专题10 生物技术与工程（4大考点）（黑吉辽蒙专用）2026年高考生物二模分类汇编

**基本信息** 本试卷聚焦生物技术与工程5大核心考点，精选辽宁、内蒙古等多地区高三二模真题，融合深海冷泉微生物、微塑料降解等前沿情境与传统发酵、单克隆抗体制备等应用案例，突出实战性与创新性。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |选择题|38题|发酵工程（微生物培养/传统发酵）、细胞工程（单克隆抗体/植物组织培养）等|以深海冷泉SRB培养装置分析考查发酵工程原理，结合碳源对菌株E产量影响数据表格培养科学思维| |不定项选择|16题|胚胎工程（核移植/胚胎移植）、基因工程（PCR/基因编辑）等|通过CRISPR-Cas9敲除PD-1基因案例考查逻辑分析，关联真题中基因工程综合题命题趋势| |非选择题|1题|基因工程（引物设计/载体构建）|以山羊FTO基因导入水稻实验设计，整合限制酶选择、转化筛选等步骤，体现探究实践核心素养|

专题10生物技术与工程 发酵工程 考点1 1 2 3 4 5 6 7 B B C D D A D 8 9 10 11 12 13 B C AD BC ABC AC 细胞工程 考点2 1 2 3 4 5 6 7 8 B C B D D B B D 9 10 11 12 13 14 15 16 A D D C D C BD ACD 胚胎工程 考点3 1 2 3 4 5 6 7 8 A D B BD ABC AB ABD AC 基因工程 考点4 1 2 3 4 5 6 7 D C B C B B A 8、【答案】(1) 基因文库中获取、人工合成 2 复性 (2) 不属于 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用 显微注射法 (3)GCCAGUAUA (4) 取成熟转基因雌羊分泌的乳汁，利用抗原—抗体杂交 乳汁中是否存在人乳铁蛋白 9、【答案】(1) RNA聚合酶 Ca2+ 能吸收周围环境中 DNA分子 (2) EcoRⅠ和BamHⅠ 密码子具有简并性 (3) b 环状质粒在琼脂糖凝胶中的迁移速率较快 (4)将融合标签从重组蛋白中切除，获得纯净的乳糖酶（去除融合蛋白中的CBD和SspDnaB编码的部分，获得纯净的乳糖酶） 10、【答案】(1) 4种脱氧核苷酸、Taq（或DNA聚合酶或耐高温的DNA聚合酶）、引物 变性、复性、延伸 (2) SalⅠ EcoRⅠ (3)F7与R扩增产物不含启动子（调控序列），荧光蛋白基因不表达 (4)F4、F5、F6 11、【答案】(1) 克隆化培养 HER2与EGFR 融合细胞可以产生两种不同的轻重链，这些轻重链可以随机组合 (2) 5′ 互补 8 有内质网和高尔基体，能正确加工真核蛋白，使其活性更高 提高翻译速度和效率（目的蛋白质表达量相应提高） (3) 细胞毒素 BsADC的双靶点识别机制可同时靶向肿瘤细胞表面的两个抗原，提升药物的肿瘤组织特异性（或“克服只使用一种单克隆抗体构建的ADC交叉耐药问题”） 12、【答案】(1) SmaⅠ和PstⅠ DNA连接酶 (2) 转化 进入大豆细胞，并在大豆细胞内维持稳定和表达 氨苄青霉素 转入空质粒或重组质粒 (3) 生长素和细胞分裂素的比值不同 能 (4)C 13、【答案】(1)D (2) （扩增）缓冲液 引物F和引物R的3'端部分序列互补配对形成双链，两引物其余序列兼起到模板的作用 123 (3) E.coli DNA连接酶连接双链DNA片段平末端的效率要远远低于T4 DNA连接酶 序列比对（或BLAST） (4)愈伤组织 (5) RNAi表达载体的T-DNA片段整合到水稻染色体DNA上并表达 ②③ 14、【答案】(1) 水稻启动子能被水稻的RNA聚合酶识别，驱动FTO基因在水稻细胞中特异性稳定表达 农杆菌Ti质粒上的T-DNA可转移并整合到受体细胞的染色体DNA上 植物细胞的全能性 (2) 筛选出成功导入目的基因（FTO基因）的愈伤组织 便于检测FTO基因是否成功表达，以及对FTO蛋白进行纯化 (3) 排除空载体（T-DNA插入本身）对实验结果的干扰，保证实验结果是由FTO基因表达引起的 丙组的有效穗数、每穗粒数、千粒重均显著高于甲组和乙组，甲组和乙组的相关指标无明显差异 (4) 筛选出能稳定遗传的转基因水稻植株，确认其产量性状的遗传稳定性 转基因水稻的食用安全性和对生态环境的安全性（生物安全风险） 15、【答案】(1) 启动子、目的基因、终止子、复制原点 便于重组DNA分子的筛选 (2)② (3) GCATACAT ATGTATGC 5’ 3600bp和4100bp (4) Cre酶 无（红色）荧光 16、【答案】(1) 细胞 免疫监视 (2)限制 (3)G-T-T-T (4) PX330质粒 作为对照，检测基因编辑治疗癌症的效果 淋巴结（和肌肉）注射重组质粒可减少肿瘤的重量，淋巴结注射效果好于肌肉注射 17、【答案】(1) RNA聚合酶 在肿瘤血管内皮细胞中高表达，在正常血管内皮细胞和其他细胞中低表达/在肿瘤血管内皮细胞中选择性表达 (2) 模板和引物 复性 (3)②④ (4) Xba Ⅰ、Mfe Ⅰ Nhe Ⅰ、EcoR Ⅰ 磷酸二酯键 (5) 更昔洛韦（GCV） HUVEC细胞存活率下降 生物技术的安全性和伦理问题 考点5 1、B 试卷第1页，共3页 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题10 生物技术与工程 5大考点概览 考点01 发酵工程 考点02 细胞工程 考点03 胚胎工程 考点04 基因工程 考点05 生物技术的安全性和伦理问题 发酵工程 考点1 1．(25-26高三下·辽宁朝阳·调研)海洋是生物医药创新的“蓝色宝库”。深海冷泉独特的高压、低温、营养匮乏环境对开发生物医药具有重要意义。冷泉中的化能自养型生物硫酸盐还原菌（SRB）可用于新型抗病毒药物的研发。用于扩大培养SRB的发酵罐，无需添加的装置是（　　） A．高压模拟装置 B．自动补给有机物的装置 C．温度监测装置 D．培养液过滤除菌装置 【答案】B 【详解】A、SRB的原始生存环境为深海高压环境，培养时需要模拟高压条件，因此需要高压模拟装置，A不符合题意； B、SRB为化能自养型生物，可通过氧化无机物获得能量，将CO2等无机物合成自身所需的有机物，无需外界提供有机物，因此无需添加自动补给有机物的装置，B符合题意； C、SRB的原始生存环境为低温环境，培养时需要控制适宜的低温条件，因此需要温度监测装置，C不符合题意； D、扩大培养SRB需要避免杂菌污染，保证培养物的纯度，因此需要培养液过滤除菌装置，D不符合题意。 故选B。 2．（2026届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）下列关于传统发酵食品制作的叙述，正确的是（　　） A．制作葡萄酒时，需对葡萄汁和发酵装置进行高压蒸汽灭菌，以防止杂菌污染 B．制作腐乳时，发酵过程中有多种微生物参与，其中起主要作用的是毛霉 C．制作泡菜时，泡菜坛口的水封结构可营造有氧环境，满足乳酸菌的代谢需求 D．制作红枣醋时，酒精发酵完成后无须通气即可将酒精转化为醋酸 【答案】B 【详解】A、制作葡萄酒的核心菌种是葡萄皮上附着的野生型酵母菌，若对葡萄汁进行高压蒸汽灭菌会杀死目标菌种，无法完成酒精发酵，A错误； B、制作腐乳的发酵过程有毛霉、酵母菌、青霉等多种微生物参与，其中起主要分解作用的是毛霉，B正确； C、乳酸菌是厌氧型微生物，泡菜坛口的水封结构是为了隔绝空气，营造无氧环境满足乳酸菌的发酵需求，C错误； D、将酒精转化为醋酸的菌种是好氧型醋酸菌，酒精发酵完成后需要持续通气才能保证醋酸菌正常代谢产生醋酸，不通气会导致醋酸菌死亡，无法完成醋酸发酵，D错误。 故选B。 3．（吉林长春市2026届高三质量监测）化合物E被广泛应用于医药、食品和化工工业。菌株甲可生产E，E的产量与培养甲的碳源关系密切。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和E产量的影响，结果见表。下列叙述错误的是（    ） 碳源种类 培养后细胞干重（g/L） E产量（g/L） 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 A．培养微生物的实验过程中，可用干热灭菌法对玻璃器皿进行灭菌 B．除碳源外，甲的生长还需要氮源和无机盐等营养物质 C．据表分析，碳源为淀粉时甲无法生产E，可能是甲将淀粉全部用于自身生长 D．表中最适合甲生长的碳源是葡萄糖，表中最适合生产E的碳源是制糖废液 【答案】C 【详解】A、干热灭菌法适用于耐高温、需保持干燥的物品，玻璃器皿可采用该方法灭菌，A正确； B、微生物培养基的基本营养成分包括碳源、氮源、水、无机盐，部分微生物还需要额外添加生长因子，因此除碳源外，菌株甲生长还需要氮源、无机盐等营养，B正确； C、淀粉为碳源时，培养后细胞干重仅为0.01g/L，远低于另外两组，说明菌株甲几乎无法利用淀粉生长，并非将淀粉全部用于自身生长，C错误； D、葡萄糖为碳源时细胞干重最高，说明最适合甲生长；制糖废液为碳源时E产量最高，说明最适合生产E，D正确。 故选C。 4．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）为获得荒漠植物根系周围土壤中的某种优良菌种，研究者利用Ashby固体培养基（见表格）进行选择培养，下列叙述正确的是（　　） 成分 甘露醇 C6H14O6 KH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O CaCO3 琼脂 H2O 用量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 0.1g 5g 20g 定容至1000mL A．应选择荒漠植物根系周围的土壤灭菌后制备土壤稀释液 B．该培养基能为微生物生长提供碳源和氮源等 C．利用平板划线法可获得固氮菌的单菌落并计数 D．筛选得到的菌种可用于荒漠植物微生物肥料的研制 【答案】D 【详解】A、若对土壤进行灭菌会杀死土壤中所有目标菌种，无法后续分离获得目的菌，制备土壤稀释液时不能灭菌土壤，A错误； B、该培养基成分中无含氮的物质，无法为微生物提供氮源，仅能为可自行固氮的微生物提供碳源、无机盐、水等营养，B错误； C、平板划线法可分离获得单菌落，但无法对菌落进行计数，微生物计数需采用稀释涂布平板法，C错误； D、筛选得到的是适应荒漠环境的固氮优良菌种，可固定空气中的氮为植物提供氮源，可用于荒漠植物微生物肥料的研制，D正确。 故选D。 5．（吉林长春市2026届高三质量监测）某同学在实验中用紫色葡萄制作葡萄酒和葡萄醋。下列相关叙述正确的是（    ） A．最初添加的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的1/3 B．随着制酒时间的延长，发酵液的颜色会逐渐变浅 C．制作葡萄醋过程中，酵母菌和乳酸菌能大量繁殖 D．葡萄酒制醋时乙醇会转化为乙醛，乙醛再变为乙酸 【答案】D 【详解】A、制作葡萄酒时，添加的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，预留的1/3空间既可以为酵母菌初期有氧呼吸提供O₂以利于酵母菌繁殖，也能防止发酵过程中发酵液溢出，A错误； B、葡萄酒制作过程中，葡萄皮中的花青素等色素会逐渐溶解进入发酵液，随着制酒时间延长，发酵液颜色会逐渐加深，B错误； C、果醋发酵的菌种是醋酸菌，发酵条件为有氧、30~35℃。酵母菌是兼性厌氧菌，在有氧条件下虽能生存，但醋酸发酵的高酸性、有氧环境会抑制酵母菌大量繁殖；乳酸菌是厌氧菌，在有氧环境中无法生存，因此二者都不能在果醋发酵中大量繁殖，C错误； D、以葡萄酒为原料制醋时糖源不足，醋酸菌可将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸（醋酸），D正确。故选D。 6．（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）下列关于传统发酵技术的叙述正确的是（    ） A．腐乳发酵中利用了毛霉等微生物分泌的蛋白酶 B．制作泡菜时乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸和CO2 C．酿酒过程中葡萄糖可为酵母菌的发酵提供碳源和氮源 D．果醋发酵需在无氧条件下进行，且温度高于果酒发酵 【答案】A 【详解】A、腐乳发酵的主要菌种为毛霉，毛霉等微生物可分泌蛋白酶，将豆腐中的蛋白质分解为小分子肽和氨基酸，该表述正确，A正确； B、乳酸菌为厌氧微生物，无氧呼吸分解葡萄糖的产物只有乳酸，不产生CO₂，B错误； C、葡萄糖的组成元素为C、H、O，不含氮元素，只能为酵母菌发酵提供碳源和能量，无法提供氮源，C错误； D、果醋发酵的菌种是醋酸菌，醋酸菌为好氧细菌，发酵需要在有氧条件下进行，D错误。 故选A。 7．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)螺蛳粉以“鲜、酸、爽、辣”闻名，其核心配料酸笋是由竹笋经乳酸菌、酵母菌、醋酸菌等发酵而成，主要流程如下图。下列叙述不正确的是（　　） A．冷却后接种是为了防止高温导致菌种失活 B．乳酸菌、酵母菌和醋酸菌均可使发酵液pH下降 C．需严格控制发酵条件，否则会影响菌种生长及代谢物形成 D．酵母菌在无氧条件下大量繁殖和发酵，产生的酒精为醋酸发酵提供底物 【答案】D 【详解】A、杀青、漂烫步骤会使原料处于高温状态，若直接接种，高温会破坏乳酸菌、酵母菌、醋酸菌等微生物的蛋白质（酶）结构，导致菌种失活、无法发酵。 因此必须冷却至适宜温度（通常为菌种的最适生长温度，如乳酸菌 20~30℃、酵母菌 28~30℃）后再接种，保证菌种活性，A正确； B、乳酸菌：无氧呼吸产生乳酸，乳酸是酸性物质，直接降低发酵液 pH； 酵母菌：无氧呼吸产生酒精和 CO₂，CO₂溶于水生成碳酸，同时发酵过程中也会产生少量有机酸，使 pH 下降； 醋酸菌：有氧呼吸将酒精转化为醋酸，醋酸是强酸，显著降低发酵液 pH，B正确； C、不同微生物的生长和代谢对环境条件有严格要求： 乳酸菌：无氧、适宜温度（20~30℃）、适宜 pH； 酵母菌：无氧发酵产酒精，有氧条件下大量繁殖，最适温度 18~30℃； 醋酸菌：严格有氧，最适温度 30~35℃，C正确； D、酵母菌的繁殖和发酵对氧气的需求完全不同： 有氧条件：酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖（此时不产生酒精，代谢产物为 CO₂和 H₂O）； 无氧条件：酵母菌进行无氧呼吸，发酵产生酒精（此时繁殖受抑制，仅维持基础代谢），D错误。 故选D。 8．(25-26高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)微塑料是直径小于5毫米的塑料碎片或颗粒，其来源广泛、危害深远。科研人员从长期掩埋塑料垃圾的土壤中分离出了甲、乙两种微塑料降解菌，并利用这两种微塑料降解菌进行了相关实验，实验记录及结果如图所示。下列叙述正确的是（    ） 注：三个实验组的总菌量相同，混合菌组按照1∶1混合；残留率=剩余量/添加量×100%。 A．可使用添加微塑料的牛肉膏蛋白胨培养基从土壤中分离出微塑料降解菌 B．该实验结果显示，甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用 C．该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，且对生态环境无害 D．实验结束后，采用稀释涂布平板法能最快速度统计出培养液中的微生物数量 【答案】B 【详解】A、从土壤中分离出微塑料降解菌，所用培养基应该是以微塑料为唯一碳源，A错误； B、据图可知，混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种，即甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用，B正确； C、该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，但不能证明其对生态环境无害，C错误； D、实验结束后，采用稀释涂布平板法并不能以最快速度统计培养液中的微生物数量，因为要等待菌落数目稳定时才能计数，采用血细胞计数板或细菌计数板，统计结果更快，D错误。 故选B。 9．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）瘤胃是反刍动物（如牛、羊）具有的一种特殊消化器官，其内部生活着多种厌氧微生物，其中一些可高效分解纤维素（注：刚果红可与纤维素形成红色复合物，但不与纤维素水解产物发生此反应）。下列关于“分离瘤胃中纤维素分解菌”的实验操作，说法错误的是（　　） A．利用以纤维素为唯一碳源的选择培养基筛选目的微生物 B．瘤胃中微生物采集、分离和鉴别都应在无氧条件下进行 C．筛选的菌种经梯度稀释后，用划线法接种至刚果红培养基鉴别 D．选择刚果红培养基上产生透明圈的菌落进行纤维素酶活性测定 【答案】C 【详解】A、以纤维素为唯一碳源的培养基可抑制其他微生物生长，仅允许纤维素分解菌存活，从而实现筛选目的，A正确； B、瘤胃微生物为厌氧型，采集、分离和培养均需在无氧环境中进行，否则会导致微生物死亡或失活，B正确； C、梯度稀释法通常用于涂布平板法接种，C错误； D、刚果红培养基上，纤维素分解菌会水解纤维素产生透明圈，透明圈直径越大说明纤维素酶活性越强，故可据此选择菌落进行酶活性测定，D正确。 故选C。 10．不定项选择题（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）苹果树腐烂由苹果树腐烂菌感染引起，为开发生物防治途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆菌，实验流程如下图。相关叙述正确的是（　　） A．过程①取5g土壤加入盛有45mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀 B．过程③应使用固体培养基，用接种环进行接种后，在适宜条件下培养 C．过程③可直接通过观察芽孢杆菌的形状、大小、颜色进行筛选 D．乙组A处长出的菌落直径应大于甲组A处长出的菌落直径 【答案】AD 【详解】A、过程①为土壤稀释的第一步，将5g土壤加入45mL无菌水充分摇匀，可得到稀释10倍（10−1）的土壤稀释液，A正确； B、过程③是梯度稀释后分离单菌落，该流程经过系列梯度稀释，对应稀释涂布平板法，需要用涂布器接种，接种环是平板划线法的接种工具，B错误； C、本实验目的是筛选能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆菌，仅观察菌落的形状、大小、颜色，无法判断该芽孢杆菌是否具有抑菌能力，必须经过抑菌检测才能筛选，C错误； D、甲组 A 处（苹果树腐烂菌）周围接种了芽孢杆菌（B），芽孢杆菌会抑制腐烂菌生长，导致甲组 A 处腐烂菌菌落直径较小，乙组 A 处仅接种苹果树腐烂菌，无芽孢杆菌抑制，其菌落生长不受限制，因此乙组 A 处菌落直径应大于甲组 A 处，D正确。 