精品解析：江苏省无锡市市北高级中学2025--2026学年高二下学期期中考试生物试题

无锡市市北高级中学2025-2026学年第二学期 高二年级生物学科期中检测卷 时间：75分钟 分值：100分 本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题） 第Ⅰ卷（选择题 共45分） 一、单项选择题：本大题共15小题，每小题2分，共30分，在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的，请把正确答案涂在答题卡上。 1. 《齐民要术》在记叙酿酒方法时指出蒸软的米要“舒（摊开）使极冷，然后纳之（下酿瓮中去）”，酿酒完成的标志是“味足沸定”。下列相关叙述错误的是（ ） A. “舒使极冷，然后纳之”可避免高温杀死发酵所需的菌种 B. 酿酒时，向酿瓮中持续通入足量空气有利于缩短发酵时间 C. “沸定”说明大部分菌种不再进行细胞呼吸释放CO2，发酵完成 D. 酿酒时糖未耗尽，酵母菌发酵也会停止，原因可能是pH降低和酒精含量增多 【答案】B 【解析】 【分析】酵母菌是兼性厌氧菌，无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。酿酒就是利用酵母菌的无氧呼吸，但在酿酒前期需通气培养，以利于酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。 【详解】A、“舒使极冷，然后纳之” 是将蒸熟的米摊开冷透，然后将其放入发酵罐中，这样可以避免高温杀死发酵所需的菌种，A正确； B、酿酒时，向酿瓮中持续通入足量空气，有利于酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，但会抑制酵母菌的无氧呼吸，因此不利于缩短发酵时间，B错误； C、“沸定”说明大部分菌种不再进行细胞呼吸释放CO2，发酵完成，此时酒精含量较高，糖分基本消耗完，C正确； D、酿酒时糖未耗尽，酵母菌发酵也会停止，原因可能是pH降低和酒精含量增多，对发酵起抑制作用，从而导致酵母菌发酵停止，D正确。 故选B。 2. 某同学为了在实验室富集某种大豆根瘤菌，通过查阅资料，配制了含有如下成分的培养基。下列有关叙述错误的是（ ） 成分 甘露醇 KH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O 浓度（质量分数） 1% 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% A. 该培养基不需要添加氮源，可以达到富集目的 B. 该培养基还需要添加琼脂，便于将菌种接种到固体培养基上 C. 灭菌后待培养基冷却至50℃左右时，需要在酒精灯火焰附近倒平板 D. 平板上一个菌落就是一个大豆根瘤菌 【答案】D 【解析】 【分析】倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰；用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖；等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上，这样可以防止皿盖上的水分滴到培养基上造成培养基的污染。 【详解】A、根瘤菌为固氮菌，可利用空气中的氮气作为氮源，该培养基缺少氮源，可用于筛选和富集固氮菌，其中的甘露醇可以作为碳源，A正确； B、琼脂通常可作为固体培养基的促凝剂，故该培养基还需要添加琼脂，便于将菌种接种到固体培养基上，B正确； C、灭菌后待培养基冷却至50℃左右时，倒平板过程需要在酒精灯火焰旁进行，防止空气中的杂菌污染，C正确； D、平板上一个菌落是由单个微生物细胞繁殖到一定程度，形成的子细胞集团，D错误。 故选D。 3. 某野生大肠杆菌经X射线照射后，形成了两种不同的氨基酸缺陷型菌株A、B，其在基本培养基上及进行相应处理后的生长情况如表所示。下列叙述错误的是 （ ） 接种的菌种 基本培养基 实验处理和结果 野生菌株 能生长 不处理 诱变菌株A 不生长 添加组氨酸，能生长 诱变菌株B 不生长 添加色氨酸，能生长 诱变菌株A+B 均能生长 不处理 A. 基本培养基含碳源、氮源、无机盐和水等细菌生长繁殖所需的基本营养成分 B. 组氨酸和色氨酸是诱变菌种生长所必需的氨基酸 C. X射线照射可能导致菌株B发生染色体变异，影响色氨酸合成 D. 菌株A和B混合培养时，可能互相提供了对方不能合成的氨基酸 【答案】C 【解析】 【分析】表格分析，野生菌株能在基本培养基上生长，菌株A需要添加组氨酸才能生长，菌株B需要添加色氨酸才能生长，而菌株A和B混合培养时能生长，可能时菌株A和B互相提供了对方不能合成的氨基酸。 【详解】A、基本培养基是满足微生物生长繁殖所需基本营养成分的培养基，通常含有碳源、氮源、无机盐和水等，A正确； B、从表格中可以看出，诱变菌株A在基本培养基上不生长，添加组氨酸后能生长；诱变菌株B在基本培养基上不生长，添加色氨酸后能生长，这说明组氨酸和色氨酸是诱变菌种生长所必需的氨基酸，B正确； C、大肠杆菌是原核生物，没有染色体，X射线照射导致的是基因突变，而不是染色体变异，C错误； D、菌株A和B混合培养时，不添加组氨酸和色氨酸均能生长，推测可能是互相提供了对方不能合成的氨基酸，D正确。 故选C。 4. 微生物需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖，下列与此有关的说法正确的是（ ） A. 有的氮源可以作为细菌的能源物质 B. 加入酚红指示剂的培养基，可以筛选大肠杆菌 C. 大肠杆菌与分解尿素的细菌所利用的氮源相同 D. 以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是能分解尿素的细菌 【答案】A 【解析】 【分析】微生物培养基的成分有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，不同的生物有不同的碳源和氮源，如尿素分解菌以尿素为唯一氮源，某些碳源、氮源也可以提供能源，如牛肉膏蛋白陈培养基。 【详解】A、有的氮源可以作为细菌的能源物质，如有机氮也可以作为细菌的能源物质，A正确； B、加入酚红指示剂的培养基不能筛选大肠杆菌，B错误； C、大肠杆菌利用的氮源是有机氮，分解尿素的细菌利用的氮源是尿素，C错误； D、以尿素为唯一氮源的培养基上长出的可能是固氮菌，它可以利用空气中游离的N2作为氮源，D错误。 故选A。 5. 大肠杆菌作为模式生物，在科学研究、生物工程和基因编辑等领域具有重要应用价值。在实验室培养大肠杆菌过程中，下列操作正确的是（ ） A. 锥形瓶中的培养基灭菌之后再调节培养基的pH B. 只能用划线分离法将大肠杆菌接种至平板上 C. 大肠杆菌的扩大培养需在CO2培养箱进行 D. 培养结束的培养基应先高压蒸汽灭菌再丢弃 【答案】D 【解析】 【分析】微生物的接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。接种时需要放置杂菌污染，保证培养物的纯度。 【详解】A、正确的操作顺序是先调节培养基的pH，然后再进行灭菌。因为如果先灭菌后调节pH，在调节过程中又可能引入杂菌污染，A错误； B、接种大肠杆菌到平板上的方法有多种，常见的有划线分离法和稀释涂布平板法等，并非只能用划线分离法，错误； C、大肠杆菌是异养兼性厌氧型细菌，扩大培养时一般在液体培养基中进行，动物细胞培养需在CO2培养箱中进行，C错误； D、培养结束后的培养基含有大量微生物，为防止这些微生物污染环境等，应先进行高压蒸汽灭菌，杀死其中的微生物后再丢弃，D正确。 故选D。 6. 图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是（ ） A. 步骤①添加盐酸以去除细胞壁 B. 步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C. 原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D. 台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养 【答案】C 【解析】 【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【详解】A、步骤①添加纤维素酶或果胶酶去除细胞，其原理是酶的专一性，A错误； B、步骤②吸取原生质体放入等渗液中清洗，否则会导致原生质体吸水涨破，B错误； C、结合图示可知原生质体处于甘露醇和蔗糖溶液之间，因而可推测原生质体的密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间，C正确； D、台盼蓝检测后应选择无色的原生质体继续培养，染成蓝色的原生质体活性差或死亡，D错误。 故选C。 7. 科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得多能干细胞，继而利用多能干细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下图所示，下列叙述正确的是（　　） A. 对克隆鼠 X 进行性别鉴定时应从滋养层处取样 B. 将克隆鼠的肝脏移植给灰鼠一定可避免免疫排斥反应 C. 黑鼠和白鼠不需要进行同期发情处理 D. 胚胎早期发育时，桑葚（椹）胚内部开始出现含液体的腔 【答案】C 【解析】 【分析】据图可知，从黑鼠中提取体细胞诱导形成多能干细胞，然后注入到特殊处理使内细胞团不发育的囊胚中，形成的重组囊胚移入到白鼠（代孕母鼠），最终形成克隆鼠X。 【详解】A、克隆鼠X是由多能干细胞发育形成的，与滋养层细胞中遗传物质并不相同，因此对克隆鼠X进行性别鉴定时不能从滋养层处取样，A错误； B、克隆鼠是由黑鼠体细胞诱导形成的多能干细胞发育形成的，与黑鼠遗传特性相同，因此将克隆鼠的肝脏移植给黑鼠可避免免疫排斥反应，但是若发生基因突变，可能会发生免疫排斥反应，B错误； C、黑鼠提供体细胞诱导形成多能干细胞，黑鼠和白鼠不需要进行同期发情处理，灰鼠提供胚胎，灰鼠和白鼠需要进行同期发情处理，C正确； D、胚胎早期发育时，囊胚内部开始出现含液体的腔，D错误。 故选C。 8. 猴痘是一种病毒性人畜共患病，在人类中出现的症状与过去在天花患者身上所看到的症状相似，B6R蛋白是猴痘病毒的抗原。为制备抗B6R蛋白的单克隆抗体，研究人员进行了相关实验，如图所示，其中①~④表示细胞。下列叙述正确的是（ ） A. 细胞①含有从小鼠的脾中得到的能产生特定抗体的B淋巴细胞 B. 诱导细胞①②融合的常用方法与诱导原生质体融合的方法相同 C. ④过程需要添加抗生素等物质，以防止病毒污染 D. 图中的培养瓶需要置于含有95%O2和5%CO2的混合气体中培养 【答案】A 【解析】 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、单克隆抗体制备过程中需要将产生特定抗体的浆细胞与骨髓瘤细胞融合，给小鼠注射B6R蛋白的目的是使小鼠针对该抗原产生特异性免疫，从而使体内出现能产生抗B6R蛋白抗体的浆细胞，因此从小鼠脾脏提取的细胞①含有能产生特定抗体的B淋巴细胞，A正确； B、诱导动物细胞融合特有的方法是灭活的病毒，因此诱导细胞①②融合的常用方法与诱导原生质体融合的方法不完全相同，B错误； C、抗生素可以抑制细菌的生长，不能抑制病毒的生长，C错误； D、图中的培养瓶需要置于含有95%空气和5%CO2的混合气体中培养，D错误。 故选A。 9. 近年来，转基因技术取得了众多成果，但其安全性也引发了广泛争论。面对这种情况，我们需要秉持科学理性的态度。以下关于转基因成果与安全性的说法错误的是（　　） A. 生存和繁殖上有优势的转基因生物可能会破坏原有生态平衡 B. 转基因抗虫棉中的Bt抗虫蛋白只在某类昆虫中表现出毒性，一般不会对人畜造成影响 C. 转基因抗病毒动物的抗病毒基因可能会发生突变，转变为具有潜在致病风险的基因，因其概率极低可忽略不计 D. 我国科学家将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可阻断淀粉储藏使花粉失活，从而有效防止转基因花粉的传播 【答案】C 【解析】 【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变等）、生物安全（对生物多样性的影响等）、环境安全（对生态系统稳定性的影响等）。 【详解】A、转基因生物若在生存和繁殖上具有优势，可能通过竞争排斥原有物种，导致生态失衡，A正确； B、Bt抗虫蛋白特异性作用于鳞翅目昆虫的碱性肠道环境，而人畜的酸性消化系统无法激活该蛋白，故对人畜无害，B正确； C、基因突变具有低频性，但一旦发生可能导致潜在风险，不能因概率低而完全忽略其安全性，C错误； D、α-淀粉酶基因的转入可抑制花粉中淀粉的积累，使花粉失活，从而阻断转基因花粉的传播，D正确。 故选C。 10. 干细胞的应用前景吸引着众多科学家投入到相关研究中。科学家将特异性基因转入甲鼠成纤维细胞中，在培养 ES 细胞的培养基上培养，获得 iPS 细胞团，再转入乙鼠体内，一段时间后转入乙鼠的细胞团逐渐退化。以下说法正确的是（ ） A. ES 细胞是胚胎干细胞的简称，可来源于囊胚，具有组织特异性 B. 小鼠的成纤维细胞转变为 iPS 细胞，类似于植物组织培养中的再分化过程 C. 小鼠乙体内细胞团逐渐退化的原因可能是发生免疫排斥反应 D. iPS 细胞与成体干细胞的分化潜能是没有差别的 【答案】C 【解析】 【分析】诱导性多能干细胞（iPS 细胞），是指通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞。 【详解】A、胚胎干细胞，简称ES细胞，存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能，A错误； B、小鼠的成纤维细胞转变为 iPS 细胞，从高度分化的细胞形成分化程度低的细胞，类似于植物组织培养中的脱分化过程，B错误； C、甲鼠的细胞对于乙鼠来说是异物，移植进入乙体内，会被乙鼠的免疫系统加以清除，所以小鼠乙体内细胞团逐渐退化的原因可能是发生免疫排斥反应，C正确； \D、iPS 细胞类似胚胎干细胞，可以分化出多种细胞，与成体干细胞的分化潜能不同，D错误。 故选C。 11. 镰状细胞贫血是一种单基因遗传病，由正常血红蛋白基因(HbA)突变为异常血红蛋白基因(Hbs)引起，它们的某片段如图甲。现对一胎儿进行基因检测，主要原理：限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，加热使酶切片段解旋后用荧光标记的 CTGACTCCT 序列与其杂交，最后电泳分离。图乙为电泳后荧光出现的三种可能性。下列叙述不正确的是（ ） A. 提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA 需要添加特定的引物 B. 若该胎儿检测结果为图乙一b，则其为镰状细胞贫血患者 C. 荧光标记序列越长，图乙-c中两个 DNA 条带间的距离越大 D. 用限制酶MstⅡ处理 DNA不充分，可能把正常人误判为携带者 【答案】C 【解析】 【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。 【详解】A、引物的作用是作为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制，因此提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA需要添加特定的引物，A正确； B、据图可知，正常血红蛋白基因 (HbA) 中含有MstⅡ限制酶的酶切位点，而贫血症基因 (Hbs) 中没有，限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，会导致正常血红蛋白基因(HbA)变短，单个分子量变小，出现图乙-aDNA条带，DNA条带距离加样孔较远，说明DNA分子量小，则表示含有正常血红蛋白基因 (HbA) ；出现图乙-bDNA条带，DNA条带距离加样孔较近，说明DNA分子量大，没有被切割，表示含有贫血症基因 (Hbs) ；出现图乙-cDNA条带表示含有贫血症基因 (Hbs) 和正常血红蛋白基因 (HbA) ，因此若某胎儿检测结果为图乙-b， 则该胎儿为镰刀形细胞贫血症患者，B正确； C、凝胶电泳中，DNA分子量越大跑得越慢，因此图乙-c 中两个DNA 条带间的距离与切割后DNA分子量的大小有关，与荧光标记序列长短无关，C错误； D、据图可知，正常血红蛋白基因 (HbA) 中含有MstⅡ限制酶的酶切位点，而贫血症基因 (Hbs) 中没有，用 MstⅡ限制酶处理DNA 不充分，正常血红蛋白基因 (HbA) 中中间位置可能没有被切割，结果可能与贫血症基因 (Hbs) 结果一样，因此可能把正常人误判为携带者，D正确。 故选C。 12. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ） A. 可以用菜花、洋葱、猪血，猪肝等实验材料粗提取DNA B. 提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的研磨液，充分研磨 C. 若选择动物细胞作为实验材料，实验中多次加入蒸馏水的目的均是为了析出DNA D. 可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取DNA 【答案】B 【解析】 【详解】A、猪血中的成熟哺乳动物红细胞没有细胞核和细胞器，不含DNA，无法作为粗提取DNA的实验材料，A错误； B、提取植物细胞的 DNA 时，加入一定量的研磨液快速研磨，可以破碎细胞，释放出 DNA，B正确； C、以动物细胞为实验材料时，第一次加入蒸馏水的目的是让动物细胞吸水涨破，释放细胞内的核物质，并非析出DNA，C 错误； D 、DNA不溶于酒精，而蛋白质等杂质易溶于酒精，实验中利用该特性析出DNA、去除杂质，D 错误。 13. 下列有关基因工程的成果及应用的叙述，正确的是（ ） A. 将人的胰岛素基因导入大肠杆菌后，表达出的胰岛素与人的胰岛素结构完全相同 B. 培育青霉菌并从中提取青霉素 C. 基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 D. 可将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，使其肠道表达肠乳糖酶，从而改善牛奶品质 【答案】C 【解析】 【分析】基因工程的应用 1.生产新型疫苗、胰岛素和人的生长激素：eg利用酵母菌生产人的乙型肝炎病毒疫苗 2、动物基因工程与帝禽品种改良：①从育种角度出发用于改造畜、禽的品质；②作为动物的生物“反应器”，用于生产人们所需要的活性物质如动物生长激素、胰岛素、抗体等。 3、转基因农作物。 4、在遗传病的基因诊断和基因治疗中的作用。 【详解】A、利用基因工程技术，将人的产生胰岛素的基因转入大肠杆菌后，大肠杆菌内表达出的胰岛素与人的胰岛素结构不完全相同，因为大肠杆菌属于原核生物，无内质网与高尔基体，无法对胰岛素进行加工，A错误； B、培育青霉菌并从中提取青霉素，没有采用基因工程技术，B错误； C、基因工程的应用很广泛，在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物，C正确； D、可将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，使其乳腺中表达肠乳糖酶，从而改善牛奶品质，而不是在肠道表达该基因，D错误。 故选C。 14. 应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品，提高了经济效益。如图表示培育生物新品种的过程，请据图判断下列叙述中正确的是（ ） A. 图中①过程需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体 B. 图中⑤过程需要的培养基中只需加入无机营养和植物激素 C. 将prG导入细胞I，细胞I是B淋巴细胞 D. 要检测抗虫棉的抗虫特性，不需要做抗虫的接种实验，检测毒蛋白即可 【答案】C 【解析】 【分析】根据题意和图示分析可知：图中①表示基因表达载体的构建，②表示利用显微注射法将目的基因导入动物细胞的受精卵中，③表示早期胚胎发育和胚胎移植，④表示将目的基因导入植物细胞，⑤表示植物组织培养技术。 【详解】A、①表示基因表达载体的构建，该过程需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶，载体不是工具酶，A错误； B、⑤表示采用植物组织培养技术将转基因植物细胞培育成转基因植株，该过程需要的培养基中含有植物激素、无机营养、有机营养、琼脂等，B错误； C、将PrG导入到细胞Ⅰ形成的重组细胞能产生单克隆抗体，PrG能无限增殖，则Ⅰ是B淋巴细胞，能产生抗体，C正确； D、转基因棉花是否具有抗虫特性，应该直接用害虫来食用棉花叶片，做毒性检测，D错误。 故选C。 15. 像BclⅠ（-T↓GATCA-）、BglⅡ（-A↓GATCT-）、MboⅠ（-↓GATC-）这样，识别序列不同、，但能产生相同的黏性末端的一类限制酶被称为同尾酶。如图表示目的基因及质粒上的酶切位点。选用不同的限制酶对质粒和目的基因进行切割，并用DNA连接酶进行连接。下列分析错误的是（ ） 选项 切割质粒 切割目的基因 结果分析 A BclI和BglⅡ BclI和BglⅡ 形成的重组质粒的碱基排列顺序不一定相同 B BclI和BglⅡ MboI 切割后的质粒不可自我环化，切割后的目的基因可以自我环化 C MboI BclI和BglⅡ 形成的重组质粒可被MboI再次切开，但可能无法被BclI和BglⅡ再次切开 D MboI MboI 切割后的质粒可以自我环化，切割后的目的基因也可以自我环化 A. A B. B C. C D. D 【答案】B 【解析】 【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。 【详解】A、切割质粒和切割目的基因用均用BclⅠ和BglⅡ，由于两种酶切割后产生的黏性末端相同，形成的重组质粒时目的基因可能反向连接，形成的碱基排列顺序不一定相同，A正确； B、切割质粒用BclⅠ和BglⅡ，切割后产生的黏性末端相同，切割后的质粒可能自我环化；切割目的基因用MboⅠ，切割后产生黏性末端，切割后的目的基因可以自我环化，B错误； C、切割质粒用MboⅠ，产生黏性末端，切割目的基因用BclⅠ和BglⅡ，产生黏性末端，形成的重组质粒中原来的BclⅠ和BglⅡ的切割位点的序列发生改变，不能再被这两种酶切割，但不影响MboⅠ的作用，C正确； D、切割质粒用MboⅠ，切割目的基因用MboⅠ，产生的均为黏末端，切割后的质粒可自我环化，切割后的目的基因也可以自我环化，D正确。 故选B。 二、多项选择题：本大题共4小题，每小题3分，共15分，请把正确答案涂在答题卡上。 16. 下列有关植物细胞工程应用的叙述正确的是（ ） A. 利用植物细胞培养技术获得紫草素，可实现细胞产物的工厂化生产 B. 通过单倍体育种得到的个体一定是纯合子 C. 利用植物组织培养技术可获得脱毒植株 D. 利用植物体细胞杂交技术培育的“白菜—甘蓝”，可获得双亲的遗传特性 【答案】ACD 【解析】 【分析】植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（包括微型繁殖，作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、组织培养技术除了在农业生产上的应用外，还可广泛应用于另一个重要的领域，即细胞产物的工厂化生产，A正确； B、基因型为AAaa的植株，减数分裂产生的配子为AA、Aa、aa，单倍体育种后得到的个体基因型为AAAA、AAaa、aaaa，其中含有杂合子AAaa，B错误； C、因为分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将分生组织（如根尖、茎尖）进行离体培养能获得脱毒植株，C正确； D、利用植物体细胞杂交技术培育的“白菜一甘蓝”，具有双亲的遗传物质，因此杂种植株可获得双亲的遗传特性，D正确。 故选ACD。 17. 花椰菜（2n=18）易患黑腐病导致减产，黑芥（2n=16）则有较好的黑腐病抗性。科研人员基于下图所示过程，培育出抗性花椰菜植株m、n和s，它们均含有花椰菜的全部染色体。下列叙述错误的有（　　） A. 可用聚乙二醇诱导原生质体融合 B. 融合的原生质体中来自黑芥的染色体介于4-8之间 C. 植株m、n、s中的抗性基因来自黑芥 D. 植株n、s中来自黑芥的染色体构成一个染色体组 【答案】BD 【解析】 【分析】植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶酶，根据酶的专一性，为获得原生质体时需用纤维素酶和果胶酶处理。 【详解】A、诱导原生质体融合的方法包括物理法和化学法，其中化学法可用聚乙二醇诱导原生质体融合，A正确； B、题意显示，m、n和s均含有花椰菜的全部染色体，而花椰菜的染色体数是18，融合的原生质体经过组织培养得到的植株中的染色体数是20、25、26，所以融合的原生质体中来自黑芥的染色体条数分别为2、7、8，故介于2～8之间，B错误； C、题意显示“黑芥（2n=16）有较好的黑腐病抗性，因而可知植株m、n、s中的抗性基因来自黑芥的染色体，C正确； D、一个染色体组指细胞中的一组非同源染色体，结合B选项的分析可知，植株n、s中来自黑芥的染色体条数分别为7、8，可知植株n、s中来自黑芥的染色体不一定构成一个染色体组，D错误。 故选BD。 18. 通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列说法错误的是（　　） A. 相对于成纤维细胞，iPS细胞分化程度低，分裂能力强 B. 两种方法都需要运用动物细胞培养技术，通过对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以保证无菌、无毒的环境 C. 利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质与患者相同，移植后不会发生免疫排斥反应 D. 利用获得的iPS细胞诱导出特定的组织器官，体现了iPS细胞的全能性 【答案】BCD 【解析】 【详解】A、iPS细胞类似于胚胎干细胞，与成纤维细胞相比，iPS细胞的分化程度低，分裂能力强，A正确； B、两种方法都需要运用动物细胞培养技术，通过对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以保证无菌环境，定期更换培养液创造无毒的环境，B错误； C、图1所示方法导入了 Oct3/4 基因、Sox基因、c-Myc 基因和Klf 基因，图2中提供质遗传物质的卵母细胞的来源未知，因此两种方法所获得的组织器官的遗传物质均可能和患者的不完全相同，C错误； D、细胞的全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能性和特性。利用获得的iPS细胞诱导出特定的组织器官，并未发育为个体或分化成其他各种细胞，不能体现iPS细胞的全能性，D错误。 故选BCD。 19. 下列有关PCR技术的说法正确的是（ ） A. PCR呈指数扩增DNA片段是因为下一轮反应的模板由上一轮反应产物提供 B. 所用引物是能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的RNA C. 引物3’端最佳碱基的选择是G和C，因为它们形成的碱基配对比较稳定 D. PCR的引物长度通常为20-30个碱基对，且引物内部不应出现互补序列 【答案】AC 【解析】 【分析】PCR技术：原理：DNA复制。前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链. 【详解】A、PCR过程中每一次循环的产物都是下一次循环的模板，所以呈指数扩增，A正确； B、PCR过程所用引物是DNA单链，不是RNA单链，B错误； C、G和C之间形成的碱基配对比较稳定，所以引物3’端最佳碱基，C正确； D、PCR的引物是DNA单链，长度通常为20-30个碱基，不是碱基对，D错误。 故选AC。 20. 苏云金芽孢杆菌中的杀虫晶体蛋白 Cry具有杀虫毒性，但 Cry蛋白存在杀虫谱窄、毒力有限等问题，制约了其在农业生产中的进一步应用。科学家通过定点突变，将Cry 蛋白第168位的组氨酸替换为精氨酸后，Cry 蛋白对烟草天蛾的毒性提高了3倍；将 Cry 蛋白第282位、第283 位的丙氨酸和亮 氨酸分别替换成甘氨酸和丝氨酸后，Cry蛋白对烟草天蛾的毒性提高了7倍。下列有关叙述错误的是（　　） A. 对Cry 蛋白的改造是通过直接替换 Cry 蛋白中的氨基酸来实现的 B. Cry蛋白的毒性提高了3~7倍的原因可能是改变了该蛋白质的空间结构 C. 改造 Cry 蛋白应从 Cry 蛋白基因的脱氧核苷酸序列出发设计其特有的结构 D. 使用蛋白质工程改造 Cry蛋白过程中需要使用限制酶和 DNA 连接酶 【答案】AC 【解析】 【分析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。 【详解】A、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，对Cry蛋白的改造是通过改造Cry蛋白的相关基因来实现的，A错误； B、蛋白质的结构决定功能，Cry蛋白的毒性提高了3~7倍的原因可能是改变了该蛋白质的空间结构，B正确； C、改造Cry蛋白应从Cry蛋白的预期功能出发设计其特有的结构，并改造或合成相关基因，C错误； D、蛋白质工程的基础是基因工程，需要改造或合成相关的基因，故使用蛋白质工程改造Cry蛋白过程中需要使用限制酶和DNA连接酶，D正确。 故选AC。 第Ⅱ卷（非选择题 共55分） 三、填空题：本大题共5小题。请把正确答案填在答题卷横线上。 21. 实验一：灰霉病菌感染使作物减产，因化学防治措施会引起诸多副作用，科研人员以黄瓜灰霉病菌为指示菌对BA-KA4解淀粉芽孢杆菌的防治效果进行了研究。 （1）从自然界筛选BA-KA4解淀粉芽孢杆菌的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→计数及性能测定。富集培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是提高培养液中的____________________， 可利用____________________方法对土壤样品中的微生物进行分离纯化并计数，筛选获得BA-KA4解淀粉芽孢杆菌。 （2）为了确定起主要抑菌作用的是BA-KA4菌体细胞，还是BA-KA4菌体释放到胞外的抑菌物质，实验步骤如下： ①挑取BA-KA4菌株单菌落接种于液体培养基中，28℃恒温培养48h，离心收集上清液并过孔径0.22μm的滤膜得到无菌发酵液。收集离心获得的菌体，超声波破碎，用培养基稀释到原体积，经离心收集上清液为菌体破碎液。 ②实验组和对照组处理如下表：请完善实验方案中的I 组别 第一步 第二步 第三步 抑菌率 倒入25mLPDA培养基， 待培养基凝固后，在中央接入直径5mm的灰霉菌菌块 22℃恒温培养至菌丝刚长满平板时，测量灰霉菌菌落直径（R0） 0 对照组A I__________ 实验组B 加1mLBA-KA 4的无菌发酵液至培养皿中 同上 同时测量灰霉菌的菌落直径（R1） 63.87% 实验组C 加1mLBA-KA 4的菌体破碎液至培养皿中 同上 同时测量灰霉菌的菌落直径（R2） 41.17% 注：PDA是马铃薯葡糖琼脂培养基的简称，抑菌率=（R一R）/R×100% ③实验结果：该菌株的无菌发酵液具有较强的抑菌活性，而细胞破碎液的抑菌活性较低，说明____________________。 实验二：塑料被称为白色污染，黄粉虫幼虫能吃塑料，并降解其中的聚苯乙烯。我国北京航空航天大学的科学家们通过实验进行了如下研究： （一）、用13C标记的聚苯乙烯喂食黄粉虫幼虫，一段时间后，不仅检测到黄粉虫幼虫呼吸释放13CO2，还在黄粉虫幼虫体内检测到标记的化合物。给黄粉虫幼虫喂食庆大霉素，十天后再喂食聚苯乙烯，发现黄粉虫幼虫对聚苯乙烯的降解效率几乎为零。 （二）、将制备好的黄粉虫幼虫肠道菌悬液用①均匀涂抹在培养基平板上，将含庆大霉素、青霉素、氯霉素、四环素的圆形滤纸片置于平板上，将培养皿倒置于适宜温度的恒温箱中培养，结果显示含庆大霉素的滤纸片抑菌圈范围最大。 （三）、将黄粉虫幼虫的肠道菌悬液加入含聚苯乙烯薄片的无碳培养基（A）中培养，目的是②：待聚苯乙烯薄片明显变小、变薄时，将培养物接种到含聚苯乙烯的无碳培养基（B）中培养得到单个菌落：对菌落进行筛选、鉴定，得到对聚苯乙烯有较强降解能力的微小杆菌和金黄杆菌。回答下列问题： （3）实验一的结果说明聚苯乙烯可以被黄粉虫幼虫利用，作为____________________，庆大霉素可能会____________________（促进/抑制）黄粉虫幼虫对聚苯乙烯的吸收或利用。 （4）实验二中，对接种用的玻璃器皿灭菌应该用____________________法：①处使用的接种工具是____________________。 （5）实验三的培养基A和B中属于分离纯化微生物的培养基的是____________________;②处所填的目的是____________________。 （6）由实验三的结果可知，黄粉虫幼虫能将吃进体内的塑料中的聚苯乙烯降解与____________________直接相关。 【答案】（1） ①. 溶解氧 ②. 稀释涂布平板法 （2） ①. 1mL无菌水（或1mL未培养过BA-KA4菌体的无菌发酵液）至培养皿中 ②. 该菌主要通过分泌到胞外的抑菌物质起到拮抗病原菌的作用 （3） ①. 合成自身化合物的原料，也可以作为呼吸作用的底物 ②. 抑制 （4） ①. 干热灭菌 ②. 涂布器 （5） ①. 培养基B ②. 增加聚苯乙烯降解菌的数量 （6）（肠道内的）微小杆菌和金黄杆菌 【解析】 【分析】纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法的过程是：由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释涂布平板法是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。 【小问1详解】 富集培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是提高培养液中的溶解氧，有利于微生物的有氧呼吸释放大量能量进行繁殖。对土壤样品中的微生物进行分离纯化并计数的方法为稀释涂布平板法。 【小问2详解】 ②该实验是为了确定起主要抑菌作用的是BA-KA4菌体细胞，还是BA-KA4菌体释放到胞外的抑菌物质，所以自变量为培养皿中是否加入BA-KA4菌体细胞和培养过BA-KA4菌体细胞的无菌发酵液，因变量是灰霉病菌被抑制的程度，其它无关变量应相同且适宜，对照组应加1mL无菌水（或1mL未培养过BA-KA4菌体的无菌发酵液）至培养皿中，实验组B中加1mLBA-KA4的无菌发酵液至培养皿中，实验组C中加1mLBA-KA4的菌体破碎液至培养皿中；每组实验中均倒入25mLPDA培养基，待培养基凝固后，在中央接入直径5mm的灰霉菌菌块；然后在适宜条件下培养，并测定灰霉菌菌落的直径。 ③根据实验结果可知，实验组B的抑菌率最高，其次是实验组C，说明该菌株的无菌发酵液具有较强的抑菌活性，而细胞破碎液的抑菌活性较低，说明该菌主要通过分泌到胞外的抑菌物质起到抑制病原菌的作用。 【小问3详解】 黄粉虫幼虫呼吸释放13CO2，说明其能够将塑料中的聚苯乙烯降解并作为自身细胞呼吸的底物，并且体内检测到13C标记的化合物说明黄粉虫幼虫将聚苯乙烯转化为其他化合物。给黄粉虫幼虫喂食庆大霉素，十天后再喂食聚苯乙烯，发现黄粉虫幼虫对聚苯乙烯的降解效率几乎为零。说明庆大霉素可能会抑制黄粉虫幼虫对聚苯乙烯的吸收或利用。 【小问4详解】 微生物的纯化与培养都应在无菌条件下，所需的用具需要灭菌，对接种用的玻璃器皿灭菌应该用干热灭菌法；黄粉虫幼虫肠道菌悬液用①均匀涂抹在培养基平板上，故①为涂布器，接种方法为稀释涂布平板法。 【小问5详解】 将黄粉虫幼虫的肠道菌悬液加入含聚苯乙烯薄片的无碳培养基A中培养，以增加聚苯乙烯降解菌的数量，则培养基A中的碳源是聚苯乙烯，提供有利于聚苯乙烯降解菌生长的条件；将培养物用稀释涂布平板法或平板划线法接种到含聚苯乙烯的无碳培养基B中，培养得到单个菌落，b对菌落进行筛选、鉴定，属于分离纯化微生物的培养基的是培养基B。 【小问6详解】 黄粉虫幼虫的肠道中含有微小杆菌和金黄杆菌，微小杆菌和金黄杆菌对聚苯乙烯有较强降解能力，因此黄粉虫幼虫能将吃进体内的塑料中的聚苯乙烯降解与（肠道内的）微小杆菌和金黄杆菌。 22. 传统的人工繁殖兰花的方法是分株繁殖和种子繁殖，随着科学技术的进步，人们开始采用“组织培养繁殖兰花”，如图所示。回答下列问题： （1）图中①过程为_____，②与④相比，分化程度_____，全能性_____。 （2）兰花的叶肉细胞之所以能培养为新个体，是因为细胞中含有_____，具有发育成完整个体的潜能。 （3）图中①③过程中，培养基的成分通常包括水、无机营养、有机营养和_____等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和O2等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证_____操作。培养基的有机营养一般选用蔗糖而不选用葡萄糖的理由是_____ （4）有人利用植物体细胞杂交技术解决兰花生根速度慢、幼苗生存能力弱的问题，操作后得到“韭菜-兰花”。植物体细胞杂交依据的生物学原理有_____。 （5）若兰花细胞内有m条染色体，韭菜细胞内有n条染色体，则“韭菜-兰花”细胞含_____条染色体。该植株_____（填“可育”或“不可育”）。若杂种细胞培育成的“韭菜-兰花”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_____倍体植株。 【答案】（1） ①. 脱分化 ②. 低 ③. 高 （2）本物种的全部遗传信息 （3） ①. 植物激素 ②. 无菌 ③. 蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压 （4）细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 （5） ①. m+n ②. 可育 ③. 单 【解析】 【小问1详解】 由图可知：①过程为脱分化，②为愈伤组织，④是胚状体。②与④相比，②的细胞分裂能力强，分化程度低，全能性高。 【小问2详解】 由于兰花的叶肉细胞含有本物种的全部遗传信息，所以能将离体的兰花叶肉细胞培养为新个体。 【小问3详解】 ①表示脱分化，③表示再分化，在其过程中，培养基的成分通常包括水、无机营养、有机营养和植物激素等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和O2等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证无菌操作。培养基的有机营养一般选用蔗糖而不选用葡萄糖的理由是葡萄糖更易被细胞选择性吸收，所以蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。 【小问4详解】 植物体细胞杂交经过了植物细胞融合和植物组织培养两个阶段，其原理分别是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，也即植物体细胞杂交的原理。 【小问5详解】 经过植物体细胞杂交，所得到的“韭菜-兰花”细胞中含有的染色体数目是兰花细胞和韭菜细胞的染色体数目之和，即m+n。杂种细胞包含了兰花和韭菜各自的同源染色体，减数分裂时可正常联会产生可育配子，因此该植株可育；四倍体的“韭菜-兰花”植株，经过花药离体培养，得到的植株是单倍体。 23. 有些人由于不能完全消化牛奶中的乳糖，饮用牛奶后易出现腹泻等不适症状，这称为乳糖不耐受。为了解决这一问题，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，使获得的转基因奶牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响。根据如下操作流程回答相关问题： （1）为了获得更多的卵母细胞，在进行①过程前，需要用_____处理奶牛A，从输卵管中采集卵母细胞后，还需要体外培养至_____期，才可以进行③过程。通过图中②过程采集的B奶牛精子不能直接使成熟的卵细胞受精，常用化学诱导法对奶牛的精子进行_____处理，即用一定浓度的_____或钙离子载体溶液处理。 （2）⑤过程表示将重组质粒导入受体细胞，常用的方法是_____。之后还要用基因探针与目的基因杂交，以检测_____。 （3）⑥过程是_____，在此之前可以选择发育良好、形态正常的_____进行胚胎分割。 （4）外源基因插入奶牛受精卵中的DNA上后，导致有的受精卵发育成转基因奶牛，有的会死亡。分析导致受精卵死亡的最可能原因是_____。⑦过程的检测结果为_____时，说明转基因奶牛D是符合要求的优质牛。 【答案】（1） ①. （外源）促性腺激素 ②. MⅡ ③. 获能 ④. 肝素 （2） ①. 显微注射（利用显微注射将目的基因注入受精卵中） ②. 受体细胞中是否含有目的基因 （3） ①. 胚胎移植 ②. 桑葚胚或囊胚 （4） ①. 外源基因插入奶牛受精卵中的DNA上后，导致受精卵内生命活动必需的某些基因不能表达 ②. 转基因奶牛的乳汁中乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响，且乳汁产量也不受影响 【解析】 【小问1详解】 为了获得更多的卵母细胞，需要对奶牛A进行超数排卵处理，一般通过注射（外源）促性腺激素处理母牛，采集的卵母细胞还需要培养至MⅡ期，才能进行③体外受精过程。精子进行受精作用之前需要进行获能处理，即用一定浓度的肝素或钙离子载体处理。 【小问2详解】 ⑤过程表示将重组质粒导入动物受精卵中，常用的方法是利用显微注射法将目的基因注入受精卵中。用基因探针与目的基因杂交是为了检测受体细胞中是否含有目的基因，属于目的基因的检测。 【小问3详解】 ⑥过程是将早期胚胎移入代孕奶牛的子宫，属于胚胎移植；在进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或者囊胚。 【小问4详解】 外源基因插入受精卵中的DNA上后，导致受精卵死亡的最可能原因是：外源基因插入奶牛受精卵中的DNA上后，导致受精卵内生命活动必需的某些基因不能表达；⑦过程的检测结果为转基因奶牛的乳汁中乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响，且乳汁产量也不受影响时表示转基因成功，说明转基因奶牛D是符合要求的优质牛。 24. 请回答细胞工程的有关问题： I、紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的新型牧草，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图： （注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的功能） （1）在制备两种植物原生质体时，先将两种细胞分别置于0．5-0．6mol/L的甘露醇溶液中，使细胞在较高渗透压环境下处于较稳定状态，从而有利于用_____去除细胞壁。两种细胞融合成功的标志是_____。 （2）①过程可使用物理方法有_____法（答出一种即可）诱导细胞融合，步骤③为_____。 （3）利用图示技术进行育种的优点是_____。 Ⅱ、为降低人乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物（ADC），过程如图所示。 （4）上述单克隆抗体制备过程运用的动物细胞工程技术手段有_____。 （5）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_____。 （6）用选择性培养基对步骤②的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行_____培养。杂交瘤细胞的特点是_____，杂交瘤细胞可采用注射到小鼠_____内增殖或进行体外培养的方式进行扩大培养。 （7）步骤④是将获得的a_____和b治疗乳腺癌的药物这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC． 【答案】（1） ①. 纤维素酶、果胶酶 ②. 形成新的细胞壁 （2） ①. 电融合法、离心 ②. 再分化 （3）打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 （4）动物细胞融合、动物细胞培养 （5）人的乳腺癌细胞 （6） ①. 克隆化 ②. 既能大量增殖，又能产生特定抗体 ③. 腹腔 （7）单克隆抗体 【解析】 【小问1详解】 由图可知，本研究主要利用植物体细胞杂交技术；图中要获得原生质体需要去除细胞壁，由于植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此根据酶的专一性原理，应该用纤维素酶和果胶酶处理原材料。植物细胞融合成功的标志是形成新的细胞壁。 【小问2详解】 细胞融合难以自发进行，需用物理或化学方法诱导融合。物理法包括电融合法、离心法等；化学法包括聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+-高pH融合法等。图中③过程愈伤组织经过再分化形成胚状体，进一步发育形成再生植株。 【小问3详解】 不同物种之间存在生殖隔离，不能通过有性杂交获得可育后代，植物体细胞杂交可打破生殖隔离，实现远远缘杂交育种，培育种间甚至属间杂种。 【小问4详解】 单克隆抗体制备过程运用的动物细胞工程技术手段有：动物细胞融合（B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合）、动物细胞培养（杂交瘤细胞的筛选与扩增培养）。 【小问5详解】 结合题干“为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上”可知该抗体能特异性识别乳腺癌细胞，故本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自人的乳腺癌细胞。 【小问6详解】 步骤②的细胞为多种杂交瘤细胞，要想获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞还需要步骤③克隆化培养和抗体检测，才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是既能大量增殖，又能产生特定抗体；杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行体外培养的方式进行扩大培养。 【小问7详解】 题图中的a物质呈“Y”形，故a为单克隆抗体，和b治疗乳腺癌的药物这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC，能准确地释放药物作用于靶细胞，对人体正常组织毒副作用小。 25. 低温是限制农作物产量的重要胁迫因子。科学家将寒带植物中的抗寒基因CBFs转移到拟南芥中构建拟南芥耐寒模型，用于植物低温胁迫机制的相关研究。回答下列问题： （注：Ampr代表氨苄青霉素抗性基因） 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5′G↓AATTC3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ SphⅠ 5′CGTAC↓G3′ San3A 5′↓GATC3′ XmaⅠ 5′C↓CCGGG3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGCC3′ MunⅠ 5′C↓AATTG3′ （1）设计引物克隆目的基因。如图所示应选择引物________（填序号）对CBFs基因进行克隆，为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在CBFs基因上游引物的________端添加________（“EcoR Ⅰ”或“BamH Ⅰ”或“Mun Ⅰ”）识别序列。 （2）根据图示Ti质粒的结构，应选用限制酶________切割Ti质粒，并通过________酶进行连接。 （3）用________处理农杆菌方能将重组质粒导入。在培养基中添加________来筛选成功导入质粒的农杆菌。将拟南芥叶片浸泡在转基因农杆菌菌液中一段时间对其进行转化，然后提取叶片中的DNA，通过PCR对CBFs基因是否整合到拟南芥基因组中进行检测，结果如下图所示。该转基因叶片的基因组中可能已整合CBFs基因，PCR结果中显示出小分子非目标条带，产生的原因可能是________（填字母）。 A．变性温度太低 B．复性温度太低 C．复性温度太高 D．引物特异性弱 （4）已获取成功转入CBFs基因的拟南芥植株，将其放置在________环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。成功转基因的拟南芥，通过自交产生的后代，_____（填“能”或“不能”）稳定遗传耐寒性状。 【答案】（1） ①. ①④ ②. 5′ ③. Mun Ⅰ （2） ①. EcoR Ⅰ和Sph Ⅰ ②. DNA连接（酶） ③. BD （3） ①. Ca2+ ②. 氨苄青霉素 （4） ①. 寒冷 ②. 不能 【解析】 【小问1详解】 PCR 扩增时，引物①（3'→5'）和④（5'→3'）与模板链互补，可扩增目标基因，故选①④。 为保证目的基因正确连接到载体，需在引物 5' 端添加限制酶识别序列。据表可知，EcoRⅠ和MunⅠ是同尾酶，EcoRⅠ能切割目的基因不能用，结合后续 Ti 质粒切割使用的酶（见第 2 问）及图示酶切位点分布，上游片段中EcoRⅠ靠近目的基因起始端，EcoRⅠ能切割目的基因不能用，则使用同尾酶MunⅠ，且不切割基因内部，因此上游引物的 5' 端 添加 MunⅠ 识别序列。 【小问2详解】 BamHⅠ切割标记基因不能用，Sau3A的识别序列包含BamHⅠ的识别序列也不能用；Ti 质粒的 T-DNA 区域需保留完整以确保目的基因转移，图示中 EcoRⅠ和 SphⅠ位于 T-DNA 内且无重叠，切割后可产生互补末端便于连接，故选用 EcoRⅠ 和 SphⅠ。 切割后通过DNA连接酶将目的基因和切割后的Ti质粒进行连接。 【小问3详解】 用Ca2+处理农杆菌可使其成为感受态细胞，能更好地吸收重组质粒。 在培养基中添加氨苄青霉素来筛选成功导入质粒的农杆菌，因为Ti质粒上有氨苄青霉素抗性基因（Ampr）。PCR结果中显示出小分子目标条带，原因可能是复性温度太低，导致引物与模板的结合特异性降低；引物特异性弱也会出现非特异性扩增，产生小分子条带，BD正确。 【小问4详解】 将成功转入CBF4基因的拟南芥植株放在寒冷环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。 转基因的拟南芥，通过自交产生的后代不能稳定遗传耐寒性状，因为导入的基因在后代中可能会发生性状分离，不一定都含有目的基因。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 无锡市市北高级中学2025-2026学年第二学期 高二年级生物学科期中检测卷 时间：75分钟 分值：100分 本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题） 第Ⅰ卷（选择题 共45分） 一、单项选择题：本大题共15小题，每小题2分，共30分，在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的，请把正确答案涂在答题卡上。 1. 《齐民要术》在记叙酿酒方法时指出蒸软的米要“舒（摊开）使极冷，然后纳之（下酿瓮中去）”，酿酒完成的标志是“味足沸定”。下列相关叙述错误的是（ ） A. “舒使极冷，然后纳之”可避免高温杀死发酵所需的菌种 B. 酿酒时，向酿瓮中持续通入足量空气有利于缩短发酵时间 C. “沸定”说明大部分菌种不再进行细胞呼吸释放CO2，发酵完成 D. 酿酒时糖未耗尽，酵母菌发酵也会停止，原因可能是pH降低和酒精含量增多 2. 某同学为了在实验室富集某种大豆根瘤菌，通过查阅资料，配制了含有如下成分的培养基。下列有关叙述错误的是（ ） 成分 甘露醇 KH2PO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O 浓度（质量分数） 1% 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% A. 该培养基不需要添加氮源，可以达到富集目的 B. 该培养基还需要添加琼脂，便于将菌种接种到固体培养基上 C. 灭菌后待培养基冷却至50℃左右时，需要在酒精灯火焰附近倒平板 D. 平板上一个菌落就是一个大豆根瘤菌 3. 某野生大肠杆菌经X射线照射后，形成了两种不同的氨基酸缺陷型菌株A、B，其在基本培养基上及进行相应处理后的生长情况如表所示。下列叙述错误的是 （ ） 接种的菌种 基本培养基 实验处理和结果 野生菌株 能生长 不处理 诱变菌株A 不生长 添加组氨酸，能生长 诱变菌株B 不生长 添加色氨酸，能生长 诱变菌株A+B 均能生长 不处理 A. 基本培养基含碳源、氮源、无机盐和水等细菌生长繁殖所需的基本营养成分 B. 组氨酸和色氨酸是诱变菌种生长所必需的氨基酸 C. X射线照射可能导致菌株B发生染色体变异，影响色氨酸合成 D. 菌株A和B混合培养时，可能互相提供了对方不能合成的氨基酸 4. 微生物需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖，下列与此有关的说法正确的是（ ） A. 有的氮源可以作为细菌的能源物质 B. 加入酚红指示剂的培养基，可以筛选大肠杆菌 C. 大肠杆菌与分解尿素的细菌所利用的氮源相同 D. 以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是能分解尿素的细菌 5. 大肠杆菌作为模式生物，在科学研究、生物工程和基因编辑等领域具有重要应用价值。在实验室培养大肠杆菌过程中，下列操作正确的是（ ） A. 锥形瓶中的培养基灭菌之后再调节培养基的pH B. 只能用划线分离法将大肠杆菌接种至平板上 C. 大肠杆菌的扩大培养需在CO2培养箱进行 D. 培养结束的培养基应先高压蒸汽灭菌再丢弃 6. 图示植物原生质体制备、分离和检测的流程。下列相关叙述正确的是（ ） A. 步骤①添加盐酸以去除细胞壁 B. 步骤②吸取原生质体放入无菌水中清洗 C. 原生质体密度介于图中甘露醇和蔗糖溶液密度之间 D. 台盼蓝检测后应选择蓝色的原生质体继续培养 7. 科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得多能干细胞，继而利用多能干细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下图所示，下列叙述正确的是（　　） A. 对克隆鼠 X 进行性别鉴定时应从滋养层处取样 B. 将克隆鼠的肝脏移植给灰鼠一定可避免免疫排斥反应 C. 黑鼠和白鼠不需要进行同期发情处理 D. 胚胎早期发育时，桑葚（椹）胚内部开始出现含液体的腔 8. 猴痘是一种病毒性人畜共患病，在人类中出现的症状与过去在天花患者身上所看到的症状相似，B6R蛋白是猴痘病毒的抗原。为制备抗B6R蛋白的单克隆抗体，研究人员进行了相关实验，如图所示，其中①~④表示细胞。下列叙述正确的是（ ） A. 细胞①含有从小鼠的脾中得到的能产生特定抗体的B淋巴细胞 B. 诱导细胞①②融合的常用方法与诱导原生质体融合的方法相同 C. ④过程需要添加抗生素等物质，以防止病毒污染 D. 图中的培养瓶需要置于含有95%O2和5%CO2的混合气体中培养 9. 近年来，转基因技术取得了众多成果，但其安全性也引发了广泛争论。面对这种情况，我们需要秉持科学理性的态度。以下关于转基因成果与安全性的说法错误的是（　　） A. 生存和繁殖上有优势的转基因生物可能会破坏原有生态平衡 B. 转基因抗虫棉中的Bt抗虫蛋白只在某类昆虫中表现出毒性，一般不会对人畜造成影响 C. 转基因抗病毒动物的抗病毒基因可能会发生突变，转变为具有潜在致病风险的基因，因其概率极低可忽略不计 D. 我国科学家将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物，可阻断淀粉储藏使花粉失活，从而有效防止转基因花粉的传播 10. 干细胞的应用前景吸引着众多科学家投入到相关研究中。科学家将特异性基因转入甲鼠成纤维细胞中，在培养 ES 细胞的培养基上培养，获得 iPS 细胞团，再转入乙鼠体内，一段时间后转入乙鼠的细胞团逐渐退化。以下说法正确的是（ ） A. ES 细胞是胚胎干细胞的简称，可来源于囊胚，具有组织特异性 B. 小鼠的成纤维细胞转变为 iPS 细胞，类似于植物组织培养中的再分化过程 C. 小鼠乙体内细胞团逐渐退化的原因可能是发生免疫排斥反应 D. iPS 细胞与成体干细胞的分化潜能是没有差别的 11. 镰状细胞贫血是一种单基因遗传病，由正常血红蛋白基因(HbA)突变为异常血红蛋白基因(Hbs)引起，它们的某片段如图甲。现对一胎儿进行基因检测，主要原理：限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，加热使酶切片段解旋后用荧光标记的 CTGACTCCT 序列与其杂交，最后电泳分离。图乙为电泳后荧光出现的三种可能性。下列叙述不正确的是（ ） A. 提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA 需要添加特定的引物 B. 若该胎儿检测结果为图乙一b，则其为镰状细胞贫血患者 C. 荧光标记序列越长，图乙-c中两个 DNA 条带间的距离越大 D. 用限制酶MstⅡ处理 DNA不充分，可能把正常人误判为携带者 12. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ） A. 可以用菜花、洋葱、猪血，猪肝等实验材料粗提取DNA B. 提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的研磨液，充分研磨 C. 若选择动物细胞作为实验材料，实验中多次加入蒸馏水的目的均是为了析出DNA D. 可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取DNA 13. 下列有关基因工程的成果及应用的叙述，正确的是（ ） A. 将人的胰岛素基因导入大肠杆菌后，表达出的胰岛素与人的胰岛素结构完全相同 B. 培育青霉菌并从中提取青霉素 C. 基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 D. 可将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，使其肠道表达肠乳糖酶，从而改善牛奶品质 14. 应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品，提高了经济效益。如图表示培育生物新品种的过程，请据图判断下列叙述中正确的是（ ） A. 图中①过程需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体 B. 图中⑤过程需要的培养基中只需加入无机营养和植物激素 C. 将prG导入细胞I，细胞I是B淋巴细胞 D. 要检测抗虫棉的抗虫特性，不需要做抗虫的接种实验，检测毒蛋白即可 15. 像BclⅠ（-T↓GATCA-）、BglⅡ（-A↓GATCT-）、MboⅠ（-↓GATC-）这样，识别序列不同、，但能产生相同的黏性末端的一类限制酶被称为同尾酶。如图表示目的基因及质粒上的酶切位点。选用不同的限制酶对质粒和目的基因进行切割，并用DNA连接酶进行连接。下列分析错误的是（ ） 选项 切割质粒 切割目的基因 结果分析 A BclI和BglⅡ BclI和BglⅡ 形成的重组质粒的碱基排列顺序不一定相同 B BclI和BglⅡ MboI 切割后的质粒不可自我环化，切割后的目的基因可以自我环化 C MboI BclI和BglⅡ 形成的重组质粒可被MboI再次切开，但可能无法被BclI和BglⅡ再次切开 D MboI MboI 切割后的质粒可以自我环化，切割后的目的基因也可以自我环化 A. A B. B C. C D. D 二、多项选择题：本大题共4小题，每小题3分，共15分，请把正确答案涂在答题卡上。 16. 下列有关植物细胞工程应用的叙述正确的是（ ） A. 利用植物细胞培养技术获得紫草素，可实现细胞产物的工厂化生产 B. 通过单倍体育种得到的个体一定是纯合子 C. 利用植物组织培养技术可获得脱毒植株 D. 利用植物体细胞杂交技术培育的“白菜—甘蓝”，可获得双亲的遗传特性 17. 花椰菜（2n=18）易患黑腐病导致减产，黑芥（2n=16）则有较好的黑腐病抗性。科研人员基于下图所示过程，培育出抗性花椰菜植株m、n和s，它们均含有花椰菜的全部染色体。下列叙述错误的有（　　） A. 可用聚乙二醇诱导原生质体融合 B. 融合的原生质体中来自黑芥的染色体介于4-8之间 C. 植株m、n、s中的抗性基因来自黑芥 D. 植株n、s中来自黑芥的染色体构成一个染色体组 18. 通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列说法错误的是（　　） A. 相对于成纤维细胞，iPS细胞分化程度低，分裂能力强 B. 两种方法都需要运用动物细胞培养技术，通过对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以保证无菌、无毒的环境 C. 利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质与患者相同，移植后不会发生免疫排斥反应 D. 利用获得的iPS细胞诱导出特定的组织器官，体现了iPS细胞的全能性 19. 下列有关PCR技术的说法正确的是（ ） A. PCR呈指数扩增DNA片段是因为下一轮反应的模板由上一轮反应产物提供 B. 所用引物是能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的RNA C. 引物3’端最佳碱基的选择是G和C，因为它们形成的碱基配对比较稳定 D. PCR的引物长度通常为20-30个碱基对，且引物内部不应出现互补序列 20. 苏云金芽孢杆菌中的杀虫晶体蛋白 Cry具有杀虫毒性，但 Cry蛋白存在杀虫谱窄、毒力有限等问题，制约了其在农业生产中的进一步应用。科学家通过定点突变，将Cry 蛋白第168位的组氨酸替换为精氨酸后，Cry 蛋白对烟草天蛾的毒性提高了3倍；将 Cry 蛋白第282位、第283 位的丙氨酸和亮 氨酸分别替换成甘氨酸和丝氨酸后，Cry蛋白对烟草天蛾的毒性提高了7倍。下列有关叙述错误的是（　　） A. 对Cry 蛋白的改造是通过直接替换 Cry 蛋白中的氨基酸来实现的 B. Cry蛋白的毒性提高了3~7倍的原因可能是改变了该蛋白质的空间结构 C. 改造 Cry 蛋白应从 Cry 蛋白基因的脱氧核苷酸序列出发设计其特有的结构 D. 使用蛋白质工程改造 Cry蛋白过程中需要使用限制酶和 DNA 连接酶 第Ⅱ卷（非选择题 共55分） 三、填空题：本大题共5小题。请把正确答案填在答题卷横线上。 21. 实验一：灰霉病菌感染使作物减产，因化学防治措施会引起诸多副作用，科研人员以黄瓜灰霉病菌为指示菌对BA-KA4解淀粉芽孢杆菌的防治效果进行了研究。 （1）从自然界筛选BA-KA4解淀粉芽孢杆菌的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→计数及性能测定。富集培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是提高培养液中的____________________， 可利用____________________方法对土壤样品中的微生物进行分离纯化并计数，筛选获得BA-KA4解淀粉芽孢杆菌。 （2）为了确定起主要抑菌作用的是BA-KA4菌体细胞，还是BA-KA4菌体释放到胞外的抑菌物质，实验步骤如下： ①挑取BA-KA4菌株单菌落接种于液体培养基中，28℃恒温培养48h，离心收集上清液并过孔径0.22μm的滤膜得到无菌发酵液。收集离心获得的菌体，超声波破碎，用培养基稀释到原体积，经离心收集上清液为菌体破碎液。 ②实验组和对照组处理如下表：请完善实验方案中的I 组别 第一步 第二步 第三步 抑菌率 倒入25mLPDA培养基， 待培养基凝固后，在中央接入直径5mm的灰霉菌菌块 22℃恒温培养至菌丝刚长满平板时，测量灰霉菌菌落直径（R0） 0 对照组A I__________ 实验组B 加1mLBA-KA 4的无菌发酵液至培养皿中 同上 同时测量灰霉菌的菌落直径（R1） 63.87% 实验组C 加1mLBA-KA 4的菌体破碎液至培养皿中 同上 同时测量灰霉菌的菌落直径（R2） 41.17% 注：PDA是马铃薯葡糖琼脂培养基的简称，抑菌率=（R一R）/R×100% ③实验结果：该菌株的无菌发酵液具有较强的抑菌活性，而细胞破碎液的抑菌活性较低，说明____________________。 实验二：塑料被称为白色污染，黄粉虫幼虫能吃塑料，并降解其中的聚苯乙烯。我国北京航空航天大学的科学家们通过实验进行了如下研究： （一）、用13C标记的聚苯乙烯喂食黄粉虫幼虫，一段时间后，不仅检测到黄粉虫幼虫呼吸释放13CO2，还在黄粉虫幼虫体内检测到标记的化合物。给黄粉虫幼虫喂食庆大霉素，十天后再喂食聚苯乙烯，发现黄粉虫幼虫对聚苯乙烯的降解效率几乎为零。 （二）、将制备好的黄粉虫幼虫肠道菌悬液用①均匀涂抹在培养基平板上，将含庆大霉素、青霉素、氯霉素、四环素的圆形滤纸片置于平板上，将培养皿倒置于适宜温度的恒温箱中培养，结果显示含庆大霉素的滤纸片抑菌圈范围最大。 （三）、将黄粉虫幼虫的肠道菌悬液加入含聚苯乙烯薄片的无碳培养基（A）中培养，目的是②：待聚苯乙烯薄片明显变小、变薄时，将培养物接种到含聚苯乙烯的无碳培养基（B）中培养得到单个菌落：对菌落进行筛选、鉴定，得到对聚苯乙烯有较强降解能力的微小杆菌和金黄杆菌。回答下列问题： （3）实验一的结果说明聚苯乙烯可以被黄粉虫幼虫利用，作为____________________，庆大霉素可能会____________________（促进/抑制）黄粉虫幼虫对聚苯乙烯的吸收或利用。 （4）实验二中，对接种用的玻璃器皿灭菌应该用____________________法：①处使用的接种工具是____________________。 （5）实验三的培养基A和B中属于分离纯化微生物的培养基的是____________________;②处所填的目的是____________________。 （6）由实验三的结果可知，黄粉虫幼虫能将吃进体内的塑料中的聚苯乙烯降解与____________________直接相关。 22. 传统的人工繁殖兰花的方法是分株繁殖和种子繁殖，随着科学技术的进步，人们开始采用“组织培养繁殖兰花”，如图所示。回答下列问题： （1）图中①过程为_____，②与④相比，分化程度_____，全能性_____。 （2）兰花的叶肉细胞之所以能培养为新个体，是因为细胞中含有_____，具有发育成完整个体的潜能。 （3）图中①③过程中，培养基的成分通常包括水、无机营养、有机营养和_____等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和O2等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证_____操作。培养基的有机营养一般选用蔗糖而不选用葡萄糖的理由是_____ （4）有人利用植物体细胞杂交技术解决兰花生根速度慢、幼苗生存能力弱的问题，操作后得到“韭菜-兰花”。植物体细胞杂交依据的生物学原理有_____。 （5）若兰花细胞内有m条染色体，韭菜细胞内有n条染色体，则“韭菜-兰花”细胞含_____条染色体。该植株_____（填“可育”或“不可育”）。若杂种细胞培育成的“韭菜-兰花”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_____倍体植株。 23. 有些人由于不能完全消化牛奶中的乳糖，饮用牛奶后易出现腹泻等不适症状，这称为乳糖不耐受。为了解决这一问题，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，使获得的转基因奶牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响。根据如下操作流程回答相关问题： （1）为了获得更多的卵母细胞，在进行①过程前，需要用_____处理奶牛A，从输卵管中采集卵母细胞后，还需要体外培养至_____期，才可以进行③过程。通过图中②过程采集的B奶牛精子不能直接使成熟的卵细胞受精，常用化学诱导法对奶牛的精子进行_____处理，即用一定浓度的_____或钙离子载体溶液处理。 （2）⑤过程表示将重组质粒导入受体细胞，常用的方法是_____。之后还要用基因探针与目的基因杂交，以检测_____。 （3）⑥过程是_____，在此之前可以选择发育良好、形态正常的_____进行胚胎分割。 （4）外源基因插入奶牛受精卵中的DNA上后，导致有的受精卵发育成转基因奶牛，有的会死亡。分析导致受精卵死亡的最可能原因是_____。⑦过程的检测结果为_____时，说明转基因奶牛D是符合要求的优质牛。 24. 请回答细胞工程的有关问题： I、紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的新型牧草，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图： （注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的功能） （1）在制备两种植物原生质体时，先将两种细胞分别置于0．5-0．6mol/L的甘露醇溶液中，使细胞在较高渗透压环境下处于较稳定状态，从而有利于用_____去除细胞壁。两种细胞融合成功的标志是_____。 （2）①过程可使用物理方法有_____法（答出一种即可）诱导细胞融合，步骤③为_____。 （3）利用图示技术进行育种的优点是_____。 Ⅱ、为降低人乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物（ADC），过程如图所示。 （4）上述单克隆抗体制备过程运用的动物细胞工程技术手段有_____。 （5）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_____。 （6）用选择性培养基对步骤②的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行_____培养。杂交瘤细胞的特点是_____，杂交瘤细胞可采用注射到小鼠_____内增殖或进行体外培养的方式进行扩大培养。 （7）步骤④是将获得的a_____和b治疗乳腺癌的药物这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC． 25. 低温是限制农作物产量的重要胁迫因子。科学家将寒带植物中的抗寒基因CBFs转移到拟南芥中构建拟南芥耐寒模型，用于植物低温胁迫机制的相关研究。回答下列问题： （注：Ampr代表氨苄青霉素抗性基因） 限制酶 识别序列 EcoRⅠ 5′G↓AATTC3′ BamHⅠ 5′G↓GATCC3′ SphⅠ 5′CGTAC↓G3′ San3A 5′↓GATC3′ XmaⅠ 5′C↓CCGGG3′ AscⅠ 5′G↓GCGCGCC3′ MunⅠ 5′C↓AATTG3′ （1）设计引物克隆目的基因。如图所示应选择引物________（填序号）对CBFs基因进行克隆，为了后续能将目的基因正确连接到载体上，应在CBFs基因上游引物的________端添加________（“EcoR Ⅰ”或“BamH Ⅰ”或“Mun Ⅰ”）识别序列。 （2）根据图示Ti质粒的结构，应选用限制酶________切割Ti质粒，并通过________酶进行连接。 （3）用________处理农杆菌方能将重组质粒导入。在培养基中添加________来筛选成功导入质粒的农杆菌。将拟南芥叶片浸泡在转基因农杆菌菌液中一段时间对其进行转化，然后提取叶片中的DNA，通过PCR对CBFs基因是否整合到拟南芥基因组中进行检测，结果如下图所示。该转基因叶片的基因组中可能已整合CBFs基因，PCR结果中显示出小分子非目标条带，产生的原因可能是________（填字母）。 A．变性温度太低 B．复性温度太低 C．复性温度太高 D．引物特异性弱 （4）已获取成功转入CBFs基因的拟南芥植株，将其放置在________环境中检测拟南芥耐寒模型是否建立成功。成功转基因的拟南芥，通过自交产生的后代，_____（填“能”或“不能”）稳定遗传耐寒性状。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $