精品解析：山东省实验中学2025-2026学年第二学期期中高二生物试题

山东省实验中学2025~2026学年第二学期期中高二生物试题 说明：本试卷满分100分，分为选择题和非选择题两部分，选择题为第1题至第30题，非选择题为第31题至第33题。试题答案请用2B铅笔或0.5mm签字笔填涂到答题卡规定位置上，书写在试题上的答案无效。考试时间90分钟。 第Ⅰ卷（共70分） 一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 某同学对“果酒和果醋的制作”实验改进如图所示，下列说法错误的是（ ） A. 将苹果梨进行酶解能充分释放梨汁和糖分，使后续发酵更容易 B. 为缩短制作时间，可分别人工接种酵母菌和醋酸菌 C. 装置1的甲不仅可阻止外界空气进入，还便于排出果醋发酵产生的气体 D. 装置2的乙可维持瓶中气压相对稳定，并可检测是否产生CO2 2. 在家庭制作泡菜过程中，充分利用各种微生物生存条件和代谢特点达到积累乳酸菌、抑制其他微生物生长的目的。关于发酵过程的叙述正确的是（ ） A. 为了避免杂菌污染，泡菜坛需严格灭菌处理，盐水需煮沸冷却待用 B. 晾干的新鲜蔬菜可以装满泡菜坛，因为乳酸菌无氧呼吸仅产生乳酸，没有气体生成 C. 乳酸菌产生的乳酸既可以抑制其他微生物生长繁殖，也会抑制自身生长繁殖 D. 因亚硝酸盐会随着发酵时间的延长越积越多，为了自身健康，应尽量少食用泡菜 3. 从海水样本中分离粘质沙雷氏菌时，所用的海生菌肉汤培养基的成分如表所示。下列叙述错误的是（　　） 蛋白胨 5.00 g·L-1 MgCl2 5.90 g·L-1 NaHCO3 0.16 g·L-1 酵母提取物 1.00 g·L-1 Na₂SO4 3.24 g·L-1 KBr 0.08 g·L-1 柠檬酸铁 0.10 g·L-1 CaCl2 1.80 g·L-1 SrCl2 34.00 g·L-1 NaCl 19.45 g·L-1 KCl 0.55 g·L-1 H₃BO3 22.00 g·L-1 A. 蛋白胨只为粘质沙雷氏菌提供碳源和氮源，该菌生长还需要多种微量元素 B. 若从牛肉膏、硫酸铵、硝酸钾中筛选优质氮源，每次应只添加其中一种 C. 该培养基应在灭菌前调节pH，其不能用于分离粘质沙雷氏菌获得单菌落 D. 该培养基添加了NaCl，具有抑制某些微生物生长的作用，属于选择培养基 4. 在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。相关叙述正确的是（　　） A. 巴氏消毒法可以杀死牛奶中绝大多数的微生物，并且不会破坏牛奶中的蛋白质 B. 消毒是用强烈的理化方法杀死物体内外的所有微生物 C. 配制好培养基后，先高压蒸汽灭菌，后定容 D. 采用紫外线照射消毒前，适量喷洒石炭酸，可强化消毒效果 5. 检验水样中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如图。大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝（EMB）培养基的指示剂反应，菌落呈黑色。下列对实验操作的分析，错误的是（　　） A. 测定前，滤杯、滤瓶均可用干热灭菌法进行灭菌处理 B. 配制好的培养基一般倒置，防止冷凝水滴至培养基造成污染 C. 配制EMB培养基培养大肠杆菌时，需将pH调至中性或弱碱性 D. EMB培养基属于选择培养基，只有大肠杆菌能正常生长并形成黑色菌落 6. 马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形杆菌，下列说法错误的是（ ） A. 如图甲所示，若培养后的棒形杆菌菌落平均数为120个，则每克土壤约含棒形杆菌1.2×108个 B. 平板划线法结果如图乙所示，则接种时接种环总共灼烧6次 C. 稀释涂布平板法和平板划线法都能用于土壤中棒形杆菌的分离和计数 D. 需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作对照 7. 当某单一营养缺陷型菌株所需的营养大类确定后，就要确定其生长所需的特殊营养物质。首先对特殊营养物质进行编组，如表是对15种特殊营养物质进行的编组，编组完成后，将沾有组合特殊营养物质的滤纸片放在涂有试验菌甲、乙、丙的培养基上，培养并观察其生长情况，三种试验菌的生长谱如图所示。据图分析，下列叙述错误的是（　　） 组别 组合特殊营养物质 A 1 2 3 4 5 B 2 6 7 8 9 C 3 7 10 11 12 D 4 8 11 13 14 E 5 9 12 14 15 A. 实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基 B. 试验菌甲、乙自身分别不能合成特殊营养物质13、2 C. 若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现两个生长圈 D. 试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，产生了抑菌圈 8. 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（ ） A. 用自然生长的茎进行组培需用适宜浓度的酒精和次氯酸钠的混合液消毒 B. 培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换 C. 组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石带菌量低且营养丰富 D. 不带叶片的菊花幼茎切段可以通过植物组织培养形成完整的菊花植株 9. 通过植物细胞工程技术获得次生代谢物，可以满足化妆品市场对原料高质量及植物资源可持续性发展的要求。下列叙述错误的是（　　） A. 培养基中含有营养物质，诱导愈伤组织时不需要光照 B. 培养基中的糖类被植物细胞吸收后既能为细胞提供能量，也可用于多种有机物的合成 C. 次生代谢物是生物代谢产生的、其生长和生存所必需的小分子有机化合物 D. 脱分化与再分化过程均与细胞中基因的选择性表达有关 10. 某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。 下列叙述错误的是（ ） A. ①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离 B. ②加培养液的目的是促进细胞增殖 C. ③分装时需调整到合适的细胞密度 D. 整个过程需要在无菌、无毒条件下进行 11. 研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是（ ） A. 步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞 B. 经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖 C. 步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交 D. 步骤⑥和植物组织培养均需使用二氧化碳培养箱进行大规模培养 12. 科研人员将诺如病毒（NV）作为抗原注射给小鼠，通过制备NV单克隆抗体1和2，应用于胶体金检测试纸进行抗原鉴定（如图）。检测原理采用双抗体夹心法：将待测样液加到样品孔处，结合垫处含有过量胶体金（可与蛋白质结合，大量聚集时出现肉眼可见的红色）标记的游离金标抗体1，可以结合样液中的抗原，T上固定有抗体2，抗体1和抗体2与NV表面同一抗原的不同部位发生特异性结合而呈红色，多余的抗体1继续向左流，C上固定有抗体1的抗体，二者结合使胶体金大量聚集也呈红色。下列叙述错误的是（ ） A. 将NV作为抗原注射给小鼠，可获得多种产生特定抗体的B淋巴细胞 B. 利用单克隆抗体技术制备的抗体1和抗体2不能直接对患者进行注射治疗 C. 若仅C处呈红色，说明检测结果为阴性，则可初步判断待测液中不含NV D. 若C、T处均呈红色，说明检测结果为阳性，该过程发生2次特异性结合 13. 传统的基于慢病毒感染、胚胎基因编辑构建非人灵长类脑疾病动物模型常出现操作困难、编辑基因脱靶等问题。若要对非人灵长类动物的体细胞进行基因编辑并获得阳性克隆的细胞，利用体细胞核移植技术构建动物疾病模型更具有优势。下列说法错误的是（ ） A. 将经基因编辑的单个体细胞注入去核的MII期卵母细胞中 B. 用电刺激、Ca2+载体等方法激活重构胚，促进其分裂、发育 C. 进行胚胎移植前，要对供体和受体进行免疫检查，以防发生免疫排斥 D. 重构胚必须移植到同种、生理状态相同的雌性子宫中才能发育成个体 14. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用HindIII酶切，目的基因转录的产物可能不同 B. 若用PvuI酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C. 若用SphI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D. 若用SphI酶切，携带目的基因的受体菌在含Tet（四环素）的培养基中能形成菌落 15. 大肠杆菌pUC118质粒是基因工程中常用的一种载体，具有氨苄青霉素抗性基因，该质粒中某限制酶的唯一切点位于lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。下列叙述正确的是（　　） A. 试管1中应加入限制酶和DNA连接酶 B. 试管2中将重组质粒导入大肠杆菌，需用Ca2+处理大肠杆菌 C. 能在氨苄青霉素培养基中存在的菌落均呈现白色 D. 试管3应选择蓝色菌落内的大肠杆菌进行扩大培养 16. 某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。 下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（ ） A. 质粒和目的基因都用酶3切割，用E. coli DNA连接酶连接 B. 质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接 C. 质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接 D. 