故选AD。 11．不定项选择题（吉林长春市2026届高三质量监测）DDT（化学式C14H9Cl5）是一种对环境有害、不溶于水的有机氯类杀虫剂。某生物兴趣小组拟通过筛选得到高效降解DDT的细菌，部分过程如下图。下列叙述错误的是（    ） A．接种①可将土壤悬浮液中的微生物分离 B．接种②时使用涂布器挑取候选菌并接种至液体培养基中 C．接种③时应选择DDT含量最高的培养瓶中菌液用于接种 D．接种④能扩大培养筛选出的降解DDT的细菌 【答案】BC 【详解】A、接种①是将土壤悬浮液接种到固体培养基，目的是获得单菌落，可将土壤中微生物分离，A正确； B、挑取培养基上的单菌落（候选菌）需要使用接种环；涂布器仅用于稀释涂布平板法时涂布菌液，不能用来挑取菌落，B错误； C、所有培养瓶初始DDT含量一致，培养后，降解DDT能力越强的菌株，分解的DDT越多，瓶中剩余DDT含量越低，因此应选择DDT含量最低的培养瓶的菌液接种，C错误； D、接种④是连续转接培养，可扩大目的菌的数量，属于降解DDT细菌的扩大培养，D正确。 故选BC。 12．不定项选择题（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量，实验基本步骤如图所示。下列说法错误的是（　　） A．步骤二可以选用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种 B．在适宜环境下培养12小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量 C．若⑤所在部位几乎未检测出微生物，则切掉①～④后的苹果便可放心食用 D．若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量可能越少 【答案】ABC 【详解】A、该实验的目的是探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量以及烂果毒性，要对微生物进行计数，应采用稀释涂布平板法，而平板划线法不能用于计数，A错误； B、不同微生物生长、繁殖速度不同，培养12小时不一定能让所有微生物都形成肉眼可见的菌落，也就不能统计出全部微生物的种类和数量，B错误； C、即使⑤所在部位微生物的数量极少，也不能排除该部位以及①～④部位可能存在少量微生物产生的毒素，所以不能放心食用，C错误； D、若①～⑤菌落种类和数量依次减少，⑤所在部位微生物的数量极少，说明离腐烂部位越远，微生物的种类和数量越少，所以离腐烂部位越远的果肉中毒素含量越低，D正确。 故选ABC。 13．不定项选择题（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟卷）某研究小组从南方红壤（pH=5.0）和东北黑土（pH=7.5）中分离分解尿素的微生物，实验步骤如下。下列叙述错误的是（    ） 注：红壤中尿素分解菌因酸性抑制实际存活率仅为理论值的20%，酚红指示剂在碱性条件下变红。 稀释度 红壤 黑土 103 32 280 104 18 35 105 4 1 A．红壤组稀释度为103时，理论上土壤中尿素分解菌的值约为3.2×106个/g B．若黑土组选择104稀释度计算，其对应土壤中尿素分解菌约为3.5×106个/g C．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 D．可设置牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，判断该培养基是否具有选择作用 【答案】AC 【详解】A、计数时应选择菌落数为30~300个的平板，红壤的稀释倍数应为103，但红壤中尿素分解菌因酸性抑制实际存活率仅为理论值的20%，所以应为3.2×105÷20%=1.6×106个/g，A错误； B、黑土不存在酸性抑制，若黑土组选择104稀释度计算，其对应土壤中尿素分解菌约为3.5×106个/g，B正确； C、筛选分解尿素的细菌时，应以尿素为唯一氮源的选择培养基培养，培养基的成分除了氮源，还有碳源、水、无机盐等，C错误； D、可设置牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，判断该培养基是否具有选择作用，D正确。 故选AC。 细胞工程 考点2 1．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）细胞工程在医疗、动物物种繁殖等方面有着广泛的应用。下列相关叙述正确的是（    ） A．从动物体内取出组织，用酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞 B．核移植技术与干细胞诱导技术结合，可用于修补人体损伤的器官 C．采用胚胎分割技术克隆动物时，可选用细胞未发生分化的囊胚 D．胚胎移植后，经受体孕育的后代，其遗传特性与受体保持基本一致 【答案】B 【详解】A、从动物体内取出组织经酶处理后直接初次培养的细胞是原代细胞，传代细胞是原代培养长满后分瓶进一步培养的细胞，A错误； B、将患者体细胞核移植到去核卵母细胞中构建重构胚，从中获取胚胎干细胞后诱导分化为目标器官，可避免免疫排斥反应，用于修补人体损伤的器官，B正确； C、囊胚阶段细胞已经发生分化，出现了内细胞团和滋养层的细胞差异，桑葚胚阶段的细胞才未发生分化，C错误； D、胚胎移植中受体仅为胚胎提供发育的场所和营养，不提供遗传物质，后代遗传特性与供体基本一致，与受体无关，D错误。 故选B。 2．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）科学家制备抗HPV（人乳头瘤病毒）单克隆抗体用于开发诊断试剂。下列叙述错误的是（    ） A．可用灭活的病毒诱导细胞融合 B．用选择培养基筛选杂交瘤细胞 C．杂交瘤细胞均能产生抗HPV抗体 D．该单克隆抗体识别HPV特定抗原 【答案】C 【详解】A、动物细胞融合的常用诱导方法包括聚乙二醇诱导、电融合法、灭活的病毒诱导法，因此可用灭活的病毒诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，A正确； B、细胞融合后体系中存在未融合的亲本细胞、同种细胞融合的细胞，选择培养基可淘汰上述不需要的细胞，仅筛选出杂交瘤细胞，B正确； C、初步筛选得到的杂交瘤细胞是由多种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的，并非都能产生抗HPV的抗体，还需进行抗体检测和克隆化培养，才能筛选出能分泌抗HPV抗体的杂交瘤细胞，C错误； D、单克隆抗体具有特异性强的特点，只能识别HPV的特定抗原，D正确。 故选C。 3．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）黄酮类物质具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，传统方法将芒果粉碎后萃取和浓缩，生产效率低下，难以满足市场需求。可通过下列哪项技术迅速大量获取？（    ） A．基因工程 B．植物细胞培养 C．植物体细胞杂交 D．发酵工程 【答案】B 【详解】A、基因工程的功能是定向改造生物的遗传性状以获得目标产物，本题中芒果本身可合成黄酮类物质，无需改造其遗传物质，A不符合题意； B、植物细胞培养可通过离体培养芒果的愈伤组织，从培养的细胞中大规模提取次生代谢产物黄酮类物质，可实现快速大量获取的需求，B符合题意； C、植物体细胞杂交的用途是获得融合了双亲遗传物质的杂种植株，不用于生产植物次生代谢产物，C不符合题意； D、发酵工程是利用微生物的代谢活动生产相关产物，黄酮类是植物细胞的代谢产物，无法通过微生物发酵大量获得，D不符合题意。 故选B。 4．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）合体滋养层细胞是由单核的滋养层细胞通过融合形成的多核细胞，该类细胞不具有细胞增殖活力。为构建合体滋养层细胞模型，研究人员使用含不同浓度FSK的培养液培养单核细胞的滋养层细胞，结果如图所示。下列说法正确的是（　　） A．随着FSK溶液浓度升高，细胞融合的效率升高 B．培养过程中需定期更换培养液，以防止发生接触抑制 C．培养过程中需提供含95%和5%的混合气体环境 D．正常发育过程中，滋养层细胞会发育成胎膜和胎盘的一部分 【答案】D 【详解】A、题干明确说明融合形成的合体滋养层细胞不具有增殖活力，因此细胞增殖活力越低，代表融合效率越高。由图可知，FSK浓度从20升高到200的过程中，细胞增殖活力逐渐升高，说明融合效率逐渐降低，并非随FSK浓度升高融合效率一直升高，A错误； B、动物细胞培养中定期更换培养液的作用是清除代谢废物、补充营养物质；接触抑制是细胞贴壁生长接触后停止增殖的现象，无法通过更换培养液避免接触抑制，B错误； C、动物细胞培养的气体环境为95%空气+5%CO2，95%空气可以满足细胞对氧气的需求，C错误； D、哺乳动物胚胎发育的囊胚阶段，滋养层细胞将来正常发育会分化形成胎膜和胎盘的一部分，D正确。 故选D。 5．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）研究人员研究了不同浓度的PEG对大丽花叶片及花瓣原生质体融合的影响，实验结果如表所示。下列说法错误的是（　　） 原生质体种类 PEG浓度/% 融合率/% 原生质体状态 叶片 20 4.95 原生质体破裂较少 30 9.79 原生质体破裂较少 40 7.50 原生质体破裂较多 花瓣 20 11.25 原生质体破裂较少 30 9.25 原生质体破裂较多 40 6.88 原生质体破裂较多 A．实验前可用纤维素酶和果胶酶处理两种细胞的细胞壁获得原生质体 B．表中浓度为20%的PEG溶液诱导大丽花花瓣原生质体融合的效果最好 C．在一定范围内，随PEG浓度升高，叶片原生质体的融合率先升高后降低 D．PEG浓度过高会导致原生质体过度吸水而破裂，降低融合率 【答案】D 【详解】A、植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，依据酶的专一性，实验前可用纤维素酶和果胶酶分解细胞壁，获得有活力的原生质体，A正确； B、由表格数据可知，大丽花花瓣原生质体在PEG浓度为20%时融合率最高，且原生质体破裂较少，因此该浓度诱导花瓣原生质体融合的效果最好，B正确； C、叶片原生质体的融合率在PEG浓度20%时为4.95%，30%时为9.79%，40%时为7.50%，因此实验范围内随PEG浓度升高，叶片原生质体融合率先升高后降低，C正确； D、PEG浓度过高时，外界溶液渗透压高于原生质体内部渗透压，原生质体过度失水破裂，进而降低融合率，并非过度吸水破裂，D错误。 故选D。 6．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）某科研团队在培育铁皮石斛新品种并提取石斛多糖时，分别采用了以下方法：①将铁皮石斛（2n=38）与抗寒的细茎石斛（2n=38）体细胞杂交获得杂种植株；②利用铁皮石斛愈伤组织进行液体悬浮培养规模化提取石斛多糖；③通过农杆菌转化法将冷响应基因导入铁皮石斛愈伤组织获得转基因植株。下列叙述正确的是（　　） A．方法①获得的杂种植株是含有76条染色体的二倍体，可通过减数分裂产生正常配子 B．方法②需控制培养基中的激素比例，以利于愈伤组织增殖和石斛多糖合成 C．方法③需筛选含重组Ti质粒的愈伤组织，经再分化获得抗寒转基因植株 D．三种方法均依赖植物细胞的全能性，为铁皮石斛品种改良提供了新方案 【答案】B 【详解】A、方法①是植物体细胞杂交，获得的杂种植株同时含有铁皮石斛和细茎石斛的两个染色体组，属于染色体数为76的异源四倍体，可通过减数分裂产生正常配子，A错误； B、方法②为愈伤组织液体悬浮培养，培养基中生长素和细胞分裂素的比例会调控愈伤组织的增殖和代谢活动，因此需控制激素比例，保证愈伤组织高效增殖和石斛多糖合成，B正确； C、农杆菌转化法中，仅重组Ti质粒上的T-DNA片段会整合到愈伤组织细胞的染色体DNA中，愈伤组织细胞内不存在完整的重组Ti质粒，需筛选的是成功整合并表达目的基因的愈伤组织，C错误； D、细胞全能性指已分化的细胞发育成完整个体的潜能，方法②仅培养到愈伤组织阶段，未培育为完整植株，不依赖细胞全能性，D错误。 故选B。 7．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)百香果含有百种以上的芳香物质，是世界上已知最芳香的水果之一，但百香果多采用嫁接、扦插等方式进行无性繁殖，易携带母株病毒，导致果实品质下降、产量降低，生产中可采取脱毒处理加以解决。下列叙述正确的是（　　） A．离体的百香果组织必须经过灭菌后才能接种到培养基上 B．百香果的茎尖几乎不含病毒，是培养脱毒苗的理想材料 C．将外植体培养成愈伤组织的过程中要提供适宜光照条件 D．经植物组织培养获得的脱毒试管苗可直接用于大田种植 【答案】B 【详解】A、离体的百香果组织属于外植体，仅需消毒处理即可，灭菌会杀灭外植体自身的活细胞，无法完成后续组织培养过程，A错误； B、百香果茎尖的分生区细胞分裂旺盛，几乎不含病毒，以此为外植体培养可获得脱毒苗，是培育脱毒苗的理想材料，B正确； C、外植体脱分化形成愈伤组织的过程需要避光，光照会抑制愈伤组织的形成，该阶段不需要提供适宜光照，C错误； D、脱毒试管苗长期生长在无菌、人工调控的适宜培养环境中，适应能力弱，需经过炼苗逐步适应外界环境后才可移栽到大田，不能直接用于大田种植，D错误。 故选B。 8．（吉林长春市2026届高三质量监测）研究发现，使用抗CD38单克隆抗体可显著抑制肾移植时发生的免疫排斥反应，该抗体的制备过程和使用的96孔板如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．培养细胞时需在培养液中加入抗生素以清除细胞代谢物 B．筛选②中96孔板的每个孔内应接种多个细胞并对其进行克隆化培养 C．两次筛选后，需将获得的抗CD38抗体在体外条件下大规模培养 D．该鼠源单克隆抗体在使用时存在刺激人体产生新抗体的风险 【答案】D 【详解】A、动物细胞培养时加入抗生素的目的是防止杂菌污染，清除细胞代谢物需要定期更换培养液，A错误； B、筛选②（抗体阳性检测）时，96孔板的每个孔内尽量仅接种1个细胞，后续再进行克隆化培养，才能保证获得的杂交瘤细胞为单一克隆，B错误； C、两次筛选后，需要大规模培养的是能产生抗CD38抗体的杂交瘤细胞，而非直接培养抗体，C错误； D、该抗体是鼠源单克隆抗体，对人体而言属于异源蛋白，可作为抗原刺激人体产生免疫反应，存在使人体产生新抗体的风险，D正确。 故选D。 9．(25-26高三下·辽宁县级重点高中协作体·二模)在利用植物细胞工程大量生产人参皂苷的过程中，以下操作及说法错误的是（    ） A．从人参根等部位获取外植体，经诱导形成愈伤组织，该过程体现了细胞的全能性 B．悬浮培养时，需要控制好温度、pH、溶氧量等条件，以保证细胞正常生长 C．定期更换培养液不仅能补充营养物质，还能减少有害代谢产物的积累 D．为提高人参皂苷的产量，可通过诱变处理悬浮培养的细胞，从而筛选高产突变体 【答案】A 【详解】A、细胞全能性是指已经分化的细胞仍具有发育成完整个体的潜能，外植体经诱导形成愈伤组织仅为脱分化过程，未发育为完整植株，不能体现细胞的全能性，A错误； B、植物细胞悬浮培养时，适宜的温度、pH、溶氧量是细胞正常代谢和生长的必要条件，需控制好相关参数保证细胞正常生长，B正确； C、细胞培养过程中会消耗营养物质，同时积累有害代谢产物抑制细胞生长，定期更换培养液既可补充营养，又能减少有害代谢产物的积累，C正确； D、诱变处理可诱导细胞发生基因突变，基因突变具有不定向性，可从突变细胞中筛选出人参皂苷产量高的突变体，进而提高产量，D正确。 故选A。 10．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）帕金森患者大脑内常出现α-突触核蛋白的聚集。科学家研发了一种单克隆抗体prasinezumab，能与聚集的α-突触核蛋白结合，临床上显示该抗体能缓解部分患者的病症。下列叙述正确的是（　　） A．体内培养杂交瘤细胞时可将其注入小鼠的血液中培养 B．从被α-突触核蛋白免疫的实验动物脾脏中获取的B细胞均能产生prasinezumab C．体外培养杂交瘤细胞时使用松盖培养瓶并将其置于CO2培养箱中以营造95%氧气、5%CO2的气体环境 D．prasinezumab与聚集的α-突触核蛋白结合后可被免疫细胞吞噬消化，该过程与细胞中的溶酶体有关 【答案】D 【详解】A、体内培养杂交瘤细胞时需将细胞注入小鼠腹腔中培养，从腹水中提取单克隆抗体，不能注入血液中培养，A错误； B、从被α-突触核蛋白免疫的实验动物脾脏中获取的B细胞存在多种类型，只有针对α-突触核蛋白的特定浆细胞能产生prasinezumab，B错误； C、体外培养杂交瘤细胞的气体环境为95%空气（提供细胞代谢所需氧气）、5%CO₂（维持培养液pH），C错误； D、prasinezumab作为抗体与抗原（聚集的α-突触核蛋白）结合后会形成沉淀，被吞噬细胞吞噬，吞噬细胞中的溶酶体含有水解酶，可将该复合物消化分解，D正确。 故选D。 11．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）紫杉醇是全球最重要的抗癌药物之一，某研究机构设计了如下两个路径来提取。据此分析正确的是（　　） A．M表示愈伤组织，图示技术均可证明已分化的植物细胞具有全能性 B．紫杉醇属于次生代谢物，是植物基本的生命活动所必需的产物 C．路径一诱导芽的分化所需生长素更多，而诱导根的分化所需细胞分裂素更多 D．路径二振荡操作的目的是使愈伤组织在培养过程中充分分散成单个细胞 【答案】D 【详解】A、路径二是愈伤组织细胞培养，然后从细胞中提取紫杉醇，不能证明高度分化的植物细胞具有全能性，A错误； B、次生代谢不是直接参与生物体的生长和繁殖，不是植物基本的生命活动所必需的产物，而是在特定条件下可以提高生物抵抗逆境的能力，B错误； C、M愈伤组织经过程①形成芽和根，诱导芽的分化所需细胞分裂素更多，而诱导根的分化所需生长素更多，C错误； D、路径二是愈伤组织细胞培养，振荡操作可使愈伤组织在培养过程中充分分散成单个细胞，D正确。 故选D。 12．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）世界上首个体细胞克隆猴是在我国诞生的，培育克隆猴的流程如下图所示。下列有关叙述正确的是（    ） A．克隆猴的成功培育体现了动物细胞具有全能性 B．用灭活的仙台病毒短暂处理，目的是使mRNA和TSA容易进入细胞 C．处理重构胚的目的是调节相关基因表达，提高胚胎的发育率 D．克隆小猴的遗传性状由图中的胎猴以及环境共同决定 【答案】C 【详解】A、克隆猴的成功培育体现了动物细胞核具有全能性，未体现动物细胞具有全能性，A错误； B、用灭活的仙台病毒短暂处理，是为了诱导细胞融合，B错误； C、处理重构胚的目的是调节相关基因表达，提高胚胎的发育率，C正确； D、克隆小猴的核DNA来自供体细胞，但质DNA来自去核卵母细胞和供体细胞，因此克隆小猴的遗传性状由图中的胎猴、母猴以及环境共同决定，D错误。 故选C。 13．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）曲妥珠单抗是一种针对人表皮生长因子受体2（HER2）的人源化单克隆抗体。它能特异性结合肿瘤细胞表面的HER2从而阻断细胞生长信号，并激活免疫系统清除肿瘤细胞。人源化抗体可降低抗体的免疫原性（引发人体免疫反应的能力），其制备过程如图。下列说法错误的是（　　） A．灭活病毒可用于过程A，与其表面的糖蛋白和一些酶有关 B．筛选②过程的原理是细胞增殖及抗体与抗原的特异性结合 C．过程B可利用显微注射法将基因表达载体导入CHO细胞 D．曲妥珠单抗在肿瘤治疗中起到靶向运输抗肿瘤药物的作用 【答案】D 【详解】A、由图可知，A过程为动物细胞的融合，可用灭活病毒诱导法，灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，A正确； B、筛选②过程为克隆化培养和抗体检测，原理是细胞增殖及抗体与抗原的特异性结合，B正确； C、过程B为将目的基因导入受体细胞，当受体细胞为动物细胞时，可利用显微注射法，即可利用显微注射法将基因表达载体导入CHO细胞，C正确； D、由题意可知，曲妥珠单抗能特异性结合肿瘤细胞表面的HER2从而阻断细胞生长信号，并激活免疫系统清除肿瘤细胞，并未运输抗肿瘤药物，D错误。 故选D。 14．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）铁皮石斛富含石斛多糖、石斛碱等成分，具抗氧化、提高免疫力和抗癌等功效，可通过组织培养后移栽的方式进行快速繁殖。下列叙述不正确的是（　　） A．铁皮石斛快速繁殖的生物学原理是植物细胞的全能性 B．植物激素浓度和配比会影响组织培养时细胞发育方向 C．获得长势良好的试管苗后，就可直接移栽入大棚种植 D．可从成熟植株中提取石斛多糖、石斛碱等次生代谢物 【答案】C 【详解】A、植物组织培养利用离体细胞发育成完整植株，其理论基础是植物细胞的全能性，A正确； B、生长素与细胞分裂素等植物激素的浓度比例可调控愈伤组织分化出根或芽，B正确； C、试管苗需经"炼苗"（逐步适应外界环境）后方可移栽，直接移栽易因失水死亡，C错误； D、石斛多糖、石斛碱为植物次生代谢产物，可从成熟植株组织提取，D正确。 故选C。 15．不定项选择题(25-26高三下·辽宁朝阳·调研)下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是（　　） A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B．可以用灭活的病毒诱导W细胞和骨髓瘤细胞融合 C．步骤2的目的是去除不能产生所需抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 【答案】BD 【详解】A、PML蛋白单克隆抗体的制备过程，应用PML蛋白作为抗原间隔多次免疫小鼠，目的是获得更多的能产生PML蛋白抗体的B淋巴细胞，A错误； B、动物细胞（B淋巴细胞，即本题中的W细胞，和骨髓瘤细胞）融合，可以用灭活的病毒诱导，这是单克隆抗体制备中常用的融合诱导方法，B正确； C、根据题意可知步骤1是诱导W细胞与骨髓瘤细胞融合，步骤2是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，C错误； D、根据电泳结果可知应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体，因为孔2中的细胞能特异性产生PML蛋白的抗体，D正确。 故选BD。 16．不定项选择题（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）银杏黄酮可用于心脑血管疾病的治疗。利用银杏愈伤组织生产该物质的过程中，添加茉莉酸甲酯（MeJA）对相关指标的影响，如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．黄酮合成相关基因只在银杏特定组织中存在并表达 B．培养基中激素的浓度及比例会影响愈伤组织的形成和生长 C．MeJA对愈伤组织生长的抑制作用强度与其浓度呈负相关 D．浓度为100mol/L的MeJA会抑制黄酮的产生 【答案】ACD 【详解】A、黄酮合成相关基因在银杏的所有细胞中都存在，只是在特定组织中选择性表达，并非“只在银杏特定组织中存在”，A错误； B、植物组织培养中，培养基中激素的浓度及比例会影响愈伤组织的形成和生长，这是植物组织培养的基本原理，B正确； C、从愈伤组织生长相对值曲线看，MeJA浓度从0到200mol/L时，生长相对值先降后升再降，并非“抑制作用强度与浓度呈负相关”，C错误； D、若浓度为100mol/L的MeJA处理后黄酮含量高于对照组（0mol/L），则说明该浓度的MeJA促进黄酮产生，而非抑制，D错误。 故选ACD。 胚胎工程 考点3 1．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）猪Xist基因仅位于X染色体上。当体细胞中存在两条X染色体时，其中仅一条X染色体上的Xist基因会表达进而导致该染色体失活。已知敲除Xist基因能提高猪核移植胚胎的出生率。下列叙述正确的是（　　） A．推测Xist基因在正常雄猪体细胞中不表达 B．用电融合法将采集的卵母细胞直接与供体细胞融合 C．选择发育至原肠胚的胚胎细胞进行基因敲除最适合 D．同一供体经核移植产生多个子代显著增加了遗传多样性 【答案】A 【详解】A、正常雄猪体细胞性染色体组成为XY，仅含有1条X染色体，由题意可知，只有体细胞存在两条X染色体时Xist基因才会表达，因此正常雄猪体细胞中该基因不表达，A正确； B、进行核移植操作时，需先将采集的卵母细胞培养至减数第二次分裂中期，完成去核处理后才能与供体细胞融合，不能直接用未处理的卵母细胞融合，B错误； C、基因敲除需选择分裂能力强、全能性高的细胞（如受精卵、囊胚期内细胞团细胞），原肠胚细胞分化程度高，不适合进行基因敲除操作，C错误； D、同一供体经核移植产生的子代遗传物质几乎完全与供体一致，属于无性繁殖，不会增加遗传多样性，D错误。 故选A。 2．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）在畜牧业生产上常应用到胚胎移植技术。下列叙述错误的是（　　） A．用于移植的胚胎可来自体外受精、体内受精和核移植等 B．用外源促性腺激素处理供体的目的是使其超数排卵 C．受体不会对来自同种供体的胚胎发生免疫排斥反应 D．经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体保持一致 【答案】D 【详解】A、用于移植的早期胚胎可来自体外受精培育的胚胎、体内受精后冲取的早期胚胎、核移植后培育的重组胚胎等，A正确； B、用外源促性腺激素处理供体雌性个体，可使其排出比自然状态下更多的卵细胞，即实现超数排卵，B正确； C、同种动物的受体对移入子宫的外来供体胚胎基本不发生免疫排斥反应，这是胚胎移植能够成功的重要生理学基础，C正确； D、胚胎的遗传物质由提供胚胎的供体（或供精、供卵的亲本）决定，受体仅为胚胎发育提供场所和营养，不改变胚胎的遗传物质，因此后代遗传特性与受体不一致，D错误。 故选D。 3．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）下列有关胚胎工程理论基础的叙述，正确的是（　　） A．在自然条件下，哺乳动物的受精作用在子宫内完成 B．常以卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体作为受精的标志 C．精子触及透明带的瞬间，透明带发生生理反应，阻止后来的精子进入 D．体外受精需用获能液处理精子使精子获能，常见的获能液有效成分有肝素、Ca2+等 【答案】B 【详解】A、自然条件下，哺乳动物的受精作用在输卵管内完成，子宫是胚胎着床和后续发育的主要场所，A错误； B、常以卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体或观察到雌雄原核作为受精的标志，B正确； C、精子触及卵细胞膜的瞬间，才会触发透明带发生生理反应（透明带反应），阻止后续精子进入，是防止多精入卵的第一道屏障，C错误； D、体外受精时使精子获能的常见有效成分有肝素、Ca²⁺载体等，并非Ca²⁺本身，D错误。 故选B。 4．不定项选择题(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)应用转基因小鼠模型进行化学物质致癌性研究越来越受到重视和认可，目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物的方法之一。该方法以精子作为外源基因载体，使精子携带外源基因进入卵细胞。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列叙述正确的是（　　） A．导入外源基因的精子与卵细胞结合即可完成转化 B．过程②是体外受精，受精的标志是观察到雌、雄原核 C．早期胚胎应选择发育良好、形态正常的原肠胚进行操作 D．过程④胚胎移植之前，无需对代孕母鼠注射免疫抑制剂 【答案】BD 【详解】A、转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，仅仅导入外源基因的精子与卵细胞结合，不能完成转化，A错误； B、过程②是体外受精，受精的标志是在卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体，或观察到雌、雄原核，B正确； C、早期胚胎应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行操作，C错误； D、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，所以过程④胚胎移植之前，无需对代孕母鼠注射免疫抑制剂，D正确。 故选BD。 5．不定项选择题（2026届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）研究人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因导入小香猪体细胞并进行克隆猪的研究，其基本流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．过程①细胞培养液中加入血清的主要目的是调节培养液渗透压 B．过程③“去核”是通过显微操作法将卵母细胞的细胞核去除 C．常用电刺激或聚乙二醇激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育 D．过程⑤实现了早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 【答案】ABC 【详解】A、动物细胞培养时，培养液中加入血清的主要目的是补充细胞生长所必需的、人类尚未完全明确的营养成分（如生长因子等）；调节渗透压主要是培养液中无机盐的作用，A错误； B、体细胞核移植过程中，对卵母细胞去核一般采用显微操作法，但去除的“核”是纺锤体-染色体复合物，而非细胞核，B错误； C、乙醇可以激活重构胚，但聚乙二醇不能激活重构胚，C错误； D、过程⑤表示胚胎移植，胚胎移植实现了早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。 故选ABC。 6．不定项选择题(25-26高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)利用胚胎工程可以快速繁殖产奶量高的奶牛，实际操作中需进行同期发情处理和性别控制技术等进一步提升繁殖效率。据图分析，下列叙述错误的是（    ） A．①过程与人工授精都需对获得的精子先进行获能处理 B．②对应的培养过程中，防止微生物污染属于无毒操作 C．③过程需用到胚胎分割技术，分割前需进行性别鉴定 D．④和⑤过程的受体牛繁殖能力正常，无须有优良性状 【答案】AB 【详解】A、人工授精时，获得的精子在雌性生殖道内完成获能，因此人工授精不需要对获得的精子先进行获能处理，A错误； B、②对应的培养过程中，防止微生物污染属于无菌操作，B错误； C、获得2个遗传物质相同的胚胎，需进行胚胎分割处理，利用胚胎工程的最终目的是获得产奶量高的奶牛，所以分割前需进行性别鉴定，C正确； D、④和⑤过程涉及胚胎移植，受体牛是健康的、繁殖能力正常的即可，无须有优良性状，D正确。 故选AB。 7．不定项选择题（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）某研究团队在应用羊胚胎分割技术时，对桑葚胚采用酶处理辅助分割法，即先用链霉蛋白酶等酶类软化或溶解胚胎的透明带，再进行机械分割。分割胚胎先在体外培养，再移植到受体母羊体内，其整个发育环境与正常胚胎存在差异。下列相关分析错误的是（    ） A．酶处理辅助分割法利用了酶的专一性，其目的是直接为胚胎发育提供营养 B．链霉蛋白酶处理能提高分割成功率，证明透明带的存在会抑制卵裂球细胞全能性 C．发育环境的差异是导致分割胚的发育率和成活率低于正常胚胎的原因之一 D．为消除发育环境的差异，应将分割后的胚胎直接移植回供体羊的子宫内进行体内发育 【答案】ABD 【详解】A、酶处理辅助分割法是先用链霉蛋白酶等酶类软化或溶解胚胎的透明带，再进行机械分割，因此酶处理辅助分割法利用了酶的专一性，其目的是分解桑葚胚中特定的蛋白质，从而降低分割难度，并不是直接为胚胎发育提供营养，A错误； B、结合对A选项的分析可知：链霉蛋白酶处理能提高分割成功率，但不能证明透明带的存在会抑制卵裂球细胞全能性，B错误； C、分割胚胎先在体外培养，再移植到受体母羊体内，其整个发育环境与正常胚胎存在差异，因此发育环境的差异是导致分割胚的发育率和成活率低于正常胚胎的原因之一，C正确； D、为消除发育环境的差异，应将分割后的胚胎直接移植到同种的生理状态相同的受体母羊的子宫内，而不是直接移植回供体羊的子宫内，D错误。 故选ABD。 8．不定项选择题（2026届黑龙江省大庆市高三二模）2006年，东北农业大学以“东北民猪”耳缘皮肤中的成纤维细胞为核供体，成功培育出体细胞克隆猪。下列说法正确的是（　　） A．可用胰蛋白酶处理猪耳缘皮肤组织制成细胞悬液进行细胞培养，获得核供体 B．从屠宰场收集的猪卵巢中采集MⅠ期卵母细胞，经显微操作去核后作为核受体 C．电刺激激活重构胚，体外培养至适宜阶段后移入经发情处理的代孕母猪体内 D．胚胎移植前，对供体和受体进行免疫检查，以免外来胚胎引发免疫排斥反应 【答案】AC 【详解】A、可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理猪耳缘皮肤组织制成细胞悬液进行细胞培养，获得核供体，A正确； B、从卵巢采集的卵子需要在体外培养到MⅡ期，通过显微操作去核后作为受体，B错误； C、用电刺激、Ca2+载体和蛋白酶合成抑制剂等方法都能激活重构胚，体外培养至适宜阶段后移入经发情处理（为胚胎移入受体提供相同的生理环境）的代孕母猪体内，C正确； D、受体母猪对外来胚胎基本不会产生免疫排斥，D错误。 故选AC。 基因工程 考点4 1．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）为鉴定目的基因是否正确插入质粒中，某同学准备设计引物进行PCR鉴定，如图所示为a、b、c3种引物在正确重组质粒中的相应位置，为四环素抗性基因。下列说法错误的是 A．可选择引物a和c进行扩增，来判断目的基因是否插入到质粒中 B．可选择引物b和c进行扩增，来判断目的基因是否正确插入质粒中 C．选择引物a和b进行扩增，若扩增产物约为650 bp，说明基因反向插入质粒中 D．将质粒导入大肠杆菌后，若表现出四环素抗性，说明导入的质粒含有目的基因 【答案】D 【详解】A、选择引物a和c进行扩增，若扩增产物约为750bp，说明目的基因插入质粒中，A正确； B、选择引物b和c进行扩增，若扩增产物约为600bp，说明目的基因正确插入到质粒中，B正确； C、选择引物a和b进行扩增，若目的基因反向插入质粒中，扩增产物约为650bp，C正确； D、将质粒导入大肠杆菌后，若表现出四环素抗性，说明大肠杆菌含有质粒，但无法确定是空载质粒，还是含有目的基因的重组质粒，D错误。 故选D。 2．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试第二次模拟）关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列叙述正确的是（    ） A．PCR扩增DNA片段时DNA双链的解聚原理与细胞内相同 B．耐高温的DNA聚合酶可直接在模板链的3′端从头合成子链 C．电泳可鉴定不同长度的DNA分子是因为它们在凝胶中的迁移速率不同 D．染色后的凝胶条带的位置可以反映DNA分子碱基序列的组成 【答案】C 【详解】A、细胞内DNA双链解聚依赖解旋酶断裂氢键，PCR扩增时DNA双链解聚依赖高温使氢键断裂，二者原理不同，A错误； B、耐高温的DNA聚合酶不能从头合成子链，只能从引物的3′端开始延伸子链，反应体系中需要加入引物才能启动子链合成，B错误； C、DNA分子带负电，在电场作用下向正极迁移，不同长度的DNA分子在凝胶中的迁移速率不同（分子量越小迁移速率越快），因此可通过电泳分离鉴定不同长度的DNA分子，C正确； D、染色后的凝胶条带的位置仅反映DNA分子的分子量（长度）大小，无法反映DNA分子的碱基序列组成，D错误。 故选C。 3．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)基于AI（人工智能）的蛋白质设计方法可以利用现有蛋白质数据库以及机器深度“学习算法”来预测新型蛋白质的结构及功能。下列叙述不正确的是（　　） A．AI可帮助人们更深入了解蛋白质的结构与功能关系 B．AI设计新型蛋白质的过程是按中心法则进行的 C．可以通过改造或合成基因来获得经AI设计的蛋白质 D．AI可帮助人们高效地设计出自然界中没有的蛋白质 【答案】B 【详解】A、AI可通过现有蛋白质数据库和深度学习算法预测蛋白质结构与功能，能帮助人们更深入理解蛋白质结构和功能的对应关系，A正确； B、中心法则是遗传信息传递和表达的规律，仅适用于遗传信息的复制、转录、翻译等生物学过程，AI设计蛋白质的过程是人工智能的算法运算过程，不遵循中心法则，B错误； C、蛋白质的合成由基因控制，因此可通过改造现有基因或人工合成目的基因，经基因表达得到AI设计的目标蛋白质，符合蛋白质工程的操作思路，C正确； D、AI可突破天然蛋白质的进化限制，根据需求高效设计出自然界原本不存在的、具备特定功能的新型蛋白质，D正确。 故选B。 4．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）下列关于现代生物技术及生物学实验的叙述，正确的是（　　） A．琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的过程中，琼脂糖融化后应立即加入核酸染料，以免凝胶凝固导致染料分布不均 B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 C．DNA粗提取实验中，研磨液中的EDTA（蛋白质变性剂）可抑制DNA酶活性，防止研磨过程中DNA被水解 D．凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 【答案】C 【详解】A、琼脂糖融化后需冷却至50~60℃左右再加入核酸染料，若立即加入，高温会导致染料降解，部分易挥发的核酸染料（如EB）还会挥发造成污染，A错误； B、单细胞蛋白指发酵获得的微生物菌体本身，无需从微生物细胞中提取，直接收集菌体即可得到单细胞蛋白，B错误； C、DNA酶的活性依赖二价金属阳离子作为辅因子，EDTA可螯合二价阳离子，进而抑制DNA酶活性，防止研磨过程中DNA被水解，C正确； D、凝胶载样缓冲液中的指示剂（如溴酚蓝）作用是指示电泳迁移进度，避免样品跑出凝胶，DNA分子的具体位置需要通过核酸染料显色后才能确定，D错误。 故选C。 5．(25-26高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)某研究团队欲通过PCR扩增疟原虫的pfcrt基因部分序列。已知该基因的部分DNA序列如图。研究人员设计了4种引物。F1：5′—ATGCG—3′；F2：5′—CGATA—3′；R1：5′—TGACC—3′；R2：5′—GCATT—3′。以疟原虫pfcrt基因为模板进行PCR后，电泳结果只显示1条与目的基因等长的清晰条带。下列哪组引物组合可成功扩增出目的片段（    ） A．F1和R1 B．F1和R2 C．F2和R1 D．F2和R2 【答案】B 【详解】F引物应为目的基因左侧引物，需与2链互补且方向为5'→3'，R引物为右侧引物，需与1链互补且方向为5'→3'，F1（5'-ATGCG-3'）与模板DNA2链的3'-TACGC-5'互补，R2（5'-GCATT-3'）与模板DNA1链的3'-CGTAA-5'互补，即F1序列与1链左侧5'-ATGCG-3'序列相同，R2序列与2链右侧3'-TTACG-5'序列相同。F1和R2可以分别与模板DNA的两端互补配对，从而扩增出完整目的片段，其他引物组合无法与模板DNA的两端同时互补配对，因此无法成功扩增出目的片段，B正确，ACD错误。 故选B。 6．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）黄色荧光蛋白与绿色荧光蛋白相比，只是第203位的苏氨酸变成了酪氨酸，科学家根据两种蛋白质结构上的差异，改造绿色荧光蛋白基因，获得了黄色荧光蛋白。下列叙述错误的是（    ） A．上述获得黄色荧光蛋白的过程属于蛋白质工程 B．由于酪氨酸有两种密码子，必须合成出两种碱基序列的基因 C．筛选重组DNA是该技术的重要操作之一 D．蛋白质的功能是设计蛋白质结构的依据 【答案】B 【详解】A、科学家通过改造绿色荧光蛋白基因获得黄色荧光蛋白，该过程以蛋白质结构为基础定向修改基因，符合蛋白质工程的定义（通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造新蛋白质），A正确； B、酪氨酸有2种密码子（UAU、UAC），但改造基因时只需选择其中一种密码子合成对应的碱基序列即可，无需合成两种（实际操作中根据宿主细胞偏好性选择最优密码子），B错误； C、蛋白质工程需将改造后的基因导入受体细胞表达，过程中涉及重组DNA的构建和筛选（如利用标记基因筛选成功重组的载体），C正确； D、蛋白质工程的核心是依据预期功能设计蛋白质结构，再反向推导基因序列进行修饰或合成，D正确。 故选B。 7．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）DNA的粗提取和鉴定实验用到了多种试剂。下列相关叙述错误的是（    ） A．研磨时加入清水研磨有利于DNA的释放 B．95%的酒精预冷能加快DNA的析出 C．2mol/L的NaCl溶液中DNA的溶解度较高 D．鉴定DNA时，实验组和对照组都要加入二苯胺试剂 【答案】A 【详解】A、研磨时需加入研磨液进行研磨，A错误； B、DNA在95%的冷酒精中溶解度小，95%的酒精预冷能加快DNA的析出，B正确； C、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2 mol/L的NaCl溶液中 DNA的溶解度较高，C正确； D、鉴定DNA时，实验组和对照组要各加入2 mol/L的NaCl 溶液5mL，将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中﹐然后向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂，D正确。 故选A。 8．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）山羊乳中β-乳球蛋白（BLG）是一种主要致敏原，为避免山羊乳过敏，研究人员利用CRISPR/Cas9系统敲除了山羊乳腺细胞中BLG基因，同时在相应位点导入人乳铁蛋白（hLF）基因。如图为利用该技术获得转基因山羊的操作过程。回答下列问题： (1)hLF基因可以通过________（答出一点）以及PCR扩增的方式获取。通过PCR仪扩增hLF基因，需要________种引物，其在________这一步骤中能与hLF基因母链进行碱基互补配对。 (2)过程①的转基因操作________（填“属于”或“不属于”）蛋白质工程。过程②的目的是________，其方法是________。 (3)在sgBLG/Cas9复合物中，sgBLG为能准确识别图中山羊DNA特定序列的RNA，并引导Cas9蛋白对DNA进行切割，复合物1所识别的DNA序列为5′-TATACTGGC-3′，则sgBLG的序列为5′-________-3′。 (4)为了检测得到的转基因母羊导入目的基因是否成功表达，应取________，检测________。 【答案】(1) 基因文库中获取、人工合成 2 复性 (2) 不属于 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用 显微注射法 (3)GCCAGUAUA (4) 取成熟转基因雌羊分泌的乳汁，利用抗原—抗体杂交 乳汁中是否存在人乳铁蛋白 【详解】（1）在转基因过程中，目的基因获取的方法有从基因文库中获取、人工合成、利用PCR技术扩增等。PCR扩增需要两种引物，分别与目的基因的两条模板链互补配对。在PCR的流程包括：变性、复性、延伸，复性过程中引物与模板链结合。 （2）过程①是将hLF基因导入山羊乳腺细胞中，同时敲除BLG基因，这属于基因工程操作，而非蛋白质工程。 过程②是将重组DNA导入母羊乙的成纤维细胞中，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法。 （3）因为sgBLG为能准确识别图中山羊DNA特定序列的RNA，根据碱基互补配对原则（A与U配对、T与A配对、G与C配对），复合物1所识别的DNA序列为5’—TATACTGGC—3’，则sgBLG的序列为3’—AUAUGACCG—5’。 （4）为了检测得到的转基因羊导入目的基因是否成功表达，可采用抗原—抗体杂交技术。从转基因成熟雌羊分泌的乳汁中提取蛋白质，进行抗原—抗体杂交。若出现杂交带，说明目的基因（人乳铁蛋白基因）成功表达产生了人乳铁蛋白；若未出现杂交带，则说明目的基因未成功表达。 9．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）利用工程菌表达重组蛋白时，蛋白质常以未折叠和无活性的包涵体形式积累。研究人员将乳糖酶基因LacZ(3075 bp)构建至自剪切型表达载体pTWIN1(注：CBD、Ssp DnaB与LacZm形成融合基因CSL，其中CBD编码的标签蛋白具有几丁质结合活性。Ssp DnaB编码内含肽，具有自我切割能力，能在特定条件下将自身与目标蛋白切割开)，其构建过程如图所示。构建完成后，将重组质粒转入大肠杆菌，经诱导表达、纯化，制备无标签乳糖酶。回答下列问题。 (1)启动子位于基因的上游，是___________识别和结合的部位，图中将基因表达载体导入大肠杆菌的方法是用___________处理大肠杆菌细胞，使其处于一种___________的生理状态。 (2)研究人员首先对乳糖酶基因(LacZ)进行了扩增，为保证LacZ基因能与质粒pUC18正确连接，设计引物时需要在图中LacZ基因左右两侧引物的5＇端分别添加___________的识别序列。原LacZ基因中含有一个Bam H Ⅰ切割位点序列GGATCC，通过引物设计将其替换为GAGTCC，获得了基因LacZm，其编码的氨基酸与LacZ相同，原因是___________。 (3)将基因LacZm用限制酶酶切后与克隆载体pUC18进行重组，进而构建至表达载体pTWIN1中，从而获得原核表达重组质粒pTWIN1-LacZm。对重组质粒pTWIN1-LacZm进行双酶切，然后电泳，得到的结果如图所示(泳道1为分子量Marker，泳道2为pTWIN1-LacZm酶切产物，泳道3为未酶切的pTWIN1-LacZm)。电泳图中代表LacZm基因的条带是___________(填“a”“b”或“c”)。未酶切重组质粒分子量大于其酶切产物，然而电泳图谱显示结果却相反，其原因是___________。 (4)将重组质粒pTWIN1-LacZm导入大肠杆菌，经诱导表达后，破碎细胞、离心、收集上清，制得粗酶液。然后利用几丁质亲和吸附柱对粗酶液进行纯化，纯化后乳糖酶位于吸附柱；加入裂解液，在特定条件下诱导融合蛋白进行自剪切，目的是___________。 【答案】(1) RNA聚合酶 Ca2+ 能吸收周围环境中 DNA分子 (2) EcoRⅠ和BamHⅠ 密码子具有简并性 (3) b 环状质粒在琼脂糖凝胶中的迁移速率较快 (4)将融合标签从重组蛋白中切除，获得纯净的乳糖酶（去除融合蛋白中的CBD和SspDnaB编码的部分，获得纯净的乳糖酶） 【详解】（1）启动子是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的上游，是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出 mRNA。将基因表达载体导入大肠杆菌等微生物细胞常用的方法是用Ca2+（或CaCl2）处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态。 （2）要将基因 LacZ 与质粒 pUC18 正确连接，需要用限制酶切割，根据图中质粒 pUC18 上的酶切位点（BamHⅠ和 EcoRⅠ），质粒 pUC18中EcoR Ⅰ的酶切位点位于BamH Ⅰ酶切位点的上游，为保证LacZ基因能与质粒 pUC18正确连接，设计引物时需要在图中LacZ基因左右两侧引物的5′端分别添加EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ的识别序列。原 LacZ 基因中含有一个 BamHⅠ切割位点序列 GGATCC，通过引物设计将其替换为 GAGTCC，由于密码子的简并性，即一种氨基酸可能由多种密码子编码，所以替换后编码的氨基酸与 LacZ 相同。 （3）观察电泳图，已知LacZm基因长度为3075bp，根据分子Marker以及各泳道条带位置，b条带对应的分子量在3000左右，符合LacZm基因的大小，所以代表LacZm基因的条带是b。在琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子的迁移速率与分子的构象等有关，未酶切的重组质粒通常以紧密的环状构象存在，这种构象在凝胶中的迁移速率较快，所以会出现未酶切重组质粒分子量虽大于其酶切产物，但在电泳图谱中迁移速率更快。 （4）构建的重组蛋白是带有融合标签（CBD和SspDnaB编码的部分）的乳糖酶融合蛋白，利用几丁质亲和吸附柱对粗酶液进行纯化后，乳糖酶位于吸附柱上，加入裂解液，在特定条件下诱导融合蛋白进行自剪切，将融合标签从重组蛋白中切除，去除融合蛋白中的CBD和SspDnaB编码的部分，从而获得纯净的、无标签的乳糖酶。 10．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）BCL11A蛋白是一种转录抑制因子，能与γ珠蛋白基因启动子上游的特异性结合位点结合，抑制γ珠蛋白基因的表达。为确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员利用下列多对引物扩增了γ珠蛋白基因上游7种不同长度的片段，分别将这些片段插入载体中并导入受体细胞，一段时间后进行荧光检测，相关信息如图所示。请回答： (1)PCR扩增γ珠蛋白基因上游不同长度片段的过程中，在缓冲体系中除需要加入Mg2+和模板外，还需要添加________（答出两点即可）。PCR每次循环要经历________三步。 (2)据图可知，为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，要在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是________，在R末端添加的序列所对应的限制酶是________。 (3)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞后，含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞均有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白，无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白的原因是________。 (4)若BCL11A蛋白结合位点位于引物F3与F4所对应序列之间的区段上，向培养液中添加适量的雌激素，则含________（选填“F1~F6”）与R扩增产物的受体细胞有荧光。 【答案】(1) 4种脱氧核苷酸、Taq（或DNA聚合酶或耐高温的DNA聚合酶）、引物 变性、复性、延伸 (2) SalⅠ EcoRⅠ (3)F7与R扩增产物不含启动子（调控序列），荧光蛋白基因不表达 (4)F4、F5、F6 【详解】（1）PCR扩增γ珠蛋白基因上游不同长度的片段过程中，在缓冲体系除需要加入Mg2+和模板外，还需要添加的主要成分有dNTP、TaqDNA聚合酶、引物。PCR每次循环要经历变性、复性（退火）和延伸三步。 （2）为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是SalⅠ，与载体上XhoI酶切后的黏性末端相同，在R末端添加的序列所对应的限制酶是EcoRⅠ，与载体上MunⅠ切割后的黏性末端一样，载体上不能用EcoRⅠ进行切割，会破坏荧光蛋白基因，对载体使用限制酶MunⅠ和XhoⅠ切割，对扩增后的产物用限制酶EcoRⅠ和限制酶SalⅠ进行切割，然后在DNA连接酶的催化作用下，连接形成重组载体，且保证目的基因接入载体时启动子和终止子的方向与荧光蛋白基因的启动子和终止子的方向相同。 （3）含F1～F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光，则可能是F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达。 （4）若BCL11A蛋白结合位点位于引物F3与F4在调控序列上所对应序列之间的区段上，F4-R、F5-R、F6-R扩增出来的片段中都不包含BCL11A蛋白结合位点，不会抑制荧光蛋白基因的表达，都会发荧光。 11．（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）抗体是由两条完全相同的重链（H链）和两条完全相同的轻链（L链）连接而成的，两种链近N端可变区（V区），识别结合抗原，近C端是恒定区（C区），结构如图1所示。人表皮生长因子受体-2（HER2）基因和表皮生长因子受体（EGFR）基因是重要的癌基因，在多种肿瘤中共表达，且互相作为旁路耐药通路，大大影响了传统抗体-药物偶联物（ADC）疗法的治疗效果。为了解决这一问题，科研人员构建了双特异性抗体偶联药物（BsADC），同时靶向肿瘤细胞表面HER2和EGFR，实现了对传统ADC疗法的升级。 (1)利用双杂交瘤融合法制备双特异性抗体（如图2）。以传统的单克隆抗体技术制备分别能产生HER2抗体和EGFR抗体的杂交瘤细胞，再将两种杂交瘤细胞融合，需对融合细胞进行_______和抗体检测，与抗原_______出现阳性反应的即为目标细胞。但是此技术制备出的双特异性抗体仍具有较大的随机性，原因是_______。 (2)利用蛋白质工程技术制备双特异性抗体：将HER2抗体和EGFR抗体的轻链与重链可变区DNA序列，通过重叠延伸PCR技术连接在一起，如图3。 根据图4所示的重叠延伸PCR技术原理，为实现DNA片段的精准融合，引物P2的5＇端需要与引物P3的_______端（填“5＇”或“3＇”）序列_______（填“相同”或“互补”）。按照上述原理合成图3所示重组DNA需要设计_______种引物。将融合序列与质粒连接，导入酵母菌获得纯度较高、装配正确的双特异性单链抗体。与大肠杆菌相比，酵母菌作为受体细胞的优势是_______。还需要根据酵母菌偏好的密码子对融合序列进行优化，目的是_______。 (3)HER2与EGFR在多种肿瘤组织中分布不均匀，单靶点治疗可能因无法有效清除低表达靶点的肿瘤细胞，从而诱导适应性耐药及疾病复发。ADC由抗体、接头、药物所组成，其中的“药物”可以是_______、化学药物或放射性物质。与只使用一种单克隆抗体构建的ADC相比，利用HER2-EGFR双抗构建的BsADC的优势在于_______（答出一点即可）。 【答案】(1) 克隆化培养 HER2与EGFR 融合细胞可以产生两种不同的轻重链，这些轻重链可以随机组合 (2) 5′ 互补 8 有内质网和高尔基体，能正确加工真核蛋白，使其活性更高 提高翻译速度和效率（目的蛋白质表达量相应提高） (3) 细胞毒素 BsADC的双靶点识别机制可同时靶向肿瘤细胞表面的两个抗原，提升药物的肿瘤组织特异性（或“克服只使用一种单克隆抗体构建的ADC交叉耐药问题”）。 【详解】（1）单克隆抗体的制备过程，在筛选出杂交瘤细胞后需进行克隆化培养和抗体检测，利用特定抗原（HER2和EGFR）筛选出能产生与之特异性结合的抗体的杂交瘤细胞；在细胞融合后，融合细胞可以产生两种不同的轻重链，这些轻链和重链可以随机组合。 （2）引物的方向均为5'-3'，为构建融合基因，需将引物P2的5'端与引物P3的5'端碱基序列互补；重组DNA中含有4个序列，每个序列需要2种引物，共8种引物；抗体为分泌蛋白，需要内质网和高尔基体的加工和修饰，大肠杆菌为原核生物，不具内质网和高尔基体，但酵母菌为真核生物，具有这两个结构；根据酵母菌偏好的密码子对融合序列进行优化目的是促进目的基因的表达，提高翻译速率。 （3）ADC的药物需要杀伤肿瘤细胞，所以可以是细胞毒素或化学物质等；BsADC的双靶点识别机制可同时靶向肿瘤细胞表面的两个抗原，提高对肿瘤细胞的特异性识别，进而提升药物的杀伤力。 12．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）向大豆中转入高出油率基因可满足人们对大豆油的需求。培育转基因大豆的过程如图所示（AluⅠ、SmaⅠ、HindⅢ和PstⅠ为限制酶，AmpR为氨苄青霉素抗性基因），回答下列问题： (1)若用限制酶同时切割含高出油率基因的DNA和Ti质粒，为保证高出油率基因与质粒的正确连接，选用的限制酶为______切割后的目的基因和Ti质粒需用______连接。 (2)图中③过程通过农杆菌的______作用，使目的基因在________。1号培养基中添加______对农杆菌进行筛选，能在其上生长的农杆菌为______的菌体，因此需要进一步的筛选。 (3)3号、4号培养基的成分不同主要体现在_________，由愈伤组织培养为转基因大豆植株，______（填“能”或“不能”）体现植物细胞的全能性。 (4)在离体的植物器官、组织和细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项操作要求不是必需的______。 A．无菌操作 B．添加营养物质 C．给予适宜光照 D．添加植物激素 【答案】(1) SmaⅠ和PstⅠ DNA连接酶 (2) 转化 进入大豆细胞，并在大豆细胞内维持稳定和表达 氨苄青霉素 转入空质粒或重组质粒 (3) 生长素和细胞分裂素的比值不同 能 (4)C 【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。 【详解】（1）若用限制酶同时切割含高出油率基因的DNA和Ti质粒，为保证高出油率基因与质粒的正确连接，选用的限制酶为SmaⅠ和PstⅠ，由于限制酶AluⅠ会破坏高出油率基因，目的基因上没有限制酶HindⅢ的识别序列，因此不选用限制酶AluⅠ和HindⅢ。切割后的目的基因和Ti质粒需用DNA连接酶连接。 （2）图中③过程通过农杆菌的转化作用，使目的基因进入大豆细胞，并在大豆细胞内维持稳定和表达。在1号培养基中添加氨苄青霉素对农杆菌进行筛选，能在其上生长的农杆菌为转入空质粒或重组质粒的菌体，因此需要进一步的筛选。 （3）3号、4号培养基的成分不同主要体现在生长素和细胞分裂素的比值不同。由愈伤组织培养为转基因大豆植株，能体现植物细胞的全能性。 （4）在离体的植物器官、组织和细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要无菌操作、添加一定的营养物质、添加植物激素，不必需的是给予适宜光照，综上，C项符合题意。 故选C。 13．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）某研究小组利用PCR技术，在不需要加入模板的条件下，合成被间隔区隔开的靶基因反向重复序列（图1靶基因干扰片段），将该序列与特定载体结合可以构建RNAi（RNA干扰）表达载体。在受体细胞中，该序列转录产生hpRNA（空间结构如图2），hpRNA的双链部分（臂）与靶基因具有相同的序列，可诱导靶基因的mRNA特异性降解而抑制靶基因表达。请回答下列问题： I、该小组选择水稻的polIV基因作为靶基因，设计正向引物（引物F），其碱基序列与polIV基因外显子（编码蛋白质区段）部分的60个碱基序列相同。将引物F的3'末端9个碱基替换为其反向互补序列得到反向引物（引物R）。根据基因载体pCAMBIA1301上的酶切位点，分别在引物F和引物R的5'端添加合适的限制酶识别序列，便于靶基因干扰片段插入。 (1)分析图3中引物F的序列和载体信息，下列能正确表示引物R的是（　 　） A．5'—TCTAGA---------------------------CTTGCCCAC—3' B．5'—TCTAGA---------------------------CACCCGTTC—3' C．5'—GGTACC---------------------------CTTGCCCAC—3' D．5'—GGTACC--------------------------CACCCGTTC—3' (2)采用PCR技术扩增polIV基因的干扰片段时，向PCR反应体系中加入H2O、引物F和引物R、4种脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶和_________，不需要加入DNA模板的原因是_________。扩增得到的polIV基因的干扰片段长度为_________个碱基对。 II、用相应限制酶分别对polIV基因的干扰片段和基因表达载体pCAMBIA1301进行双酶切， 再利用T4 DNA连接酶进行连接，获得重组质粒。 (3)E.coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶在作用上的区别是 _________。为了检测构建的重组质粒是否正确，利用PCR技术将整个重组质粒进行扩增，选择大小正确的扩增产物进行基因测序，利用_________工具将测序结果与已知的结果进行比对，若比对成功即为构建正确的RNAi表达载体。 (4)将RNAi表达载体导入农杆菌中，利用农杆菌侵染野生型水稻外植体脱分化后形成的_________，再经过筛选和培养得到转基因水稻植株。 (5)利用X-Gluc对转基因水稻叶片进行β-葡萄糖苷酸酶组织化学活性检测。结果显示，与野生型水稻相比，转基因水稻叶片切口处理后显现出蓝色，说明_________。为了检测RNAi表达载体是否能够抑制靶基因的表达，对靶基因的表达量进行了实时荧光PCR定量检测，下列说法错误的是_________。 ①选择转基因水稻叶片为材料，进行实时荧光PCR来检测靶基因的表达量 ②提取转基因水稻相关组织细胞中的基因组DNA作为实时荧光PCR的模板 ③根据实时荧光PCR的结果，如果转基因水稻的Ct值（PCR产物荧光强度达到设定阈值时的PCR循环数）远低于野生型水稻，则说明RNAi表达载体成功发挥了作用 ④RNAi表达载体转录产生的hpRNA分子环状部分的碱基序列为5'—CACCCGUUC—3' 【答案】(1)D (2) （扩增）缓冲液 引物F和引物R的3'端部分序列互补配对形成双链，两引物其余序列兼起到模板的作用 123 (3) E.coli DNA连接酶连接双链DNA片段平末端的效率要远远低于T4 DNA连接酶 序列比对（或BLAST） (4)愈伤组织 (5) RNAi表达载体的T-DNA片段整合到水稻染色体DNA上并表达 ②③ 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）根据题干“将引物F的3'末端9个碱基替换为其反向互补序列得到反向引物（引物R）”及观察图3可知，引物R的3'端序列与引物F的5'—GAACGGGTG—3'互补，即引物R的3'端序列应为3'—CTTGCCCAC—5'，D正确，ABC错误。 故选D。 （2）PCR反应需在缓冲液中进行，故除了题目中已经给出的物质，还需要缓冲液；不需要加入DNA模板的原因，这是一种特殊的PCR，引物F和引物R的3'端具有互补序列，它们可以作为彼此的模板进行延伸，从而扩增出目的片段。因为引物F的碱基序列与polIV基因外显子部分的60个碱基序列相同，而引物R是由引物F反向互补得到的，两者有9个碱基对的重叠部分，两端又各有6个碱基对的识别序列，故得到的干扰片段长度为60+60-9+6+6=123个。 （3）E.coli DNA连接酶主要连接黏性末端，连接平末端效率较低，T4 DNA连接酶可以连接黏性末端和平末端，所以两者的主要区别是E.coli DNA连接酶连接双链DNA片段平末端的效率要远远低于T4 DNA连接酶；将测序结果与已知的结果进行比对，需要用到序列比对工具。 （4）植物细胞工程中，通常将载体通过农杆菌导入植物细胞中，再利用外植体脱分化形成愈伤组织，之后进行一系列的培养和筛选得到转基因植物。 （5）由图3可知，GUS基因编码β-葡萄糖苷酸酶，该酶可以催化X-Gluc（无色）最终形成蓝色物质。故可利用X-Gluc检测β-葡萄糖苷酸酶活性，野生型水稻通常无GUS基因，不显色；转基因水稻如果含有GUS基因，切口处理后会显蓝色。则说明RNAi表达载体已成功导入并整合到水稻基因组中，且GUS基因在转基因水稻中成功表达。 ①要检测靶基因的表达量，通常使用的检测方法是实时荧光定量 PCR，①正确； ②提取基因组DNA只能检测该基因是否存在或有多少拷贝，但不能检测它表达得高不高，②错误； ③Ct值代表扩增曲线达到阈值的循环数，Ct值越低，表示模板越多，表达量越高，RNAi 的作用是抑制基因表达，如果它成功了，转基因水稻的靶基因 mRNA 应该变少，其 Ct 值应该高于野生型，③错误； ④RNAi表达载体转录产生的hpRNA分子环状部分的碱基序列为引物F的3'末端9个碱基的互补序列，故碱基序列为5'—CACCCGUUC—3'，④正确。 故选②③。 14．（2026届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）为实现水稻产量提升，科研人员尝试将动物来源的肥胖基因FTO的cDNA导入水稻细胞，构建含FTO基因的T-DNA序列（结构如图所示）。科研人员以水稻愈伤组织为受体，采用农杆菌转化法将该T-DNA转入水稻细胞，经植物组织培养技术获得转基因水稻植株，进而探究FTO基因对水稻产量的影响。回答下列问题： (1)选择水稻启动子驱动FTO基因表达的优势是_______。农杆菌转化法中，农杆菌介导转化的原理是_______。水稻愈伤组织发育为完整转基因植株过程的理论基础是_______。 (2)对转化后的水稻愈伤组织进行培养时，需在培养基中添加潮霉素，该操作的目的是_______。Flag是一种常用于蛋白质纯化和检测的短肽标签，其与FTO基因串联后，会表达出“FTO蛋白+Flag标签”的融合蛋白，该设置的目的是_______。 (3)为验证FTO基因的表达能提升水稻产量，科研人员设置三组实验：甲组为非转基因野生型水稻，乙组为转入空载体（仅不含FTO基因）的水稻，丙组为转入上述重组载体的转基因水稻。将三组水稻置于相同且适宜的环境中培养，收获后统计有效穗数、每穗粒数、千粒重。 ①设置乙组实验的目的是_______； ②若实验结果为________，则可证明FTO基因的表达能提升水稻产量。 (4)若将该转基因水稻投入生产，还需进行田间多代种植实验，目的是_______，从生物安全角度分析，还需评估_______。 【答案】(1) 水稻启动子能被水稻的RNA聚合酶识别，驱动FTO基因在水稻细胞中特异性稳定表达 农杆菌Ti质粒上的T-DNA可转移并整合到受体细胞的染色体DNA上 植物细胞的全能性 (2) 筛选出成功导入目的基因（FTO基因）的愈伤组织 便于检测FTO基因是否成功表达，以及对FTO蛋白进行纯化 (3) 排除空载体（T-DNA插入本身）对实验结果的干扰，保证实验结果是由FTO基因表达引起的 丙组的有效穗数、每穗粒数、千粒重均显著高于甲组和乙组，甲组和乙组的相关指标无明显差异 (4) 筛选出能稳定遗传的转基因水稻植株，确认其产量性状的遗传稳定性 转基因水稻的食用安全性和对生态环境的安全性（生物安全风险） 【详解】（1）启动子是RNA聚合酶识别结合的位点，使用水稻自身的启动子，能被水稻的RNA聚合酶识别，驱动FTO基因在水稻细胞中特异性稳定表达；农杆菌转化法中，农杆菌Ti质粒上的T-DNA可转移并整合到受体细胞的染色体DNA上，使目的基因稳定遗传；植物组织培养获得完整植株的理论基础是植物细胞的全能性。 （2）潮霉素抗性基因是标记基因，培养基添加潮霉素可淘汰未导入FTO基因的愈伤组织，筛选出获得目的基因的愈伤组织；Flag标签用于蛋白质的纯化和检测，融合表达后可通过检测标签间接检测FTO，方便目的基因表达的检测和蛋白纯化。 （3）实验中设置转入空载体的乙组，是为了排除空载体（T-DNA插入本身）对实验结果的干扰，保证实验结果是由FTO基因表达引起的；若FTO表达提升产量，则结果为转入FTO的丙组的有效穗数、每穗粒数、千粒重均显著高于甲组和乙组，而未转入FTO基因的甲组、乙组产量无明显差异。 （4）转基因植株初始多为杂合子，多代种植可以筛选出能稳定遗传的转基因水稻植株，确认其产量性状的遗传稳定性；投入生产前，从生物安全角度，需要评估转基因水稻的食用安全性（对人体健康的影响）和生态安全性（对环境、生物多样性的潜在风险）。 15．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）培育转VEGF基因的山羊，有利于提高羊绒产量。但转基因动物含有标记基因可能造成安全性问题。研究者利用Cre/LoxP系统删除标记基因。回答下列问题。 (1)基因表达载体除了含有标记基因外，还应有____（写出两点）等，其中标记基因的作用是____。 (2)如图1所示，Cre酶能切割特定位点形成黏性末端。结合图1和图2分析，Cre酶能将____（填“①”或“②”）中的目标片段删除，并且其余片段末端可以连接形成一个DNA分子。 (3)为保证转化后可删除标记基因并构建P1，图3中引物a和b应添加的LoxP序列分别为5’-____-3’、5’-____-3’（写出已知的8个碱基），同时限制酶识别序列需添加在LoxP序列的____端。用BglⅡ和HindⅢ处理P1并对产物进行电泳鉴定，结果长度为____，说明P1构建成功。 (4)将P1导入山羊皮肤成纤维细胞，经检测VEGF已成功表达。此时还需要____的作用将标记基因删除。利用荧光显微镜观察，结果为____，说明已成功删除标记基因。 【答案】(1) 启动子、目的基因、终止子、复制原点 便于重组DNA分子的筛选 (2)② (3) GCATACAT ATGTATGC 5’ 3600bp和4100bp (4) Cre酶 无（红色）荧光 【详解】（1）基因表达载体的核心组成包括：  启动子：RNA 聚合酶的结合位点，启动目的基因的转录； 目的基因：需要表达的外源基因（本题中为 VEGF 基因）； 终止子：终止转录的 DNA 序列； 复制原点：载体在受体细胞中复制的起点； 标记基因：如抗生素抗性基因、荧光蛋白基因等，作用是筛选出成功导入重组载体的受体细胞（未导入载体的细胞无法在选择培养基上存活，或无荧光信号）。 （2）结合图 1 和图 2 分析：  图 1 显示：Cre 酶识别 LoxP 序列，在5'-GCATACAT...-3'和3'-CGTATGTA...-5'之间剪切，产生黏性末端； 图 2 中，②的两个 LoxP 序列方向一致，Cre 酶剪切后，两个 LoxP 之间的目标片段被删除，剩余的黏性末端可以互补连接，形成完整的 DNA 分子； ①的 LoxP 序列方向相反，Cre 酶剪切后会导致片段倒位，而非删除。因此 Cre 酶能将②中的目标片段删除。 （3）根据图 1，LoxP 序列的已知 8 个碱基为5'-GCATACAT-3'（正链），其互补链为3'-CGTATGTA-5'（即5'-ATGTATGC-3'）。引物 a 和 b 需要添加 LoxP 序列，因此引物 a 添加5'-GCATACAT-3'，引物 b 添加5'-ATGTATGC-3'。限制酶需要识别并切割 DNA，因此其识别序列必须添加在 LoxP 序列的5' 端，才能保证后续酶切操作正常进行。图 3 中，P₁载体总长度为 7700bp，VEGF 基因长度为 5600bp。  用HindⅢ单酶切：载体被切成 1 个片段，长度为 7700bp； 用BglⅡ 和 HindⅢ双酶切：载体被切成 2 个片段： 含 VEGF 的片段：7700bp - 4100bp = 3600bp, 含 LoxP、DsRed、KanR的片段：4100bp（图中标注）因此电泳结果出现3600bp 和 4100bp两个条带，说明 P₁构建成功。 （4）本题利用Cre/LoxP 系统删除标记基因，因此需要Cre 酶识别 LoxP 序列，剪切并删除两个 LoxP 之间的标记基因（DsRed 红色荧光基因、KanR卡那霉素抗性基因）。标记基因包含DsRed 红色荧光基因，若标记基因被成功删除，细胞将不再表达红色荧光蛋白。因此用荧光显微镜观察，结果为无（红色）荧光，说明标记基因已成功删除。 16．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)肿瘤细胞表面的PD-L1蛋白与T细胞表面的受体蛋白PD-1结合，抑制T细胞的活化和增殖，使得肿瘤细胞开启免疫逃逸。为了达到更好的癌症治疗效果，科研人员对此开展系列研究。 (1)机体能通过________免疫杀伤癌细胞，该过程体现了免疫系统的________功能。 (2)科研人员欲通过基因编辑技术（CRISPR-Cas9）敲除T细胞的PD-1基因，以达到治疗癌症的目的。基因编辑CRISPR-Cas9技术系统主要由人工设计的gRNA和Cas9蛋白组成，gRNA可与靶序列特异性结合，Cas9蛋白对靶序列所在DNA进行剪切，gRNA和Cas9蛋白复合体的功能类似于_________酶。 (3)科研人员设计的gRNA能靶向识别PD-1基因，gRNA基因序列与携带Cas9基因的PX330质粒构建重组质粒。其中PX330质粒部分碱基序列及BbsⅠ限制酶识别序列如图1所示。据图1分析，限制酶BbsⅠ切割后质粒b处黏性末端序列（5′→3′）为__________。 (4)研究人员以不同的方式处理黑色素肿瘤小鼠（如图2）。其中注射物Ⅰ为__________，组6的作用为_________。图2中组1、组3和组5的结果说明_________。 【答案】(1) 细胞 免疫监视 (2)限制 (3)G-T-T-T (4) PX330质粒 作为对照，检测基因编辑治疗癌症的效果 淋巴结（和肌肉）注射重组质粒可减少肿瘤的重量，淋巴结注射效果好于肌肉注射 【详解】（1）癌细胞寄生在细胞内，故机体能通过细胞免疫杀伤癌细胞。免疫系统有三大功能，即免疫防御、免疫自稳和免疫监视，其中免疫监视是指机体识别和清除突变细胞、癌变细胞，防止肿瘤发生的功能。 （2）基因编辑CRISPR-Cas9技术中，gRNA与靶序列特异性结合，Cas9蛋白对靶序列所在DNA进行剪切，其功能类似限制酶（限制性核酸内切酶）。 （3）由图1可知，质粒上有a、b两处限制酶Bbs1的识别序列，切割位点在识别序列5'-G-A-A-G-A-C-3'的下游第2个碱基处切断上链，互补链（下链）的切割位点位于识别序列3'-C-T-T-C-T-G-5'的下游第6 碱基处。切割后，b处会形成一对互补的黏性末端5'-G-T-T-T-3'和3'-C-A-A-A-5'，其中3'-C-A-A-A-5'位于a、b之间被切除的片段上，因此切割后质粒b处保留的黏性末端序列为5'-G-T-T-T-3'。 （4）该实验设置了不同处理组，要探究基因编辑治疗癌症的效果，需要有空白对照组，即注射不含gRNA基因的空PX330质粒，即注射物Ⅰ为PX330质粒。组6注射临床已知有效的抗PD-1抗体，作用是作为阳性对照，便于检测基因编辑治疗癌症的效果。从图2中组1、组3和组5的结果看，组1（未处理）肿瘤重量＞组5（肌肉注射重组质粒）＞组3（淋巴结注射重组质粒），说明淋巴结（和肌肉）注射重组质粒可减少肿瘤的重量，淋巴结注射效果好于肌肉注射。 17．（吉林长春市2026届高三质量监测）肿瘤的生长和转移具有血管依赖性，阻断血管生成是遏制肿瘤的有效策略。KDR基因编码的蛋白是肿瘤血管内皮细胞表面的关键受体。病毒的胸苷激酶基因（tk）编码的酶能将无毒性的前体药物更昔洛韦（GCV）转化为毒性物质，导致细胞死亡。为特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞，科研人员拟构建由KDR基因启动子驱动tk表达的重组质粒（KDR-tk），并检测其杀伤效果，部分过程如图。回答下列问题。 限制酶 识别序列和切割位点 Nhe Ⅰ 5′-G↓CTAGC-3′ Mfe Ⅰ 5′-C↓AATTG-3′ Age Ⅰ 5′-A↓CCGGT-3′ EcoR Ⅰ 5′-G↓AATTC-3′ Xba Ⅰ 5′-T↓CTAGA-3′ Hind Ⅲ 5′-A↓AGCTT-3′ (1)启动子是_______识别和结合的部位，因此无启动子的tk无法表达。为达到使用GCV特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞的目的，科研人员从众多启动子中选择了KDR基因启动子序列构建载体，推测是由于KDR基因_______。 (2)向①②两个PCR反应体系中提供的组分不同的有_______。将反应体系放入PCR仪中进行反应，每次循环按序可以分为变性、_______、延伸三步。 (3)图中KDR基因启动子的a链与所在基因的模板链为同一条链，已知b链序列为5′-GAGCATTAAAACTGAA……CGTAGAGTCTGCGCAG-3′，则过程①构建的一对引物序列为_______。 ①5′-GCATTAAAACTGAAGTGAAGTG-3′ ②5′-GCTAGCGAGCATTAAAACTGAA-3′ ③5′-GGTACCCTGCGCAGACTCTACG-3′ ④5′-ACCGGTCTGCGCAGACTCTACG-3′ (4)为保证正确连接，过程④最好选择用限制酶_______处理质粒，选用限制酶_______处理KDR基因启动子-tk，此过程还需用DNA连接酶，其催化连接的化学键是_______。获得的KDR-tk重组质粒，经检测鉴定后导入大肠杆菌体内。 (5)研究人员提取大肠杆菌中的重组质粒，将其导入HUVEC细胞（常用作体外模拟肿瘤的血管内皮细胞系），一段时间后，在转化成功细胞的培养液中加入_______进行培养，于不同时间检测细胞存活率，证明实验成功的实验结果是_______。 【答案】(1) RNA聚合酶 在肿瘤血管内皮细胞中高表达，在正常血管内皮细胞和其他细胞中低表达/在肿瘤血管内皮细胞中选择性表达 (2) 模板和引物 复性 (3)②④ (4) Xba Ⅰ、Mfe Ⅰ Nhe Ⅰ、EcoR Ⅰ 磷酸二酯键 (5) 更昔洛韦（GCV） HUVEC细胞存活率下降 【详解】（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，启动下游基因的转录；实验需要特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞，而KDR基因仅在肿瘤血管内皮细胞中特异性表达（在肿瘤血管内皮细胞中高表达，在正常血管内皮细胞和其他细胞中低表达），其启动子才能驱动tk基因仅在目标细胞中表达，因此选择KDR基因启动子。 （2）PCR是一项体外扩增DNA的技术，①扩增KDR基因启动子，②扩增tk基因，两个PCR体系的模板DNA、引物（与模板链碱基互补配对）均不同；PCR的每一次循环依次分为变性、复性、延伸三步。 （3）已知b链序列为5′−GAGCATTAAAACTGAA……CGTAGAGTCTGCGCAG−3′，PCR引物需要在5'端引入酶切位点，KDR启动子左端需要引入NheⅠ位点，NheⅠ识别序列为5′−GCTAGC−3′，上游引物序列需要匹配b链5'端序列并加上该识别序列，对应②；KDR启动子右端需要引入AgeⅠ位点，AgeⅠ识别序列为5′−ACCGGT−3′，下游引物与b链3'端反向互补，加上识别序列后对应④，因此引物为②和④。 （4）分析题图，NheⅠ切割序列为5′−G↓CTAGC−3′，切割后产生粘性末端5′−CTAG−3′；XbaⅠ切割序列为5′−T↓CTAGA−3′，切割后产生的粘性末端同样是5′−CTAG−3′，二者粘性末端互补，可互相连接，EcoRⅠ切割序列为5′−G↓AATTC−3′，切割后产生粘性末端5′−AATT−3′，MfeⅠ切割序列为5′−C↓AATTG−3′，切割后产生的粘性末端同样是5′−AATT−3′，二者粘性末端互补，可互相连接， 质粒上本身带有XbaⅠ和MfeⅠ两个酶切位点，用XbaⅠ和MfeⅠ双酶切质粒后，质粒产生两个不同的粘性末端，可避免质粒自身环化，保证后续连接方向正确。 融合后的KDR基因启动子tk片段，左端保留KDR启动子的NheⅠ酶切位点，右端保留tk基因的EcoRⅠ酶切位点，因此NheⅠ和EcoRⅠ双酶切处理目的基因，得到的两个粘性末端正好可以和双酶切后的质粒粘性末端互补配对，实现目的基因的定向正确连接；DNA连接酶催化连接的化学键是磷酸二酯键。 （5）tk基因表达的酶可将无毒的更昔洛韦（GCV）转化为毒性物质杀死细胞，因此需要向培养液中加入更昔洛韦（GCV）；若实验成功，tk基因仅在转化成功的肿瘤血管内皮细胞中表达，因此观察到的结果是转化成功的HUVEC细胞存活率显著降低。 生物技术的安全性和伦理问题 考点5 1．（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）线粒体疾病由细胞核或线粒体基因突变所致，常累及神经、肌肉等能量需求高的组织器官。通过诱导多能干细胞（iPS细胞）研究线粒体疾病的流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．可以将特定基因通过转基因技术导入患者成纤维细胞实现重新编程 B．患者iPS细胞分化出的特定靶细胞移植回患者体内会引发免疫排斥 C．基因编辑线粒体DNA纠正突变，可以实现线粒体疾病的个性化治疗 D．iPS细胞不存在治疗性克隆所涉及到的抛弃早期胚胎的伦理争议 【答案】B 【难度】0.65 【来源】考试生物学科试题 【知识点】生物技术中的伦理问题、基因编辑技术、基因治疗 【详解】A、可以将特定基因通过转基因技术导入患者成纤维细胞实现重新编程，进而诱导多能干细胞（iPS细胞）形成，A正确； B、患者iPS细胞分化出的特定靶细胞移植回患者体内一般不会引发免疫排斥，B错误； C、结合图示可知，基因编辑线粒体DNA纠正突变，可以实现线粒体疾病的个性化治疗，实现精准治疗，C正确； D、iPS细胞取自患者的体细胞，是使用病人自身的细胞重编程形成的，用iPS细胞治疗疾病可以避免免疫排斥反应和抛弃早期胚胎的伦理争议，D正确。 故选B。 试卷第1页，共3页 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题10 生物技术与工程 5大考点概览 考点01 发酵工程 考点02 细胞工程 考点03 胚胎工程 考点04 基因工程 考点05 生物技术的安全性和伦理问题 发酵工程 考点1 1．(25-26高三下·辽宁朝阳·调研)海洋是生物医药创新的“蓝色宝库”。深海冷泉独特的高压、低温、营养匮乏环境对开发生物医药具有重要意义。冷泉中的化能自养型生物硫酸盐还原菌（SRB）可用于新型抗病毒药物的研发。用于扩大培养SRB的发酵罐，无需添加的装置是（　　） A．高压模拟装置 B．自动补给有机物的装置 C．温度监测装置 D．培养液过滤除菌装置 2．（2026届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）下列关于传统发酵食品制作的叙述，正确的是（　　） A．制作葡萄酒时，需对葡萄汁和发酵装置进行高压蒸汽灭菌，以防止杂菌污染 B．制作腐乳时，发酵过程中有多种微生物参与，其中起主要作用的是毛霉 C．制作泡菜时，泡菜坛口的水封结构可营造有氧环境，满足乳酸菌的代谢需求 D．制作红枣醋时，酒精发酵完成后无须通气即可将酒精转化为醋酸 3．（吉林长春市2026届高三质量监测）化合物E被广泛应用于医药、食品和化工工业。菌株甲可生产E，E的产量与培养甲的碳源关系密切。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和E产量的影响，结果见表。下列叙述错误的是（    ） 碳源种类 培养后细胞干重（g/L） E产量（g/L） 葡萄糖 3.12 0.15 淀粉 0.01 0.00 制糖废液 2.30 0.18 A．培养微生物的实验过程中，可用干热灭菌法对玻璃器皿进行灭菌 B．除碳源外，甲的生长还需要氮源和无机盐等营养物质 C．据表分析，碳源为淀粉时甲无法生产E，可能是甲将淀粉全部用于自身生长 D．表中最适合甲生长的碳源是葡萄糖，表中最适合生产E的碳源是制糖废液 4．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）为获得荒漠植物根系周围土壤中的某种优良菌种，研究者利用Ashby固体培养基（见表格）进行选择培养，下列叙述正确的是（　　） 成分 甘露醇 C6H14O6 KH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O CaCO3 琼脂 H2O 用量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 0.1g 5g 20g 定容至1000mL A．应选择荒漠植物根系周围的土壤灭菌后制备土壤稀释液 B．该培养基能为微生物生长提供碳源和氮源等 C．利用平板划线法可获得固氮菌的单菌落并计数 D．筛选得到的菌种可用于荒漠植物微生物肥料的研制 5．（吉林长春市2026届高三质量监测）某同学在实验中用紫色葡萄制作葡萄酒和葡萄醋。下列相关叙述正确的是（    ） A．最初添加的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的1/3 B．随着制酒时间的延长，发酵液的颜色会逐渐变浅 C．制作葡萄醋过程中，酵母菌和乳酸菌能大量繁殖 D．葡萄酒制醋时乙醇会转化为乙醛，乙醛再变为乙酸 6．（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）下列关于传统发酵技术的叙述正确的是（    ） A．腐乳发酵中利用了毛霉等微生物分泌的蛋白酶 B．制作泡菜时乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸和CO2 C．酿酒过程中葡萄糖可为酵母菌的发酵提供碳源和氮源 D．果醋发酵需在无氧条件下进行，且温度高于果酒发酵 7．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)螺蛳粉以“鲜、酸、爽、辣”闻名，其核心配料酸笋是由竹笋经乳酸菌、酵母菌、醋酸菌等发酵而成，主要流程如下图。下列叙述不正确的是（　　） A．冷却后接种是为了防止高温导致菌种失活 B．乳酸菌、酵母菌和醋酸菌均可使发酵液pH下降 C．需严格控制发酵条件，否则会影响菌种生长及代谢物形成 D．酵母菌在无氧条件下大量繁殖和发酵，产生的酒精为醋酸发酵提供底物 8．(25-26高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)微塑料是直径小于5毫米的塑料碎片或颗粒，其来源广泛、危害深远。科研人员从长期掩埋塑料垃圾的土壤中分离出了甲、乙两种微塑料降解菌，并利用这两种微塑料降解菌进行了相关实验，实验记录及结果如图所示。下列叙述正确的是（    ） 注：三个实验组的总菌量相同，混合菌组按照1∶1混合；残留率=剩余量/添加量×100%。 A．可使用添加微塑料的牛肉膏蛋白胨培养基从土壤中分离出微塑料降解菌 B．该实验结果显示，甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用 C．该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，且对生态环境无害 D．实验结束后，采用稀释涂布平板法能最快速度统计出培养液中的微生物数量 9．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）瘤胃是反刍动物（如牛、羊）具有的一种特殊消化器官，其内部生活着多种厌氧微生物，其中一些可高效分解纤维素（注：刚果红可与纤维素形成红色复合物，但不与纤维素水解产物发生此反应）。下列关于“分离瘤胃中纤维素分解菌”的实验操作，说法错误的是（　　） A．利用以纤维素为唯一碳源的选择培养基筛选目的微生物 B．瘤胃中微生物采集、分离和鉴别都应在无氧条件下进行 C．筛选的菌种经梯度稀释后，用划线法接种至刚果红培养基鉴别 D．选择刚果红培养基上产生透明圈的菌落进行纤维素酶活性测定 10．不定项选择题（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）苹果树腐烂由苹果树腐烂菌感染引起，为开发生物防治途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆菌，实验流程如下图。相关叙述正确的是（　　） A．过程①取5g土壤加入盛有45mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀 B．过程③应使用固体培养基，用接种环进行接种后，在适宜条件下培养 C．过程③可直接通过观察芽孢杆菌的形状、大小、颜色进行筛选 D．乙组A处长出的菌落直径应大于甲组A处长出的菌落直径 11．不定项选择题（吉林长春市2026届高三质量监测）DDT（化学式C14H9Cl5）是一种对环境有害、不溶于水的有机氯类杀虫剂。某生物兴趣小组拟通过筛选得到高效降解DDT的细菌，部分过程如下图。下列叙述错误的是（    ） A．接种①可将土壤悬浮液中的微生物分离 B．接种②时使用涂布器挑取候选菌并接种至液体培养基中 C．接种③时应选择DDT含量最高的培养瓶中菌液用于接种 D．接种④能扩大培养筛选出的降解DDT的细菌 12．不定项选择题（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量，实验基本步骤如图所示。下列说法错误的是（　　） A．步骤二可以选用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种 B．在适宜环境下培养12小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量 C．若⑤所在部位几乎未检测出微生物，则切掉①～④后的苹果便可放心食用 D．若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量可能越少 13．不定项选择题（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟卷）某研究小组从南方红壤（pH=5.0）和东北黑土（pH=7.5）中分离分解尿素的微生物，实验步骤如下。下列叙述错误的是（    ） 注：红壤中尿素分解菌因酸性抑制实际存活率仅为理论值的20%，酚红指示剂在碱性条件下变红。 稀释度 红壤 黑土 103 32 280 104 18 35 105 4 1 A．红壤组稀释度为103时，理论上土壤中尿素分解菌的值约为3.2×106个/g B．若黑土组选择104稀释度计算，其对应土壤中尿素分解菌约为3.5×106个/g C．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 D．可设置牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，判断该培养基是否具有选择作用 细胞工程 考点2 1．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）细胞工程在医疗、动物物种繁殖等方面有着广泛的应用。下列相关叙述正确的是（    ） A．从动物体内取出组织，用酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞 B．核移植技术与干细胞诱导技术结合，可用于修补人体损伤的器官 C．采用胚胎分割技术克隆动物时，可选用细胞未发生分化的囊胚 D．胚胎移植后，经受体孕育的后代，其遗传特性与受体保持基本一致 2．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）科学家制备抗HPV（人乳头瘤病毒）单克隆抗体用于开发诊断试剂。下列叙述错误的是（    ） A．可用灭活的病毒诱导细胞融合 B．用选择培养基筛选杂交瘤细胞 C．杂交瘤细胞均能产生抗HPV抗体 D．该单克隆抗体识别HPV特定抗原 3．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）黄酮类物质具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，传统方法将芒果粉碎后萃取和浓缩，生产效率低下，难以满足市场需求。可通过下列哪项技术迅速大量获取？（    ） A．基因工程 B．植物细胞培养 C．植物体细胞杂交 D．发酵工程 4．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）合体滋养层细胞是由单核的滋养层细胞通过融合形成的多核细胞，该类细胞不具有细胞增殖活力。为构建合体滋养层细胞模型，研究人员使用含不同浓度FSK的培养液培养单核细胞的滋养层细胞，结果如图所示。下列说法正确的是（　　） A．随着FSK溶液浓度升高，细胞融合的效率升高 B．培养过程中需定期更换培养液，以防止发生接触抑制 C．培养过程中需提供含95%和5%的混合气体环境 D．正常发育过程中，滋养层细胞会发育成胎膜和胎盘的一部分 5．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）研究人员研究了不同浓度的PEG对大丽花叶片及花瓣原生质体融合的影响，实验结果如表所示。下列说法错误的是（　　） 原生质体种类 PEG浓度/% 融合率/% 原生质体状态 叶片 20 4.95 原生质体破裂较少 30 9.79 原生质体破裂较少 40 7.50 原生质体破裂较多 花瓣 20 11.25 原生质体破裂较少 30 9.25 原生质体破裂较多 40 6.88 原生质体破裂较多 A．实验前可用纤维素酶和果胶酶处理两种细胞的细胞壁获得原生质体 B．表中浓度为20%的PEG溶液诱导大丽花花瓣原生质体融合的效果最好 C．在一定范围内，随PEG浓度升高，叶片原生质体的融合率先升高后降低 D．PEG浓度过高会导致原生质体过度吸水而破裂，降低融合率 6．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）某科研团队在培育铁皮石斛新品种并提取石斛多糖时，分别采用了以下方法：①将铁皮石斛（2n=38）与抗寒的细茎石斛（2n=38）体细胞杂交获得杂种植株；②利用铁皮石斛愈伤组织进行液体悬浮培养规模化提取石斛多糖；③通过农杆菌转化法将冷响应基因导入铁皮石斛愈伤组织获得转基因植株。下列叙述正确的是（　　） A．方法①获得的杂种植株是含有76条染色体的二倍体，可通过减数分裂产生正常配子 B．方法②需控制培养基中的激素比例，以利于愈伤组织增殖和石斛多糖合成 C．方法③需筛选含重组Ti质粒的愈伤组织，经再分化获得抗寒转基因植株 D．三种方法均依赖植物细胞的全能性，为铁皮石斛品种改良提供了新方案 7．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)百香果含有百种以上的芳香物质，是世界上已知最芳香的水果之一，但百香果多采用嫁接、扦插等方式进行无性繁殖，易携带母株病毒，导致果实品质下降、产量降低，生产中可采取脱毒处理加以解决。下列叙述正确的是（　　） A．离体的百香果组织必须经过灭菌后才能接种到培养基上 B．百香果的茎尖几乎不含病毒，是培养脱毒苗的理想材料 C．将外植体培养成愈伤组织的过程中要提供适宜光照条件 D．经植物组织培养获得的脱毒试管苗可直接用于大田种植 8．（吉林长春市2026届高三质量监测）研究发现，使用抗CD38单克隆抗体可显著抑制肾移植时发生的免疫排斥反应，该抗体的制备过程和使用的96孔板如图所示。下列叙述正确的是（    ） A．培养细胞时需在培养液中加入抗生素以清除细胞代谢物 B．筛选②中96孔板的每个孔内应接种多个细胞并对其进行克隆化培养 C．两次筛选后，需将获得的抗CD38抗体在体外条件下大规模培养 D．该鼠源单克隆抗体在使用时存在刺激人体产生新抗体的风险 9．(25-26高三下·辽宁县级重点高中协作体·二模)在利用植物细胞工程大量生产人参皂苷的过程中，以下操作及说法错误的是（    ） A．从人参根等部位获取外植体，经诱导形成愈伤组织，该过程体现了细胞的全能性 B．悬浮培养时，需要控制好温度、pH、溶氧量等条件，以保证细胞正常生长 C．定期更换培养液不仅能补充营养物质，还能减少有害代谢产物的积累 D．为提高人参皂苷的产量，可通过诱变处理悬浮培养的细胞，从而筛选高产突变体 10．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）帕金森患者大脑内常出现α-突触核蛋白的聚集。科学家研发了一种单克隆抗体prasinezumab，能与聚集的α-突触核蛋白结合，临床上显示该抗体能缓解部分患者的病症。下列叙述正确的是（　　） A．体内培养杂交瘤细胞时可将其注入小鼠的血液中培养 B．从被α-突触核蛋白免疫的实验动物脾脏中获取的B细胞均能产生prasinezumab C．体外培养杂交瘤细胞时使用松盖培养瓶并将其置于CO2培养箱中以营造95%氧气、5%CO2的气体环境 D．prasinezumab与聚集的α-突触核蛋白结合后可被免疫细胞吞噬消化，该过程与细胞中的溶酶体有关 11．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）紫杉醇是全球最重要的抗癌药物之一，某研究机构设计了如下两个路径来提取。据此分析正确的是（　　） A．M表示愈伤组织，图示技术均可证明已分化的植物细胞具有全能性 B．紫杉醇属于次生代谢物，是植物基本的生命活动所必需的产物 C．路径一诱导芽的分化所需生长素更多，而诱导根的分化所需细胞分裂素更多 D．路径二振荡操作的目的是使愈伤组织在培养过程中充分分散成单个细胞 12．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）世界上首个体细胞克隆猴是在我国诞生的，培育克隆猴的流程如下图所示。下列有关叙述正确的是（    ） A．克隆猴的成功培育体现了动物细胞具有全能性 B．用灭活的仙台病毒短暂处理，目的是使mRNA和TSA容易进入细胞 C．处理重构胚的目的是调节相关基因表达，提高胚胎的发育率 D．克隆小猴的遗传性状由图中的胎猴以及环境共同决定 13．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）曲妥珠单抗是一种针对人表皮生长因子受体2（HER2）的人源化单克隆抗体。它能特异性结合肿瘤细胞表面的HER2从而阻断细胞生长信号，并激活免疫系统清除肿瘤细胞。人源化抗体可降低抗体的免疫原性（引发人体免疫反应的能力），其制备过程如图。下列说法错误的是（　　） A．灭活病毒可用于过程A，与其表面的糖蛋白和一些酶有关 B．筛选②过程的原理是细胞增殖及抗体与抗原的特异性结合 C．过程B可利用显微注射法将基因表达载体导入CHO细胞 D．曲妥珠单抗在肿瘤治疗中起到靶向运输抗肿瘤药物的作用 14．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）铁皮石斛富含石斛多糖、石斛碱等成分，具抗氧化、提高免疫力和抗癌等功效，可通过组织培养后移栽的方式进行快速繁殖。下列叙述不正确的是（　　） A．铁皮石斛快速繁殖的生物学原理是植物细胞的全能性 B．植物激素浓度和配比会影响组织培养时细胞发育方向 C．获得长势良好的试管苗后，就可直接移栽入大棚种植 D．可从成熟植株中提取石斛多糖、石斛碱等次生代谢物 15．不定项选择题(25-26高三下·辽宁朝阳·调研)下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是（　　） A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间 B．可以用灭活的病毒诱导W细胞和骨髓瘤细胞融合 C．步骤2的目的是去除不能产生所需抗体的细胞 D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体 16．不定项选择题（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）银杏黄酮可用于心脑血管疾病的治疗。利用银杏愈伤组织生产该物质的过程中，添加茉莉酸甲酯（MeJA）对相关指标的影响，如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．黄酮合成相关基因只在银杏特定组织中存在并表达 B．培养基中激素的浓度及比例会影响愈伤组织的形成和生长 C．MeJA对愈伤组织生长的抑制作用强度与其浓度呈负相关 D．浓度为100mol/L的MeJA会抑制黄酮的产生 胚胎工程 考点3 1．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）猪Xist基因仅位于X染色体上。当体细胞中存在两条X染色体时，其中仅一条X染色体上的Xist基因会表达进而导致该染色体失活。已知敲除Xist基因能提高猪核移植胚胎的出生率。下列叙述正确的是（　　） A．推测Xist基因在正常雄猪体细胞中不表达 B．用电融合法将采集的卵母细胞直接与供体细胞融合 C．选择发育至原肠胚的胚胎细胞进行基因敲除最适合 D．同一供体经核移植产生多个子代显著增加了遗传多样性 2．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）在畜牧业生产上常应用到胚胎移植技术。下列叙述错误的是（　　） A．用于移植的胚胎可来自体外受精、体内受精和核移植等 B．用外源促性腺激素处理供体的目的是使其超数排卵 C．受体不会对来自同种供体的胚胎发生免疫排斥反应 D．经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体保持一致 3．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026届高三二模）下列有关胚胎工程理论基础的叙述，正确的是（　　） A．在自然条件下，哺乳动物的受精作用在子宫内完成 B．常以卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体作为受精的标志 C．精子触及透明带的瞬间，透明带发生生理反应，阻止后来的精子进入 D．体外受精需用获能液处理精子使精子获能，常见的获能液有效成分有肝素、Ca2+等 4．不定项选择题(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)应用转基因小鼠模型进行化学物质致癌性研究越来越受到重视和认可，目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物的方法之一。该方法以精子作为外源基因载体，使精子携带外源基因进入卵细胞。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列叙述正确的是（　　） A．导入外源基因的精子与卵细胞结合即可完成转化 B．过程②是体外受精，受精的标志是观察到雌、雄原核 C．早期胚胎应选择发育良好、形态正常的原肠胚进行操作 D．过程④胚胎移植之前，无需对代孕母鼠注射免疫抑制剂 5．不定项选择题（2026届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）研究人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因导入小香猪体细胞并进行克隆猪的研究，其基本流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A．过程①细胞培养液中加入血清的主要目的是调节培养液渗透压 B．过程③“去核”是通过显微操作法将卵母细胞的细胞核去除 C．常用电刺激或聚乙二醇激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育 D．过程⑤实现了早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 6．不定项选择题(25-26高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)利用胚胎工程可以快速繁殖产奶量高的奶牛，实际操作中需进行同期发情处理和性别控制技术等进一步提升繁殖效率。据图分析，下列叙述错误的是（    ） A．①过程与人工授精都需对获得的精子先进行获能处理 B．②对应的培养过程中，防止微生物污染属于无毒操作 C．③过程需用到胚胎分割技术，分割前需进行性别鉴定 D．④和⑤过程的受体牛繁殖能力正常，无须有优良性状 7．不定项选择题（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）某研究团队在应用羊胚胎分割技术时，对桑葚胚采用酶处理辅助分割法，即先用链霉蛋白酶等酶类软化或溶解胚胎的透明带，再进行机械分割。分割胚胎先在体外培养，再移植到受体母羊体内，其整个发育环境与正常胚胎存在差异。下列相关分析错误的是（    ） A．酶处理辅助分割法利用了酶的专一性，其目的是直接为胚胎发育提供营养 B．链霉蛋白酶处理能提高分割成功率，证明透明带的存在会抑制卵裂球细胞全能性 C．发育环境的差异是导致分割胚的发育率和成活率低于正常胚胎的原因之一 D．为消除发育环境的差异，应将分割后的胚胎直接移植回供体羊的子宫内进行体内发育 8．不定项选择题（2026届黑龙江省大庆市高三二模）2006年，东北农业大学以“东北民猪”耳缘皮肤中的成纤维细胞为核供体，成功培育出体细胞克隆猪。下列说法正确的是（　　） A．可用胰蛋白酶处理猪耳缘皮肤组织制成细胞悬液进行细胞培养，获得核供体 B．从屠宰场收集的猪卵巢中采集MⅠ期卵母细胞，经显微操作去核后作为核受体 C．电刺激激活重构胚，体外培养至适宜阶段后移入经发情处理的代孕母猪体内 D．胚胎移植前，对供体和受体进行免疫检查，以免外来胚胎引发免疫排斥反应 基因工程 考点4 1．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）为鉴定目的基因是否正确插入质粒中，某同学准备设计引物进行PCR鉴定，如图所示为a、b、c3种引物在正确重组质粒中的相应位置，为四环素抗性基因。下列说法错误的是 A．可选择引物a和c进行扩增，来判断目的基因是否插入到质粒中 B．可选择引物b和c进行扩增，来判断目的基因是否正确插入质粒中 C．选择引物a和b进行扩增，若扩增产物约为650 bp，说明基因反向插入质粒中 D．将质粒导入大肠杆菌后，若表现出四环素抗性，说明导入的质粒含有目的基因 2．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试第二次模拟）关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列叙述正确的是（    ） A．PCR扩增DNA片段时DNA双链的解聚原理与细胞内相同 B．耐高温的DNA聚合酶可直接在模板链的3′端从头合成子链 C．电泳可鉴定不同长度的DNA分子是因为它们在凝胶中的迁移速率不同 D．染色后的凝胶条带的位置可以反映DNA分子碱基序列的组成 3．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)基于AI（人工智能）的蛋白质设计方法可以利用现有蛋白质数据库以及机器深度“学习算法”来预测新型蛋白质的结构及功能。下列叙述不正确的是（　　） A．AI可帮助人们更深入了解蛋白质的结构与功能关系 B．AI设计新型蛋白质的过程是按中心法则进行的 C．可以通过改造或合成基因来获得经AI设计的蛋白质 D．AI可帮助人们高效地设计出自然界中没有的蛋白质 4．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）下列关于现代生物技术及生物学实验的叙述，正确的是（　　） A．琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的过程中，琼脂糖融化后应立即加入核酸染料，以免凝胶凝固导致染料分布不均 B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白 C．DNA粗提取实验中，研磨液中的EDTA（蛋白质变性剂）可抑制DNA酶活性，防止研磨过程中DNA被水解 D．凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 5．(25-26高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)某研究团队欲通过PCR扩增疟原虫的pfcrt基因部分序列。已知该基因的部分DNA序列如图。研究人员设计了4种引物。F1：5′—ATGCG—3′；F2：5′—CGATA—3′；R1：5′—TGACC—3′；R2：5′—GCATT—3′。以疟原虫pfcrt基因为模板进行PCR后，电泳结果只显示1条与目的基因等长的清晰条带。下列哪组引物组合可成功扩增出目的片段（    ） A．F1和R1 B．F1和R2 C．F2和R1 D．F2和R2 6．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）黄色荧光蛋白与绿色荧光蛋白相比，只是第203位的苏氨酸变成了酪氨酸，科学家根据两种蛋白质结构上的差异，改造绿色荧光蛋白基因，获得了黄色荧光蛋白。下列叙述错误的是（    ） A．上述获得黄色荧光蛋白的过程属于蛋白质工程 B．由于酪氨酸有两种密码子，必须合成出两种碱基序列的基因 C．筛选重组DNA是该技术的重要操作之一 D．蛋白质的功能是设计蛋白质结构的依据 7．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）DNA的粗提取和鉴定实验用到了多种试剂。下列相关叙述错误的是（    ） A．研磨时加入清水研磨有利于DNA的释放 B．95%的酒精预冷能加快DNA的析出 C．2mol/L的NaCl溶液中DNA的溶解度较高 D．鉴定DNA时，实验组和对照组都要加入二苯胺试剂 8．（内蒙古兴安盟2026年高三年级下学期模拟）山羊乳中β-乳球蛋白（BLG）是一种主要致敏原，为避免山羊乳过敏，研究人员利用CRISPR/Cas9系统敲除了山羊乳腺细胞中BLG基因，同时在相应位点导入人乳铁蛋白（hLF）基因。如图为利用该技术获得转基因山羊的操作过程。回答下列问题： (1)hLF基因可以通过________（答出一点）以及PCR扩增的方式获取。通过PCR仪扩增hLF基因，需要________种引物，其在________这一步骤中能与hLF基因母链进行碱基互补配对。 (2)过程①的转基因操作________（填“属于”或“不属于”）蛋白质工程。过程②的目的是________，其方法是________。 (3)在sgBLG/Cas9复合物中，sgBLG为能准确识别图中山羊DNA特定序列的RNA，并引导Cas9蛋白对DNA进行切割，复合物1所识别的DNA序列为5′-TATACTGGC-3′，则sgBLG的序列为5′-________-3′。 (4)为了检测得到的转基因母羊导入目的基因是否成功表达，应取________，检测________。 9．（2026届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）利用工程菌表达重组蛋白时，蛋白质常以未折叠和无活性的包涵体形式积累。研究人员将乳糖酶基因LacZ(3075 bp)构建至自剪切型表达载体pTWIN1(注：CBD、Ssp DnaB与LacZm形成融合基因CSL，其中CBD编码的标签蛋白具有几丁质结合活性。Ssp DnaB编码内含肽，具有自我切割能力，能在特定条件下将自身与目标蛋白切割开)，其构建过程如图所示。构建完成后，将重组质粒转入大肠杆菌，经诱导表达、纯化，制备无标签乳糖酶。回答下列问题。 (1)启动子位于基因的上游，是___________识别和结合的部位，图中将基因表达载体导入大肠杆菌的方法是用___________处理大肠杆菌细胞，使其处于一种___________的生理状态。 (2)研究人员首先对乳糖酶基因(LacZ)进行了扩增，为保证LacZ基因能与质粒pUC18正确连接，设计引物时需要在图中LacZ基因左右两侧引物的5＇端分别添加___________的识别序列。原LacZ基因中含有一个Bam H Ⅰ切割位点序列GGATCC，通过引物设计将其替换为GAGTCC，获得了基因LacZm，其编码的氨基酸与LacZ相同，原因是___________。 (3)将基因LacZm用限制酶酶切后与克隆载体pUC18进行重组，进而构建至表达载体pTWIN1中，从而获得原核表达重组质粒pTWIN1-LacZm。对重组质粒pTWIN1-LacZm进行双酶切，然后电泳，得到的结果如图所示(泳道1为分子量Marker，泳道2为pTWIN1-LacZm酶切产物，泳道3为未酶切的pTWIN1-LacZm)。电泳图中代表LacZm基因的条带是___________(填“a”“b”或“c”)。未酶切重组质粒分子量大于其酶切产物，然而电泳图谱显示结果却相反，其原因是___________。 (4)将重组质粒pTWIN1-LacZm导入大肠杆菌，经诱导表达后，破碎细胞、离心、收集上清，制得粗酶液。然后利用几丁质亲和吸附柱对粗酶液进行纯化，纯化后乳糖酶位于吸附柱；加入裂解液，在特定条件下诱导融合蛋白进行自剪切，目的是___________。 10．（内蒙古包头市2026年普通高等学校招生全国统一考试二模）BCL11A蛋白是一种转录抑制因子，能与γ珠蛋白基因启动子上游的特异性结合位点结合，抑制γ珠蛋白基因的表达。为确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员利用下列多对引物扩增了γ珠蛋白基因上游7种不同长度的片段，分别将这些片段插入载体中并导入受体细胞，一段时间后进行荧光检测，相关信息如图所示。请回答： (1)PCR扩增γ珠蛋白基因上游不同长度片段的过程中，在缓冲体系中除需要加入Mg2+和模板外，还需要添加________（答出两点即可）。PCR每次循环要经历________三步。 (2)据图可知，为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，要在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是________，在R末端添加的序列所对应的限制酶是________。 (3)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞后，含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞均有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白，无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白的原因是________。 (4)若BCL11A蛋白结合位点位于引物F3与F4所对应序列之间的区段上，向培养液中添加适量的雌激素，则含________（选填“F1~F6”）与R扩增产物的受体细胞有荧光。 11．（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）抗体是由两条完全相同的重链（H链）和两条完全相同的轻链（L链）连接而成的，两种链近N端可变区（V区），识别结合抗原，近C端是恒定区（C区），结构如图1所示。人表皮生长因子受体-2（HER2）基因和表皮生长因子受体（EGFR）基因是重要的癌基因，在多种肿瘤中共表达，且互相作为旁路耐药通路，大大影响了传统抗体-药物偶联物（ADC）疗法的治疗效果。为了解决这一问题，科研人员构建了双特异性抗体偶联药物（BsADC），同时靶向肿瘤细胞表面HER2和EGFR，实现了对传统ADC疗法的升级。 (1)利用双杂交瘤融合法制备双特异性抗体（如图2）。以传统的单克隆抗体技术制备分别能产生HER2抗体和EGFR抗体的杂交瘤细胞，再将两种杂交瘤细胞融合，需对融合细胞进行_______和抗体检测，与抗原_______出现阳性反应的即为目标细胞。但是此技术制备出的双特异性抗体仍具有较大的随机性，原因是_______。 (2)利用蛋白质工程技术制备双特异性抗体：将HER2抗体和EGFR抗体的轻链与重链可变区DNA序列，通过重叠延伸PCR技术连接在一起，如图3。 根据图4所示的重叠延伸PCR技术原理，为实现DNA片段的精准融合，引物P2的5＇端需要与引物P3的_______端（填“5＇”或“3＇”）序列_______（填“相同”或“互补”）。按照上述原理合成图3所示重组DNA需要设计_______种引物。将融合序列与质粒连接，导入酵母菌获得纯度较高、装配正确的双特异性单链抗体。与大肠杆菌相比，酵母菌作为受体细胞的优势是_______。还需要根据酵母菌偏好的密码子对融合序列进行优化，目的是_______。 (3)HER2与EGFR在多种肿瘤组织中分布不均匀，单靶点治疗可能因无法有效清除低表达靶点的肿瘤细胞，从而诱导适应性耐药及疾病复发。ADC由抗体、接头、药物所组成，其中的“药物”可以是_______、化学药物或放射性物质。与只使用一种单克隆抗体构建的ADC相比，利用HER2-EGFR双抗构建的BsADC的优势在于_______（答出一点即可）。 12．（辽宁名校联盟2026届高三下学期高考模拟）向大豆中转入高出油率基因可满足人们对大豆油的需求。培育转基因大豆的过程如图所示（AluⅠ、SmaⅠ、HindⅢ和PstⅠ为限制酶，AmpR为氨苄青霉素抗性基因），回答下列问题： (1)若用限制酶同时切割含高出油率基因的DNA和Ti质粒，为保证高出油率基因与质粒的正确连接，选用的限制酶为______切割后的目的基因和Ti质粒需用______连接。 (2)图中③过程通过农杆菌的______作用，使目的基因在________。1号培养基中添加______对农杆菌进行筛选，能在其上生长的农杆菌为______的菌体，因此需要进一步的筛选。 (3)3号、4号培养基的成分不同主要体现在_________，由愈伤组织培养为转基因大豆植株，______（填“能”或“不能”）体现植物细胞的全能性。 (4)在离体的植物器官、组织和细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项操作要求不是必需的______。 A．无菌操作 B．添加营养物质 C．给予适宜光照 D．添加植物激素 13．（2026届黑龙江省大庆市高三二模）某研究小组利用PCR技术，在不需要加入模板的条件下，合成被间隔区隔开的靶基因反向重复序列（图1靶基因干扰片段），将该序列与特定载体结合可以构建RNAi（RNA干扰）表达载体。在受体细胞中，该序列转录产生hpRNA（空间结构如图2），hpRNA的双链部分（臂）与靶基因具有相同的序列，可诱导靶基因的mRNA特异性降解而抑制靶基因表达。请回答下列问题： I、该小组选择水稻的polIV基因作为靶基因，设计正向引物（引物F），其碱基序列与polIV基因外显子（编码蛋白质区段）部分的60个碱基序列相同。将引物F的3'末端9个碱基替换为其反向互补序列得到反向引物（引物R）。根据基因载体pCAMBIA1301上的酶切位点，分别在引物F和引物R的5'端添加合适的限制酶识别序列，便于靶基因干扰片段插入。 (1)分析图3中引物F的序列和载体信息，下列能正确表示引物R的是（　 　） A．5'—TCTAGA---------------------------CTTGCCCAC—3' B．5'—TCTAGA---------------------------CACCCGTTC—3' C．5'—GGTACC---------------------------CTTGCCCAC—3' D．5'—GGTACC--------------------------CACCCGTTC—3' (2)采用PCR技术扩增polIV基因的干扰片段时，向PCR反应体系中加入H2O、引物F和引物R、4种脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶和_________，不需要加入DNA模板的原因是_________。扩增得到的polIV基因的干扰片段长度为_________个碱基对。 II、用相应限制酶分别对polIV基因的干扰片段和基因表达载体pCAMBIA1301进行双酶切， 再利用T4 DNA连接酶进行连接，获得重组质粒。 (3)E.coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶在作用上的区别是 _________。为了检测构建的重组质粒是否正确，利用PCR技术将整个重组质粒进行扩增，选择大小正确的扩增产物进行基因测序，利用_________工具将测序结果与已知的结果进行比对，若比对成功即为构建正确的RNAi表达载体。 (4)将RNAi表达载体导入农杆菌中，利用农杆菌侵染野生型水稻外植体脱分化后形成的_________，再经过筛选和培养得到转基因水稻植株。 (5)利用X-Gluc对转基因水稻叶片进行β-葡萄糖苷酸酶组织化学活性检测。结果显示，与野生型水稻相比，转基因水稻叶片切口处理后显现出蓝色，说明_________。为了检测RNAi表达载体是否能够抑制靶基因的表达，对靶基因的表达量进行了实时荧光PCR定量检测，下列说法错误的是_________。 ①选择转基因水稻叶片为材料，进行实时荧光PCR来检测靶基因的表达量 ②提取转基因水稻相关组织细胞中的基因组DNA作为实时荧光PCR的模板 ③根据实时荧光PCR的结果，如果转基因水稻的Ct值（PCR产物荧光强度达到设定阈值时的PCR循环数）远低于野生型水稻，则说明RNAi表达载体成功发挥了作用 ④RNAi表达载体转录产生的hpRNA分子环状部分的碱基序列为5'—CACCCGUUC—3' 14．（2026届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）为实现水稻产量提升，科研人员尝试将动物来源的肥胖基因FTO的cDNA导入水稻细胞，构建含FTO基因的T-DNA序列（结构如图所示）。科研人员以水稻愈伤组织为受体，采用农杆菌转化法将该T-DNA转入水稻细胞，经植物组织培养技术获得转基因水稻植株，进而探究FTO基因对水稻产量的影响。回答下列问题： (1)选择水稻启动子驱动FTO基因表达的优势是_______。农杆菌转化法中，农杆菌介导转化的原理是_______。水稻愈伤组织发育为完整转基因植株过程的理论基础是_______。 (2)对转化后的水稻愈伤组织进行培养时，需在培养基中添加潮霉素，该操作的目的是_______。Flag是一种常用于蛋白质纯化和检测的短肽标签，其与FTO基因串联后，会表达出“FTO蛋白+Flag标签”的融合蛋白，该设置的目的是_______。 (3)为验证FTO基因的表达能提升水稻产量，科研人员设置三组实验：甲组为非转基因野生型水稻，乙组为转入空载体（仅不含FTO基因）的水稻，丙组为转入上述重组载体的转基因水稻。将三组水稻置于相同且适宜的环境中培养，收获后统计有效穗数、每穗粒数、千粒重。 ①设置乙组实验的目的是_______； ②若实验结果为________，则可证明FTO基因的表达能提升水稻产量。 (4)若将该转基因水稻投入生产，还需进行田间多代种植实验，目的是_______，从生物安全角度分析，还需评估_______。 15．（2026届辽宁沈阳市高三下学期二模）培育转VEGF基因的山羊，有利于提高羊绒产量。但转基因动物含有标记基因可能造成安全性问题。研究者利用Cre/LoxP系统删除标记基因。回答下列问题。 (1)基因表达载体除了含有标记基因外，还应有____（写出两点）等，其中标记基因的作用是____。 (2)如图1所示，Cre酶能切割特定位点形成黏性末端。结合图1和图2分析，Cre酶能将____（填“①”或“②”）中的目标片段删除，并且其余片段末端可以连接形成一个DNA分子。 (3)为保证转化后可删除标记基因并构建P1，图3中引物a和b应添加的LoxP序列分别为5’-____-3’、5’-____-3’（写出已知的8个碱基），同时限制酶识别序列需添加在LoxP序列的____端。用BglⅡ和HindⅢ处理P1并对产物进行电泳鉴定，结果长度为____，说明P1构建成功。 (4)将P1导入山羊皮肤成纤维细胞，经检测VEGF已成功表达。此时还需要____的作用将标记基因删除。利用荧光显微镜观察，结果为____，说明已成功删除标记基因。 16．(25-26高三·辽宁鞍山普通高中)肿瘤细胞表面的PD-L1蛋白与T细胞表面的受体蛋白PD-1结合，抑制T细胞的活化和增殖，使得肿瘤细胞开启免疫逃逸。为了达到更好的癌症治疗效果，科研人员对此开展系列研究。 (1)机体能通过________免疫杀伤癌细胞，该过程体现了免疫系统的________功能。 (2)科研人员欲通过基因编辑技术（CRISPR-Cas9）敲除T细胞的PD-1基因，以达到治疗癌症的目的。基因编辑CRISPR-Cas9技术系统主要由人工设计的gRNA和Cas9蛋白组成，gRNA可与靶序列特异性结合，Cas9蛋白对靶序列所在DNA进行剪切，gRNA和Cas9蛋白复合体的功能类似于_________酶。 (3)科研人员设计的gRNA能靶向识别PD-1基因，gRNA基因序列与携带Cas9基因的PX330质粒构建重组质粒。其中PX330质粒部分碱基序列及BbsⅠ限制酶识别序列如图1所示。据图1分析，限制酶BbsⅠ切割后质粒b处黏性末端序列（5′→3′）为__________。 (4)研究人员以不同的方式处理黑色素肿瘤小鼠（如图2）。其中注射物Ⅰ为__________，组6的作用为_________。图2中组1、组3和组5的结果说明_________。 17．（吉林长春市2026届高三质量监测）肿瘤的生长和转移具有血管依赖性，阻断血管生成是遏制肿瘤的有效策略。KDR基因编码的蛋白是肿瘤血管内皮细胞表面的关键受体。病毒的胸苷激酶基因（tk）编码的酶能将无毒性的前体药物更昔洛韦（GCV）转化为毒性物质，导致细胞死亡。为特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞，科研人员拟构建由KDR基因启动子驱动tk表达的重组质粒（KDR-tk），并检测其杀伤效果，部分过程如图。回答下列问题。 限制酶 识别序列和切割位点 Nhe Ⅰ 5′-G↓CTAGC-3′ Mfe Ⅰ 5′-C↓AATTG-3′ Age Ⅰ 5′-A↓CCGGT-3′ EcoR Ⅰ 5′-G↓AATTC-3′ Xba Ⅰ 5′-T↓CTAGA-3′ Hind Ⅲ 5′-A↓AGCTT-3′ (1)启动子是_______识别和结合的部位，因此无启动子的tk无法表达。为达到使用GCV特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞的目的，科研人员从众多启动子中选择了KDR基因启动子序列构建载体，推测是由于KDR基因_______。 (2)向①②两个PCR反应体系中提供的组分不同的有_______。将反应体系放入PCR仪中进行反应，每次循环按序可以分为变性、_______、延伸三步。 (3)图中KDR基因启动子的a链与所在基因的模板链为同一条链，已知b链序列为5′-GAGCATTAAAACTGAA……CGTAGAGTCTGCGCAG-3′，则过程①构建的一对引物序列为_______。 ①5′-GCATTAAAACTGAAGTGAAGTG-3′ ②5′-GCTAGCGAGCATTAAAACTGAA-3′ ③5′-GGTACCCTGCGCAGACTCTACG-3′ ④5′-ACCGGTCTGCGCAGACTCTACG-3′ (4)为保证正确连接，过程④最好选择用限制酶_______处理质粒，选用限制酶_______处理KDR基因启动子-tk，此过程还需用DNA连接酶，其催化连接的化学键是_______。获得的KDR-tk重组质粒，经检测鉴定后导入大肠杆菌体内。 (5)研究人员提取大肠杆菌中的重组质粒，将其导入HUVEC细胞（常用作体外模拟肿瘤的血管内皮细胞系），一段时间后，在转化成功细胞的培养液中加入_______进行培养，于不同时间检测细胞存活率，证明实验成功的实验结果是_______。 生物技术的安全性和伦理问题 考点5 1．（2026届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）线粒体疾病由细胞核或线粒体基因突变所致，常累及神经、肌肉等能量需求高的组织器官。通过诱导多能干细胞（iPS细胞）研究线粒体疾病的流程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．可以将特定基因通过转基因技术导入患者成纤维细胞实现重新编程 B．患者iPS细胞分化出的特定靶细胞移植回患者体内会引发免疫排斥 C．基因编辑线粒体DNA纠正突变，可以实现线粒体疾病的个性化治疗 D．iPS细胞不存在治疗性克隆所涉及到的抛弃早期胚胎的伦理争议 试卷第1页，共3页 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $