ①传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主 ②果酒发酵和果醋发酵过程中，发酵液的pH都会下降 ③制作腐乳和酱油都有微生物产生蛋白酶将蛋白质分解成肽和氨基酸的过程 ④制作传统泡菜时，需用体积分数为7.0%的酒精对泡菜坛和蔬菜等原料进行消毒 ⑤向泡菜坛盖边沿的水槽中注满水，为了防止杂菌污染 A. ①②③: B; ②③④ C. ①②⑤ D. ①②④⑤ 2. A、B、C、D四种抗生素均可治疗金黄色葡萄球菌(Sau)引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素。研究者将分别含等剂量抗生素的四张大小相同的滤纸片a、b、q、l. d.置于 Sau均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养 48h₃.结果如图。下列叙述错误的是 ( ) A.实验中一般采用干热灭菌的方法对培养皿进行灭菌处理 B.四种抗生素中，抗生素A治疗 Sau感染引起的肺炎效果最好 C.滤纸片b周围抑菌圈中出现的菌落，离抑菌圈越远抗药性越强 D.接种涂布后的培养皿倒置于 37℃的恒温箱中培养 3.与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更丰富，产量和质量明显提高。下列说法正确的是( ) A.发酵王程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵 B.发酵工程的产品只包括微生物的代谢物和酶 C.在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢 学科网（北京）股份有限公司 途径。 D.通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 4.下列有关限制酶和 DNA连接酶的叙述，正确的是( ) A.用限制酶酶切获得一个外源基因时得到两个切口，有2个磷酸二酯键被断开 B.限制酶识别序列越短，则该序列在 DNA中出现的概率就越小 C.序列——C⁺ATG—和——G'GATCC—被限制酶切出的黏性末端碱基数不同 D. DNA 连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接 5.甘薯是重要的农作物，为了改良甘薯品质，科学家利用甘薯(2N=90)与其近缘野生种(2N=30)进行体细胞杂交，选育得到杂种植株M1。下列说法正确的是( ) A.需用几丁质酶和果胶酶来降解甘薯细胞壁 B.为防止原生质体失水，需使用低渗缓冲液 C. M1 具有两个物种的所有性状，且染色体数目为2N=120 D.在培育M1时，配制的各种培养基常以MS培养基为基础 6.图示一种植物组织培养周期，①~③表示相应过程。下列相关叙述错误的是( A.过程①发生了细胞的脱分化和有丝分裂 B.过程②经细胞的再分化形成不同种类的细胞 C.过程②③所用培养基的成分、浓度相同 D.培养基中糖类既能作为碳源，又与维持渗透压有关 7.假设世界上最后一头野驴刚死，以下使它“复生”的方案中可行的是( ) A.将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育出新个体 B.将野驴的体细胞取出，利用组织培养培育出新个体 C.将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育出新个体 D.将野驴的体细胞核移植到家驴的去核卵母细胞中，经孕育培育出新个体 2 学科网（北京）股份有限公司 8.治疗性克隆有望解决供体器官短缺和免疫排斥等问题。下图为治疗性克隆的过程，有关叙述错误的是( ) 患者正常体细胞 A.细胞A常采用去核的卵母细胞 B.动物细胞的培养需提供95%空气和5%CO₂的混合气体 C.胚胎干细胞分化为不同细胞的过程中发生了基因的选择性表达 D.该治疗过程应用了核移植、动物细胞培养和胚胎移植等技术 9.以下关于基因表达载体组成的说法正确的是( ) A.基因表达载体通常采用抗生素合成基因作为标记基因 B.终止子在基因的上游，它控制着转录的结束. C.基因表达载体中启动子的作用是驱动基因转录出 mRNA D.基因表达载体的组成应包括目的基因、启动子、终止密码子、标记基因等 10.利用PCR 方法克隆水通道蛋白基因P。基因P的部分序列如下图，请从①—④中选择扩增P基因的合适引物组合是( 5'—GAAGTCCTCT- -ACGACGAACC——3 3'—CTTCAGGAGA- -TGCTGCTTGG- -5 ①5'- GAAGTCCTC1-3' ②3'— TGCTGCTTGG——5' ③3' — CTTCAGGAGA—5' ④5'—— ACGACGAACC——3' A. ①③ B. ①② C. ②③ D. ②④ 11.下列关于PCR 扩增DNA片段及电泳鉴定的叙述，正确的是( ) A. PCR 扩增过程中双链DNA.解旋是通过酶解旋实现的 B.在凝胶中 DNA 分子的迁移速率只与凝胶的浓度、DNA 分子的大小有关 3 学科网（北京）股份有限公司 C. PCR 反应体系中需加入适量 ATP 溶液来驱动子链延伸 D. PCR 扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳来进行鉴定 12.华西牛是我国具有完全自主知识产权的专门化肉牛新品种。科研人员在生产中采取胚胎工程的手段实现了华西牛的快速繁育。下列叙述正确的是( A.采集的华西牛精子需要进行获能处理后，获能是指获得ATP B.可以选择发育良好的囊胚或桑葚胚进行分割，获得同卵双胎或多胎 C.受体母牛需性状优良且有较强的繁殖力，胚胎移植前需进行同期发情处理 D.移植胚胎前需对代孕母牛进行免疫排斥反应检测 13.下列相关实验操作正确的是( ) A.配制PCR 反应体系时，加入等量的4种核糖核苷酸溶液作为扩增原料 B.利用添加核酸染料的凝胶对PCR产物进行电泳后，在紫外灯下观察结果 C.将配制的酵母培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板 D.将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养，获得单菌落 二、多项选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有两个或两个以上选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全得1分，有选错得0分。 14.研究人员用花椰菜(BB, 2n=18)根与黑芥(CO, 2n=16)叶片分别制备原生质体,经PEG诱导融合形成杂种细胞，进一步培养获得再生植株，其中的植株N经鉴定有33条染色体。下列叙述错误的是( ) A.两个原生质体融合形成的细胞即为杂种细胞 B.再生植株N的形成证明杂种细胞仍具有全能性 C.花椰菜和黑芥的原生质体能融合，证明两种植物间不存在生殖隔离 D.植株N的B组和C'组染色体不能正常联会配对，无法产生可育配子 15.植物细胞壁中存在大量不能被动物消化的多聚糖类物质；研究人员通过生物工程技术培育出含多聚糖水解酶基因猪，主要流程如下图，①~⑤表示操作过程。下列有关说法正确的是( ) 4 学科网（北京）股份有限公司 A.在基因表达载体中构建诱导型启动子，可以利用诱导物激活多聚糖水解酶基因表达 B.用蛋白酶合成抑制剂激活③过程形成的重构胚使其完成分裂和发育进程 C.从卵巢中采集的卵母细胞需培养到MⅡ期后用显微操作技术去除核膜包裹的细胞核 D.④过程的实质是早期胚胎在相同生理环境下空间位置的转移 16.下图为PML 蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述不正确的是 ( ) A.应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B. W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得 C.步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞 D.应选择孔 2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 17.琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1~4的电泳结果如图所示 (“+”“-”分别代表电泳槽的阳极和阴极)。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲只有限制酶R的一个酶切位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是( ) 5 学科网（北京）股份有限公司 A.配制琼脂糖凝胶时需选用适当的缓冲溶液 B.该实验条件下甲、乙两种 DNA 分子均带负电荷 C.甲、乙两种 DNA 分子所含碱基对的数量一定相同 D.据图推测样品3可能是甲被酶R完全酶切后的产物 18.生物技术就像一把“双刃剑”，它既可以造福人类，也可能在使用不当时给人类带来潜在的危害。下列叙述正确的是( ) A.反对设计试管婴儿的原因之一是避免有人滥用此技术选择性设计婴儿 B.消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面 C.转基因产品具有优良的品质，实验室培育的转基因产品可直接上市推广 D.α-淀粉酶基因与目的基因同时转入植物中能防止转基因花粉的传播 三、非选择题：本题共5题，共59分。 19.(13分)醋酸菌是一类生活在富含有机质土壤表层的细菌。筛选、鉴别醋酸菌的培养基常用米曲汁乙醇培养基(米曲汁中富含蛋白质)，该培养基的配方如下表。已知当微生物产生的物质能够与培养基中特定成分(如米曲汁乙醇培养基中的碳酸钙)发生反应时，会使得原本不透明的培养基区域变得透明；醋酸会与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸；大多数细菌在体积分数大于 5%的乙醇中会被杀死。回答下列问题： 组分 体积分数为8%的乙醇 碳酸钙 琼脂 米曲汁 含量 40mL 15g 10g 定容至 1000mL (1)从物理性质看，米曲汁乙醇培养基为 培养基，该培养基中能为醋酸菌提供碳源的物质是 ，土壤中微生物数量繁多，种类庞杂，该培养基能筛选出醋酸菌的原因是 。 6 学科网（北京）股份有限公司 (2)某实验小组将富集液进行梯度稀释，分别取10⁴×、10⁹和10⁶倍数的稀释液0.1mL涂布于培养基上, 每个稀释倍数涂布三个平板, 结果各平板的菌落数分别为(39、42、37) (276、291、283),(6、11、9)。三组中适合用于计数的两组为 倍数的稀释液；该方法统计的菌落数量比实际活菌数目 (填“多”或“少”)。为增加实验的信度，应再增设空白对照组，对照组的设计是 。 (3)根据米曲汁乙醇培养基平板上菌落周围的透明圈可初步判断该菌落为醋酸菌，原因是 。为进一步鉴别醋酸菌，可挑选菌落丰厚、边缘整齐、透明圈大的菌落，接种到液体米曲汁乙醇培养基中培养并进行产醋酸实验。 (4)为了进一步挑选出耐酸的醋酸菌，需将 (3)中获得的菌种接种于含 的培养基进行筛选。当氧气充足、 时，醋酸菌能将 ，再将其转变为醋酸。 20.(9分)美国新希望生殖医学中心张进团队于2016年 10月 19日在美国生殖医学学会会议上正式宣布，世界首个细胞核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。下图是该男婴的培育过程示意图，请据图回答问题： (1)上述“三亲婴儿”的核DNA 由 提供，质DNA 由 提供。由此可见，“三亲婴儿”的意义在于可以避免子代 (填“细胞核或细胞质”)遗传病的发生。 (2)为获取更多的卵细胞，需要对女性注射 激素。.过程③的体外进行时需要对精子进行 处理。 (3)过程④是 ，需将受精卵移入发育培养液继续培养。以检查受精状况和受精卵的发育能力。 (4)过程⑤是 技术，取 的滋养层细胞可以对移植前的胚胎进行性别鉴定可采用的鉴定 7 学科网（北京）股份有限公司 方法是 法。 21.(11分)癌胚抗原(CEA)是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克隆抗体来诊断癌症下图是CEA单克隆抗体的制备过程示意图，回答下列有关问题： (1)制备CEA的单克隆抗体时，首先将 注入小鼠体内，使小鼠产生免疫反应。B过程是动物细胞融合，该过程常用的方法 (至少回答两点) (2)经过多次筛选，最终获得的杂交瘤细胞具有 的特点。 (3)在动物细胞培养过程中，在使用合成培养基时通常需加入 等天然成分；气体环境主要是提供细胞所需的O₂和CO₃，其中O₈用于细胞有氧呼吸，CO₂的作用是 。当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 。 (4)CEA单克隆抗体具主要优点是 。CEA单克隆抗体与抗癌药物偶联后，可以使抗癌药物定向作用于癌细胞，该过程所利用的免疫学原理为 。 22(13分).如图表示培养克隆牛的流程。为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，流程中将Kdm4d(组蛋白去甲基化酶，可以催化组蛋白去甲基化)的mRNA注入重构胚。回答下列问题： 8 学科网（北京）股份有限公司 (1)体外培养牛乳腺细胞需要提供的条件是 、 、营养和气体环境，其中，在使用合 成培养基进行细胞培养时，通常需要加入血清等天然成分，其作用是 。 (2)从B牛采集来的卵母细胞需要在体外培养至 期，才能进行去核操作， “去核”其实是 去除 。 (3)胚胎移植过程中，需要对代孕母牛C进行同期发情处理的目的是 。为使胚胎移植能得 到多个后代，可采用胚胎分割技术将 或囊胚进行分割，在分割囊胚阶段的胚胎时，要注意将 。进行胚胎移植的优势是 。 (4)注入的Kdm4d的mRNA可以 (填“降低”或“提高”)组蛋白的甲基化水平，使细胞发 生表观遗传水平的变异，从而激活被抑制基因的表达。 23.(13分)外泌体是一种大小为30~100nm的细胞外膜囊泡，尤其在癌症的诊断及治疗等领域发 挥重要作用。研究人员构建了含有近红外荧光蛋白 iRFP682基因和外泌体标记蛋白CD63基因的表 达载体。载体构建过程中用到的限制酶的切割位点及部分过程如图所示(Amp表示氨苄青霉素抗性 基因)。请回答下列问题： 启动子 BamHI Not I EcoRI Bgl II AmpR Bgl II 5'-TCCTCCGGATCC EcoRI 终止子 Not I CD63-iRFP682 CTTAAGTCTAGA-5' 启动子 AmpR CD63 终止子 iRFP682 EcoRI 5'-GAATTC-3' 5'-GGATCC-3' 3'-CTTAAG-5' BamHI 3'-CCTAGG-5' 5'-AGATCT-3' 5'-GCGGCCGC-3' Not I BglⅡ 3'-TCTAGA-5' 3'-CGCCGGCG-5' 9 学科网（北京）股份有限公司 (1)为将CD63-iRFP682基因与质粒进行准确和高效地连接，对CD63-iRFP682基因、质粒分别用 、 酶进行切割，破坏的化学键是 ；与只用一种限制酶酶切相比，采用双酶切的目的在于避免 。基因表达载体中启动子的功能是 。 (2)若将该基因片段扩增6次，则消耗 个引物分子。 (3)将构建好的基因表达载体通过 方法导入癌细胞。检测该基因表达载体是否成功导入受体细胞的便捷方法是 。 (4)将目的基因导入大肠杆菌，提取其体内蛋白质注入兔子体内，进一步提取兔子体内的抗体，再与提取的转基因癌细胞外泌体中的蛋白质进行杂交，然后进行电泳。若CD63-iRFP682基因在癌细胞内表达，电泳结果会出现特异性条带，此过程依据的原理是 。 10 学科网（北京）股份有限公司 $11 -13 AC CC D CD DCB DB B14 ACD 15 ABD 16 ABC 17 CD 18 ABD 19（13分)(1)固体 (体积分数为8%的)乙醇（和米曲汁） 体积分数为8%的乙醇具有抑菌作用（大多数 细菌在体积分数为8的乙醇中会被杀死)，而醋酸菌能利用乙醇（合理即可） (2)10和105 少取一空白培养基，接种0.1mL无菌水（或不接种），置于相同条件下培养相同时间（合理即可） (3)醋酸菌发酵产生醋酸，醋酸与碳酸钙反应生成醋酸钙和碳酸，在菌落周围形成透明圈 (4) 高浓度醋酸（或乙醇、pH为酸性） 缺少糖源 乙醇转变为乙醛 20(9分)(1) ①、母亲甲和父亲丙 ②.捐献者乙 ③.细胞质 (2) ①.促性腺激素 ②.获能 (3)早期胚胎培养 (4) ①.胚胎移植 ②.囊胚期 ③.DNA分析法或染色体鉴定法 21(11分)(1)①.癌胚抗原(CEA) ②.电激、聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒等 (2)既能产生CEA抗体，又能无限增殖 (3) ①.血清、血浆②.维持培养液pH ③，接触抑制 (4) ①.特异性强、灵敏度高、可大量制备等 ②抗原和抗体的特异性结合 22(13分)(1) ①.无毒、无菌的环境 ②.适宜的温度、pH和渗透压（可与前一空互换） ③.补充未 知成分，利于动物细胞生长（分裂）（合理即可） (2) ①.MI(或Mm中) ②、纺锤丝一染色体复合物 (3) ①.为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境 ②.桑葚胚 ③.内细胞团均等分割 ④.可以充分发 挥雌性优良个体的繁殖潜力（合理即可） (4)降低 23(13分)(1) ①BamHI、EcoRl ②.Bgn、EcoRI 磷酸二酯键 含目的基因的DNA片段或质粒的自 身环化以及错误（反向)连接 ③.与RNA聚合酶结合，驱动转录 (2)126 (3)显微庄射 在近红外灯下观察细胞是否出现荧光 (4)抗原-抗体杂交（或抗原抗体特异性结合）