质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E. coli DNA连接酶连接 17. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入少量的一种双脱氧腺苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧核苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 上述PCR反应体系中只需加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越大，迁移速率越慢 C. 5’—TAGTGTCCATC—3’为患者的一段序列 D. 患者该段序列中发生改变的碱基对是G—C突变为A—T 18. 下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（　　） A. 整个提取过程中可以不使用离心机 B. 如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 C. 加入与滤液体积相等的、体积分数为95%的冷却的酒精，可分离DNA D. DNA在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度较高，可纯化DNA粗提物 19. 为培育能表达SGF14a-GFP融合蛋白的转基因拟南芥，研究人员所构建的重组质粒部分结构如图。下列说法错误的是（　　） 注：GFP基因为绿色荧光蛋白基因，F1、F2、R1、R2表示引物 A. 终止子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的下游 B. 为确定GFP基因是否定向插入，可选用引物F1和R2进行PCR鉴定 C. 引物F1与a链部分序列相同，引物R2与b链部分序列相同 D. 可通过转基因拟南芥细胞能否发出绿色荧光来判断融合基因是否成功表达 20. 大引物PCR定点突变常用于研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需要通过PCR获得，其过程如图所示．下列有关分析错误的是（ ） A. PCR每一次循环都包括变性、复性和延伸三步 B. 诱变引物与模板链并不是严格的碱基互补配对 C. PCR-Ⅰ经过一次循环即可获得大引物模板 D. PCR-Ⅱ选用大引物和引物乙以获得定点诱变的基因片段 二、选择题：本题共10小题，每小题3分，共30分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 21. 老五甑（蒸馏酒用的锅）酿造法主要特点是混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒。将发酵后的四甑酒醅分层出窖，按一定比例加入新粮，分成五甑后依次蒸酒。蒸酒后一甑糟丢弃，另四甑料重新放回窖池发酵。糟醅配料时需润料、拌匀并堆积；蒸酒出甑后的粮糟需加水、摊凉、撒曲；粮糟入窖后需踩窖，以压紧发酵材料并封窖；窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌的载体，主要位于窖池底部和四壁，是生产浓香型白酒的基础。下列叙述正确的是（　　） A. 该工艺可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累 B. 窖泥的作用主要是提供酿酒微生物和以淀粉酶、蛋白酶为主的各种糖化酶类 C. 摊凉可防止酵母等微生物死亡，踩窖可抑制好氧菌繁殖 D. 可采用抽样检测法对窖池底部和四壁的窖泥微生物进行计数 22. 啤酒主要是以麦芽、水、啤酒花为原料，经酵母菌发酵而来，具体生产流程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 啤酒发酵过程中，主发酵阶段完成酵母菌的繁殖，后发酵阶段完成代谢物的生成 B. “精酿”啤酒发酵时间长，没有进行过滤和消毒处理，因此保质期较短 C. 蒸煮阶段产生风味组分，终止酶的进一步作用，并对糖浆灭菌 D. 为防止接种时酵母菌被杀死，应在麦汁冷却后再加入酵母菌进行发酵 23. 某研究小组从黄色短杆菌（能合成L-亮氨酸）中筛选L-亮氨酸缺陷型（不能合成L-亮氨酸）突变菌株，培养皿A和培养皿B的培养基中含有L-亮氨酸，培养皿C的培养基中不含有L-亮氨酸，实验流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A. ①的操作过程是用灼烧后冷却的涂布器蘸取菌液在培养皿A表面涂布接种 B. ②接种时，要使培养皿B和培养皿C的菌种接种位置相同，便于将来比较培养皿B和培养皿C中菌落差异 C. 培养皿A、B、C中的培养基都要使用固体培养基的原因是便于观察菌落特征和分离目的菌株 D. 研究人员应该从培养皿C中选取目的菌落，选取目的菌落位置的依据是培养皿C中有菌落，而在培养皿B中的对应位置没有菌落 24. 多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体，为了获得植物次生代谢产物，先用某植物外植体（2n）获得愈伤组织，然后在培养液中悬浮培养，再经秋水仙素处理，产生染色体加倍的细胞。下列叙述错误的是（ ） A. 培养液中添加的蔗糖具有提供能源和调节渗透压的作用 B. 需要用胰蛋白酶将愈伤组织分散成单个细胞进行悬浮培养 C. 诱导加倍处理后，可以观察到染色体数为8n的细胞 D. 细胞干重在培养12d后会下降，原因可能是营养物质减少、有害代谢产物积累 25. 在单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞（即瘤细胞和B淋巴细胞的融合细胞）的筛选是必不可少的步骤。筛选杂交瘤细胞所用的HAT培养基成分和细胞增殖时所需的核苷酸的两条形成途径（D途径，S途径）如下表所示。已知融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株，即只有起始合成途径，B淋巴细胞有两条核苷酸合成途径。若仅考虑细胞的两两融合，下列说法错误的是（　　） HAT培养基成分 水，糖类、无机盐、次黄蝶呤、氨基喋呤（叶酸拮抗剂），胸腺嘧啶脱氧核苷等 起始合成途径（D途径） 由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程 中间合成途径（S途径） 利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸 A. HAT培养基中瘤细胞可利用氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 B. 杂交瘤细胞能被筛选的原因为既具备增殖能力，又可进行S途径 C. 筛选出来的杂交瘤细胞分泌的均为同一种特异性抗体 D. 在放入HAT培养基之前的融合细胞的培养液中，有D途径的细胞有3种 26. 我国中科院研究人员把猴子的胚胎干细胞注射到猪的胚胎中，产下2只“猪-猴嵌合体”幼患，过程如图。下列说法错误的是（　　） A. 将GFP基因导入食蟹猴细胞的目的是便于追踪猴细胞在猪-猴嵌合体中的位置 B. 可通过电融合法促进转GFP基因的食蟹猴细胞与去核的食蟹猴卵母细胞融合 C. 处于MⅡ期的猪卵母细胞与获得能量的精子共同培养在培养液中完成受精作用 D. 利用猪-猴嵌合体囊胚的滋养层细胞进行性别鉴定后培养到原肠胚再进行胚胎移植 27. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（　　） A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子染色后可在紫外灯下被检测出来 28. 利用农杆菌转化法可以将目的基因导入受体细胞。农杆菌Ti质粒是一种天然存在的植物遗传转化系统。下列关于Ti质粒的叙述正确的是（　　） A. 当农杆菌感染植物时，菌体进入受体细胞后留在细胞质内 B. T-DNA进入受体细胞后可利用植物体内的酶进行转录和翻译 C. 将目的基因与Ti质粒整合的过程称为转化 D. Ti质粒上的T-DNA区段可整合到受体细胞的染色体上 29. 中国农业科学院棉花研究所棉花分子遗传改良创新团队成功将甜菜红素在棉花纤维中富集，创制出纤维呈粉红色的棉花，下图是利用基因工程培育粉红色棉花的示意图，下列有关该研究说法错误的是（ ） A. 通过基因工程创制出彩色纤维棉可有效减少化学染料使用量 B. 过程①→②完成需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶的参与 C. 在植株⑤中检测到甜菜红素合成相关的基因，就代表粉红色棉花培育成功 D. 过程④→⑤依据了植物体细胞全能性的原理 30. 下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，错误的是（　　） A. DNA连接酶具有特异性，只能连接同一种限制性内切核酸酶切割形成的黏性末端 B. 启动子是一段特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，是转录的起始位点 C. 蛋白质工程需构建基因表达载体，改造后的蛋白质的性状可遗传给后代 D. 将抗虫基因整合到某植物的线粒体DNA中，可通过花粉传播，从而引起基因污染 第II卷（非选择题，共30分） 三、非选择题（本题共3小题，共30分） 31. 泡菜传统自然发酵方式的发酵周期相对较长，生产效率低。研究人员欲从泡菜中分离筛选出高产酸乳酸菌，为泡菜工厂化生产提供依据。请分析并回答下列问题： （1）配制CaCO3-MRS培养基。成分：蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、磷酸氢二钾、葡萄糖、琼脂粉、碳酸钙等。 ①根据物理性质分类，该培养基属于_____培养基，为乳酸菌种提供氮源的成分是_____； ②培养过程中，乳酸菌产生乳酸溶解碳酸钙，形成溶钙圈，便于_____。 （2）高产乳酸菌的培养与分离。其部分实验目的与具体操作如下所示，请完成下表。 实验目的 简要操作过程 梯度稀释 在无菌条件下取样品中泡菜汁1mL，加入①_____进行10倍梯度稀 释，依次得到10-5、10-6、10-7的稀释液。 接种培养 取上述稀释液1mL分别加入无菌培养皿中，然后将CaCO3-MRS培养基浇注混匀冷凝后，将培养皿②_____，并连续培养48h。 分离纯化 挑取③_____进行平板划线培养。 长期保存 将菌种加入30％的甘油中在-20℃保存。 （3）高产酸乳酸菌的鉴定。提取筛选乳酸菌的DNA，通常采用16SrDNA（编码 rRNA对应的DNA序列）的通用引物进行PCR扩增并测序鉴定。以16SrDNA作为细菌分类依据的原因是不同菌属的16SrDNA具有_____。 （4）高产酸乳酸菌发酵效果检测。研究人员研究了两种高产酸乳酸菌（乳酸菌A50f7和A50b9）在发酵泡菜过程中pH的变化，结果如下图所示。据图分析，该研究实验的自变量是_____，可以看出，接种两种乳酸菌效果相近，其相近之处表现为_____。 32. 百合具有观赏、食用和药用等多种价值，科研人员对其进行了多种育种技术研究。回答下列问题： （1）体细胞杂交育种。进行不同种百合体细胞杂交前，先用_______去除细胞壁获得原生质体，使原生质体融合，得到杂种细胞后，继续培养，常用_______（填植物激素名称）诱导愈伤组织形成和分化，获得完整的杂种植株。 （2）单倍体育种。常用________的方法来获得单倍体植株，鉴定百合单倍体植株的方法是________。 （3）基因工程育种。研究人员从野生百合中获得一个抵抗尖孢镰刀菌侵染的基因L，该基因及其上游的启动子pL和下游的终止子结构如图a。图b是一种Ti质粒的结构示意图，其中基因gus编码GUS酶，GUS酶活性可反映启动子活性。 ①研究病原微生物对L的启动子pL活性的影响。从图a所示结构中获取pL，首先选用_______酶切，将其与相同限制酶酶切的Ti质粒连接，再导入烟草。随机选取3组转基因成功的烟草（P1、P2和P3）进行病原微生物胁迫，结果如图c。由此可知：三种病原微生物都能诱导pL的活性增强，其中________的诱导作用最强。 ②现发现栽培种百合B中也有L，但其上游的启动子与野生百合不同，且抗病性弱。若要提高该百合中L的表达量，培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，简要写出实验思路________。 33. 研究发现，实体肿瘤内部通常是缺氧的环境，蓖麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖体，使蛋白合成受阻，从而引起细胞死亡。TAT是一种短肽，可转导蛋白进入细胞，含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应低氧条件稳定存在，但在常氧条件下会被蛋白酶降解。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子，利用TAT的作用将融合蛋白转运进入肿瘤细胞，并利用ODD的作用减轻RTA对正常细胞的毒性，分别构建了含TAT−RTA（660bp）和TAT−RTA−ODD（870bp）融合基因的表达载体，并成功得到相关融合蛋白。 （1）可采用PCR的方法获取融合基因TAT−RTA，需要根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是__________。已知RTA基因和欲得到的TAT−RTA融合基因的结构如图1所示，TAT基因编码链序列5＇−ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA−3＇，为顺利构建表达载体，需要在引物1的5＇端加入________限制酶的酶切位点，引物2的5＇端加入________限制酶的酶切位点，利用TAT和RTA核酸序列设计引物时，要求在RTA蛋白的前端引入TAT短肽，请根据要求写出引物1_______（写出引物5＇端的12个碱基即可）。 （2）载体的部分结构如图2所示，His标签由连续的6个组氨酸构成，可用于对重组融合蛋白进行分离纯化，将PCR得到的TAT−RTA融合基因和载体双酶切后，再用___________酶连接。但是在研究时，发现融合蛋白中没有His标签蛋白，据图分析原因是_________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 山东省实验中学2025~2026学年第二学期期中高二生物试题 说明：本试卷满分100分，分为选择题和非选择题两部分，选择题为第1题至第30题，非选择题为第31题至第33题。试题答案请用2B铅笔或0.5mm签字笔填涂到答题卡规定位置上，书写在试题上的答案无效。考试时间90分钟。 第Ⅰ卷（共70分） 一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 某同学对“果酒和果醋的制作”实验改进如图所示，下列说法错误的是（ ） A. 将苹果梨进行酶解能充分释放梨汁和糖分，使后续发酵更容易 B. 为缩短制作时间，可分别人工接种酵母菌和醋酸菌 C. 装置1的甲不仅可阻止外界空气进入，还便于排出果醋发酵产生的气体 D. 装置2的乙可维持瓶中气压相对稳定，并可检测是否产生CO2 【答案】C 【解析】 【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理： (1) 在有氧条件下，酵母菌进行 有氧呼吸大量繁殖；(2) 在无氧条件下，酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。 2、果醋制作过程中的菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧菌，在氧气、糖源充足时，醋酸菌能将糖分解成醋酸，糖源不足时可以将乙醇转化成乙醛再转化成醋酸，最适宜醋酸菌生长繁殖的温度是30~ 35℃。 【详解】A、苹果细胞是植物细胞，含有细胞壁，用纤维素酶和果胶酶能去除细胞壁，因此将苹果梨进行酶解能充分释放梨汁和糖分，使后续发酵更容易，A正确； B、人工接种酵母菌和醋酸菌，菌种的纯度高，发酵的效率就高，从而缩短制作时间，B正确； C、果醋发酵不产生气体，C错误； D、装置2的乙与发酵瓶直接相通，可维持瓶中气压相对稳定，且乙中的X溶液可用于检测是否产生CO2，D正确。 故选C。 2. 在家庭制作泡菜过程中，充分利用各种微生物生存条件和代谢特点达到积累乳酸菌、抑制其他微生物生长的目的。关于发酵过程的叙述正确的是（ ） A. 为了避免杂菌污染，泡菜坛需严格灭菌处理，盐水需煮沸冷却待用 B. 晾干的新鲜蔬菜可以装满泡菜坛，因为乳酸菌无氧呼吸仅产生乳酸，没有气体生成 C. 乳酸菌产生的乳酸既可以抑制其他微生物生长繁殖，也会抑制自身生长繁殖 D. 因亚硝酸盐会随着发酵时间的延长越积越多，为了自身健康，应尽量少食用泡菜 【答案】C 【解析】 【分析】制作传统泡菜是利用植物体表面天然的乳酸菌来进行发酵的。发酵期间，乳酸会不断积累，当它的质量分数为0.4% 〜0.8%时，泡菜的口味、品质最佳。 【详解】A、泡菜坛需要进行消毒，盐水需要煮沸冷却待用，A错误； B、将新鲜蔬菜洗净，切成块状或条状，混合均匀，晾干后装入泡菜坛内；装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至八成满，B错误； C、乳酸菌产生的乳酸既可以抑制其他微生物生长繁殖，起到防止杂菌污染的作用，同时也会抑制自身生长繁殖，C正确； D、亚硝酸盐会随着发酵时间先增多后减少，可选用适当的时间适量食用泡菜，D错误。 故选C。 3. 从海水样本中分离粘质沙雷氏菌时，所用的海生菌肉汤培养基的成分如表所示。下列叙述错误的是（　　） 蛋白胨 5.00 g·L-1 MgCl2 5.90 g·L-1 NaHCO3 0.16 g·L-1 酵母提取物 1.00 g·L-1 Na₂SO4 3.24 g·L-1 KBr 0.08 g·L-1 柠檬酸铁 0.10 g·L-1 CaCl2 1.80 g·L-1 SrCl2 34.00 g·L-1 NaCl 19.45 g·L-1 KCl 0.55 g·L-1 H₃BO3 22.00 g·L-1 A. 蛋白胨只为粘质沙雷氏菌提供碳源和氮源，该菌生长还需要多种微量元素 B. 若从牛肉膏、硫酸铵、硝酸钾中筛选优质氮源，每次应只添加其中一种 C. 该培养基应在灭菌前调节pH，其不能用于分离粘质沙雷氏菌获得单菌落 D. 该培养基添加了NaCl，具有抑制某些微生物生长的作用，属于选择培养基 【答案】A 【解析】 【详解】A、蛋白胨来源于动物原料，除可为粘质沙雷氏菌提供碳源、氮源外，还可提供维生素等生长因子，并非只提供碳源和氮源，A错误； B、筛选优质氮源的实验中，自变量为氮源的种类，依据单一变量原则，每次应只添加其中一种作为唯一氮源，其余培养条件保持相同且适宜，B正确； C、培养基制备时需先调节pH再灭菌，避免灭菌后调pH引入杂菌；该培养基未添加琼脂等凝固剂，属于液体培养基，无法用于分离获得单菌落（分离单菌落需使用固体培养基），C正确； D、该培养基添加了较高浓度的NaCl，可抑制不耐盐的微生物生长，仅适合耐盐的海生微生物（如粘质沙雷氏菌）生长，属于选择培养基，D正确。 4. 在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。相关叙述正确的是（　　） A. 巴氏消毒法可以杀死牛奶中绝大多数的微生物，并且不会破坏牛奶中的蛋白质 B. 消毒是用强烈的理化方法杀死物体内外的所有微生物 C. 配制好培养基后，先高压蒸汽灭菌，后定容 D. 采用紫外线照射消毒前，适量喷洒石炭酸，可强化消毒效果 【答案】D 【解析】 【详解】A、巴氏消毒法采用相对较低的温度处理牛奶，可杀死绝大多数微生物，仅会少量破坏牛奶中的蛋白质，最大程度保留营养，并非完全不破坏蛋白质，A错误； B、消毒是用温和的理化方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），使用强烈理化方法杀死物体内外所有微生物（含芽孢、孢子）的操作是灭菌，B错误； C、配制培养基的正确顺序是计算、称量、溶化、定容、调pH、高压蒸汽灭菌、倒平板，若先灭菌后定容会引入杂菌，且无法保证培养基浓度准确，C错误； D、紫外线的穿透能力较弱，消毒前适量喷洒石炭酸等消毒剂，既可以促进空气中悬浮的微生物沉降，也可协同紫外线发挥杀菌作用，强化消毒效果，D正确。 5. 检验水样中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如图。大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝（EMB）培养基的指示剂反应，菌落呈黑色。下列对实验操作的分析，错误的是（　　） A. 测定前，滤杯、滤瓶均可用干热灭菌法进行灭菌处理 B. 配制好的培养基一般倒置，防止冷凝水滴至培养基造成污染 C. 配制EMB培养基培养大肠杆菌时，需将pH调至中性或弱碱性 D. EMB培养基属于选择培养基，只有大肠杆菌能正常生长并形成黑色菌落 【答案】D 【解析】 【详解】A、测定前滤杯、滤瓶均需灭菌处理，因为是玻璃仪器，可采用干热灭菌法，以实现无菌操作，A正确； B、配制好的培养基一般倒置，既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，B正确； C、大肠杆菌属于细菌，培养细菌的培养基 pH 一般调至中性或弱碱性，C正确； D、分析题意可知，大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝（EMB）培养基的指示剂反应，菌落呈黑色，说明EMB培养基属于鉴别培养基，D错误。 6. 马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形杆菌，下列说法错误的是（ ） A. 如图甲所示，若培养后的棒形杆菌菌落平均数为120个，则每克土壤约含棒形杆菌1.2×108个 B. 平板划线法结果如图乙所示，则接种时接种环总共灼烧6次 C. 稀释涂布平板法和平板划线法都能用于土壤中棒形杆菌的分离和计数 D. 需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作对照 【答案】C 【解析】 【详解】A、称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，稀释了100倍，而经梯度稀释后，此时相当于稀释了100000倍，从下图③号试管取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，重复3次，若平板培养后的菌落平均数为120个，故该样本中每克土壤约含 棒形杆菌（120÷0.1）×100000=1.2×108个/g，A正确； B、平板划线法一共划线5次，则灼烧次数为6次，B正确； C、平板划线法不能进行微生物计数，C错误； D、增设未接种的选择培养基作对照目的是判断培养基是否灭菌彻底及无菌操作是否规范；接种后的完全培养基作对照目的是判断选择培养基是否发挥选择作用，D正确。 故选C。 7. 当某单一营养缺陷型菌株所需的营养大类确定后，就要确定其生长所需的特殊营养物质。首先对特殊营养物质进行编组，如表是对15种特殊营养物质进行的编组，编组完成后，将沾有组合特殊营养物质的滤纸片放在涂有试验菌甲、乙、丙的培养基上，培养并观察其生长情况，三种试验菌的生长谱如图所示。据图分析，下列叙述错误的是（　　） 组别 组合特殊营养物质 A 1 2 3 4 5 B 2 6 7 8 9 C 3 7 10 11 12 D 4 8 11 13 14 E 5 9 12 14 15 A. 实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基 B. 试验菌甲、乙自身分别不能合成特殊营养物质13、2 C. 若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现两个生长圈 D. 试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，产生了抑菌圈 【答案】C 【解析】 【详解】A、本实验要确定某单一营养缺陷型菌株所需的特殊营养物质，该菌在不含特殊营养物质的基本培养基上不能生存，加入特殊营养物质才能生存，因此实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基，A正确； B、与其他组（A、B、C、E组）相比，D组含有特殊营养物质13，试验菌甲在D上能生存，在其他组上不能生存，因此推测试验菌甲不能合成特殊营养物质13；同理，A和B组共同含有的特殊营养物质是2，试验菌乙在A组和B组上能生存，在其他组上不能生存，说明试验菌乙不能合成特殊营养物质2，B正确； C、与其他组相比，A组含有特殊营养物质1，据此推测试验菌丙不能合成特殊营养物质1，这三种菌都能合成10和11，因此无论营养物质中是否缺乏该营养，都能生存，若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现5个生长圈，C错误； D、试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，抑制了滤纸片周围的菌种的生长，因此产生了抑菌圈，D正确。 8. 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（ ） A. 用自然生长的茎进行组培需用适宜浓度的酒精和次氯酸钠的混合液消毒 B. 培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换 C. 组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石带菌量低且营养丰富 D. 不带叶片的菊花幼茎切段可以通过植物组织培养形成完整的菊花植株 【答案】D 【解析】 【分析】植物组织培养技术：1、过程：离体植物器官、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、芽等器官，进而形成新的植物体。2、原理：植物细胞的全能性。3、条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。 【详解】A、自然生长茎段的消毒属于外植体消毒，先用质量分数为70%的酒精，再用无菌水清洗，再用5%次氯酸钠消毒处理，最后再用无菌水清洗，A错误； B、培养瓶用专用封口膜封口的目的是防止杂菌污染，并不影响气体交换，B错误； C、组培苗生存能力较弱，需要进行锻炼，采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石保水透气，蛭石不含营养，C错误； D、不带叶片的菊花茎切段经过脱分化培养形成愈伤组织，继续进行再分化培养，可形成完整的菊花植株，D正确。 故选D。 9. 通过植物细胞工程技术获得次生代谢物，可以满足化妆品市场对原料高质量及植物资源可持续性发展的要求。下列叙述错误的是（　　） A. 培养基中含有营养物质，诱导愈伤组织时不需要光照 B. 培养基中的糖类被植物细胞吸收后既能为细胞提供能量，也可用于多种有机物的合成 C. 次生代谢物是生物代谢产生的、其生长和生存所必需的小分子有机化合物 D. 脱分化与再分化过程均与细胞中基因的选择性表达有关 【答案】C 【解析】 【详解】A、诱导愈伤组织的过程属于脱分化，该阶段不需要光照，避免提前分化形成维管组织，培养基中含有的蔗糖、矿质元素等营养物质可满足细胞代谢需求，A正确； B、培养基中的糖类多为蔗糖，被植物细胞吸收后，既可通过呼吸作用氧化分解为细胞供能，也可利用其分解的中间产物作为原料合成氨基酸、脂质等多种有机物，B正确； C、次生代谢物是植物代谢产生的非必需小分子有机化合物，并非植物生长、生存所必需的物质，如生物碱、紫杉醇等；初级代谢产物才是植物生长发育所必需的物质，C错误； D、脱分化是已分化的细胞恢复分裂能力的过程，再分化是愈伤组织分化形成根、芽等结构的过程，二者的本质均是基因的选择性表达，D正确。 10. 某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。 下列叙述错误的是（ ） A. ①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离 B. ②加培养液的目的是促进细胞增殖 C. ③分装时需调整到合适的细胞密度 D. 整个过程需要在无菌、无毒条件下进行 【答案】B 【解析】 【分析】动物细胞培养条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。 【详解】A、①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离，A正确； B、②加培养液，多次加培养液先洗去残留的消化酶，然后终止消化液的消化作用，并对细胞加以稀释，B错误； C、③分装时需调整到合适的细胞密度，因为若密度过大细胞直接仍存在接触抑制，C正确； D、动物细胞培养需要无菌无毒环境，因此整个过程需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。 故选B。 11. 研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是（ ） A. 步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞 B. 经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖 C. 步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交 D. 步骤⑥和植物组织培养均需使用二氧化碳培养箱进行大规模培养 【答案】A 【解析】 【分析】单克隆抗体的制备过程： （1）制备产生抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞； （2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体； （3）克隆化培养和抗体检测； （4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖； （5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。 【详解】A、步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞；步骤⑤向小 鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A正确； B、经步骤②诱导后融合的细胞只有杂交瘤细胞才能既能分泌TREM2抗体又可无限增殖，B错误； C、步骤三是特定培养基筛选杂交瘤细胞，步骤4是抗原抗体杂交，C错误； D、动物细胞培养过程中二氧化碳用于调节培养液的pH值，而植物组织培养的过程中不需要二氧化碳培养箱，D错误。 故选A。 12. 科研人员将诺如病毒（NV）作为抗原注射给小鼠，通过制备NV单克隆抗体1和2，应用于胶体金检测试纸进行抗原鉴定（如图）。检测原理采用双抗体夹心法：将待测样液加到样品孔处，结合垫处含有过量胶体金（可与蛋白质结合，大量聚集时出现肉眼可见的红色）标记的游离金标抗体1，可以结合样液中的抗原，T上固定有抗体2，抗体1和抗体2与NV表面同一抗原的不同部位发生特异性结合而呈红色，多余的抗体1继续向左流，C上固定有抗体1的抗体，二者结合使胶体金大量聚集也呈红色。下列叙述错误的是（ ） A. 将NV作为抗原注射给小鼠，可获得多种产生特定抗体的B淋巴细胞 B. 利用单克隆抗体技术制备的抗体1和抗体2不能直接对患者进行注射治疗 C. 若仅C处呈红色，说明检测结果为阴性，则可初步判断待测液中不含NV D. 若C、T处均呈红色，说明检测结果为阳性，该过程发生2次特异性结合 【答案】D 【解析】 【分析】若检测结果为阳性，则诺如病毒表面抗原结合位点会先与结合垫处的可移动抗体1结合，随着抗体1移动到T线处，病毒表面同一抗原不同位点在T线处与抗体2结合，呈红色，结合垫处未与病毒表面抗原蛋白结合的抗体1在移动到C线处会与抗体1的抗体结合，也呈红色。 【详解】A、NV作为抗原，具有多个抗原结合位点，可以诱导机体产生多种特定抗体的B淋巴细胞，A正确； B、利用单克隆抗体技术制备的抗体1和抗体2是利用小鼠的骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合的杂交瘤细胞分泌产生的，对人来说属于异物，为了降低免疫排斥，需要对单克隆抗体进行改造，除抗原结合区域外，其他部分都替换为人抗体区段，B正确； C、若待测液中含NV，则检测线和质控线C处均出现红色，而仅C处呈红色，说明检测结果为阴性，则可初步判断待测液中不含NV，C正确； D、若检测结果为阳性，则该病毒表面的抗原与结合垫处的抗体1结合，随着抗体1移动到T处，同一抗原表面的不同结合位点与抗体2结合呈红色，未与该病毒表面抗原结合的抗体1移动到C处与抗体1的抗体结合，因此该过程共发生3次特异性结合，D错误。 故选D。 13. 传统的基于慢病毒感染、胚胎基因编辑构建非人灵长类脑疾病动物模型常出现操作困难、编辑基因脱靶等问题。若要对非人灵长类动物的体细胞进行基因编辑并获得阳性克隆的细胞，利用体细胞核移植技术构建动物疾病模型更具有优势。下列说法错误的是（ ） A. 将经基因编辑的单个体细胞注入去核的MII期卵母细胞中 B. 用电刺激、Ca2+载体等方法激活重构胚，促进其分裂、发育 C. 进行胚胎移植前，要对供体和受体进行免疫检查，以防发生免疫排斥 D. 重构胚必须移植到同种、生理状态相同的雌性子宫中才能发育成个体 【答案】C 【解析】 【分析】体细胞核移植过程（以克隆高产奶牛为例）： 【详解】A、需要将经基因编辑的单个体细胞注入MⅡ期的卵母细胞中，使核移植动物模型的核遗传物质全部来自经基因编辑的单个体细胞，A正确； B、使用电刺激、Ca2+载体等方法可以激活重构胚, 使其完成细胞分裂和发育过程，B正确； C、受体不会对移植的胚胎产生免疫排斥反应，故而进行胚胎移植前，不需要对供体和受体进行免疫检查，C错误； D、重构胚必须采用胚胎移植技术移植到同种、生理状态相同的雌性个体才能继续发育，D正确。 故选C。 14. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用HindIII酶切，目的基因转录的产物可能不同 B. 若用PvuI酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C. 若用SphI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D. 若用SphI酶切，携带目的基因的受体菌在含Tet（四环素）的培养基中能形成菌落 【答案】D 【解析】 【详解】A、若用HindⅢ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，转录的产物可能不同，A正确； B、若用PvuⅠ酶切，重组质粒和质粒中都有四环素抗性基因（TetR），因此在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因，B正确； C、DNA凝胶电泳技术可以分离不同大小的DNA片段，重组质粒的大小与质粒不同，能够鉴定重组质粒构建成功与否，C正确； D、SphⅠ的酶切位点位于四环素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，会破坏四环素抗性基因，因此携带目的基因的受体菌在含Tet的培养基中不能形成菌落，D错误。 15. 大肠杆菌pUC118质粒是基因工程中常用的一种载体，具有氨苄青霉素抗性基因，该质粒中某限制酶的唯一切点位于lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。下列叙述正确的是（　　） A. 试管1中应加入限制酶和DNA连接酶 B. 试管2中将重组质粒导入大肠杆菌，需用Ca2+处理大肠杆菌 C. 能在氨苄青霉素培养基中存在的菌落均呈现白色 D. 试管3应选择蓝色菌落内的大肠杆菌进行扩大培养 【答案】B 【解析】 【详解】A、分析题图可知，在加入试管1之前，质粒和目的基因已经被切割，故试管1中应加入DNA连接酶处理，A错误； B、试管2中用Ca2+处理，使大肠杆菌处于感受态，这样可将重组载体导入不含lacZ基因的大肠杆菌中，B正确； C、能在氨苄青霉素培养基中存在的菌落呈现蓝色或白色，C错误； D、若大肠杆菌的菌落为蓝色，则导入大肠杆菌的是普通质粒，试管3应选择白色菌落内的大肠杆菌进行扩大培养，D错误。 16. 某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。 下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（ ） A. 质粒和目的基因都用酶3切割，用E. coli DNA连接酶连接 B. 质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接 C. 质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接 D. 质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E. coli DNA连接酶连接 【答案】C 【解析】 【分析】DNA连接酶： （1）根据酶的来源不同分为两类：E.coliDNA连接酶、T4DNA连接酶。这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。 （2）DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 【详解】A、酶3切割后得到的是平末端，应该用T4 DNA连接酶连接，A错误； B、质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末端，二者不能连接，B错误； C、质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4 DNA连接酶连接后，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C正确； D、若用酶2和酶4切割质粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法进行后续的筛选，D错误。 故选C。 17. 最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入少量的一种双脱氧腺苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧核苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 上述PCR反应体系中只需加入一种引物 B. 电泳时产物的片段越大，迁移速率越慢 C. 5’—TAGTGTCCATC—3’为患者的一段序列 D. 患者该段序列中发生改变的碱基对是G—C突变为A—T 【答案】C 【解析】 【分析】双脱氧测序法的原理：在DNA聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸（dNTP）存在的情况下，如果在四管反应系统中再分别加入四种双脱氧核苷三磷酸（ ddNTP），DNA链合成反应过程中 ddNTP与dNTP处于一种竞争状态，即新合成DNA链既可能掺入正常dNTP，也可能掺入ddNTP并使新合成链终止延伸。这样在每个反应系统中形成的产物是一系列长度不等的多核苷酸片段，这些片段具有相同的起点，即引物的5'端，但有不同的ddNTP终端。 在结束反应后，用四个泳道进行电泳，分别分离各组反应体系中不同长度的DNA 片段，检测DNA片段终止末端位置的碱基种类，从自显影图谱中直接读取到与模板相匹配的新的链序。 【详解】A、利用双脱氧测序法时，PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA，故只需加入一种引物，A正确； B、电泳时，DNA的片段越大，迁移速率越慢，B正确； C、依据分析中双脱氧测序法的原理，可以确定每个泳道中的条带（DNA片段）的3'终端的碱基，如+ddATP的泳道中出现的条带（DNA片段）的3'终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同，但终止点不同，因此可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基；图示电泳方向为从上→下，即对应的DNA片段为长→短，则对应的DNA测序结果为3'→5'，对照个体的测序结果为5'-CTACCCGTGAT-3'，患者的测序结果为5'-CTACCTGTGAT-3'，C错误； D、对比患者和对照个体的测序结果可知，患者该段序列中某位点的碱基对由G-C突变为A-T，D正确。 故选C。 18. 下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（　　） A. 整个提取过程中可以不使用离心机 B. 如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 C. 加入与滤液体积相等的、体积分数为95%的冷却的酒精，可分离DNA D. DNA在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度较高，可纯化DNA粗提物 【答案】D 【解析】 【详解】A、若选用植物为实验材料，研磨后用纱布过滤即可获取含DNA的滤液，后续加入冷却酒精析出DNA时，可用玻璃棒直接卷取絮状DNA，整个过程可不需要离心机，A正确； B、研磨液中含有洗涤剂可瓦解细胞膜、NaCl可促进DNA溶解，若更换为蒸馏水，细胞破裂释放的DNA量减少，且DNA溶解量低，提取效率会降低，B正确； C、DNA不溶于酒精，而部分蛋白质等杂质可溶于酒精，加入与滤液等体积的冷却95%酒精后，DNA会以白色絮状物形式析出，可分离得到DNA，C正确； D、DNA在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最低，此时DNA析出，可去除溶解在溶液中的杂质实现纯化，选项表述与事实相反，D错误。 19. 为培育能表达SGF14a-GFP融合蛋白的转基因拟南芥，研究人员所构建的重组质粒部分结构如图。下列说法错误的是（　　） 注：GFP基因为绿色荧光蛋白基因，F1、F2、R1、R2表示引物 A. 终止子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的下游 B. 为确定GFP基因是否定向插入，可选用引物F1和R2进行PCR鉴定 C. 引物F1与a链部分序列相同，引物R2与b链部分序列相同 D. 可通过转基因拟南芥细胞能否发出绿色荧光来判断融合基因是否成功表达 【答案】C 【解析】 【详解】A、终止子是具有特殊序列的DNA片段，位于基因的下游，可终止转录，A正确； B、若要确定GFP基因是否定向插入，可根据GFP基因两侧的序列设计引物。由图可知，引物F1和R2分别位于GFP基因的两侧，若用引物F1和R2进行PCR鉴定，若能扩增出相应的片段，则说明GFP基因已定向插入，B正确； C、引物总是与其结合的模板链互补，F1结合在a链上，所以F1与a链互补。R2结合在b链上，所以R2与b链互补，C错误； D、GFP基因表达后会发出绿色荧光，若转基因拟南芥细胞能发出绿色荧光，说明SGF14a−GFP融合基因成功表达出了SGF14a−GFP融合蛋白，D正确。 20. 大引物PCR定点突变常用于研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需要通过PCR获得，其过程如图所示．下列有关分析错误的是（ ） A. PCR每一次循环都包括变性、复性和延伸三步 B. 诱变引物与模板链并不是严格的碱基互补配对 C. PCR-Ⅰ经过一次循环即可获得大引物模板 D. PCR-Ⅱ选用大引物和引物乙以获得定点诱变的基因片段 【答案】C 【解析】 【分析】PCR技术：（1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术；（2）原理：体外DNA复制；（3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物；（4）条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Iag酶)；（5）过程：变性、复性、延伸。 【详解】A、PCR技术的基本过程包括变性、复性、延伸，每一次循环也都包含这三个步骤，A正确； B、为了实现定点突变，就需要在特定位置改变碱基序列，因此诱变引物与模板链并不是严格的碱基互补配对，B正确； C、大引物模板需要以含有诱变引物和引物甲的模板链复制获得，故PCR-I至少经过两次循环，才能获得大引物模板，C错误； D、大引物中有定点诱变碱基，且大引物延伸方向由5'-3'，扩增一次可得到定点诱变的基因片段。PCR技术每扩增一次，要一对引物，引物乙与大引物结合的模板不同。因此，PCR-Ⅱ选用大引物和引物乙以获得定点诱变的基因片段，D正确。 故选C。 二、选择题：本题共10小题，每小题3分，共30分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 21. 老五甑（蒸馏酒用的锅）酿造法主要特点是混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒。将发酵后的四甑酒醅分层出窖，按一定比例加入新粮，分成五甑后依次蒸酒。蒸酒后一甑糟丢弃，另四甑料重新放回窖池发酵。糟醅配料时需润料、拌匀并堆积；蒸酒出甑后的粮糟需加水、摊凉、撒曲；粮糟入窖后需踩窖，以压紧发酵材料并封窖；窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌的载体，主要位于窖池底部和四壁，是生产浓香型白酒的基础。下列叙述正确的是（　　） A. 该工艺可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累 B. 窖泥的作用主要是提供酿酒微生物和以淀粉酶、蛋白酶为主的各种糖化酶类 C. 摊凉可防止酵母等微生物死亡，踩窖可抑制好氧菌繁殖 D. 可采用抽样检测法对窖池底部和四壁的窖泥微生物进行计数 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、该工艺混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒，其中多轮次发酵蒸酒等过程可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累，A正确； B、分析题意可知，窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌的载体，其能起到密封以及排废作用，此外还可提供酿酒微生物，但不提供糖化酶类，B错误； C、果酒发酵需要适宜的温度，通常是25℃左右，摊凉可防止酵母等微生物死亡；踩窖可减少氧气，抑制好气性细菌繁殖，C正确； D、由于微生物数量多，故对其计数时可采用抽样检测法，检测前要搅拌均匀，随机取样，D正确。 22. 啤酒主要是以麦芽、水、啤酒花为原料，经酵母菌发酵而来，具体生产流程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 啤酒发酵过程中，主发酵阶段完成酵母菌的繁殖，后发酵阶段完成代谢物的生成 B. “精酿”啤酒发酵时间长，没有进行过滤和消毒处理，因此保质期较短 C. 蒸煮阶段产生风味组分，终止酶的进一步作用，并对糖浆灭菌 D. 为防止接种时酵母菌被杀死，应在麦汁冷却后再加入酵母菌进行发酵 【答案】BCD 【解析】 【详解】A、主发酵阶段不仅完成酵母菌的繁殖，也会进行代谢产物（酒精等）的生成，后发酵是继续完成残糖的发酵、风味物质的形成等，不是只在后发酵生成代谢物，A错误； B、“精酿”啤酒发酵时间长，部分确实不进行过滤和消毒，这会让啤酒中残留少量酵母和微生物，因此保质期较短，B正确； C、蒸煮阶段可以产生风味组分，同时高温会终止酶的进一步作用（比如糖化酶的活性被高温破坏），还能对糖浆进行灭菌，C正确。 D、酵母菌在高温下会失活，所以需要在麦汁冷却后再加入酵母菌，防止酵母菌被杀死，保证发酵正常进行，D正确。 23. 某研究小组从黄色短杆菌（能合成L-亮氨酸）中筛选L-亮氨酸缺陷型（不能合成L-亮氨酸）突变菌株，培养皿A和培养皿B的培养基中含有L-亮氨酸，培养皿C的培养基中不含有L-亮氨酸，实验流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A. ①的操作过程是用灼烧后冷却的涂布器蘸取菌液在培养皿A表面涂布接种 B. ②接种时，要使培养皿B和培养皿C的菌种接种位置相同，便于将来比较培养皿B和培养皿C中菌落差异 C. 培养皿A、B、C中的培养基都要使用固体培养基的原因是便于观察菌落特征和分离目的菌株 D. 研究人员应该从培养皿C中选取目的菌落，选取目的菌落位置的依据是培养皿C中有菌落，而在培养皿B中的对应位置没有菌落 【答案】BC 【解析】 【详解】A、用移液器吸取菌液滴加到培养基表面，后用灼烧后冷却的涂布器将菌液均匀涂布，A错误； B、需要通过比较培养皿B、C中的菌落差异来确定目的菌株的位置，故②接种时培养皿B、C的菌种接种位置应相同，B正确； C、液体培养基无法形成菌落，也难以分离目的菌株，故培养皿A、B、C中的培养基都应使用固体培养基，C正确； D、在不含L-亮氨酸的培养基中，不能合成L-亮氨酸的突变菌株不能生长，而在含L-亮氨酸的培养基中可以正常生长，对照B、C中培养基的相同位置，C中没有而B中有的菌落即为目的菌落，D错误。 24. 多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体，为了获得植物次生代谢产物，先用某植物外植体（2n）获得愈伤组织，然后在培养液中悬浮培养，再经秋水仙素处理，产生染色体加倍的细胞。下列叙述错误的是（ ） A. 培养液中添加的蔗糖具有提供能源和调节渗透压的作用 B. 需要用胰蛋白酶将愈伤组织分散成单个细胞进行悬浮培养 C. 诱导加倍处理后，可以观察到染色体数为8n的细胞 D. 细胞干重在培养12d后会下降，原因可能是营养物质减少、有害代谢产物积累 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养和动物细胞培养的比较： 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 成分 营养物质（蔗糖）、植物激素等 营养物质（葡萄糖）、动物血清等 分散处理 无 有 脱分化 有 无 培养目的 快速繁殖、培育无毒苗等 获得细胞或细胞产物 【详解】A、蔗糖是碳源，溶于水可作为溶质，因此培养液中添加的蔗糖具有提供能源和调节渗透压的作用，A正确；B、植物细胞培养不需要用胰蛋白酶将愈伤组织分散成单个细胞进行悬浮培养，动物细胞培养才需要，B错误； C、愈伤组织为2n，经秋水仙素诱导一次后变成4n，4n细胞在有丝分裂后期染色体数为8n，或者愈伤组织经秋水仙素诱导两次变为染色体数为8n的细胞，C正确； D、细胞干重在培养12d后会下降，原因可能是营养物质减少，细胞生长所需要的营养供应不足，也可能是有害代谢产物积累，抑制了细胞的生长，从而细胞干重下降，D正确。 故选B。 25. 在单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞（即瘤细胞和B淋巴细胞的融合细胞）的筛选是必不可少的步骤。筛选杂交瘤细胞所用的HAT培养基成分和细胞增殖时所需的核苷酸的两条形成途径（D途径，S途径）如下表所示。已知融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株，即只有起始合成途径，B淋巴细胞有两条核苷酸合成途径。若仅考虑细胞的两两融合，下列说法错误的是（　　） HAT培养基成分 水，糖类、无机盐、次黄蝶呤、氨基喋呤（叶酸拮抗剂），胸腺嘧啶脱氧核苷等 起始合成途径（D途径） 由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程 中间合成途径（S途径） 利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸 A. HAT培养基中瘤细胞可利用氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 B. 杂交瘤细胞能被筛选的原因为既具备增殖能力，又可进行S途径 C. 筛选出来的杂交瘤细胞分泌的均为同一种特异性抗体 D. 在放入HAT培养基之前的融合细胞的培养液中，有D途径的细胞有3种 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、瘤细胞只有起始合成途径，在HAT培养基中，含叶酸拮抗剂（氨甲蝶呤），氨甲蝶呤阻断DNA合成的主途径，起始合成途径（D途径）不能进行，也不能合成核苷酸，A错误； B、杂交瘤细胞为瘤细胞和B淋巴细胞（D和S途径）的融合细胞，既具备增殖能力，又可在HAT培养基（阻断D途径）中进行合成DNA的S途径，B正确； C、最终筛选出来的可能有多种杂交瘤细胞，分泌的可能不是同一种特异性抗体，还需进行进一步筛选，C错误； D、仅考虑细胞的两两融合，在放入HAT培养基之前的融合细胞的培养液中，会有融合的B淋巴细胞—瘤细胞、融合的B淋巴细胞—B淋巴细胞、融合的瘤细胞—瘤细胞、未融合的B淋巴细胞、未融合的瘤细胞等多种形式的细胞，这几种形式的细胞均可进行D途径，D错误。 26. 我国中科院研究人员把猴子的胚胎干细胞注射到猪的胚胎中，产下2只“猪-猴嵌合体”幼患，过程如图。下列说法错误的是（　　） A. 将GFP基因导入食蟹猴细胞的目的是便于追踪猴细胞在猪-猴嵌合体中的位置 B. 可通过电融合法促进转GFP基因的食蟹猴细胞与去核的食蟹猴卵母细胞融合 C. 处于MⅡ期的猪卵母细胞与获得能量的精子共同培养在培养液中完成受精作用 D. 利用猪-猴嵌合体囊胚的滋养层细胞进行性别鉴定后培养到原肠胚再进行胚胎移植 【答案】CD 【解析】 【分析】1、动物细胞培养是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、胚胎干细胞，（1）来源：哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。（2）特点：具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。 【详解】A、GFP基因为绿色荧光蛋白基因，将GFP基因导入食蟹猴细胞的目的是便于追踪猴细胞在猪-猴嵌合体中的位置，A正确； B、可通过电融合法促进细胞融合，B正确； C、精子获能是指获得与卵细胞融合的能力，不是获得能量，C错误； D、培养到桑葚胚或囊胚期再进行胚胎移植，D错误。 故选CD。 27. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（　　） A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子染色后可在紫外灯下被检测出来 【答案】ABCD 【解析】 【详解】A、琼脂糖凝胶的浓度会影响DNA分子在凝胶中的迁移率和分辨率，琼脂糖凝胶的浓度通常是根据所需分离的DNA片段大小来选择的，A正确； B、凝胶载样缓冲液指示剂通常是一种颜色较深的染料，可以作为电泳进度的指示分子，能够直观地标记出样品的位置，在电泳过程中，凝胶上的某种染料会随着电流的通过而移动，从而可以帮助实验者确定样品的迁移方向和距离，B正确； C、为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理，C正确； D、琼脂糖凝胶中的DNA分子需染色后，才可在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，D正确。 28. 利用农杆菌转化法可以将目的基因导入受体细胞。农杆菌Ti质粒是一种天然存在的植物遗传转化系统。下列关于Ti质粒的叙述正确的是（　　） A. 当农杆菌感染植物时，菌体进入受体细胞后留在细胞质内 B. T-DNA进入受体细胞后可利用植物体内的酶进行转录和翻译 C. 将目的基因与Ti质粒整合的过程称为转化 D. Ti质粒上的T-DNA区段可整合到受体细胞的染色体上 【答案】BD 【解析】 【详解】A、农杆菌感染植物时，仅Ti质粒上的T-DNA片段会转移进入植物受体细胞，农杆菌菌体本身不进入受体细胞，A错误； B、T-DNA进入受体细胞后可整合到受体细胞染色体DNA上，能够利用植物体内的酶完成转录和翻译过程，B正确； C、转化是指目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，将目的基因与Ti质粒整合属于构建基因表达载体的操作，不属于转化，C错误； D、Ti质粒上的T-DNA具有可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上的特点，D正确。 29. 中国农业科学院棉花研究所棉花分子遗传改良创新团队成功将甜菜红素在棉花纤维中富集，创制出纤维呈粉红色的棉花，下图是利用基因工程培育粉红色棉花的示意图，下列有关该研究说法错误的是（ ） A. 通过基因工程创制出彩色纤维棉可有效减少化学染料使用量 B. 过程①→②完成需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶的参与 C. 在植株⑤中检测到甜菜红素合成相关的基因，就代表粉红色棉花培育成功 D. 过程④→⑤依据了植物体细胞全能性的原理 【答案】C 【解析】 【分析】过程①→②为基因表达载体的构建，过程②→③→④为将目的基因导入受体细胞（农杆菌转化法），过程④→⑤为植物组织培养。 【详解】A、通过基因工程将甜菜红素在棉花纤维中富集，创制出纤维呈粉红色的棉花，可有效减少化学染料使用量，A正确； B、过程①→②为基因表达载体的构建，完成该过程需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶的参与，B正确； C、在⑤的植株中检测到甜菜红素合成相关的基因，该基因不一定能进行转录和翻译，故检测到甜菜红素合成相关的基因粉红色棉花不一定能培育成功，C错误； D、过程④→⑤为植物组织培养，植物组织培养的原理是植物体细胞具有全能性，D正确。 故选C。 30. 下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，错误的是（　　） A. DNA连接酶具有特异性，只能连接同一种限制性内切核酸酶切割形成的黏性末端 B. 启动子是一段特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，是转录的起始位点 C. 蛋白质工程需构建基因表达载体，改造后的蛋白质的性状可遗传给后代 D. 将抗虫基因整合到某植物的线粒体DNA中，可通过花粉传播，从而引起基因污染 【答案】ABD 【解析】 【详解】A、DNA连接酶可以将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，而产生的相同黏性末端，可以是同一种限制性内切核酸酶切割形成的，也可以是两种限制性内切核酸酶切割形成的，A错误； B、启动子不是转录的起始位点，而是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，B错误； C、蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，也需构建基因表达载体，改造后的蛋白质的性状可遗传给后代，C正确； D、受精时只有精子的头部进入卵细胞，将抗虫基因整合到某植物的线粒体DNA中，不会通过花粉传播而引起基因污染，D错误。 第II卷（非选择题，共30分） 三、非选择题（本题共3小题，共30分） 31. 泡菜传统自然发酵方式的发酵周期相对较长，生产效率低。研究人员欲从泡菜中分离筛选出高产酸乳酸菌，为泡菜工厂化生产提供依据。请分析并回答下列问题： （1）配制CaCO3-MRS培养基。成分：蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、磷酸氢二钾、葡萄糖、琼脂粉、碳酸钙等。 ①根据物理性质分类，该培养基属于_____培养基，为乳酸菌种提供氮源的成分是_____； ②培养过程中，乳酸菌产生乳酸溶解碳酸钙，形成溶钙圈，便于_____。 （2）高产乳酸菌的培养与分离。其部分实验目的与具体操作如下所示，请完成下表。 实验目的 简要操作过程 梯度稀释 在无菌条件下取样品中泡菜汁1mL，加入①_____进行10倍梯度稀 释，依次得到10-5、10-6、10-7的稀释液。 接种培养 取上述稀释液1mL分别加入无菌培养皿中，然后将CaCO3-MRS培养基浇注混匀冷凝后，将培养皿②_____，并连续培养48h。 分离纯化 挑取③_____进行平板划线培养。 长期保存 将菌种加入30％的甘油中在-20℃保存。 （3）高产酸乳酸菌的鉴定。提取筛选乳酸菌的DNA，通常采用16SrDNA（编码 rRNA对应的DNA序列）的通用引物进行PCR扩增并测序鉴定。以16SrDNA作为细菌分类依据的原因是不同菌属的16SrDNA具有_____。 （4）高产酸乳酸菌发酵效果检测。研究人员研究了两种高产酸乳酸菌（乳酸菌A50f7和A50b9）在发酵泡菜过程中pH的变化，结果如下图所示。据图分析，该研究实验的自变量是_____，可以看出，接种两种乳酸菌效果相近，其相近之处表现为_____。 【答案】（1） ①. 固体 ②. 蛋白胨、牛肉膏、酵母粉 ③. 筛选高产酸乳酸菌 （2） ①. 9ml无菌水 ②. 倒置 ③. 有明显溶钙圈 （3）差（特）异性 （4） ①. 乳酸菌种类和接种量（发酵时间） ②. 均能快速降低泡菜发酵过程中的pH值，且接种量越大作用效果越明显 【解析】 【分析】泡菜制作的原理是需利用乳酸菌在无氧条件下发酵形成乳酸菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，然后制作成泡菜。PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 【小问1详解】 琼脂是凝固剂，根据物理性质分类，该培养基属于固体培养基；氮源是指提供氮元素的物质，蛋白胨、牛肉膏、酵母粉含有氮元素，可为乳酸菌种提供氮源；培养基中含有碳酸钙，乳酸菌产生乳酸会与碳酸钙反应形成溶钙圈，便于筛选高产酸乳酸菌。 【小问2详解】 要分离和培养高产乳酸菌，首先可以对泡菜汁进行梯度稀释，稀释时需要用无菌水，如1mL泡菜汁+9mL无菌水，相当于对泡菜汁稀释了10倍，以此类推；培养时为了防止冷凝水滴落冲散菌落，应将培养皿倒置培养；溶钙圈明显的菌落，产乳酸菌的能力强，应挑选有明显溶钙圈的菌落进行平板划线培养。 【小问3详解】 不同菌属的16SrDNA具有差（特）异性，PCR能鉴定不同的DNA，因此能采用16SrDNA（编码 rRNA对应的DNA序列）的通用引物进行PCR扩增并测序鉴定不同菌属。 【小问4详解】 自变量是人为改变的量，据图分析，该研究实验的自变量是乳酸菌种类（乳酸菌A50f7和A50b9）和接种量（发酵时间）；结合图示结果可知，两种乳酸菌均能快速降低泡菜发酵过程中的pH值，且接种量越大作用效果越明显，效果相近。 【点睛】本题主要考查微生物的分离与应用，要求学生有一定的理解分析能力。 32. 百合具有观赏、食用和药用等多种价值，科研人员对其进行了多种育种技术研究。回答下列问题： （1）体细胞杂交育种。进行不同种百合体细胞杂交前，先用_______去除细胞壁获得原生质体，使原生质体融合，得到杂种细胞后，继续培养，常用_______（填植物激素名称）诱导愈伤组织形成和分化，获得完整的杂种植株。 （2）单倍体育种。常用________的方法来获得单倍体植株，鉴定百合单倍体植株的方法是________。 （3）基因工程育种。研究人员从野生百合中获得一个抵抗尖孢镰刀菌侵染的基因L，该基因及其上游的启动子pL和下游的终止子结构如图a。图b是一种Ti质粒的结构示意图，其中基因gus编码GUS酶，GUS酶活性可反映启动子活性。 ①研究病原微生物对L的启动子pL活性的影响。从图a所示结构中获取pL，首先选用_______酶切，将其与相同限制酶酶切的Ti质粒连接，再导入烟草。随机选取3组转基因成功的烟草（P1、P2和P3）进行病原微生物胁迫，结果如图c。由此可知：三种病原微生物都能诱导pL的活性增强，其中________的诱导作用最强。 ②现发现栽培种百合B中也有L，但其上游的启动子与野生百合不同，且抗病性弱。若要提高该百合中L的表达量，培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，简要写出实验思路________。 【答案】（1） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. 生长素和细胞分裂素 （2） ①. 花药离体培养 ②. 利用显微镜观察根尖有丝分裂中期细胞中染色体的数目 （3） ①. HindⅢ、BamHⅠ ②. 交链格孢 ③. 利用转基因技术将百合B中L基因的启动子替换为野生百合中L基因的启动子pL 【解析】 【分析】【关键能力】 （1）信息获取与加工 题干关键信息 所学知识 信息加工 去除细胞壁获得原生质体 植物体细胞杂交的过程 植物体细胞杂交的过程中需要先去除植物细胞的细胞壁，植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，需要用相应的酶完成去壁的过程 获得单倍体植株 植物组织培养技术 通过植物组织培养技术，经过脱分化和再分化的过程，利用花药离体培养可获得单倍体 鉴定百合单倍体植株 有丝分裂的过程 单倍体植株是由配子发育而来，染色体数目减半，观察染色体的数目可判断是否是单倍体植株，有丝分裂中期的染色体形态固定，数目清晰，是观察染色体最佳时期 （2）逻辑推理与论证： 【小问1详解】 因植物细胞细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，因此获得原生质体的方法是用纤维素酶和果胶酶对植物细胞进行处理。得到原生质体后使原生质体融合，形成杂种细胞，再用生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织形成和分化，从而获得完整的杂种植株。 【小问2详解】 获得单倍体植株的常用方法是花药（花粉）离体培养；鉴定百合单倍体植株的方法是利用显微镜观察根尖有丝分裂中期细胞中染色体的数目，如果染色体数目减少一半，则获得的植株即为单倍体植株。 【小问3详解】 根据目的片段以及质粒上限制酶的识别位点，启动子两侧都有两种酶，若要获得pL并连接到质粒上，可选用限制酶HindⅢ、BamHⅠ进行酶切，以替换Ti质粒中的启动子，从而达到根据GUS酶活性反映启动子活性的目的。根据图c的结果可知，交链格孢处理的每一组转基因烟草中的GUS酶活性都最高，可确定其诱导作用最强。欲培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，可利用转基因技术将百合B中L基因的启动子替换为野生百合中L基因的启动子pL，具体思路：设计引物利用PCR扩增野生百合的基因L及其pL；插入Ti质粒构建基因表达载体，利用农杆菌转化 法导入百合B的体细胞，经植物组织培养获得转基因植株；筛选L表达量提高的转基因百合；用病原体微 生物侵染转基因百合，检测其抗病能力（要体现基因工程的步骤和关键技术，最后要进行个体生 物学水平鉴定） 33. 研究发现，实体肿瘤内部通常是缺氧的环境，蓖麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖体，使蛋白合成受阻，从而引起细胞死亡。TAT是一种短肽，可转导蛋白进入细胞，含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应低氧条件稳定存在，但在常氧条件下会被蛋白酶降解。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子，利用TAT的作用将融合蛋白转运进入肿瘤细胞，并利用ODD的作用减轻RTA对正常细胞的毒性，分别构建了含TAT−RTA（660bp）和TAT−RTA−ODD（870bp）融合基因的表达载体，并成功得到相关融合蛋白。 （1）可采用PCR的方法获取融合基因TAT−RTA，需要根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是__________。已知RTA基因和欲得到的TAT−RTA融合基因的结构如图1所示，TAT基因编码链序列5＇−ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA−3＇，为顺利构建表达载体，需要在引物1的5＇端加入________限制酶的酶切位点，引物2的5＇端加入________限制酶的酶切位点，利用TAT和RTA核酸序列设计引物时，要求在RTA蛋白的前端引入TAT短肽，请根据要求写出引物1_______（写出引物5＇端的12个碱基即可）。 （2）载体的部分结构如图2所示，His标签由连续的6个组氨酸构成，可用于对重组融合蛋白进行分离纯化，将PCR得到的TAT−RTA融合基因和载体双酶切后，再用___________酶连接。但是在研究时，发现融合蛋白中没有His标签蛋白，据图分析原因是_________。 【答案】（1） ①. 与模板DNA单链互补配对实现连接，并且使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸 ②. BamHI ③. Xbo I ④. 5'GGATCCATGAGC3' （2） ①. DNA连接酶 ②. 限制酶2识别序列后面的一个碱基A与His标签基因编码链的前两个碱 基CA编码一个氨基酸，导致His标签基因对应的mRNA的密码子被错位读取 【解析】 【小问1详解】 PCR中，引物的作用是与模板DNA单链互补配对实现连接，并且使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸。据图1可知，TAT-RTA融合基因TAT靠近启动子一侧有BamHI的位点，RTA靠近终止子一侧有XboI的位点，则引物1的5端加入BamHI，引物2的5端加入XboI。TAT基因编码链序列 5'ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA3'，由于其5'端需插入BamHI的识别位点，根据碱基互补配对原则可知，其对应的引物的5'端应包含BamHI的识别序列，故设计为5'GGATCCATGAGC3'，以便BamHI切出相应的黏性末端。 【小问2详解】 切割后的DNA片段需要用DNA连接酶连接成完整DNA分子。由图2可知，限制酶2识别序列与His标签序列之间多出一个碱基A，这一个碱基A与His标签基因编码链的前两个碱基CA编码一个氨基酸，导致His标签基因对应的mRNA的密码子被错位读取，导致不能正确编码出His标签蛋白。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $